赖氨酸脱羧酶试验标准操作规程

目的：明确盐酸赖氨酸的质量标准和规范盐酸赖氨酸的检验规程。

适用范围：盐酸赖氨酸的检验。

责任人：化验员。

引用标准：CP2000版二部。

本品为L-2，6-二氨基已酸盐酸盐。

按干燥品计算，含C6H14N2O2不得少于98.5%。

[性状] 本品为白色结晶或结晶性粉末；无臭。

本品在水中易溶，在乙醇中极微溶解，在乙醚中几乎不溶。

比旋度取本品，精密称定，加6mol/L盐酸溶液溶解并稀释成每1ml中含80mg的溶液，依法测定，比旋度为+20.0°至+21.5°。

[鉴别] （1）本品的红外光吸收图谱与对照的图谱（光谱集165图一致）。

（2）本品的水溶液显氯化物的鉴别反应。

[检查] 酸度取本品0.10g，加水10ml溶解后，依法测定，PH值应为5.0—6.0。

溶液的透光度取本品0.5g，加水10ml溶解后，照分光光度法，在430nm 的波长处测定透光率，不得低于98.0%。

硫酸盐取本品1.0g，依法检查，与标准硫酸钾溶液2.0ml制成的对照液比较，不得更浓（0.02%）。

铵盐取本品0.10g，依法检查，与标准氯化铵溶液2.0ml制成的对照液比较，不得更深（0.02%）。

其他氨基酸取本品，加水制成每1ml中含16mg的溶液，作为供试品溶液；精密量取上述溶液适量，加水稀释成每1ml中含80μg的溶液，作为对照溶液。

照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶解各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丙醇-氨溶液（2：1）为展开剂，展开后，晾干，在100℃干燥10分钟，喷以茚三酮的丙酮溶液（1→50），在80℃干燥5分钟，立即检视，供试品溶液所显杂质斑点的颜色，与对照溶液的主斑点比较，不得更深（0.5%）。

干燥失重取本品，在105℃干燥3小时，减失重量不得过0.4%。

炽灼残渣不得过0.1%。

铁盐取本品0.50g，依法检查，与标准铁溶液1.5ml制成的对照液比较，不得更深（0.003%）。

重金属取本品2.0g，加水23ml溶解后，加醋酸盐缓冲液（PH3.5）2ml，依法检查，含重金属不得过百万分之十。

酶活性测定实验室标准操作规程
1. 引言
本标准操作规程旨在确保酶活性测定实验室操作的准确性和一
致性。

该实验室用于测定酶的活性，以评估其催化反应速率，为进
一步研究和应用提供依据。

2. 实验室准备
- 确保实验室环境清洁整洁，排除干扰因素。

- 准备所需试剂、仪器和设备，并进行校准和验证。

3. 样品准备
- 按照实验要求准备待测酶样品。

- 保持样品的完整性和稳定性，避免污染和损伤。

4. 实验步骤
4.1 样品稀释
- 使用适当的缓冲液稀释待测酶样品，以达到合适的测试范围。

4.2 酶活性测定
- 将稀释后的样品与适当的底物混合，并按照预定的反应时间进行反应。

- 使用光谱仪、荧光仪或其他相关仪器测定反应产物的生成情况。

4.3 数据处理
- 记录实验过程中所有操作的详细信息。

- 根据实验结果计算酶的活性，并进行数据统计和分析。

5. 质量控制
- 定期进行实验室内部质量控制，包括使用质检样品进行标准曲线校准和验证。

- 确保实验操作符合质量管理体系要求。

6. 安全注意事项
- 遵守实验室的安全规定，包括佩戴适当的个人防护装备。

- 确保试剂的正确使用和储存，避免有害物质的暴露和泄漏。

7. 结论
本标准操作规程为酶活性测定实验室提供了一套明确的操作指南，用于确保实验操作的准确性和一致性。

遵循该规程可提高实验结果的可靠性，并为进一步研究和应用提供有力支持。

实验名称：赖氨酸的提取与鉴定一、实验目的1. 掌握赖氨酸的提取方法。

2. 了解赖氨酸的鉴定方法。

3. 探究赖氨酸在不同生物样品中的含量。

二、实验原理赖氨酸是一种必需氨基酸，广泛存在于动物和植物中。

本实验通过酸水解法提取赖氨酸，并采用紫外分光光度法对其进行鉴定。

紫外分光光度法是基于分子中某些基团对紫外光的吸收特性进行定量分析的原理。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：鸡蛋、鸡肉、牛肉、豆类、小麦等。

2. 实验仪器：酸度计、紫外分光光度计、离心机、天平等。

四、实验步骤1. 赖氨酸的提取（1）称取一定量的生物样品，加入10倍体积的0.1mol/L盐酸溶液，搅拌均匀。

（2）将混合液煮沸30分钟，使蛋白质变性。

（3）冷却后，加入1mol/L氢氧化钠溶液，调节pH至7.0。

（4）加入10倍体积的95%乙醇，静置过夜。

（5）离心去除沉淀，收集上清液。

（6）将上清液用95%乙醇进行醇沉，离心去除沉淀。

（7）将沉淀用少量蒸馏水溶解，得到赖氨酸溶液。

2. 赖氨酸的鉴定（1）配制赖氨酸标准溶液：准确称取赖氨酸标准品，用蒸馏水溶解并定容至一定体积，得到100μg/mL的赖氨酸标准溶液。

（2）测定吸光度：将赖氨酸标准溶液和样品溶液分别进行紫外分光光度法测定，测定波长为258nm。

（3）绘制标准曲线：以赖氨酸浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。

（4）计算样品中赖氨酸含量：根据样品溶液的吸光度，从标准曲线上查得对应的赖氨酸浓度，计算样品中赖氨酸含量。

五、实验结果与分析1. 赖氨酸的提取本实验成功提取了鸡蛋、鸡肉、牛肉、豆类、小麦等生物样品中的赖氨酸。

2. 赖氨酸的鉴定通过紫外分光光度法，成功鉴定了赖氨酸。

标准曲线的线性范围为0.5～5.0μg/mL，相关系数R²=0.998。

3. 赖氨酸含量测定不同生物样品中赖氨酸含量如下：鸡蛋：3.5mg/g鸡肉：4.2mg/g牛肉：5.0mg/g豆类：2.8mg/g小麦：2.0mg/g六、实验结论1. 本实验成功提取了鸡蛋、鸡肉、牛肉、豆类、小麦等生物样品中的赖氨酸。

酶类测定操作规程血清丙氨酸氨基移换酶（ALT）测定血清门冬氨酸氨基移换酶（AST）测定这两个酶的测定在方法上、操作程序上以及试剂等的要求上基本一致。

赖氏（Reitman）法（比色法）【试剂】市售现成试剂，每批试剂的空白管吸光度应≤0.015A，如超出此范围则应检查试剂及仪器等方面的问题。

【操作】按试剂盒的说明书手工操作，比色测定，波长505nm；并从预先绘制好的标准曲线中查得该酶的活性。

酶偶联速率法（连续监测法）【试剂】市售成套试剂，有“单试剂法”及“双试剂法”二种市售试剂盒均可使用，目前推荐双试剂法，它是ALT、AST测定的首选法，市售的ALT、AST底物溶液其起始吸光度必须大於1.2A，空白测定值必须小於5u/L，否则提示此试剂已不合格，不能使用。

【操作】按试剂及仪器使用说明书设定程序，输入参数，用自动生化分析仪测定，波长340nm。

【标本】血清，忌溶血，血清应即时分离，室温可保存二天，4℃可保存一周，-25℃可保存一月，但不推荐冰冻保存，更不宜反复冻溶，遇有严重脂血或黄疸的血清样品，测定时应作血清标本对照管（赖氏法）。

血清碱性磷酸酶（ALP）测定连续监测法【试剂】市售现成试剂，其中的磷酸对硝基苯酚底物液要求：1．酶水解转换率（4-NPP → 4NP）必须大於98%。

2．4-NPP的摩尔吸光度：波长311nm介质10mmo1/L NaOH，温度25℃ε=9867±76 L.mol–1·cm–1。

3．游离4-NP＜0.3mmo1/ mo1 4-NPP；4．无机磷酸＜10mmo1/ mo1 4-NPP。

试剂应贮于棕色瓶中4~8℃保存。

【操作】按试剂盒及仪器说明书要求，设定程序，输入参数用自动或半自动生化分析仪测定，波长450nm。

比色法【试剂】市售或按正式出版的书刊文献自配。

【操作】按试剂盒或相应文献规程比色测定，波长510nm；标准曲线绘制，样品测定，查标准曲线求得ALP活力单位。

沙门氏菌检测操作规程1 原理沙门氏菌的检测需要四个连续的阶段见下图：1.1 用非选择性液体培养基预增菌将试料接种到缓冲蛋白胨水（BPW），在36℃±1℃下培养16~20h。

（样品中可能存在少量的沙门氏菌却含大量的肠杆菌科的其他菌，所以选择性增菌是必须的；为了检测受伤的沙门氏菌，常须进行预增菌。

）1.2 在选择性液体培养基上增菌将1.1中的培养物接种到四硫磺酸钠煌绿（TTB）增菌液和亚硒酸盐胱氨酸（SC）增菌液中。

于TTB增菌液内42℃±1℃培养18h～24h；SC 增菌液内36℃±1℃培养18h～24h。

1.3 初步筛选将1.2的培养物接种到以下两个选择性培养基：亚硫酸铋（BS）琼脂、木糖赖氨酸脱氧胆盐（XLD）琼脂，于36℃±1℃分别培养40h～48h（BS 琼脂平板）或18h～24h（XLD 琼脂平板），根据菌落特性，辨别可疑沙门氏菌菌落。

1.4再次筛选挑出1.3中的可疑沙门氏菌菌落，在沙门氏菌显色培养基中培养再次筛选，再用合适的生化和血清学试剂进行鉴定。

2 试剂与仪器2.1所用器具三角烧瓶、玻璃珠、具塞试管、培养皿、1000μL枪头、5mL枪头、称量勺、接种环、接种针2.2 仪器：分析天平、恒温培养箱、微型振荡器、超净工作台、高压灭菌锅2.3 所用试剂和培养基2.3.1缓冲蛋白胨水培养基（BPW）称取BPW培养基20.1g，加入蒸馏水1L，搅拌加热煮沸至完全溶解，以90mL/瓶分装到各锥形瓶，并于121℃灭菌15 min，冷至常温。

2.3.2 四硫磺酸钠煌绿（TTB）增菌液取TTB增菌液基础93.6g，加入蒸馏水1L，搅拌加热煮沸至完全溶解，分装于锥形瓶中，每瓶100mL。

将锥形瓶放入灭菌锅中，121℃灭菌20min；冷至30℃，每100mL基础培养基中加入TTB配套试剂碘液和煌绿各一支（开启前用75%酒精棉消毒西林瓶表面），混合均匀。

2.3.3 亚硒酸盐胱氨酸（SC）增菌液取SC培养基23g，加入蒸馏水1L，搅拌加热煮沸至完全溶解，分装锥形瓶，冷至常温备用。

hbi沙门氏菌生化鉴定条一、鉴定条包含的生化反应项目。

1. 三糖铁（TSI）试验。

- 原理：三糖铁琼脂中含有乳糖、蔗糖和葡萄糖，以及硫酸亚铁铵等成分。

沙门氏菌通常发酵葡萄糖，产酸使底层变黄，由于不发酵乳糖和蔗糖（或发酵缓慢），斜面保持红色或变为粉红色。

同时，沙门氏菌可产生硫化氢，与硫酸亚铁铵反应生成黑色沉淀。

- 结果判定：典型的沙门氏菌在三糖铁琼脂上表现为底层变黄，斜面变红，有黑色沉淀。

但也有一些非典型菌株可能出现不同结果，需要结合其他试验综合判断。

2. 赖氨酸脱羧酶试验。

- 原理：某些细菌具有赖氨酸脱羧酶，可将赖氨酸脱羧产生尸胺。

该反应会使培养基的pH值升高。

- 结果判定：如果试验管颜色变为紫色（碱性反应），表明赖氨酸脱羧酶阳性，沙门氏菌赖氨酸脱羧酶通常为阳性。

如果颜色不变（黄色或保持原色）则为阴性。

3. 鸟氨酸脱羧酶试验。

- 原理：与赖氨酸脱羧酶试验类似，鸟氨酸脱羧酶作用于鸟氨酸产生腐胺，引起pH值变化。

- 结果判定：阳性结果为试验管变为紫色，沙门氏菌鸟氨酸脱羧酶多为阳性，但不同血清型可能存在差异。

4. 靛基质试验。

- 原理：某些细菌可分解色氨酸产生靛基质，靛基质与试剂（如对二甲基氨基苯甲醛）反应生成红色化合物。

- 结果判定：加入试剂后，若培养基变为红色则为阳性，沙门氏菌靛基质试验通常为阴性。

5. 尿素酶试验。

- 原理：尿素酶可分解尿素产生氨，使培养基的pH值升高。

- 结果判定：如果培养基变为粉红色或红色为阳性，沙门氏菌尿素酶试验为阴性。

6. 甘露醇发酵试验。

- 原理：甘露醇是一种糖类，可被某些细菌发酵产酸，使培养基pH值下降。

- 结果判定：如果培养基颜色变黄（酸性反应），表明甘露醇发酵阳性，沙门氏菌通常甘露醇发酵阳性。

7. 山梨醇发酵试验。

- 原理：山梨醇可被细菌发酵，产生酸性代谢产物改变培养基pH值。

- 结果判定：培养基变黄为阳性，沙门氏菌山梨醇发酵情况因血清型而异，部分沙门氏菌山梨醇发酵阳性，部分阴性。

l-赖氨酸质量标准L-赖氨酸是一种重要的氨基酸，它对人体的生长、发育和健康起着重要的作用。

因此，L-赖氨酸质量标准对于生产和销售具有重要的指导意义。

下面是一份关于L-赖氨酸质量标准的详细介绍。

L-赖氨酸的物理性质主要包括化学式、化学结构、分子量、外观、溶解性等。

L-赖氨酸的化学式为C6H14N2O2，化学结构为H2N-CH2-CH2-CH2-CH(NH2)-COOH，分子量为146.19、L-赖氨酸为无色结晶体，外观为白色结晶或结晶粉末。

L-赖氨酸可溶于水，微溶于甲醇和乙醇，不溶于乙醚和醚。

L-赖氨酸的化学性质主要体现在其氨基基团和羧基部位。

L-赖氨酸具有两个反应中心，即羧基和氨基。

羧基可以与其他化合物发生酸碱反应、酯化反应等；氨基可以与酸酐反应生成酰胺、与醛酮反应生成酮胺，以及与缩合酶反应生成酸酰胺。

此外，L-赖氨酸还可以产生酰基互变异构。

L-赖氨酸的纯度标准在国际上通常采用高效液相色谱法（HPLC）和紫外-可见吸收光谱法（UV-Vis）进行检测。

HPLC是一种高效精确的分析方法，可以测定L-赖氨酸在样品中的浓度，并与纯品进行对照。

UV-Vis则是一种简便的方法，通过测量L-赖氨酸在紫外-可见波长范围内的吸光度来确定其含量。

L-赖氨酸的含量标准根据不同的用途有所不同。

一般来说，食品级L-赖氨酸的纯度要求在98%以上，饲料级L-赖氨酸的纯度要求在99%以上，医药级L-赖氨酸的纯度要求在99.9%以上。

这是因为不同用途的L-赖氨酸对纯度的要求也不同，食品和饲料级L-赖氨酸用作营养补充剂，对纯度要求相对较低；而医药级L-赖氨酸用于药物制剂，对纯度要求较高。

除了含量标准，L-赖氨酸还需要符合其他一些质量标准，如重金属和有害物质的限量要求，微生物限度等。

重金属污染对人体健康有害，因此，食品和饲料级L-赖氨酸需要严格控制重金属的含量。

微生物限度则是针对食品和饲料级L-赖氨酸中可能存在的细菌、霉菌等微生物进行检测，确保产品的卫生质量。

乳酸脱氢酶(LDH)测定操作规程（SOP）一、用途本产品用于体外定量测定血清、血浆样品中乳酸脱氢酶（LDH）的活性。

二、临床意义（一）概述乳酸脱氢酶（LDH），又称L－乳酸－NAD+氧化还原酶，酶编号为EC 1.1.1.27，分子量约为34000道尔顿。

LDH是一种细胞质酶，存在于所有组织细胞中。

由于组织中的LDH 浓度比血浆高约500倍，即使组织的轻微损伤也将导致血清中活性的明显增高，在肝、心肌、骨骼肌和肾中发现高度组织特异性活性的酶。

（二）临床意义乳酸脱氢酶增高主要见于心肌梗死、肝炎、肺梗死、某些恶性肿瘤、白血病等。

某些肿瘤转移所致的胸腹水中乳酸脱氢酶活力往往升高。

目前，常用于心肌梗死、肝病和某些恶性肿瘤的辅助诊断。

（三）医学决定水平170U／L:此值在参考范围以内，等于或低于此值可排除许多与LDH升高有关的疾病，而考虑其他的诊断。

此值还可作为病人自身的对照，用来与以前或将来的测定值作比较。

300U／L：高于此水平时，应考虑到可能引起LDH升高的各种疾病，如心肌梗塞、肝病变、传染性单核细胞增多症、进行性肌营养不良等。

因此，应作其他各种试验，以作出明确诊断。

血清溶血可使测定值增高，应予以注意。

500U／L：高于此值，常见于巨幼细胞性溶血，急性白血病、慢性粒细胞性白血病、转移癌和肝昏迷等，此时应作其他多种检测来作出正确诊断。

三、检验原理L-乳酸＋NAD+−−LDH丙酮酸＋NADH＋H+−→NADH的生成速率与样品中LDH活性成正比，在340nm波长处，通过连续监测吸光度的上升速率(△A／min)，即可计算出样品中LDH的活性。

四、样品血液样品原则上采集晨起空腹血（禁食12小时）；患者处于平静、休息状态，减少患者由于运动、饮食带来的影响；静脉采血时患者应取坐位或卧位；止血带使用后1分钟内采血，回血后立即松开；正确使用抗凝剂；防止溶血；防止过失性采样。

样品运送过程中应防止过度振荡、防止样品容器的破损、防止样品被污染、防止样品及唯一性标志的丢失和混淆，防止样品对环境的污染、水分蒸发。