XXX司法鉴定中心作业指导书
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一、目的
规范人体血液乙醇定性定量检验操作。
二、适用范围
1、顶空气相色谱氢火焰离子化检测器对人体血液乙醇
含量的检验方法。
2、道路交通执法活动中对人员血液中酒精的定性和定
量分析。
三、依据
1、GA/T842-2019《中华人民共和国公共安全行业标准
血液酒精含量的检验方法》。
2、GA/T1556-2016《道路交通执法人体血液采集技术规
范》。
3、JJG700-2016《气相色谱仪检定规程》。
4、GA/T1147-2014《车辆驾驶人员血液酒精含量检验实
验室规范》。
5、《检验检测机构资质认定评审准则》。
6、GB/T6682-2008《中华人民共和国国家标准分析实
验室用水规格和实验方法》。
四、技术主管职责
1、管理实验室的技术工作,解决检验中出现的技术问
题。
2、组织对重大案件、疑难案件的检验和复核检验。
3、负责对检验员、技术员的培训及考核。
4、审核检验报告。
5、签发检验报告。
五、试剂
1、实验室用水二级水。
2、乙醇(色谱纯 99.8%)
3、叔丁醇(色谱纯 99.5%)
4、乙醇标准工作溶液:用电子天平准确称量盛少量水
的50毫升具塞容量瓶,归零,用该容量瓶准确称取
5.0100克无水乙醇,用水配成1000mg/100ml乙醇储备
液500毫升,密封,冷藏保存,使用期6个月。
将乙醇
储备液按倍数用水稀释成实验中所用系列浓度的乙醇
标准工作溶液,密封冷蔵保存,使用期3个月。
见表1。
5、4mg/100mL叔丁醇内标工作溶液:用电子天平准确
称量盛少量水的50毫升具塞容量瓶,归零,用该容量
瓶准确称取0.4020克叔丁醇,用水配成400mg/100ml
叔丁醇储备液100毫升,密封冷藏保存,使用期3个月。
精密吸取叔丁醇储备液1.00毫升置于100毫升容量瓶中,用水稀释至刻度,即为4mg/100毫升的叔丁醇内标工作溶液,密封,冷蔵保存,试用期3个月。
表1 乙醇标准工作溶液
六、顶空气相色谱检验方法应具备以下器材
1、气相色谱器:配氢火焰离子化检测器;
2、顶空自动进样器;
3、1/万电子分析天平:感量0.1毫克;
4、100微升和500微升精密定量移液枪;
5、1毫升至30毫升紧密定量移液管;
6、50毫升、100毫升和500毫升紧密容量瓶;
7、样品瓶(顶空瓶);
8、硅橡胶垫;
9、铝帽;
10、密封钳。
七、操作方法
1、定性分析
1.1样品制备
1.1.1案件样品制备:取0.10毫升待测全血及0.50毫升叔丁醇内标工作溶液加入样品瓶内,盖上硅橡胶垫,用密封钳加封铝帽,混匀,待测。
1.1.2检测限添加样品制备:取1mg/100ml乙醇标准工作溶液0.10毫升及0.50毫升叔丁醇内标工作溶液加入样品瓶内,盖上硅橡胶垫,用密封钳加封铝帽,混匀,与案件样品平行对照分析。
1.1.3空白样品制备:取经检测无乙醇的空白全血0.10毫升及0.50毫升叔丁醇内标工作溶液加入样品瓶内,盖上硅橡胶垫,用密封钳加封铝帽,混匀,与案件样品平行对照分析。
7.1.2检测
7.1.2.1 气相色谱检测参考条件见表2,可依据不同品牌仪器和不同样品等实际情况进行调整。
7.1.2.2 顶空进样分析参考条件和顶空自动进样器
参考条件
1)加热箱温度65℃;
2)定量环温度105℃;
3)传输线温度110℃;
4)样品瓶加热平衡时间10.00min;
5)样品瓶加压时间0.10min;
6)定量环充满时间0.10min;
7)定量环平衡时间0.05min;
8)进样时间1.00min
表2 气相色谱检测参考条件
7.1.2.3进样:将已制备的样品置于顶空自动进样器样品架
上,编制进样方法并运行。
7.1.3记录与计算:分别记录各样品中叔丁醇、乙醇标准品
和案件样品可疑乙醇峰的保留时间,计算各
样品中乙醇相对于内标叔丁醇的相对保留
时间值。
相对保留时间=(乙醇的保留时间-叔丁醇的保留时间)÷(叔
丁醇的保留时间-死时间)
7.2定量分析
7.2.1样品制备
7.2.1.1案件样品制备:取0.10毫升案件样品全血2份,分
别添加0.50毫升叔丁醇内标工作液于样品
瓶中,盖上硅橡胶垫,用密封钳加封铝帽,
混匀,待测。
7.2.1.2校准曲线制备:取表1中系列浓度(其中序号0除
外)的乙醇标准工作溶液0.10毫升及0.50
毫升叔丁醇内标工作溶液,分别加入样品瓶
内,盖上硅橡胶垫,用密封钳加封铝帽,混
匀,备用。
7.2.2检测与记录:将已制备的样品置于顶空自动进样器样
品架上,编制进样方法并运行。
分别记录案
件样品和系列浓度的乙醇标准工作溶液中
叔丁醇、乙醇的峰面积值。
7.2.3计算
7.2.3.1建立校准曲线:以系列浓度的乙醇标准工作溶液
样品中乙醇的峰面积与叔丁醇的峰面积之
比为纵坐标,乙醇质量浓度为横坐标进行线
性回归,建立线性回归方程。
7.2.3.2案件样品乙醇含量:由Y=aX+b进行计算
7.2.3.3计算相对相差RD=|X1-X2|÷(X1+X2)÷2×100% 8结果评价
8.1.1阳性定性结果评价:空白样品中出现叔丁醇峰无乙醇
峰,空白样品正常;检测限添加样品中同时
出现乙醇峰和叔丁醇峰,检测限添加样品正
常;空白样品和检测限添加样品均正常,案
件样品中色谱峰的相对保留时间(或保留时
间)与检测限添加样品中乙醇峰的相对保留
时间(或保留时间)比较,相对误差在±2%
内,再选择不同的色谱条件检测,结果一致
时,则认定案件样品中含有乙醇。
相对误差(乙醇保留时间)=(案件样品乙醇的保留时间-检
测限添加样品乙醇保留时间)÷检测限添加
样品乙醇保留时间×100%。
或者
相对误差(相对保留时间)=(案件样品乙醇相对叔丁醇的
相对保留时间-检测限添加样品乙醇相对叔
丁醇的相对保留时间)÷检测限添加样品乙
醇相对叔丁醇的相对保留时间×100%
8.1.2阴性定性结果评价:空白样品中出现叔丁醇峰无乙醇
峰,空白样品正常;检测限添加样品中同时
出现乙醇峰和叔丁醇峰,检测限添加样品正
常;空白样品和检测限添加样品均正常,案
件样品中无乙醇色谱峰出现叔丁醇峰正常,
则认定检验结果为阴性。
8.1.3检出限:1mg/100ml
8.2定量结果评价:乙醇含量校准曲线的线性相关系数
r≥0.999,校准曲线有效。
平行测定的两份案
件样品相对相差≤10%时,结果报告两份平案件样品平行测定的平均值。
因本检测方法的定量限为5mg/100ml,所以当定性结果为阳性,定量计算结果小于5mg/100ml时,结果报告:该案件全血样品检出乙醇,其含量小于5mg/100ml.
2020年05月01日。