微生物学实验

微生物学实验实验一常用培养基的制备、灭菌与消毒一、实验目的了解培养基的配制原理；掌握配制培养基的一般方法和步骤；了解常见灭菌、清毒基本原理及方法；掌握干热天菌、高压蒸汽灭菌及过滤除菌的操作方法。

二、实验原理培养基是人工按一定比例配制的供微生物生长繁殖和合成代谢产物所需要的营养物质的混合物。

培养基的原材料可分为碳源、氮源、无机盐、生长因素和水。

根据微生物的种类和实验目的不同，培养基也有不同的种类和配制方法。

牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基，有时又称为普通培养基。

由于这种培养基中含有一般细胞生长繁殖所需要的最基本的营养物质，所以可供微生物生长繁殖之用。

干热天菌、高压蒸汽灭菌方法主要是通过升温使蛋白质变性从而达到杀死微生物的效果。

三、试剂与器材1.器材试管、三角瓶、烧杯、量筒、玻璃棒、培养基、分装器、天平、牛角匙、高压蒸汽灭菌锅、pH度纸、棉花、牛皮纸、记号笔、麻绳、纱布、吸管、培养皿、电烘箱、注射器、微孔滤膜过滤器、镊子等。

2.试剂牛肉膏、蛋白胨、NaCl、琼脂四、实验内容1.称量→溶化→调pH→过滤→分装→加塞→包扎→灭菌→无菌检查2.干热灭菌：装入待灭菌物品→升温→恒温→降温→开箱取物3.高压蒸汽灭菌：加水→装物品→加盖→加热→排冷空气→加压→恒压→降压回零→排汽→取物→无菌检查4.过滤除菌：组装灭菌→连接→压滤→无菌检查→清洗灭菌五、关键步骤及注意事项1.要严格按配方配制。

2.调pH不要过头。

3.干热灭菌要注意物品不要堆放过紧，注意温度的时间控制，70ºC以下放物、取物。

4.高压灭菌要注意物品不要过多，加热后排除冷空气，到时降压回零取物。

5.过滤除菌要注意各部件灭菌，压滤时，压力要适当，不可太猛太快，滤膜要注意清洗保存。

六、思考题1.培养基配好后，为什么必须立即灭菌?如何检查灭菌后的培养基是无菌的?2.在配制培养基的操作过程中应注意些什么问题?为什么?3.培养微生物的培养基应具备哪些条件?为什么?4.培养基的配制原则是什么?实验二土壤中微生物分离纯化培养一、实验目的掌握倒平板的方法和几种常用的分离纯化微生物的基本操作技术；了解不同的微生物菌落在斜面上、半固体培养基和液体培养基中的生长特征；进一步熟练和掌握微生物无菌操作技术；掌握微生物培养方法。

微生物学实验内容实验一 . 显微镜的使用及细菌的简单染色实验二 . 细菌的革兰氏染色实验三 . 酵母菌的形态观察及死活细胞的鉴别实验四 . 酵母菌的数量测定实验五 . 酵母菌的大小测定实验六 . 微生物菌落的观察实验实验七 . 霉菌的形态观察实验八 . 培养基的制备与灭菌实验九 . 放线菌的形态及菌落特征的观察实验十 . 微生物的纯种分离培养实验一 . 普通光学显微镜的使用一、目的要求1. 学习并掌握油镜的原理和使用方法。

2. 复习普通台式显微镜的结构、各部分的功能和使用方法。

二 . 显微镜的基本结构及油镜的工作原理现代普通光学显微镜利用目镜和物镜两组透镜系统来放大成像，故又常被称为复式显微镜。

它们由机械装置和光学系统两大部分组成。

在显微镜的光学系统中，物镜的性能最为关键，它直接影响着显微镜的分辨率。

而在普通光学显微镜通常配置的几种物镜中，油镜的放大倍数最大，对微生物学研究最为重要。

与其他物镜相比，油镜的使用比较特殊，需在载玻片与镜头之间加滴镜油，这主要有如下二方面的原因：1. 增加照明亮度油镜的放大倍数可达 100Χ，放大倍数这样大的镜头，焦距很短，直径很小，但所需要的光照强度却最大。

从承载标本的玻片透过来的光线，因介质密度不同（从玻片进入空气，再进入镜头），有些光线会因折射或全反射，不能进入镜头，致使在使用油镜时会因射入的光线较少，物像显现不清。

所以为了不使通过的光线有所损失，在使用油镜时须在油镜与玻片之间加入与玻璃的折射率（n=1.55）相仿的油镜（通常用香柏游，其折射率 n=1.52）。

2. 增加显微镜的分辨率显微镜的分辨率或分辨力 (resolution or resolving power) 是指显微镜能辨别两点之间的最小距离的能力。

从物理学角度看，光学显微镜的分辨率受光的干涉现象及所用物镜性能的限制，可表示为：（公式 P16 ）式中λ= 光波波长；NA=物镜的数值孔径值。

光学显微镜的光源不可能超出可见光的波长范围（ 0.4--0.7μm），而数值孔径值则取决于物镜的镜口角和玻片与镜头间介质的折射率，可表示为： NA=n × sin α式中α为光线最大入射角的半数。

一、实验目的1. 学习微生物分离纯化的基本方法。

2. 掌握微生物形态观察和菌落特征鉴定技术。

3. 培养微生物实验操作技能，提高对微生物学基本知识的理解。

二、实验原理微生物分离与鉴定是微生物学实验中的基本操作。

通过分离纯化，可以获得单一菌株，便于进行后续研究。

微生物鉴定则是根据微生物的形态特征、生理生化特性等，确定其种类。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：土壤样品、牛肉膏蛋白胨培养基、琼脂、无菌水、无菌试管、接种环、酒精灯、显微镜等。

2. 实验仪器：高压蒸汽灭菌器、恒温培养箱、无菌操作台等。

四、实验步骤1. 样品采集与处理（1）采集土壤样品，放入无菌试管中。

（2）用无菌水将土壤样品稀释10倍，制成土壤悬液。

2. 分离纯化（1）将土壤悬液取适量，涂布于牛肉膏蛋白胨琼脂平板上。

（2）将平板倒置放入恒温培养箱中，37℃培养24小时。

（3）观察菌落生长情况，挑取单个菌落，进行纯化培养。

3. 形态观察与菌落特征鉴定（1）将纯化后的菌株涂布于牛肉膏蛋白胨琼脂平板上，37℃培养24小时。

（2）观察菌落形态、颜色、大小、边缘等特征。

（3）将菌落置于显微镜下观察菌体形态。

4. 生理生化特性鉴定（1）根据菌落特征，选取疑似菌种进行生理生化试验。

（2）进行糖发酵试验、氧化酶试验、甲基红试验等。

（3）根据试验结果，确定菌种。

五、实验结果与分析1. 分离纯化经过多次挑取，成功分离出多个单菌落。

2. 形态观察与菌落特征鉴定观察发现，分离出的菌株菌落呈圆形，表面光滑，边缘整齐，颜色为白色。

3. 生理生化特性鉴定经过糖发酵试验、氧化酶试验、甲基红试验等，确定分离出的菌株为乳酸菌。

六、实验总结本次实验成功分离纯化了土壤样品中的乳酸菌，并通过形态观察、菌落特征鉴定和生理生化特性鉴定，确定了其种类。

在实验过程中，掌握了微生物分离纯化的基本方法，提高了微生物实验操作技能，加深了对微生物学基本知识的理解。

七、注意事项1. 实验操作过程中，严格遵守无菌操作规程，避免污染。

微生物常用实验第一篇：细菌涂片染色实验细菌涂片染色实验是微生物学中最基本的实验之一。

通过染色方法，使细菌变得可见，便于观察形态、结构、数量等特征，有利于研究其生长、代谢、致病性等方面。

下面，我们来介绍细菌涂片染色实验的具体步骤：一、制备细菌涂片1.取出培养基上生长良好的细菌菌落，用不锈钢嵌片环沿中心点轻压一下。

2.将嵌片环中的菌落涂匀于无菌载玻片上，制备成直径约1厘米的薄片。

3.待载玻片上的细菌涂片晾干，并用火焰消毒。

二、涂片染色1.用火焰将铺有细菌涂片的玻片烤干。

2.将烤干的玻片浸入甲醇中，固定一分钟，再用水漱洗。

3.将玻片浸入碘酒中，固定一分钟，再用水漱洗。

4.将玻片浸入乙醇中，使背景颜色褪去，再用水漱洗。

5.将玻片浸入洋红染色液中，染色时间不超过1分钟。

6.用水冲洗干净，晾干后可以在显微镜下观察。

通过细菌涂片染色实验，我们可以直观地观察到细菌的形态、大小、聚集情况、颜色等，有助于鉴定细菌种类，并进一步深入研究其生物学特性。

第二篇：厌氧培养实验厌氧菌是一类生长需要在完全无氧条件下进行的微生物。

在许多疾病的发病机制中，厌氧菌都发挥着重要作用，因此，研究厌氧菌对于认识疾病的发病机制具有极其重要的意义。

下面，我们来介绍厌氧培养实验的具体步骤：一、制备厌氧培养基制备厌氧培养基是进行厌氧菌培养的关键。

具体操作步骤如下：1.准备培养基，并在其中加入培养菌株所需的配方和其他适宜的添加剂。

2.将培养基分装到无菌针筒或暗口瓶中。

3.在体积的一半至三分之二处加入去氧剂（一般为Thioglycolate或Dithiothreitol）。

二、厌氧细菌接种与培养1.准备厌氧细菌培养物的接种种子。

一般情况下，把生长适应在厌氧条件下的细菌进行分生处理来获得设计数量的细胞，并将其重新悬浮在与培养基相同的缓冲液中。

2.在无氧条件下接种厌氧菌，避免暴露于空气中。

可以通过使用瓶盖和橡胶塞的局部替代或全封闭气密容器的方法来实现无氧条件。

03微生物在自然界和人类生活中的作用阐述微生物在生态系统、工业生产、医疗卫生等领域的重要性。

01微生物的定义与分类包括细菌、真菌、病毒等微生物的基本概念和分类方法。

02微生物的生物学特性介绍微生物的形态、结构、生理生化特性等。

微生物学概述01实验室安全制度包括实验室安全守则、危险标识识别、紧急情况下的应对措施等。

02实验操作规范介绍实验前准备、实验过程中的操作规范、实验后清理等注意事项。

03生物安全阐述生物安全的概念、生物安全级别的划分及相应防护措施。

实验室安全与规范介绍显微镜的种类、使用方法和维护保养。

显微镜介绍离心机的类型、使用方法和维护保养。

离心机阐述培养箱和摇床的工作原理、使用方法和注意事项。

培养箱与摇床包括分光光度计、电泳仪、PCR 仪等设备的简要介绍和使用方法。

其他常用设备常用仪器与设备实验报告格式包括标题、作者、摘要、正文、结论、参考文献等部分的撰写要求。

数据处理与图表制作介绍数据处理的方法、图表的制作规范及注意事项。

实验结果分析与讨论阐述实验结果的分析方法、讨论实验结果的合理性及可能存在的问题。

实验报告提交与评审说明实验报告的提交方式、评审标准及相关注意事项。

实验报告撰写要求03根据实验需求，选择适当的培养基类型，如营养琼脂、马丁氏琼脂等。

选择合适的培养基按照培养基配方准确称量各成分，加入蒸馏水或去离子水，加热溶解后调整pH 值。

配制培养基将配制好的培养基分装到试管、培养皿等容器中，采用高压蒸汽灭菌法或干热灭菌法进行灭菌处理。

培养基分装与灭菌培养基制备与灭菌微生物接种与培养接种前准备准备好无菌操作台、无菌接种环、酒精灯等接种工具，确保无菌操作环境。

微生物接种采用划线法、倾注法等方法将待测微生物接种到培养基上。

培养条件设置根据微生物的生长需求，设置好培养温度、湿度和光照等条件。

观察前准备准备好显微镜、载玻片、盖玻片等观察工具，确保无菌操作环境。

微生物形态观察通过显微镜观察微生物的形态、大小、排列方式等特征，记录并描述观察结果。

一、实验目的1. 学习微生物分离和纯化的基本方法。

2. 掌握微生物形态观察和简单生理生化试验的方法。

3. 熟悉微生物鉴定的一般程序。

二、实验原理微生物分离与鉴定是微生物学的基本实验技术。

通过纯化培养，可以得到单一种类的微生物，便于对其进行观察和研究。

微生物鉴定则是对纯化后的微生物进行分类和命名。

三、实验材料与仪器1. 材料：土壤样品、牛肉膏蛋白胨培养基、琼脂、生理盐水、革兰氏染色液、显微镜、酒精灯、接种环等。

2. 仪器：高压蒸汽灭菌器、恒温培养箱、酒精灯、显微镜等。

四、实验步骤1. 微生物分离（1）土壤样品采集：取适量土壤样品，置于无菌试管中。

（2）土壤样品处理：将土壤样品加入适量的生理盐水，振荡混匀，制成土壤悬液。

（3）稀释涂布平板法：将土壤悬液进行10倍系列稀释，取适量稀释液涂布于牛肉膏蛋白胨琼脂平板上，37℃恒温培养24小时。

（4）挑取单菌落：用接种环挑取单个菌落，转接至新的牛肉膏蛋白胨琼脂平板上，37℃恒温培养24小时。

2. 微生物形态观察（1）革兰氏染色：将纯化后的菌落涂片，进行革兰氏染色，观察菌体的形态和染色特性。

（2）显微镜观察：将菌落制成临时涂片，在显微镜下观察菌体的形态、大小、排列等特征。

3. 微生物生理生化试验（1）糖发酵试验：将纯化后的菌落接种于糖发酵管中，37℃恒温培养24小时，观察菌落是否产生气泡。

（2）V-P试验：将纯化后的菌落接种于V-P试剂中，37℃恒温培养24小时，观察菌落是否产生红色沉淀。

4. 微生物鉴定根据微生物的形态、生理生化特征，结合已知的微生物分类学知识，对纯化后的微生物进行鉴定。

五、实验结果与分析1. 微生物分离：成功分离出多个单菌落，菌落呈圆形、光滑、湿润、乳白色。

2. 微生物形态观察：革兰氏染色结果显示，菌体为革兰氏阳性菌，呈杆状。

3. 微生物生理生化试验：糖发酵试验结果显示，该菌能发酵葡萄糖，产生气泡；V-P试验结果显示，该菌能产生红色沉淀。

4. 微生物鉴定：根据以上实验结果，该菌为葡萄球菌属。

微生物学实验微生物学实验是研究微生物的生长、活动和相互作用的一种科学实验。

通过实验可以了解微生物的生理特性和遗传特性，探究微生物与环境的关系，以及微生物对人类健康和环境的影响。

本文将介绍微生物学实验的常见内容和方法，并举例说明其应用。

1. 常见（1）微生物的培养与分离：将微生物样品接种于培养基上，提供适宜的环境因素使其生长繁殖。

利用孵育箱或培养皿进行培养，观察微生物的孢子、菌丝和菌落等形态特征，通过分离与鉴定，确定微生物的种类和数量。

（2）微生物的生长曲线：利用培养皿或发酵罐等装置，监测微生物在不同时间内的生长情况，绘制生长曲线。

通过分析曲线上的不同阶段，了解微生物的生长特性，包括潜时期、对数期、平稳期和死亡期等。

（3）微生物的代谢分析：通过测定微生物培养过程中的代谢产物，如酸、气体、酶等，分析微生物的代谢途径和代谢产物对生物工艺和环境的影响。

常用的方法包括气相色谱、质谱和高效液相色谱等技术。

（4）微生物的遗传分析：通过构建基因工程菌株或利用遗传标记技术，研究微生物的基因表达、突变和遗传传递等现象。

例如，利用PCR技术检测微生物的特定基因序列，分析其在不同环境条件下的表达水平。

2. 微生物学实验方法（1）杀菌与消毒：在进行微生物实验前，需要对实验器材、培养基和试剂等进行杀菌和消毒处理，以防止外源菌的污染。

常用的方法有高温高压灭菌、酒精喷雾消毒和过滤器材消毒等。

（2）无菌技术：在进行微生物的培养和分离实验时，需要避免外界细菌的污染。

常用的无菌技术包括细菌装液的操作在无菌台上进行，采用无菌培养皿、培养基和工具，以及穿戴无菌手套等措施。

（3）微量液体处理：有些微生物实验需要处理微量的液体，如微生物菌液的接种、稀释和移液等。

在这种情况下，需要使用微量吸管、微量移液器和微量离心机等微量操作工具，保证实验的准确性和可重复性。

（4）统计分析：微生物学实验的数据分析通常需要进行统计处理，以确定实验数据的可靠性和显著性差异。

一、实验目的1. 掌握微生物的基本培养方法。

2. 学习显微镜的使用技巧，观察微生物的形态和结构。

3. 了解微生物染色技术，观察微生物的细胞结构。

4. 掌握微生物纯化技术，获得纯种菌株。

二、实验原理微生物是一类具有微小体积的生物，其形态和结构各异。

通过显微镜观察，可以了解微生物的形态特征。

微生物染色技术可以进一步揭示微生物的细胞结构，如细胞壁、细胞膜、细胞质等。

纯化技术则是获得纯种菌株的重要手段。

三、实验材料与试剂1. 实验材料：大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌等。

2. 试剂：营养肉汤、营养琼脂、革兰氏染液、无菌水、酒精、盐酸、氢氧化钠等。

四、实验步骤1. 微生物培养- 将微生物接种于营养肉汤中，置于37℃恒温培养箱中培养过夜。

- 将培养好的菌液涂布于营养琼脂平板上，置于37℃恒温培养箱中培养24小时。

2. 显微镜观察- 取培养好的菌落，制作临时装片。

- 使用显微镜观察菌落的形态、大小、颜色等特征。

- 使用革兰氏染色法观察细菌的细胞结构。

3. 微生物染色- 取培养好的菌液，制作临时装片。

- 使用革兰氏染色法观察细菌的细胞结构。

- 使用荧光染色法观察细菌的鞭毛、荚膜等特殊结构。

4. 微生物纯化- 将涂布于营养琼脂平板上的菌落挑取至新的平板上，重复数次，直至获得单菌落。

- 将单菌落接种于营养肉汤中，培养过夜。

五、实验结果与分析1. 微生物培养- 在营养琼脂平板上观察到不同颜色的菌落，表明微生物已成功培养。

2. 显微镜观察- 通过显微镜观察，发现大肠杆菌为杆状，金黄色葡萄球菌为球形，枯草芽孢杆菌为棒状。

- 革兰氏染色结果显示，大肠杆菌为革兰氏阴性菌，金黄色葡萄球菌为革兰氏阳性菌。

3. 微生物染色- 荧光染色结果显示，大肠杆菌具有鞭毛，金黄色葡萄球菌具有荚膜。

4. 微生物纯化- 通过纯化技术，成功获得纯种菌株。

六、实验结论1. 本实验成功培养了大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌等微生物。

2. 通过显微镜观察和染色技术，成功观察了微生物的形态、结构和特殊结构。

微生物学实验实验一实验室环境和人体表面微生物的检查实验二油镜的使用和细菌的简单染色实验三细菌的革兰氏染色和芽孢染色实验四微生物大小的测定和酵母菌死活细胞的鉴定实验五培养基的配制与消毒灭菌实验六土壤微生物的分离纯化与鉴定实验七食品微生物检验 (一)细菌总数测定实验八食品微生物检验（二）大肠菌群数测定实验九大肠杆菌生长曲线的测定实验十IMViC与硫化氢试验实验一、实验室环境和人体表微生物的检查1.一、目的：1.比较来自不同场所与不同条件下细菌的数量与类型；2.观察不同类型微生物的菌落形态特征；3.体会无菌操作的重要性。

2.二、原理：1.微生物无孔不入，无处不在。

2.微生物→营养琼脂平板→菌落或菌苔。

（37 ℃倒置培养24 h）3.描述：菌落的大小、表面光滑或粗糙、干燥或湿润、隆起或扁平、边缘整齐或锯齿状、菌落透明或不透明、颜色以及质地均匀与否、疏松或紧密等，以便检查环境中细菌的类?秃褪 俊?4.细胞、放线菌、酵母菌和霉菌四大类型都可能存在，本实验重点观察细菌。

3.三、器材：1.培养基：营养琼脂平板（牛肉膏蛋白胨培养基）2.器具：无菌水、灭菌棉签、接种环（针）、酒精灯等。

4.四、步骤：1.标记。

组号/姓名、日期、样品来源。

2.接种。

3.倒置培养，37℃ 24 h4.观察结果。

5.五、结果6.样品来源菌落数菌落类型特征描写本实验室（流动空气30 min）1 大小形态干湿扁/隆透明度颜色边缘23接种室（不流动空气30min）洗手前洗手后头发屑指甲垢实验台门把1.六、思考题：1.人多的实验室与少人走动的实验室比较，平板上的菌落数和菌落类型有区别吗？试解释。

2.通过本实验，在防止培养物的污染和防止细菌的扩散方面，你有何体会？3.4.实验二油镜的使用和细菌的简单染色一、实验目的1、学习和掌握油镜的原理和使用技术。

2、学习微生物涂片、染色的基本技术，掌握细菌的简单染色法。

二、实验原理1．油镜使用原理：光镜的几种物镜中以油镜的放大倍数最大，尤其适用于微生物学研究。

微生物学实验引言微生物学实验是研究微生物的种类、特性和功能的重要手段。

通过实验可以深入了解微生物的生长、代谢、分化和遗传等方面的现象，为研究微生物的应用和控制提供理论和实践依据。

本文将介绍微生物学实验的基本步骤和常用实验方法，并结合具体案例展示实验的设计和分析方法。

实验步骤样品采集与处理首先，需要选择合适的样品。

可以从环境中采集，如土壤、水源等，或者从生物体中获取，比如人体、动物或植物组织。

采集样品时要注意卫生和无菌操作，以避免污染。

采集到样品后，需要进行处理。

常见的处理方法包括稀释、均质和过滤。

稀释可以使样品中的微生物浓度适合进行后续操作，均质可以使样品中的微生物均匀分布，过滤可以去除较大的颗粒和杂质。

培养微生物接下来，需要将样品中的微生物进行培养。

培养微生物的方法有多种，常见的包括固体培养和液体培养。

固体培养常用琼脂（Agar）作为培养基，液体培养则需要选取合适的培养液，并提供适当的温度、湿度和氧气条件。

在培养微生物的过程中，需要注意消毒操作，以防止其他微生物的污染。

此外，还需要定期观察和记录微生物的生长情况，包括菌落形态、颜色和大小等。

鉴定与分离当微生物培养达到一定程度后，可以进行鉴定和分离。

鉴定微生物的方法有多种，包括形态学观察、生理生化检测和分子生物学技术。

通过这些方法可以确定微生物的种类和相关特性。

分离微生物时，可以使用稀释涂布法、均匀涂布法或罩盖涂布法。

将培养物均匀地涂布在琼脂平板上，然后进行孔明法或拭子转接法进行分离。

分离出来的单个菌落可以进行单菌种的培养和纯化。

实验分析最后，可以对微生物进行实验分析。

根据研究目的，可以选择适当的实验方法进行。

常见的实验分析包括微生物生长曲线分析、代谢产物检测、抗生素敏感性测试等。

微生物生长曲线分析是研究微生物生长规律的重要方法。

可以通过测量菌落数量、菌落直径或光密度等参数，绘制生长曲线，并分析生长速率、生长周期等指标。

代谢产物检测可以了解微生物在不同条件下产生的代谢产物。