实用文库汇编之菌种保存大家谈。甘油的浓度。
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菌种甘油保存方法
菌种甘油保存方法
Company Document number：WUUT-WUUY-WBBGB-BWYTT-1982GT
菌种甘油保存方法1 将要保存菌种接种于LB液体培养至对数生长期（肉眼见培养体系内浑浊即可）
2 将甘油稀释至浓度为50%（等体积蒸馏水加等体积甘油，甘油需要慢慢吸）
3 将甘油、2 ml离心管、枪头等试验用品于121℃灭菌20min
4 无菌条件下将菌液与50%浓度甘油1:1等体积混合于离心管中，甘油终浓度为25%
5 于-20℃冰箱内保存
有效期1年
再次使用钱30°水浴后接种到固体培养基上即可
正常是直接把保藏液接到液体培养基中，让后生长24-48h后，将菌液再次转接到新的液体培养基中。
新的菌液就可以划线培养了。
原始菌种不够的情况下先扩繁十个固体培养基
如果用菌液的话接种到液体培养基上
步骤是固液液用第二个实验第三个保存。
甘油应用于菌种保藏的原理
甘油应用于菌种保藏的原理1. 背景介绍在微生物学研究中，菌种保藏是非常重要的一项工作。
为了长期保存微生物菌株，通常需要使用一种合适的保藏方法，以确保菌株的存活性和遗传稳定性。
而甘油是一种常用的保藏剂之一，它在菌种保藏中具有重要的应用价值。
2. 甘油的特点甘油，化学名称为丙三醇，是一种无色、无臭的有机化合物。
它具有以下特点：•保湿性：甘油具有良好的保湿性，能够吸收空气中的水分，防止菌株在干燥条件下失水。
•渗透调节：甘油能够进入细胞内部，调节细胞内外的渗透压，起到保护细胞的作用。
•稳定性：甘油具有良好的化学稳定性，不易被微生物菌株代谢降解。
3. 甘油在菌种保藏中的应用原理甘油在菌种保藏中的应用原理主要包括以下几个方面：3.1 冻干菌株保藏冻干是一种常用的菌株保藏方法，其中甘油被广泛应用。
具体应用原理如下：1.菌株预培养：首先，将要保藏的微生物菌株进行预培养，使其适应培养基环境。
2.甘油预处理：将预培养的菌株转移到含有一定浓度甘油的冻存液中，使其适应高渗透压情况。
同时，甘油还具有保湿性，能够防止菌株在冻结过程中失水。
3.菌株冷冻：将经过甘油预处理的菌株，放入液氮中进行急速冷冻，使菌株快速达到低温状态，减少冷冻过程对细胞的伤害。
4.干燥处理：在低温中，将冻结的菌株进行干燥处理，以去除菌株中的水分。
甘油能够保持菌株的稳定性，防止菌株代谢活性的损失。
5.密封保存：将干燥处理后的菌株密封保存在低温条件下，确保菌株的长期保存。
3.2 甘油浸泡菌株保藏除了冻干法外，甘油还可以通过浸泡的方式应用于菌株保藏。
具体应用原理如下：1.菌株预培养：同样需要进行菌株的预培养。
2.甘油处理：将预培养的菌株转入含有一定浓度甘油的培养基中进行浸泡处理。
甘油能够渗透进入菌株内部，保护细胞结构和功能的完整性。
3.密封保存：将经过甘油浸泡处理的菌株密封保存在适宜的储存条件下，确保菌株的存活性和遗传稳定性。
4. 甘油保藏的优点和注意事项甘油在菌种保藏中具有以下优点：•简单易行：甘油的使用方法简单，不需要复杂的仪器设备。
菌种保藏方法甘油
菌种保藏方法甘油
甘油是一种常用的菌种保藏方法，具体步骤如下：
1. 准备甘油溶液：用无菌蒸馏水将甘油稀释至10-20%的浓度。
可以使用无菌瓶或试管来制备溶液。
2. 菌种准备：将需要保藏的菌种以活菌母液或活菌培养物的形式准备好。
3. 混合菌种和甘油溶液：将相应的菌种接种到甘油溶液中。
通常可用无菌吸管将菌种转移到甘油溶液中。
4. 混匀：轻轻摇动或翻转瓶子，确保菌种均匀分散在甘油溶液中。
5. 分装：将混匀的菌种溶液分装到无菌小容器中，如无菌管或试管中。
每个容器通常只需要接种几滴。
6. 标记和封存：在容器上标记菌种名称、时间和保藏条件，并用无菌盖子或锡箔密封容器。
7. 保藏：将标记好的菌种容器存放在适当的温度和湿度条件下，如4冰箱或-80冰箱。
注意事项：
- 进行所有步骤时，确保操作环境和操作器具都是无菌的，以防止其他细菌或真菌的污染。
- 甘油保藏法适用于大多数菌种，但并非适用于所有菌种。
某些菌种对甘油不耐受或易于受损，可能需要使用其他保藏方法。
- 在保藏期间，定期检查菌种的存活情况，并根据需要制备培养物以进行后续的实验或培养。
菌种甘油保存
菌种甘油保存
1、配制30%甘油，121摄氏度高压灭菌20min，常温保存既可，一般都是现配现用
2、将要保存菌种接种于LB（或带相应抗性）液体培养至对数生长期（肉眼见培养体系内浑浊即可）
3、无菌条件下将菌液与30%浓度甘油1:1等体积混合于离心管中，甘油终浓度为15%
4、再次使用前置冰浴融化后接种到固体培养基上即可
5、一般零下20度一年左右，零下80度二年以上，时间太长就使用前活化下
甘油保菌原理
1、冷冻保存时菌液会被冻起来，内部产生的“冰晶”会使细胞破裂等，加入如甘油后可以防止对细胞的伤害。
2、简单来说就是抗冻，原理是甘油能够提高水体的粘稠度，使其冰点提高，防止细胞内部产生冰晶造成细胞的损害，一般使用甘油的终浓度在10%-20%，该范围外的浓度会对细胞产生毒性，质粒会很容易丢失
3、高浓度甘油保存菌种据说会影响菌种的表达活性如果该菌只用一次怎么化都没关系的甘油浓度太高，质粒就很容易丢失。
菌种甘油保存方法
菌种甘油保存方法文件编码（008-TTIG-UTITD-GKBTT-PUUTI-WYTUI-8256）
菌种甘油保存方法1 将要保存菌种接种于LB液体培养至对数生长期（肉眼见培养体系内浑浊即可）
2 将甘油稀释至浓度为50%（等体积蒸馏水加等体积甘油，甘油需要慢慢吸）
3 将甘油、2 ml离心管、枪头等试验用品于121℃灭菌20min
4 无菌条件下将菌液与50%浓度甘油1:1等体积混合于离心管中，甘油终浓度为25%
5 于-20℃冰箱内保存
有效期1年
再次使用钱30°水浴后接种到固体培养基上即可
正常是直接把保藏液接到液体培养基中，让后生长24-48h后，将菌液再次转接到新的液体培养基中。
新的菌液就可以划线培养了。
原始菌种不够的情况下先扩繁十个固体培养基
如果用菌液的话接种到液体培养基上
步骤是固液液用第二个实验第三个保存。
菌种保存大家谈。甘油的浓度。
菌种保存大家谈。
甘油的浓度。
2009-08-15 01:13大家好！我是保藏中心，最近发现基因酷保藏中心的共享菌株的保存出现了较严重的问题，06年07年酷友共享的菌株很多都活化不了，好些酷友想要，保藏中心却不能应助，对此我们很抱歉！因此，在此向大家赐教，菌株应如何保存呢？望大家能分享经验，多提出建议（保藏中心如何保藏菌株和管理菌株为佳），一起努力搭建好这个平台，让它能帮到更多酷友！作者: 保藏中心时间: 09-2-19 10:55有人说，冷冻干燥保藏法是菌种保藏最有效的方法之一。
因为没有做过，所以请教做过这方面的酷友，大肠杆菌的冷冻保藏应该注意的事项?甘油冷冻保藏及穿刺菌的保藏一般能保藏多久呢？作者: 我是好人时间: 09-2-19 21:34冷冻干燥法是国内外一致认为比较理想的菌种保藏方法。
冷冻真空干燥保藏法又称冷冻干燥保藏法，简称冻干法。
它通常是用保护剂制备拟保藏菌种的细胞悬液或孢子悬液于安瓿管中，再在低温下快速将含菌样冻结，并减压抽真空，使水升华将样品脱水干燥，形成完全干燥的固体菌块。
并在真空条件下立即融封，造成无氧真空环境，最后置于低温下，使微生物处于休眠状态，而得以长期保藏。
常用的保护剂有脱脂牛奶、血清、淀粉、葡聚糖等高分子物质。
由于此法同时具备低温、干燥、缺氧的菌种保藏条件，因此保藏期长，一般达5～15年，存活率高，变异率低，是目前被广泛采用的一种较理想的保藏方法。
除不产孢子的丝状真菌不宜用此法外，其他大多数微生物如病毒、细菌、放线菌、酵母菌、丝状真菌等均可采用这种保藏方法。
保藏菌种需用时，可在无菌环境下开启安瓿管，将无菌的培养基注入安瓿管中，固体菌块溶解后，摇匀复水，然后将其接种于适宜该菌种生长的斜面上适温培养即可。
该法操作比较烦琐，技术要求较高，且需要冻干机等设备。
不适合酷友频繁的求助菌种。
我们实验室保藏菌种，不管是细菌，放线菌还是霉菌和酵母，我们都是用的甘油管保藏。
就是划斜面得到单菌落，将单菌落置于液体培养基培养至对数期，在EP管中保存，菌液与甘油体积比为1：1，甘油要灭菌的。
菌种保存大家谈。甘油地浓度。
菌种保存大家谈。
甘油的浓度。
2009-08-15 01:13大家好！我是保藏中心，最近发现基因酷保藏中心的共享菌株的保存出现了较严重的问题，06年07年酷友共享的菌株很多都活化不了，好些酷友想要，保藏中心却不能应助，对此我们很抱歉！因此，在此向大家赐教，菌株应如何保存呢？望大家能分享经验，多提出建议（保藏中心如何保藏菌株和管理菌株为佳），一起努力搭建好这个平台，让它能帮到更多酷友！作者: 保藏中心时间: 09-2-19 10:55有人说，冷冻干燥保藏法是菌种保藏最有效的方法之一。
因为没有做过，所以请教做过这方面的酷友，大肠杆菌的冷冻保藏应该注意的事项?甘油冷冻保藏及穿刺菌的保藏一般能保藏多久呢？作者: 我是好人时间: 09-2-19 21:34冷冻干燥法是国外一致认为比较理想的菌种保藏方法。
冷冻真空干燥保藏法又称冷冻干燥保藏法，简称冻干法。
它通常是用保护剂制备拟保藏菌种的细胞悬液或孢子悬液于安瓿管中，再在低温下快速将含菌样冻结，并减压抽真空，使水升华将样品脱水干燥，形成完全干燥的固体菌块。
并在真空条件下立即融封，造成无氧真空环境，最后置于低温下，使微生物处于休眠状态，而得以长期保藏。
常用的保护剂有脱脂牛奶、血清、淀粉、葡聚糖等高分子物质。
由于此法同时具备低温、干燥、缺氧的菌种保藏条件，因此保藏期长，一般达5～15年，存活率高，变异率低，是目前被广泛采用的一种较理想的保藏方法。
除不产孢子的丝状真菌不宜用此法外，其他大多数微生物如病毒、细菌、放线菌、酵母菌、丝状真菌等均可采用这种保藏方法。
保藏菌种需用时，可在无菌环境下开启安瓿管，将无菌的培养基注入安瓿管中，固体菌块溶解后，摇匀复水，然后将其接种于适宜该菌种生长的斜面上适温培养即可。
该法操作比较烦琐，技术要求较高，且需要冻干机等设备。
不适合酷友频繁的求助菌种。
我们实验室保藏菌种，不管是细菌，放线菌还是霉菌和酵母，我们都是用的甘油管保藏。
就是划斜面得到单菌落，将单菌落置于液体培养基培养至对数期，在EP管中保存，菌液与甘油体积比为1：1，甘油要灭菌的。
菌种保存大家谈。甘油的浓度。
菌种保存大家谈。
甘油的浓度。
2009-08-15 01:13大家好！我是保藏中心，最近发现基因酷保藏中心的共享菌株的保存出现了较严重的问题，06年07年酷友共享的菌株很多都活化不了，好些酷友想要，保藏中心却不能应助，对此我们很抱歉！因此，在此向大家赐教，菌株应如何保存呢？望大家能分享经验，多提出建议（保藏中心如何保藏菌株和管理菌株为佳），一起努力搭建好这个平台，让它能帮到更多酷友！作者: 保藏中心时间: 09-2-19 10:55有人说，冷冻干燥保藏法是菌种保藏最有效的方法之一。
因为没有做过，所以请教做过这方面的酷友，大肠杆菌的冷冻保藏应该注意的事项?甘油冷冻保藏及穿刺菌的保藏一般能保藏多久呢？作者: 我是好人时间: 09-2-19 21:34冷冻干燥法是国内外一致认为比较理想的菌种保藏方法。
冷冻真空干燥保藏法又称冷冻干燥保藏法，简称冻干法。
它通常是用保护剂制备拟保藏菌种的细胞悬液或孢子悬液于安瓿管中，再在低温下快速将含菌样冻结，并减压抽真空，使水升华将样品脱水干燥，形成完全干燥的固体菌块。
并在真空条件下立即融封，造成无氧真空环境，最后置于低温下，使微生物处于休眠状态，而得以长期保藏。
常用的保护剂有脱脂牛奶、血清、淀粉、葡聚糖等高分子物质。
由于此法同时具备低温、干燥、缺氧的菌种保藏条件，因此保藏期长，一般达5～15年，存活率高，变异率低，是目前被广泛采用的一种较理想的保藏方法。
除不产孢子的丝状真菌不宜用此法外，其他大多数微生物如病毒、细菌、放线菌、酵母菌、丝状真菌等均可采用这种保藏方法。
保藏菌种需用时，可在无菌环境下开启安瓿管，将无菌的培养基注入安瓿管中，固体菌块溶解后，摇匀复水，然后将其接种于适宜该菌种生长的斜面上适温培养即可。
该法操作比较烦琐，技术要求较高，且需要冻干机等设备。
不适合酷友频繁的求助菌种。
我们实验室保藏菌种，不管是细菌，放线菌还是霉菌和酵母，我们都是用的甘油管保藏。
就是划斜面得到单菌落，将单菌落置于液体培养基培养至对数期，在EP管中保存，菌液与甘油体积比为1：1，甘油要灭菌的。
甘油的保菌作用及浓度
甘油保菌的作用及浓度（三种说法）
一、冷冻保存时菌液会被冻起来，内部产生的“冰晶”会使细胞破裂等，加入如甘油后可以防止对细胞的伤害。
二、简单来说就是抗冻，原理是甘油能够提高水体的粘稠度，使其冰点提高，防止细胞内部产生冰晶造成细胞的损害，一般使用甘油的中浓度在10%-20%，改范围外的浓度会对细胞产生毒性。
三、甘油的主要作用就是防止在冻存细菌时产生的冰晶对细胞造成的损害，我们实验室一般用30%的甘油，但保存携带质粒的菌种时甘油浓度要低些，因为甘油浓度太高，质粒就
很容易丢失。
高浓度甘油保存菌种据说会影响菌种的表达活性如果该菌只用一次怎么化都没关系的甘油浓度太高，质粒就很容易丢失。
菌种保存的方法 甘油
菌种保存的方法甘油菌种的保存对于微生物的研究和应用非常重要。
甘油是一种常用的保存剂，可以用于长时间保存和保持菌种的活力。
本文将介绍甘油的使用方法以及其在菌种保存中的作用。
甘油的作用甘油（Glycerol）是一种无色、无味、无毒的有机化合物，具有良好的保湿性和稳定性。
在菌种保存中，甘油具有以下作用：1. 维持菌种的生理状态：甘油可以降低细胞脆性，防止细胞在保存过程中的损伤和死亡，从而保持菌种的活力。
2. 提高低温储存能力：甘油可以降低水分冻结的温度，避免细胞在冷冻过程中的损伤，提高菌种在低温下的存活率。
3. 增加菌种的长期保存能力：甘油可作为营养源供细胞使用，延缓细胞老化和死亡，从而延长菌种的保存时间。
甘油的使用方法步骤一：制备甘油溶液首先需要制备甘油溶液，一般浓度为15%-20%。
具体制备方法如下：1. 取一定量的甘油溶液，一般可选择无菌蒸馏水或生理盐水作为稀释溶剂。
2. 将甘油溶液和稀释溶剂按照一定比例混合并彻底搅拌，直到完全溶解。
步骤二：制备菌种1. 选择需要保存的菌种，可以是细菌、真菌、酵母等微生物。
2. 选取菌落形成较好的菌株，从培养皿上用无菌鉴别环或鉴别针取一小部分菌落。
3. 将菌落转移到无菌培养基上，进行预培养。
步骤三：冻存菌种1. 在冻存管中加入适量的甘油溶液，使其覆盖菌种。
2. 将培养基上的预培养菌液用无菌鉴别环或鉴别针均匀刷取一些菌液，滴加到冻存管中的甘油溶液中，轻轻摇动以使菌种均匀分布。
3. 加盖冻存管盖，并密封好。
4. 将冻存管放入冻存盒中，标注样品信息，存放于-80或液氮保存罐中。
步骤四：菌种复苏与传代在需要使用菌种时，按照以下步骤进行菌种复苏和传代：1. 从冻存盒中取出冻存管，迅速将其放入37水浴中解冻，使菌种迅速复苏。
2. 将菌液转移到含有适宜培养基的无菌试管或烧杯中。
3. 进行菌种的传代培养，并进行相关实验或应用。
注意事项在使用甘油保存菌种时，需要注意以下事项：1. 所有操作必须在无菌条件下进行，避免细菌或其他微生物的污染。
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作者：风骤起作品编号：31005C58G01599625487创作日期：2020年12月20日实用文库汇编之菌种保存大家谈。
甘油的浓度。
2009-08-15 01:13大家好！我是保藏中心，最近发现基因酷保藏中心的共享菌株的保存出现了较严重的问题，06年07年酷友共享的菌株很多都活化不了，好些酷友想要，保藏中心却不能应助，对此我们很抱歉！因此，在此向大家赐教，菌株应如何保存呢？望大家能分享经验，多提出建议（保藏中心如何保藏菌株和管理菌株为佳），一起努力搭建好这个平台，让它能帮到更多酷友！作者: 保藏中心时间: 09-2-19 10:55有人说，冷冻干燥保藏法是菌种保藏最有效的方法之一。
因为没有做过，所以请教做过这方面的酷友，大肠杆菌的冷冻保藏应该注意的事项?甘油冷冻保藏及穿刺菌的保藏一般能保藏多久呢？作者: 我是好人时间: 09-2-19 21:34冷冻干燥法是国内外一致认为比较理想的菌种保藏方法。
冷冻真空干燥保藏法又称冷冻干燥保藏法，简称冻干法。
它通常是用保护剂制备拟保藏菌种的细胞悬液或孢子悬液于安瓿管中，再在低温下快速将含菌样冻结，并减压抽真空，使水升华将样品脱水干燥，形成完全干燥的固体菌块。
并在真空条件下立即融封，造成无氧真空环境，最后置于低温下，使微生物处于休眠状态，而得以长期保藏。
常用的保护剂有脱脂牛奶、血清、淀粉、葡聚糖等高分子物质。
由于此法同时具备低温、干燥、缺氧的菌种保藏条件，因此保藏期长，一般达5～15年，存活率高，变异率低，是目前被广泛采用的一种较理想的保藏方法。
除不产孢子的丝状真菌不宜用此法外，其他大多数微生物如病毒、细菌、放线菌、酵母菌、丝状真菌等均可采用这种保藏方法。
保藏菌种需用时，可在无菌环境下开启安瓿管，将无菌的培养基注入安瓿管中，固体菌块溶解后，摇匀复水，然后将其接种于适宜该菌种生长的斜面上适温培养即可。
该法操作比较烦琐，技术要求较高，且需要冻干机等设备。
不适合酷友频繁的求助菌种。
我们实验室保藏菌种，不管是细菌，放线菌还是霉菌和酵母，我们都是用的甘油管保藏。
就是划斜面得到单菌落，将单菌落置于液体培养基培养至对数期，在EP管中保存，菌液与甘油体积比为1：1，甘油要灭菌的。
-20摄氏度保存即可。
我们的菌种有保存七八年的依然能用。
方便快捷。
管理员不妨试试。
作者: 保藏中心时间: 09-2-20 23:03:'终于有酷友理我了！感动ing十分感谢您的指教！为了表达谢意，加两点威望作者: 保藏中心时间: 09-2-20 23:33如您所说，冷冻干燥法该法操作比较烦琐，技术要求较高，且需要冻干机等设备，不适合酷友频繁的求助菌种。
但考虑到一个菌株的传代问题，菌种传代次数对菌株特性的影响？我有这样的想法：每个菌种用冷冻干燥法保藏一些，也用甘油菌保藏（用于给酷友应助，一两年后再拿冷冻干燥法保藏的菌种活化，保新一批甘油菌、穿刺菌用于应助（其实保藏中心一直都有保甘油菌，但06、07年的菌株还是有出现问题）。
这样考虑怎样呢？看了您介绍的冷冻真空干燥保藏法的操作，有不明白的地方：1、保护剂如脱脂牛奶、淀粉、葡聚糖要如何处理灭菌呢？2、菌种在冷冻干燥机里冷冻干燥时会不会染菌，还是需要事先处理下冷冻干燥机？3、如何在真空条件下融封？因为没有做过这方面的工作，很多不懂的，问了不少，请谅解。
还有，液氮冷冻保藏法和冷冻干燥法相比哪种方法较好，那种比较适合保藏中心？还是有其它方法更适合呢？大家多多提出宝贵意见、分享下经验啦！作者: 我是好人时间: 09-2-22 20:295#保藏中心作者: 我是好人时间: 09-2-22 20:43液氮超低温保藏法是目前比较理想的一种菌种保藏方法，已被国外一些菌种保藏机构作为常规的方法应用，美国的ATCC已于1965年开始用用，我国的菌种保藏中心也正积极的创造条件，准备或已采用此法。
但投资费用较大，并要有个可靠的氮源。
作者: 保藏中心时间: 09-2-24 09:50您好！您上传的资料中介绍了好多种菌种保藏的方法，很受用，十分感谢您的帮助和支持！但我有一些疑问想请教下：1/您上传的PPT中讲到“在作低温保藏时，注意尽量不损伤细胞。
在缓慢冷冻时，胞外基质一般较快结冰而形成冰晶使基质浓度增高，造成细胞水分外渗而大量脱水，可能使细胞死亡。
如快速降温，胞内也很快形成冰晶，胞内外渗透压基本平衡，同时胞内冰晶较小，对细胞及原生质膜的损伤也较小，菌株不易死亡，影响也较小。
”，按这样说快速降温对细胞的损伤较小，但这与细胞放入液氮罐前应先进行梯度降温的做法似乎有矛盾。
2/甘油菌甘油终浓度为40%，这个浓度是如何定的呢？因为甘油具有脱水作用，浓度高了会使菌株脱水死亡，有的人建议用终浓度为10%~20%的浓度，您是如何看待这个情况呢？作者: 我是好人时间: 09-2-27 10:27管理员您好，很佩服您发现问题的能力，嘿嘿，我这些资料都是在网上给您找的，我们实验室也没有这种设备，我也没做过，所以很多问题也不是很清楚。
我们保存菌种都是用的甘油保存，但也没有注意到您说的甘油具有脱水这个问题，很是受用，以后我会注意的。
我们用甘油保存过细菌，酵母，霉菌和放线菌，40%-50%的甘油是它的最终浓度。
甘油浓度过低低温保存易结冰，使菌死亡。
我同学有直接将菌液-20保存的，不加任何保护剂，但保存的时间很短，他们保存过一年的，但很多有死掉的。
我们做大肠杆菌感受态，最终甘油是15%的浓度，有时结冰也会使菌死掉。
我用40%-50%的甘油最终浓度一直很好，也不结冰，所以也没考虑您提出的那个问题，嘿嘿。
对于液氮超低温保藏我又查了本资料，它是把熔封的安瓿管进行慢速冷冻，以每份钟下降1度的速度直至-35度，最后移到液氮中保藏。
其他的就没说什么了。
很不好意思啊。
作者: 保藏中心时间: 09-2-28 17:18不用不好意思！大家互相交流学习。
我也是上网查了相关的资料，发现有些细节问题说法不一，自己经验少，所以不懂的问题要向大家请教！作者: wyat1984 时间: 09-3-5 02:40我们实验室都是用新鲜菌液+50%灭菌甘油1：1混匀，终浓度25%甘油，-80度保存的。
菌体可以多离心收集一点。
冻干保存用的脱脂牛奶110度15分钟灭菌。
其实很多时候大家要的是质粒而不是菌，一般的DH5,JM109之类的大家都有。
为什么不抽成质粒保存呢？-80度基本不会降解。
作者: 保藏中心时间: 09-3-5 10:13您好！感谢您的支持。
“其实很多时候大家要的是质粒而不是菌，一般的DH5,JM109之类的大家都有。
为什么不抽成质粒保存呢？-80度基本不会降解。
”保藏中心的质粒都是抽提保存的，我想您有些误解了，现出现的是菌株的保藏问题而不是质粒的保藏问题，DH5,JM109之类的菌株是很多人都有，但也还有其它不少的菌株较少的。
作者: nfu03200 时间: 09-3-15 10:45我这里一般是需要用到质粒的大肠杆菌用15%的甘油1：1和菌液混合，酵母用的是30%的甘油和菌液1：1混合，然后放在-80度冰箱中保存，效果很好作者: 保藏中心时间: 09-3-16 18:43我这里一般是需要用到质粒的大肠杆菌用15%的甘油1：1和菌液混合，酵母用的是30%的甘油和菌液1：1混合，然后放在-80度冰箱中保存，效果很好nfu03200 发表于 09-3-15 10:45质粒的大肠杆菌用15%的甘油1：1和菌液混合,甘油的终浓度7.5％，感觉挺低的，请问您那里-80度保存大概能保存多长时间？作者: ferraricyn 时间: 09-3-20 15:17本帖最后由 ferraricyn 于 09-3-20 15:21 编辑个人觉得脱脂牛奶冻干的方法保藏效果较好，我们的霉菌就是这么弄哦，看了一下，原来都是细菌保藏，那还是加甘油保护，液氮速冻，-70保藏吧，呵呵另外，有的冻干机是有封口功能的，冻干机也是在无菌室内操作的，冻干后可以取出封口，同样是无菌条件下操作的作者: yueyuetby 时间: 09-3-21 17:37我们实验室的保存方式是，按3：1的比例加入菌液和甘油，一定要混匀，然后放在-70度冰箱中保存。
作者: rcm001 时间: 09-3-29 21:20本帖最后由 rcm001 于 09-3-29 21:23 编辑您好！您上传的资料中介绍了好多种菌种保藏的方法，很受用，十分感谢您的帮助和支持！但我有一些疑问想请教下：1/您上传的PPT中讲到“在作低温保藏时，注意尽量不损伤细胞。
在缓慢冷冻时，胞外基质一般较快结冰而 ...保藏中心发表于 09-2-24 09:50不是啊！细菌保存最好要快速冷冻，我在PASTEUR作博士后时他们的PROTOCOL都是用液氮先浇在有菌液＋冷冻液的EP管上，冻好后放－80度冰箱，可以保存10年左右。
冷冻液配方需再找找再给你，印象中不是简单的甘油溶液。
动物细胞当然是要缓慢冷冻了。
作者: rcm001 时间: 09-3-29 21:43本帖最后由 rcm001 于 09-3-29 21:52 编辑如您所说，冷冻干燥法该法操作比较烦琐，技术要求较高，且需要冻干机等设备，不适合酷友频繁的求助菌种。
但考虑到一个菌株的传代问题，菌种传代次数对菌株特性的影响？我有这样的想法：每个菌种用冷冻干燥法保藏一些 ...保藏中心发表于 09-2-20 23:33冻干保护剂是先配成溶液，再用0.22um的滤膜过滤除菌，再按比例加到培养到对数生长期的菌液；真正的冻干机操作当然不会染菌了，进去的空气都是经过滤的；真空封融菌种管是把冻好的菌种管口套在抽气机上，抽至一定真空度，如6pa，在喷灯上封融。
冻干曲线（温度和真空度随时间调整的曲线）也影响到存活率。
作者: 保藏中心时间: 09-3-30 10:35不是啊！细菌保存最好要快速冷冻，我在PASTEUR作博士后时他们的PROTOCOL都是用液氮先浇在有菌液＋冷冻液的EP管上，冻好后放－80度冰箱，可以保存10年左右。
冷冻液配方需再找找再给你，印象中不是简单的甘油溶液。
...rcm001 发表于 09-3-29 21:20非常感谢！期待......作者: rcm001 时间: 09-3-30 21:59冷冻液配方来了：--翻了半天，终于找到了，是HOGNESS，哈哈－－excellent for E.coli preservation10X Hogness Modified Freezing Medium:Solution A: 5 mM MgSO4x4 H2O, 20 mM Sodium Citrate,85 mM (NH4)2SO4, 45 % Glycerin.Solution B: 0,66 M KH2PO4, 1,3 M K2HPO4Dilute "B" 4X with "A" = 10 x HMFM (e.g., 1B + 4A)例子：10 x HMFM (Hogness Modified Freezing Medium)(For freezing of bacteria)Solution AMgSO4.7 H2O 0.9 gNa3-citrate.2H2O 4.5 g(NH4)2 SO4 9 gGlycerol (100%) 440 gThe volume was adjusted to 800 ml with sterile water and sterilized by autoclaving.Solution BKH2PO4 18 gK2HPO4 47 gThe volume was adjusted to 200 ml with sterile water and sterilized by autoclaving.Before using, 640 ml solution A was added to 160 ml solution B.作者: 保藏中心时间: 09-3-31 10:32冷冻液配方来了：--翻了半天，终于找到了，是HOGNESS，哈哈－－excellent for E.coli preservation10X Hogness Modified Freezing Medium:Solution A: 5 mM MgSO4x4 H2O, 20 mM Sodium Citrate,85 mM (N ...rcm001 发表于 09-3-30 21:59对于您的分享，代表需要它的人感谢您！需要的酷友大家来试试啦！保藏中心会尝试看是否适合我们为表示感谢，给您加上两点威望。