2019版HIV抗体检测实验室样品登记

艾滋病筛查实验室文件一、实验室目的和背景本实验室文件旨在规范和指导艾滋病筛查实验室的操作流程，确保实验室工作的准确性、可靠性和安全性，以提供及时有效的艾滋病检测服务。

二、实验室设备和材料1. 实验设备：- 生化分析仪- 免疫分析仪- PCR仪器- 荧光显微镜- 离心机- 培养箱等2. 材料：- 试剂盒- 超净台- 实验手套- 纯净水- 废液收集容器等三、实验室操作流程1. 样本接收与记录a) 样本接收：- 确保样本标识与病人信息一致- 将样本放置于适当的存储条件下（如4℃）b) 样本记录：- 记录样本编号、接收日期和接收者信息- 将记录存档以备查阅2. 样本处理与分装a) 样本处理：- 严格按照试剂盒说明，采用正确的方法进行样本处理 - 避免交叉污染，确保每个样本的纯净性b) 样本分装：- 将处理后的样本分装于标有编号的试管或小瓶中- 妥善保存并记录样本的存放位置3. 实验室检测方法a) 血清学检测：- 使用ELISA法检测HIV抗体- 遵循试剂盒说明进行操作- 记录结果并进行分析b) 分子生物学检测：- 使用PCR法检测HIV核酸- 严格遵循反应体系的准备和扩增条件- 检测结果进行解读和分析c) 细胞学检测：- 使用荧光显微镜观察HIV病毒感染的细胞- 绘制并记录观察到的细胞图像4. 结果判读和报告a) 结果判读：- 由专业人员进行结果判读，确保准确性和可靠性 - 参考内部质控结果和标准，排除干扰和误判b) 报告：- 将结果填写在专用报告单上- 注明样本信息、检测方法和结果5. 废弃物处理a) 废液：- 将废液倒入专门的收集容器中- 定期清空废液容器b) 废弃物：- 将用过的试剂盒、管子等废弃物转移到标有医疗废弃物的容器内- 定期进行医疗废弃物的处理四、实验室质量管理1. 内部质量控制：- 定期进行内部质量控制，确保仪器和试剂的稳定性和准确性- 记录质控结果，并及时采取纠正措施2. 外部质量评估：- 参与相关机构组织的外部质量评估活动- 分析评估结果，并改进实验室工作中存在的问题3. 培训和更新：- 对实验室工作人员进行定期培训，提高技能和知识水平- 紧跟艾滋病筛查技术的最新发展，更新实验室操作流程五、实验室安全管理1. 个人防护：- 所有进入实验室的人员必须佩戴实验手套、口罩和实验服等防护用品- 避免接触感染性危险物质2. 设备安全：- 定期对实验仪器进行维护和保养- 使用和操作仪器时，需按照操作手册要求进行3. 废弃物处理：- 严格按照有关规定对废弃物进行分类和处理- 防止废弃物对环境和人员造成危害六、实验室文件管理1. 文件存档：- 将实验室操作流程、质控记录、评估结果等文件进行分类存档 - 定期对存档文件进行整理、归档和备份2. 文件使用：- 在实验室内建立文件使用和借阅制度- 确保文件的准确性、完整性和保密性七、总结本实验室文件详细规定了艾滋病筛查实验室的操作流程、质量管理和安全管理要求。

HIV实验室样品收样检测留存细则
一、样品收样
1、接疾控二科电话，抽血后，记住跟二科人员要标本编号
2、VCT标本先从疾控二科过一遍，由二科编号
3、没有样品的检测不收样，注明无样品
4、每个样品必须在收样本上进行登记
二、样品检测
1、所有样品原则上要求酶标法检测
2、检测项目哨点监测：MSM男同： HIV/TP/HCV
STD性病门诊：HIV/TP/HCV
HIV筛查看守所： HIV
VCT（包括乡镇转介、单位二楼抽血）：HIV、TP
3、检测结果要求有酶标法原始记录，快速检测除外，快速检测需
注明
4、检测结果需逐一登记。

三、样品留存
1、阳性标本一律不留存
2、第1、
3、4季度所有项目的阴性标本留一份就行
3、第2季度标本留三份
4、样品保留期一年。

艾滋病检测样品的采集和处理一、血液1 抗凝全血：消毒局部皮肤，用加有抗凝剂（EDTA钠盐或钾盐、枸橼酸钠、肝素钠）的真空采血管抽取适量静脉血，或用一次性注射器抽取静脉血，转移至加有抗凝剂的试管中，轻轻颠倒混匀6～8次，备用。

2 末梢全血：消毒局部皮肤（成人和1岁以上儿童可选择耳垂、中指、无名指或食指。

1岁以下儿童采用足跟部）。

用采血针刺破皮肤，用无菌纱布擦掉第一滴血。

收集滴出的血液，备用。

3 血浆：将采集的抗凝全血1500～3000r/min离心15min，上层即为血浆，吸出置于合适的容器中，备用。

4 血清：根据需要，用一次性注射器（或真空采血管）抽取5～10ml 静脉血，室温下自然放置1～2h，待血液凝固、血块收缩后再用1500～3000r/min离心15min，吸出血清，置于合适的容器中，备用。

5 淋巴细胞富集液：将采集的抗凝全血1500～3000r/min离心15min ，吸取血浆层下的淋巴细胞富集液，置于合适的容器中，备用。

6 PBMC：使用淋巴细胞分离液，进行密度梯度离心，吸出PBMC层，备用。

7 根据检测要求选用适当的抗凝剂，如CD4+和CD8+T淋巴细胞测定可选用EDTA钠盐或钾盐、枸橼酸钠、肝素钠，HIV病毒分离、核酸定性/定量检测可选用EDTA钠盐或钾盐或枸橼酸钠。

8 样品采集后处理、保存、运输的时限和条件，因不同的检测项目而异，应参见不同检测项目要求。

9 采血完成后的穿刺针头必须丢弃于尖锐危险品容器里，妥善处理，防止发生职业暴露。

二、滤纸干血斑1 根据需要，可将采集的各种血液样品制备成滤纸干血斑，保存、运输及检测。

最常用的是用抗凝全血、末梢全血和血浆制备滤纸干血斑。

2 用移液器从样品管中吸取100μL抗凝全血（或血浆）样品，对准滤纸印圈的中心处，将样品滴在滤纸上，或将穿刺后自皮肤伤口流出的末梢全血直接滴加在滤纸印圈的中心处。

3 根据需要，连续在数个印圈上滴加样品。

4 于室温下自然干燥至少4小时（潮湿气候下至少干燥24小时），不要加热或堆叠血斑，勿与其它界面接触。

附件1 初筛实验室HIV抗体检测标本登记表1附件2 河北省初筛中心实验室HIV抗体检测接收标本登记表2附件3HIV抗体检测试验记录编号实验步骤：1.样品、试剂、酶标板条室温平衡分钟。

2.取条板条，放在板架上，撕去板条上的封条。

3.在所有板孔中加入100µL的样品稀释液，包括要做质控的板孔。

4.在确定的板孔中加入50µL的标本或质控。

设3个阴性对照和1个HIV1阳性对照、1个HIV2阳性对照。

在加入标本之后加入质控，并填写加样顺序表(见下表)。

5.在微板上盖上贴膜，洗板前撕去贴膜，37℃孵育60分钟。

6.在进行孵育的过程中，准备以下试剂：（1）洗液（1:25）：浓磷酸盐缓冲液ml，加蒸馏水ml 。

（2）TMB底物液（1:1）：TMB ml，尿过氧化物ml。

（临用前配制）（3）1M硫酸：取浓硫酸（98%浓硫酸相当于18M），加蒸馏水ml。

7.磷酸盐缓冲液浸泡板孔60秒，洗板机洗板，洗6次。

8.每孔加入100µL TMB底物液，不要混匀或振荡，弃去多余的TMB底物液。

9.室温℃环境中孵育30分钟，闭光显色。

10.每孔加入100µL 1M硫酸，终止反应。

11.在450nm和620nm双波长读取每孔的吸光度，并打印结果。

ABCDEFGH结果分析：呈阳性反应，需复检；其余均为阴性反应。

河北省性病艾滋病预防监测中心HIV抗体检测试验记录编号实验步骤：1．样品、试剂、酶标板条室温平衡30分钟。

2．将酶联反应板从密封袋中取出，取下条板条，放在板架上。

按顺序编号，设一个空白对照孔，两个阳性对照孔，两个阴性对照孔。

3．每孔加入50µl样品稀释液，取阳性对照和阴性对照分别充分混匀后各50µl加入对照孔中，空白对照孔只加样品稀释液，其余每个孔加待检血清50µl，（要先加样品，后加对照）轻轻振荡，充分混匀。

并填写加样顺序表(见表)。

4．用不干胶封片封盖反应板，置37℃温育30分钟。

HIV抗体初筛实验室SOP文件安国市医院检验科目录第一部分工作制度........................................................... - 2 -实验室工作制度 .......................................................... - 2 - HIV 标本采集与接收登记制度............................................. - 3 - 艾滋病实验室保密制度.................................................... - 4 - 艾滋病筛查实验室常规消毒清理工作制度...................................... - 5 - 差错事故处理制度........................................................ - 6 - 报告单签发审核制度...................................................... - 7 - 设备管理制度 ........................................................... - 8 - 试剂管理制度 ........................................................... - 9 - 艾滋病筛查实验室安全防护制度............................................ - 10 - 艾滋病病毒职业暴露预防处理方案.......................................... - 11 -第二部分标准操作规程....................................................... - 14 -第一章样品采集与处理................................................... - 14 - 第二章标准操作程序..................................................... - 15 - 第三章结果报告与注意事项............................................... - 17 -第三部分设备SOP文件 ....................................................... -19 -一、START FAX —2100 酶标分析仪..................................... - 19 -二、RT3000 洗板机..................................................... - 21 -三、电热恒温水箱....................................................... - 26 - 第四部分流程图- 27 -一、HIV 抗体筛查流程图................................................ - 27 -二、暴露级别的评估...................................................... - 28 -第一部分工作制度实验室工作制度1、室内应经常保持整洁，各种仪器设备要安装适当，器皿试剂摆放整齐，标志清晰，有良好的通风设备。

人类免疫缺陷病毒抗体诊断试剂盒（化学发光法）临床检验标准操作规程项目名称：人类免疫缺陷病毒抗体诊断试剂盒（化学发光法）操作规程文件号：KM-SOP-CLIA-019第1版第 1 页共 5 页2008年1月1日起实施，2010年9月1日修订起草人：起草日期：2007-12-14复核人：复核日期：批准人：批准日期：分发部门或个人：1. 实验原理：采用双抗原夹心（两步法）分析模式，预先采用基因工程HIV(1+2) 特异性蛋白抗原包被固相发光微孔板。

加入血清或血浆标本后，待测抗体与包被抗原形成复合物，再加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的相同抗原，三者结合形成双抗原夹心结构，洗涤除去未结合的酶标抗原，加入HRP化学发光底物液，测定其发光强度（RLU），根据临界值判断样本中是否含有HIV特异性抗体。

2. 临床应用：艾滋病，即获得性免疫缺陷综合症（Acquired Immure Deficiency Syndrome, AIDS），是由人类免疫缺陷病毒（human immunodeficiency virus, HIV）引起的严重疾病。

HIV可通过性传播、血液传播和母婴传播三种途径感染人类。

HIV(1+2)抗体的检出是艾滋病诊断的必要条件。

3.标本采集及处理：3.1检测标本种类要求：静脉血或动脉血的血清或血浆标本均可作为检测标本；溶血、脂血、黄疸血不宜使用，如需使用，应在报告单上注明“标本溶血/脂血/黄疸”。

3.2受检者准备：受检者无需做特殊准备；3.3标本采集及处理：宜空腹采集静脉血，无需抗凝，采用离心方法分离血清，分离血清应彻底，不含纤维蛋白；病人标本无需特殊制备处理，采用正确医用技术收集全血标本，离心分离后提取血清用于检测。

使用抗凝剂（浓度为21.8mmol/L枸橼酸钠，5mmol/L EDTA-Na，15IU/ml肝素，10mmol/L草酸钠）不影响检测结果。

3.4标本保存：留取的标本最好在当天检测，不能立即检测的应放置于2-8℃不应超过3天，血清置于-20℃以下可长期保存，但应避免反复冰融。

HIV实验室样品的采集、登记、处理、保存和运输程序1 样品的采集和处理艾滋病检测最常用的样品是血液，包括血清、血浆和全血。

唾液或尿液有时也可作为测试样品。

1.1 血清样品采集和处理1.1.1 用一次性注射器（或真空采血管）抽取一定量静脉血，室温下自然放置1～2h，待血液凝固、血块收缩后再用3000r/min离心15min，吸出血清备用。

1.1.2 如用滤纸片采样，则手指或耳垂局部严格按常规进行消毒，在刺破皮肤后，迅速把滤纸片沾上，切勿让血液滴落在其它物体表面造成污染。

采血后要待血样干燥后再包装送检。

1.2 抗凝血样品采集和处理1.2.1 用加有抗凝剂的真空采血管（或一次性注射器抽取静脉血，转移至加有抗凝剂的试管），反复轻摇，分离血浆和血细胞备用。

1.2.2 应根据实验要求选用适当的抗凝剂，如CD4+/CD8+T淋巴细胞测定可选用K3·EDTA、肝素或枸橼酸钠，HIV病毒分离、核酸定性/定量检测可选用K3·EDTA或枸橼酸钠。

1.2.3 用于核酸定性检测时，采集的抗凝全血应在4～8h 内分离PBMC和血浆，否则应在24～48h内分离血浆和血细胞。

1.3 采集样品注意事项1.3.1 采集样品原则上应按临床采血技术规范操作（试剂盒说明书有特殊要求除外）。

1.3.2 采集样品时应注意安全，建议采用真空采血管及蝶形针具，以避免直接接触血液；直接接触HIV感染者/艾滋病（AIDS）病人血液/体液的操作,应戴双层手套。

2 样品的保存2.1 用于抗体检测的血清或血浆样品，应存放于-20℃以下，短期（1周）内进行检测的样品可存放于2～8℃。

2.2 用于抗原和核酸检测的血浆和血细胞样品应冻存于-20℃以下，进行病毒RNA检测的样品如需保存3个月以上应置于-80℃。

2.3 用于CD4+/CD8+T淋巴细胞测定的样品不能长期保存，样品采集时间超过48h则不可检测。

3 样品的运送3.1 实验室间传递的样品应为血清或血浆，除特殊情况外一般不运送全血。

HIV初筛实验室检测数据的记录与保存
1、实验原始记录表
应按实验要求，设计操作的原始记录表，标明空白对照、阳性对照、阴性对照、外部对照以及待检样品的位置，便于指导实验人员加样。

要注明试剂盒厂家、测定方法、批号、效期、操作人员和复核人员姓名及检测日期。

2、标本的登记
收到标本后，及时登记有关参数，包括受检者姓名或代号、试管编号、性别、年龄、职业、送检单位、人群类别、检验结果、送检日期、报告日期、备注( 必要时记录通信地址)等。

3、HIV阳性标本的保存记录
包括HIV阳性标本的类型、贮存量、贮存温度、贮存起始时间以及标本保管人姓名。

4、文件存档
实验原始记录表、打印数据、检测记录表、标本登记、标本保存记录以及仪器设备维修和校准记录等都应该妥善存档保存15年以上。

并同时使用计算机保存各种文件和记录。

编写：审核：批准：。

标准操作程序（SOP）艾滋病筛查实验室宾县人民医院艾滋病实验室标准操作程序（SOP）目录BXYY_AIDS_SOP001 抽血标准操作程序BXYY_AIDS_SOP002 酒精棉球的制备BXYY_AIDS_SOP003 样品接收登记处理程序BXYY_AIDS_SOP004 检测结果报告程序BXYY_AIDS_SOP005 HIV抗体筛查检测程序BXYY_AIDS_SOP006 废弃物处置和实验室消毒程序BXYY_AIDS_SOP007 检测数据的记录与保存程序BXYY_AIDS_SOP008 ELISA法HIV抗体检测操作程序（珠海丽珠）BXYY_AIDS_SOP009 仪器保养维护校准程序BXYY_AIDS_SOP010 微量可调移液器标准操作程序BXYY_AIDS_SOP011 实验室的消毒和处理程序BXYY_AIDS_SOP012 实验室质量控制程序BXYY_AIDS_SOP013 保密程序BXYY_AIDS_SOP014 实验室意外和事故处理程序BXYY_AIDS_SOP015 实验室安全防护程序BXYY_AIDS_SOP016 ELISA法HIV抗体检测操作程序（上海科华）BXYY_AIDS_SOP017 酶标仪标准操作程序（Anthos 2010）BXYY_AIDS_SOP018 自动洗板机标准操作程序（Anthos Fluido）BXYY_AIDS_SOP019 生物安全柜标准操作程序（Biobase BSC-1500ⅡA2）BXYY_AIDS_SOP020人类免疫缺陷病毒抗体操作程序(胶体金法)说明：1、《艾滋病实验室标准操作程序（SOP）》由各岗位工作人员起草，实验室主任审定，并定期修订。

2、修订应该在实验室主任领导下进行，每年至少修订1次。

3、日常工作中，工作人员有义务随时发现并报告SOP文件中的不足和错误，实验室主任组织调查核实后负责修订。

4、所有实验室各岗位工作人员要在SOP文件上签名，表示已经阅读并掌握了有关内容。

疾控中心HIV实验室样品的采集登记处理保存和运输程序1 样品的采集和处理艾滋病检测最常用的样品是血液，包括血清、血浆和全血。

唾液或尿液有时也可作为测试样品。

1.1 血清样品采集和处理1.1.1 用一次性注射器（或真空采血管）抽取一定量静脉血，室温下自然放置1～2h，待血液凝固、血块收缩后再用3000r/min离心15min，吸出血清备用。

1.1.2 如用滤纸片采样，则手指或耳垂局部严格按常规进行消毒，在刺破皮肤后，迅速把滤纸片沾上，切勿让血液滴落在其它物体表面造成污染。

采血后要待血样干燥后再包装送检。

1.2 抗凝血样品采集和处理1.2.1 用加有抗凝剂的真空采血管（或一次性注射器抽取静脉血，转移至加有抗凝剂的试管），反复轻摇，分离血浆和血细胞备用。

1.2.2 应根据实验要求选用适当的抗凝剂，如CD4+/CD8+T淋巴细胞测定可选用K3·EDTA、肝素或枸橼酸钠，HIV病毒分离、核酸定性/定量检测可选用K3·EDTA或枸橼酸钠。

1.2.3 用于核酸定性检测时，采集的抗凝全血应在4～8h内分离PBMC和血浆，否则应在24～48h内分离血浆和血细胞。

1.3 采集样品注意事项1.3.1 采集样品原则上应按临床采血技术规范操作（试剂盒说明书有特殊要求除外）。

1.3.2 采集样品时应注意安全，建议采用真空采血管及蝶形针具，以避免直接接触血液；直接接触HIV感染者/艾滋病（AIDS）病人血液/体液的操作,应戴双层手套。

2 样品的保存2.1 用于抗体检测的血清或血浆样品，应存放于-20℃以下，短期（1周）内进行检测的样品可存放于2～8℃。

2.2 用于抗原和核酸检测的血浆和血细胞样品应冻存于-20℃以下，进行病毒RNA检测的样品如需保存3个月以上应置于-80℃。

2.3 用于CD4+/CD8+T淋巴细胞测定的样品不能长期保存，样品采集时间超过48h则不可检测。

3 样品的运送3.1 实验室间传递的样品应为血清或血浆，除特殊情况外一般不运送全血。

艾滋病检测检测数据的记录与保存操作规程
1目的
为了检测数据规范化管理，确保原始资料的妥善保存，维持原始资料的真实性、完整性。

2职责
检验人员应严格执行本规定，质量监督员对执行情况进行监督。

3适用范围
适用于艾滋病抗体检测工作。

4操作程序
4.1、实验原始记录：
根据HIV抗体检测实验要求，按照不同生产厂家试剂盒的说明书，我们设计了操作可行的实验原始记录表，表头注明有检测日期、报告日期、检测目的、样品份数、样品种类、检测项目、试剂种类、试剂批号、试剂效期、生产厂家、室内温度、湿度、送检单位；表中设有使用标准、实验方法、设备要求等；下表格内设有空白对照、阳性对照、阴性对照以及待检样品的位置；并附有检测者及审核者签名。

后附表格：
4.2、结果打印记录：
每次检测结果均经过认真审核作出判断后，再由打印
机打印，打印结果与实验原始记录一一对应。

4.3、数据保存：
每次报告发放后，将所有检测数据的记录进行整理归档，由专人、专柜保存。