实验1 细菌的形态与结构

实验一 细菌形态和结构观察，涂片制作及染色法 课程名称：兽医微生物学 实验学时： 2学时一、目的要求1．了解、熟悉油镜的使用和使用原理。

2．掌握细菌抹片的制备及美蓝和革兰氏染色方法。

3．能够识别革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌的染色特征。

4．熟悉细菌的基本形态学特征和特殊构造。

二、知识背景细菌个体微小，无色透明，在一般显微镜下不易识别，必须用适当的染料使其着色后，才能看到其形态、排列和结构。

某些细菌因有特殊的染色性，更可借特殊的染色方法加以鉴别。

因此染色技术是细菌鉴定中的基本技术之一。

检查微生物标本，需要使用显微镜。

比较多用的是普通光学显微镜。

根据不同要求，可使用暗视野显微镜、相差显微镜、荧光显微镜和电子显微镜。

前几种显微镜用可见光线或紫外光线作照明光源，它们都属于光学显微镜；电子显微镜则是用电子流代替照明光源，与光学显微镜不同。

［普通光学显微镜的构造和使用］普通光学显微镜（或称生物显微镜）的构造，使用与保护方法，已在《组织学与胚胎学》教材中讲过，这里概述油镜的原理和使用要点：检查细菌标本，多用油镜进行，油镜是一种高倍放大（95-100倍）的物镜，一般都标有放大倍数（如95×；100×等）和特别标记，以便识别。

国产镜多用“油”字表示，国外产品则常用“Oil 或“HI”作记号。

油镜上还常漆有黑环或红环，而且油镜镜身比高倍镜和低倍镜长，镜片最小，这也是识别的另一个标志。

油镜头的晶片细小，进入镜中的光量也较少，其视野比用高倍镜时为暗。

当油镜头和载玻片之间为空气层所隔时，因为空气的折光指数与玻璃的不同，故有一部分光线被折射而不能进入镜头之内，使视野更暗；若在镜头与载玻片之间放上与玻璃的折光指数相似的油类，如香柏油等，使光线不致于因折射而大为损失，则可使视野充分照明，并能使操作者清楚地进行观察和检查（图l ）。

实验室中几种常用物质的折光指数 品名 玻璃 檀香油香柏油 加拿大树胶二甲苯 液体石蜡松节油甘油 水 折光指数 1.52-1.59 1.52 1.51 1.52 1.49 1.48 1.47 1.47 1.33进行油镜检查时，应先对好光线，但不可直对阳光，采取最强亮度（升高集光器，开大光圈，调好反光镜等）。

项目二细菌任务一细菌的形态结构一、细菌的形态结构（一）细菌细胞的形态和排列方式细菌细胞的基本形态有球状、杆状、螺旋状三种（图1-1），分别称为球菌、杆菌和螺旋菌，其中以杆状最为常见，球状次之，螺旋状较为少见。

仅有少数细菌或一些细菌在培养不正常时为其他形状，如丝状、三角形、方形、星形等。

图1-1 细菌的三种基本形态（左为模式图，右为照片）1. 球菌球菌单独存在时，细胞呈球形或近球形。

根据其繁殖时细胞分裂面的方向不同，以及分裂后菌体之间相互粘连的松紧程度和组合状态，可形成若干不同的排列方式（图1-2）。

A B C DE F图1-2 球菌的形态及排列方式（A.单球菌； B.双球菌； C.四联球菌； D.八叠球菌； E.链球菌； F 葡萄球菌）（1）单球菌细胞沿一个平面进行分裂，子细胞分散而独立存在，如尿素微球菌。

（2）双球菌细胞沿一个平面分裂，子细胞成双排列,如褐色固氮菌。

（3）四联球菌细胞按两个互相垂直的平面分裂，子细胞呈田字形排列,如四联微球菌。

（4）八叠球菌细胞按三个互相垂直的平面分裂，子细胞呈立方体排列,如尿素八叠球菌。

（5）链球菌细胞沿一个平面分裂，子细胞成链状排列,如溶血链球菌。

（6）葡萄球菌细胞分裂无定向，子细胞呈葡萄状排列,如金黄色葡萄球菌。

细菌细胞的形态与排列方式在细菌的分类鉴定上具有重要的意义。

但某种细菌的细胞不一定全部都按照特定的排列方式存在，只是特征性的排列方式占优势。

2. 杆菌杆菌细胞呈杆状或圆柱状，形态多样。

不同杆菌其长短、粗细差别较大，有短杆或球杆状（长宽非常接近），如甲烷短杆菌属；有长杆或棒杆状（长宽相差较大），如枯草芽孢杆菌。

不同杆菌的端部形态各异，有的两端钝圆，如腊状芽孢杆菌；有的两端平截，如炭疽芽孢杆菌；有的两端稍尖，如梭菌属；有的一端分支，呈“丫”或叉状，如双歧杆菌属，有的一端有一柄，如柄细菌属。

也有的杆菌稍弯曲而呈月亮状或弧状，如脱硫弧菌属。

杆菌的细胞排列方式有“八”字状、栅状、链状等多种（图1-3）。

实验一细菌的形态结构观察引言：细菌属于原核生物，是一类非常小的微生物，其形态结构一直是微生物学领域的重要研究内容。

通过观察细菌的形态结构，可以了解其生物学特性，甚至为细菌的分类和鉴定提供辅助依据。

本实验旨在通过显微镜观察、绘制不同种类细菌的形态特征，并对其进行描述和分析。

材料和方法：1.细菌样本：从环境中采集的细菌样本，使用无菌技术制备细菌涂片；2.显微镜：高性能光学显微镜；3.其他实验工具：无菌培养皿、无菌移液器、无菌盖玻片、无菌镊子等。

实验步骤：1.细菌准备：在无菌实验台上，取一块无菌盖玻片，用无菌镊子取一小滴待观察的细菌悬浮液在盖玻片上；2.细菌涂片制备：将另一块无菌盖玻片，倾斜放在含细菌悬浮液的盖玻片上，使两个盖玻片接触并自然扩散，制备细菌涂片；3.固定细菌：将细菌涂片在微火上加热，使细菌固定在玻片上；4.染色：将固定的细菌涂片浸入甲醇中进行固定，并在甲醇中静置3-5分钟；5.除染：将固定染色的细菌涂片置于水龙头下轻轻冲洗，冲洗到水清澈；6.贴片：将染好的细菌涂片倒置在无菌盖玻片上，用手指轻轻压实；7.观察：将贴好的细菌涂片放在显微镜下，逐个观察细菌的形态结构；8.绘制：选取有代表性的细菌形态，在实验记录本中进行绘制和注释。

结果和讨论：通过以上实验步骤，我们观察到了不同细菌的形态结构，如以下几个典型细菌的形态特征描述。

1. 球菌（cocci）：球形或近球形的单细胞菌，如葡萄球菌（Staphylococcus aureus）。

形态特征：球形，直径约0.5-1微米，聚集在一起呈葡萄状、串珠状。

2. 杆菌（bacilli）：长形的单细胞菌，如大肠杆菌（Escherichia coli）。

形态特征：长棍状，直径约0.5-1微米，长度约2-6微米。

3. 弯曲菌（spirilla）：弯曲或螺旋形的细胞，如鲍曼不动杆菌（Vibrio cholerae）。

形态特征：螺旋形，直径约0.5-1微米，长度约2-6微米。

第一篇微生物的基本知识第一章细菌第一节细菌的形态和结构细菌是一类具有细胞壁的单细胞原核型微生物。

细菌在一定的环境条件下具有相对恒定的形态结构和生理生化特性，了解这些特性，对于细菌的分类鉴定、疾病的诊断、细菌的致病性与抗原性的研究，均有重要意义。

一、细菌的形态(一)细菌的大小细菌的个体微小，须用显微镜放大数百倍乃至数千倍才能看到。

通常使用显微测微尺来测量细菌的大小，以微米（μm）作为测量单位。

不同种类的细菌，大小很不一致，即使是同一种细菌在不同的生长繁殖阶段其大小也可能差别很大。

一般球菌的直径约为0.8～1.2μm；杆菌长1～10μm，宽0.2～1.0μm；螺旋菌长1～50μm，宽0.2～1.0μm。

细菌的大小，是以生长在适宜的温度和培养基中的青壮龄培养物（指对数期）为标准。

在一定条件下，各种细菌的大小是相对稳定的，而且具有明显特征，可以作为鉴定细菌的依据之一。

同种细菌在不同的生长环境（如动物体内、外）、不同的培养条件下，其大小会有所变化，测量时的制片方法、染色方法及使用的显微镜不同也会对测量结果产生一定影响，因此，测定细菌大小时，各种条件和技术操作等均应一致。

(二)细菌的基本形态和排列细菌的基本形态有球状、杆状和螺旋状三种，并据此将细菌分为球菌(图1-1，图1-2)、杆菌(图1-3，图1-4)和螺旋菌（图1-7)三种。

细菌的繁殖方式是简单的二分裂，不同细菌分裂后其菌体排列方式不同，有些细菌分裂后单个存在，有些细菌分裂后彼此仍通过原浆带相连，形成一定的排列方式。

1．球菌菌体呈球形或近似球形。

根据球菌分裂的方向和分裂后的排列状况将其分为：双球菌沿一个平面分裂，分裂后两两相连，其接触面扁平或凹入,菌体有时呈肾形，如脑膜炎双球菌；有时呈矛头状，如肺炎双球菌。

链球菌沿一个平面分裂，分裂后三个以上的菌体呈短链或长链排列，如猪链球菌。

葡萄球菌沿多个不同方向的平面分裂，分裂后排列不规则，似一串葡萄，如金黄色葡萄球菌。

细菌与真菌学实验细菌与真菌学实验实验⼀细菌形态结构观察【⽬的】1、了解细菌的基本形态和特殊结构观察法2、明确细菌特殊结构在医疗实践中的意义3、细菌不染⾊标本的观察⽅法4、观察活细菌的形态及运动情况【材料】⾰兰染⾊标本⽚：1、球菌：葡萄球菌、链球菌、脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌。

2、杆菌：伤寒沙门菌、⼤肠埃希菌、炭疽芽胞杆菌、枯草芽胞杆菌。

3、螺形菌：霍乱弧菌或⽔弧菌。

细菌特殊结构标本⽚：1、鞭⽑:变形杆菌、霍乱弧菌2、荚膜:肺炎链球菌、产⽓荚膜杆菌3、芽孢：破伤风杆菌、炭疽杆菌细菌动⼒观察材料：1、菌种：普通变形杆菌、表⽪葡萄球菌。

2、变形杆菌和表⽪葡萄球菌8～12min⾁汤培养物。

3、其他：凹玻⽚、盖玻⽚、凡⼠林、⽛签、接种环、酒精灯、⾹柏油、⼆甲苯、擦镜纸⼀细菌形态结果观察1、使⽤油镜观察上述⾰兰染⾊标本⽚：认识细菌的三种基本形态。

注意观察各菌的形态、⼤⼩、排列⽅式及染⾊性等特点。

2、使⽤油镜观察细菌的特殊结构标本⽚：（1）荚膜：肺炎链球菌经⾰兰染⾊后，呈⽭头状成双排列，菌体四周有不着⾊的透明圈（既荚膜）；肺炎链球菌与产⽓荚膜杆菌的荚膜（荚膜染⾊法），注意观察菌体及荚膜的颜⾊及两者的形态特点。

（2）鞭⽑：变形杆菌与霍乱弧菌的鞭⽑（鞭⽑染⾊法），注意观察菌体和鞭⽑的颜⾊、鞭⽑的长短、数⽬及在菌体上的位置。

（3）芽胞：破伤风梭菌及炭疽杆菌芽胞（芽胞染⾊法），注意观察菌体、芽孢的形态、颜⾊及芽孢在菌体中的位置。

⼆、细菌不染⾊标本观察法（动⼒观察法）1、悬滴法图2－1－1（1）取⼀张洁净盖玻⽚，⽤⽛签涂少许凡⼠林于盖玻⽚的四个⾓处。

（2）⽤接种环取3～4环普通变形杆菌或表⽪葡萄球菌液体培养物于盖玻⽚中央。

（3）把凹玻⽚凹⾯朝下盖在盖玻⽚上，使凹窝中央正对菌液（见图2－1－1）。

（4）迅速翻转凹玻⽚，使粘附在凹玻⽚上的盖玻⽚朝上。

（5）先⽤低倍镜观察，再换⾼倍镜观察。

图2－1－1悬滴法普通变形杆菌有鞭⽑，运动活泼，可向不同⽅向迅速运动。

第一章细菌的形态与结构细菌的概述：细菌是属于原核细胞型微生物，这是一类形体微小、结构简单，具有细胞壁和原始核质，没有核仁和核膜，除了核糖体没有其他细胞器。

对细菌进行认识，是从它的大小、形态将细菌进行分门别类以及将细菌进行解剖后，看看它是由哪些微小的结构组成的，也就是细菌的基本结构和特殊结构。

第一部分细菌的大小长度单位：微米。

对细菌进行描述选择出一个适当的单位是非常重要的，细菌可以在光学显微镜下观察到，大小可以用测微尺在显微镜下进行测量。

光学显微镜可观察到0.2微米以上的，所以再次强调细菌的测量单位是微米。

细菌的长短不同对于细菌的鉴别是很有帮助的。

第二部分细菌的形态一、球菌：我们根据细菌的外形，单个菌体呈球形或者是近似球形；二、杆菌：单个细菌呈杆状、菌体长而且直的；三、螺形菌：如果菌体呈波状、或不规则的锯齿状。

这是根据菌体形态上的特点差异将全部细菌分为这三类。

一、球菌细菌的增殖是通过无性繁殖，自身复制遗传物质，然后又进行自身的裂解，这样生成的是一个和母体一模一样的子代体。

根据细菌进行繁殖时选择的平面不同和分裂后菌体之间相互粘附的程度不同，又可以将球菌进行细分：1、单球菌：细菌分裂沿一个平面进行，新个体分散而单独存在，例如尿微球菌。

2、双球菌：指细菌沿一个平面分裂，分裂后两个菌体成对排列，例如脑膜炎奈瑟军、肺炎链球菌。

3、链球菌：是指细胞沿一个平面进行分裂，分裂后多个菌体粘连成链状，例如乙型溶血性链球菌。

4、四联球菌是指细胞分裂是沿两个相垂直的平面进行，分裂后四个菌体粘附在一起呈正方形，例如四联加夫基菌。

5、八叠球菌是指细菌在三个相互垂直的平面上分裂，分裂后八个菌体粘附成包裹状立方体，例如如藤黄八叠球菌。

6、葡萄球菌是指细菌在多个不规则的平面上分裂，分裂后菌体无一定规则的黏连在一起似葡萄状，如金黄色葡萄球菌。

说明：我们说细菌属于球菌是说单个细菌的形态特点，单个细菌近似球形就说是球菌范围的，两个粘附在一个就是双球菌，粘附称一串就是链球菌，四个在一起近似正方形就是四联球菌，八个包裹在一起呈立方体是八叠球菌，在临床是最常见的是排列不规则的葡萄球菌，是最常见的化脓性球菌，医院交叉感染的来源。

实验一显微镜的使用、细菌形态和结构观察与革兰氏染色法一、显微镜的使用普通光学显微镜是一种精密的光学仪器。

以往最简单的显微镜仅由几块透镜组成，而当前使用的显微镜由一套透镜组成。

普通光学显微镜通常能将物体放大1500—2000倍。

（一）显微镜的构造普通光学显微镜的构造可分为两大部分：一为机械装置，一为光学系统，这两部分很好的配合，才能发挥显微镜的作用。

1、显微镜的机械装置显微镜的机械装置包括镜座、镜筒、物镜转换器、载物台、推动器、粗动螺旋、微动螺旋等部件（1）镜座镜座是显微镜的基本支架，它由底座和镜臂两部分组成。

在它上面连接有载物台和镜筒，它是用来安装光学放大系统部件的基础。

（2）镜筒镜筒上接接目镜，下接转换器，形成接目镜与接物镜（装在转换器下）间的暗室。

从物镜的后缘到镜筒尾端的距离称为机械筒长。

因为物镜的放大率是对一定的镜筒长度而言的。

镜筒长度的变化，不仅放大倍率随之变化，而且成像质量也受到影响。

因此，使用显微镜时，不能任意改变镜筒长度。

国际上将显微镜的标准筒长定为160mm，此数字标在物镜的外壳上。

（3）物镜转换器物镜转换器上可安装3—4个接物镜，一般是三个接物镜（低倍、高倍、油镜）。

Nikon显微镜装有四个物镜。

转动转换器，可以按需要将其中的任何一个接物镜和镜筒接通，与镜筒上面的接目镜构成一个放大系统。

（4）载物台载物台中央有一孔，为光线通路。

在台上装有弹簧标本夹和推动器，其作用为固定或移动标本的位置，使得镜检对象恰好位于视野中心。

（5）推动器是移动标本的机械装置，它是由一横一纵两个推进齿轴的金属架构成的，好的显微镜在纵横架杆上刻有刻度标尺，构成很精密的平面座标系。

如果我们须重复观察已检查标本的某一部分，在第一次检查时，可记下纵横标尺的数值，以后按数值移动推动器，就可以找到原来标本的位置。

（6）粗动螺旋粗动螺旋是移动镜筒调节接物镜和标本间距离的机件，老式显微镜粗螺旋向前扭，镜头下降接近标本。

新近出产的显微镜（如Nikon显微镜）镜检时，右手向前扭载物台上升，让标本接近物镜，反之则下降，标本脱离物镜。