5-1 含生物碱类成分中药制剂的分析_图文.ppt

高效液相色谱法
利用高效液相色谱仪分离生物碱，通过检测器测量各组分的峰面积或峰高，与标准品比较来确定生物碱的含量。
06
生物碱类药物分析的样品处
理与分离技术
萃取技术
液-液萃取
利用两种不混溶的溶剂， 使生物碱从一种溶剂转移 到另一种溶剂中的过程。
固-液萃取
利用固体吸附剂吸附样品 中的生物碱，然后用溶剂 洗脱的过程。
嘌呤类生物碱
总结词
具有嘌呤骨架的基本结构
详细描述
嘌呤类生物碱是一类具有嘌呤骨架的基本结 构的生物碱，通常具有嘧啶环和嘌呤环通过 碳-碳键相连的结构特征。
04
生物碱类药物的定性分析
化学反应法
01
02
03
沉淀反应
生物碱类药物与某些试剂 发生沉淀反应，通过沉淀 的颜色、形状等特征进行 鉴别。
显色反应
进行鉴别。
紫外光谱法
最大吸收波长
紫外光谱法可以检测生物碱类药物在紫外光下的最大吸 收波长，通过最大吸收波长的位置进行定性分析。
吸收曲线
紫外光谱法可以获得生物碱类药物的吸收曲线，通过吸 收曲线的形状和变化规律进行鉴别。
核磁共振波谱法与质谱法
核磁共振波谱特征
核磁共振波谱法可以检测生物碱类药物中氢原子和碳原子的核磁共振信号，通过特征峰 的位置和强度进行定性分析。
详细描述
高效液相色谱法是一种常用的分离和分析方法，具有高分离效能、高灵敏度和广泛应用的特点。通过高压泵将生 物碱类药物在固定相和移动相之间进行分配，实现各成分的分离，再通过检测器进行定量和定性分析。
气相色谱法
总结词
适用于挥发性生物碱的分析方法
VS
详细描述
气相色谱法适用于挥发性生物碱的分析， 通过将生物碱类药物在气相状态下进行分 离，利用不同组分的沸点差异实现分离。 该方法具有高分离效能、高灵敏度和分析 速度快的特点。

N
奎宁
pKb29.7
O CH3
H3C N
N
OH
N ON
H3C N ON
N N
CH3
咖啡因 （pKb14.15）
CH3
茶碱 （弱酸性）
N CH3
HCl 3H2O
HO
O
OH
盐酸吗啡（两性）
（3）立体结构与碱性的关系
CH3O
N N H
O
OC
OC
OCH3 OCH3
利血平（pKa 6.07）
OCH3 OCH3
残渣加稀盐酸1ml使溶解，加碘化铋钾试液1~2滴,
即生成黄棕色沉淀。
（二）色谱法鉴别
1. TLC法 TLC法是Ch.P.中药制剂常用
鉴别方法，大多用硅胶为吸附剂
硅胶是弱酸性吸附剂，会吸附生物 碱，用中性展开剂时，Rf 小，并会产生 斑点拖尾现象
防止斑点拖尾的措施 A. 展开剂中加入碱性试剂
（例氨水、二乙胺、吡啶） B. 用硅胶铺板时加碱液（例氢氧化钠） C. 改用其他吸附剂（例碱性氧化铝）
有些小分子的呈液态（烟碱、槟榔碱)
麻黄碱具有挥发性 咖啡因具有升华性
O H3C
N
CH3 N
N ON
CH3
咖啡因
OH NHCH3 CH CH CH3
麻黄碱
COOCH3
N 槟榔碱
CH3
N
N
CH3
烟碱
2. 溶解性
游离生物碱OHH 生物碱盐
难溶于水 易溶于有机溶剂
易溶于水 难溶于有机溶剂
例 盐酸吗啡
Ch.P.（2010）
苦味酸钠
K 2HPO4
buffer
过滤
溶醇解、水定容

测定方法包括紫外分光光度法、高效液相色谱法等。
延胡索中延胡索乙素成分分析
1 2 3
延胡索乙素的结构与性质
延胡索乙素是延胡索中的主要生物碱成分，具有 特定的结构和性质，包括分子式、分子量、离
从延胡索中提取延胡索乙素的方法包括溶剂法、 酸水提取法等。常用的分离方法包括色谱法、结 晶法等。
中药分析5-1-生物碱课件
目录
• 生物碱概述 • 生物碱提取与分离方法 • 生物碱鉴定与含量测定方法 • 常见中药中生物碱成分分析 • 生物碱药理活性与临床应用 • 实验操作注意事项与实验报告要求
01
生物碱概述
生物碱定义与分类
生物碱定义
生物碱是一类含氮的碱性有机化 合物，通常存在于植物、动物和 微生物中，具有广泛的生物活性 和药理作用。
操作
将含有生物碱的中药提取物通过色谱柱，以适当的流动相进行洗脱。生物碱在色谱柱上因吸附作用而达到分配平 衡，不同生物碱因吸附力不同而按一定顺序流出色谱柱。通过收集流出液并对流出液进行检测，可以得到单一或 纯度较高的生物碱组分。
03
生物碱鉴定与含量测定方法
呈色反应鉴定法原理及应用
原理
利用生物碱与特定试剂发生颜色反应 的特性，通过观察颜色变化来判断生 物碱的存在。
操作
将含有生物碱的中药粉末与适量的固体吸附剂（如硅胶、氧化铝等）混合均匀， 然后进行加热。生物碱在加热过程中升华，被吸附在固体吸附剂表面。最后通过 冷却、洗脱等步骤将生物碱从吸附剂上分离出来。
色谱法原理及操作
原理
利用生物碱在固定相和流动相之间的分配平衡进行分离。色谱法具有分离效果好、分辨率高等优点，适用于复杂 样品中生物碱的分离和纯化。
原理
利用高效液相色谱仪对生物碱进行分离和检测，通过峰面积或峰高与标准曲线比较来测 定生物碱的含量。

非极性溶剂系统：一般先用10%的氢氧化 铵、碳酸氢钠或氢氧化钠碱化，使生物盐 游离，后用氯仿或乙醚提取，缺点是不能 提出水溶性生物碱。
第七页，编辑于星期日：七点 十四分。
极性溶剂系统：极性较大的生物碱可用
中性甲醇、乙醇、酸水（常用0.1%-1%的盐酸、硫酸等）以及缓冲液提取，
但提出的杂质较多，需净化。
第五章 中药制剂中各类化学成分分析
第一节 含生物碱（alkaloid）类成分的分析
第一页，编辑于星期日：七点 十四分。
生物碱的分布
含生物碱量多的科有罂粟科、防已科、茄科、小 檗科、毛茛科、芸香科、夹竹桃科、马钱科及茜 草科等，中药有三尖杉、麻黄、黄连、黄柏、乌 头、延胡索、粉防已、颠茄、洋金花、贝母、百 部等。
品精密称定，加无水乙醇溶液并放置24小时，过滤，减压
回收乙醇，至残留液至小量时加2%盐酸溶液（注2），
移入分液漏斗中，用乙醚萃取3次（注3），在样品液中
滴 加 氨 试 液 调 PH9 10 （ 注 4 ） ， 再 用 乙 醚 - 氯 仿 （3:1）混合液提取３次（注5），合并萃取液，蒸干， 加无水乙醇溶解．精密加入硫酸液（0.01mol/l）与
通常用磷酸盐缓冲液，但操作时由于存在 盐，做过后应充分洗柱，以免腐蚀柱子。
第二十六页，编辑于星期日：七点 十四分。
（2）、固定相方面的改进 A：选择C链较短的键合相硅胶为固定相，如C8
比C18好，原因是由于硅烷的C链较短则覆盖硅 胶的表面较好，只有较少的游离硅醇基。 B：封尾技术可使填料的键合更彻底，常用三甲 基氯硅烷（TMCS）处理，可减少残余羟基，增 加单体覆盖度。
人有了知识，就会具备各种分析能力，
明辨是非的能力。
所以我们要勤恳读书，广泛阅读，

（）
(二)生物碱的色谱鉴别 1．薄层色谱法 首先用适当的溶剂提取生物碱，提取液经浓缩 后直接或经过必要的净化后，点在薄层板上，层析后喷洒生物碱显 色剂，再根据生物碱的特性，选择特异的颜色反应或荧光，并应用 纯品对照，或标准药材对照，同时须作阴性对照后确定。如用硅胶 为吸附剂时，一般应用碱性系统展开剂较多，或使生物碱的薄层分 离在碱性环境下进行。
2021/01/21测定
(一)经典化学方法 1.重量法 重量法测定中药制剂中生物碱多为测定其总生物碱的 含量。本法可用于混合总碱、未知结构或分子量相差较大的生物碱 的含量测定。缺点是挥发性生物碱不宜用此法，在蒸发提取溶剂或 加热、干燥时能分解破坏以及加碱使生物碱游离时可发生水解的生 物碱也不可用此法。本法取样量大，得到的残渣在称量的准确度内 方可应用。应用本法要求定量的将生物碱提取完全，并尽可能除去 杂质，须注意选择合适的提取溶剂。 实例 见P135 苦参片中苦参总碱的测定
(2)两相滴定法： 因边滴边使游离生物碱溶于有机溶剂中，不
致影响终点的观察。更重要的是由于游离生物碱进入有机相，明显
地增大了生物碱盐的电离常数pKa。生物碱盐在两相中的水解为
pKa(D)=pKa - log(1+PC)，即与分配系数有关。一般的测定方法是
称取生物碱盐类溶于水中(加氯化钠少许)，然后加一定量有机溶剂，
(2)生物碱的酸性水溶液或稀醇（小于50%）溶液中，滴加碘碘化钾试剂数滴，产生棕色或褐色沉淀，
BH+ + I2-K+I- → BI2HI（棕、褐色） + K+
(3)生物碱的酸性水溶液或稀醇（小于50%）溶液中，滴加碘化 铋钾、碘化汞钾试剂数滴，产生红棕色沉淀、类白色沉淀。
BH+ + BiI3KI → BBiI3HI（红棕色） + K+ 2B02H1/+01/2+1 HgI2KI → BHgI22HI（类白色） + K+ 第一课件网 1

内标物+杂质对照品→对照溶液， 进样，测定，计算校正因子
生物碱类药物的分析
校正因f） 子 As（ Cs AR CR
供试品+内标→供试品溶液，进样，
测定杂质和内标峰面积或峰高，计算
杂质含量
含量C（ ） f A x A C 生物碱类药物的分析
x ss
（2）外标法测定供试品中某个杂质
的含量
供试品→供试品溶液
（三）一般测定方法
一般采用半微量法。中国药典（2000年 版）的测定方法为：取经适当方法干燥的 供 试 品 适 量 〔 约 消 耗 高 氯 酸 滴 定 液 （ 0.1 mol/L）8 ml〕，加冰醋酸10～30 ml使溶解。 若供试品为氢卤酸盐，应再加5％醋酸汞的 冰醋酸溶液3～5 m1，加各药品项下规定的 指示液1～2滴，用高氯酸滴定液（0.1mol/L） 滴定，并将滴定结果用空白试验校正。
3. 原子吸收分光光度法 主要用于金属元素的检查，具
有灵敏度高、选择性好等优点。如 肝素钠中钾盐的检查。
生物碱类药物的分析
（六）吸附或分配性质的差异—色谱 法
1. TLC （1）杂质对照品法
（2）高低浓度对比法
生物碱类药物的分析
（3）参比杂质对照品法 选用可能存 在的某种物质作为杂质对照品。
（4）选用质量符合规定的与供试品 相同的药物作为杂质对照品。
方法
S溶 剂 溶 解 供试品溶液 一定量供试 品 稀 释 溶 对 液照溶
生物碱类药物的分析
分别进样，测定供试品溶液中各 杂质峰面积及其总和，与对照溶液主 成分峰面积比较，控制供试品中杂质 的量。
生物碱类药物的分析
优点：不需杂质对照品，可同时 控制各个杂质及其总量限度
缺点：检测波长处，各杂质和药 物的吸收强度可能有差异，准确度差

一、结构特征及理化性质
• （二）理化性质 • 1. 物理性状 多数生物碱为结晶型固体，少数为无定形粉末，个别小 分子生物碱为液体，如槟榔碱、烟碱等。液体生物碱及个别小分子生 物碱具有挥发性和升华性，如麻黄碱具有挥发性、咖啡因具有升华性 等。一般生物碱为无色或白色，结构中存在较长共轭体系时可显不同 颜色，如黄连生物碱显黄色。 • 2. 溶解性 大多数生物碱属亲脂性成分，游离状态下难溶于水，易溶 于氯仿、乙醚、丙酮、甲醇、乙醇等有机溶剂；与酸结合成盐后水溶 性增加，但与不同酸生成的盐水溶性有差异，一般含氧无机酸及小分 子有机酸的生物碱盐水溶性较大。季铵型生物碱、生物碱氮氧化物易 溶于水，一些小分子生物碱则既可溶于水也可溶于有机溶剂。含有酸 性基团(如酚羟基、羧基)的生物碱可溶于不同碱性的碱水溶液中，含 有内酯环、内酰胺结构的生物碱可溶于热苛性碱水溶液。 • 3. 酸碱性 大多数生物碱具有不同程度的碱性。碱性强弱取决于生物 碱结构中氮原子的杂化方式、电子云密度分布以及分子的立体效应、 氢键效应等。酰胺类生物碱一般碱性较弱，几呈中性；如果在生物碱 结构中尚存在酸性基团，则同时会表现出酸碱两性。
一、结构特征及理化性质
• 4. 沉淀反应 大多数生物碱在酸性水溶液中可以与生物碱沉淀试剂(如 碘化物复盐、重金属盐和大分子酸等)生成不溶于水的复盐或分子复 合物，借以检查中药制剂中生物碱的存在和测定中药制剂中生物碱成 分的含量。但须注意的是，共存的蛋白质、多肽和鞣质等成分，也可 与生物碱沉淀试剂生成沉淀，产生假阳性。因此，用沉淀反应进行中 药制剂中生物碱成分分析时，要用适宜的方法先行处理样品供试液， 排除干扰。 • 5. 显色反应 少数生物碱可与特定试剂反应产生不同颜色。生物碱在 一定pH条件下可与一些酸性染料定量结合，生成有色络合物，被氯仿 等有机溶剂定量提取；具有酯键结构的生物碱，如乌头碱等，可与异 羟肟酸铁试剂反应产生紫红色。这些显色反应可用于中药制剂中生物 碱成分的分析。 • 6. 紫外光谱特征 结构中具有共轭体系的生物碱可产生 紫外吸收，如 吡啶类、喹啉类、吲哚类生物碱等。吸收峰位置和强度除与助色团的 种类、位置、数目有关外，需要特别指出的是，生物碱结构中的氮原 子若与发色团直接连接或参与发色团，则还与测定溶剂的pH有关。

ppt课件
10
4、异喹啉类 盐酸吗啡、磷酸可待因
－
HO
可C待H3因
O
HO
N CH3
吗啡
ppt课件
11
性质：
碱性：吗啡分子中含有酚羟基和叔胺基团，故属两性 化合物，碱性略强，即可以溶与氢氧化钠又可溶与盐 酸水溶液。
可待因分子中仅有叔胺基团，无酚羟基，碱性较吗 啡稍强，不能溶与氢氧化钠溶液。
ppt课件
易水解
2.五元脂环上有叔胺氮原子，故碱性较强，易
与酸成盐
3.山莨菪碱中有不对称碳原子，呈左旋体
阿托品为消旋体，无旋光性。
ppt课件
8
3 喹啉类药物 硫酸奎宁、硫酸奎尼丁、喜树碱等
典型药物的结构
H
H
HO
H HO
N
O
（喹核碱） O
H
N
（喹核碱）
N
(喹啉环）
N
(喹啉环）
奎宁（左旋体）
奎尼丁（右旋体）
碱性:> ppt课件
一、一般鉴别反应
（一）熔点测定法 （二）沉淀反应
生物碱 + 生物碱沉淀试剂H+ ↓
ppt课件
20
常用的生物碱沉淀试剂为：
1. 重金属盐类，如K2HgI4、KBiI4、 I2—KI、二氯化汞等；
2. 大分子酸类，如磷钼酸、硅钨 酸等。
ppt课件
21
（三）显色反应 常用的显色试剂：浓硫酸、浓硝
酸、钼硫酸、钒硫酸、硒硫酸、甲醛 硫酸等
腐蚀性极强，在空气中猛 烈发烟并吸收水分。
氢硫 溴酸 酸阿 山托 莨 +品 发 菪碱 烟 HNO3·
黄色醇制深紫色
KOH
ppt课件

时，须首先作一工作曲线，目的是考察工 作曲线是否为通过原点的直线，以便决定 采用外标一点法或外标两点法进行定量， 其次需要找出线性范围，以便摸索样品点 样量。采用薄层直接扫描定量还需要随行 对照品进行，同时要考察稳定性，同板、 异板效应和精密度等。
2．高效液相色谱
生物碱类成分进行高效液相色谱分析时， 可采用正相、反相和离子对色谱，其中以 反相高效液相色谱应用较多。

本方法可不需要标准对照品，但需注
意生物碱生成单盐或双盐，并要注意样品
的净化。
(二)单体生物碱含量测定
1．薄层色谱法
薄层色谱技术在生物碱类成分分离和测定 须结合生物碱的通性选择合适的提取溶剂制 成供试品溶液，需要采用化学方法提取和纯 化，常用液-液萃取或液-固萃取，或结合生 物碱的特性进行纯化。常使用碱性展开剂或 在碱性气氛中展开。在薄层直接扫描定量
显相同的黄色荧光斑点。 注意事项 温度在25℃以上；控制湿度在18-47％
范围内色谱效果较好.
1
2
3
4
5
6
样品：
1.淫羊藿甙
2.淫羊藿 3.箭叶淫羊藿
4.朝鲜淫羊藿 5.柔毛淫羊藿 6.巫山淫羊藿
2．聚酰胺薄层色谱
聚酰胺薄层色谱用于分离含游离酚羟基 的黄酮甙与甙元较好。由于各种黄酮类成 分取代基团的性质、多少和位置的不同， 与聚酰胺形成氢键的能力有所差异而得到 分离。
二、结构特性和理化性质 （一）结构特性
大多含有C，H，N，O组成 结构复杂，结构类型较多 氮原子有多种形式 有羧基,酚羟基等酸性官能团及酯键取代
(二)理化性质
1. 物理性质
多为结晶型固体，少数为液体
一般生物碱为白色或无色，但结构中具 有较长共轭体系，并有助色团的可显不 同颜色

OH
H
H N
·HCl
CH3
H3C H
白色结晶性粉末，无臭、味苦
ppt课件
11
一、生物碱类药物性质与结构分析
①苯烃胺类药物结构
秋水仙碱 （colchicine）
H3CO
H3CO H3CO
H N
CH3
HO
O OCH3
淡黄色结晶性粉末
ppt课件
12
一、生物碱类药物性质与结构分析
②苯烃胺类药物理化性质
性状及溶解性 碱性 氨基醇双缩脲反应 旋光性 紫外特征吸收
第六节 生物碱类药物的分析
生物碱（alkaloids）是一类重要的天然有机化合物，多数 具有复杂的氮杂环结构，生理活性显著，多显碱性, 绝大 多数存在于植物体内，已有数十种广泛应用于临床。
中国药典收录的生物碱类化学药物主要有苯烃胺类、托烷 类、喹啉类、吲哚类、黄嘌呤类等。
ppt课件
1
一、生物碱类药物性质与结构分析
34
·H
2
一、生物碱类药物性质与结构分析
②喹啉类药物理化性质
旋光性
硫酸奎宁和硫酸奎尼丁是对映异构体，仅喹核 碱部分立体结构不同，硫酸奎宁是左旋体， 20mg/ml水溶液比旋度为－237～－244；硫酸 奎尼丁为右旋体，20mg/ml水溶液，比旋度为 ＋275～＋290。
ppt课件
35
一、生物碱类药物性质与结构分析
旋光性
盐酸麻黄碱为左旋体，50mg/ml溶液测定比旋 度为－33～－35.5；盐酸伪麻黄碱为右旋体， 50mg/ml溶液测定比旋度为＋61.0～＋62.5； 秋水仙碱为左旋体， 10mg/ml溶液比旋度为－ 425～－450。
ppt课件