食品中呕吐毒素的快速检测胶体金免疫层析法
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挪I分析与检测胶体金免疫层析技术快速检测谷物中的黄曲霉毒素、玉米赤霉烯酮、呕吐毒素□贺丽丽拜发分析系统销售(北京)有限公司1971 年,Faulk 和 Taylor 首次将胶体金引入免疫化学领域,建立了 以胶体金标记抗原(或抗体)检测相 应抗体(或抗原)的免疫学新方法。
自此,胶体金标记技术成为继荧光标 记、酶标记和放射性免疫标记之后的 又一新型免疫标记技术〇经过近50年的 发展,免疫胶体金标记技术已较为成 熟,并被广泛应用于电镜水平研究、光显微细胞化学、免疫沉淀及蛋白质 染色技术中。
此外,这一技术还被引 进免疫诊断/检测领域,并在医学检验、植物学诊断、刑侦、食品安全检测方面应用广泛。
德国拜发生产的 RIDA®QUICK系列就是利用胶体金免疫层析原理制备成胶体金免疫层析横流检测卡,结合德拜发集团独有的RIDA®SM ARTAPP读数仪,能对食品中存在的霉菌毒素进行准确定量检测。
本文通过实验对德国拜发集团生产的RIDA®QUICK霉菌毒素系列在谷物、花生及花生粗榨油中的检测应用进行客观评价。
1材料与方法1.1材料RIDA®QUICK Aflatoxin RQSvRIDA®QUICK Zearalenon RQS、RIDA®QUICK DON 及 RIDA®SMART APP读数仪,均由德国拜发集团提供;用于添加回收实验的标准品为Trilogy®标准品,用于验证实验过程的参考物质为Tri丨ogy®参考物质;用于配合HPLC高效液相色谱使用并进行比对试验的霉菌毒素免疫亲和柱为EASI-EXTRACT®A F L A T O X IN、E A S I-E X T R A C T®ZEARALENONE、D0NPREP®。
以上所有材料均由德国拜发集团生产,购买自拜发分析系统销售(北京)有限公司。
谢婷婷,林秀,陈凌峰:小麦中呕吐毒素快速检测方法比较小麦中呕吐毒素快速检测方法比较*谢婷婷,林秀,陈凌峰(福建省粮油质量监测所,福建福州350012 )摘要:以小麦为原料,采用酶联免疫吸附法、肢体金快速定量法、时间分辨荧光免疫层析法及高效液相色谱法 检测其呕吐毒素含量并探讨3种快速检测方法的准确性。
结果表明,上述3种快速检测方法均适用于小麦中呕吐毒 素的检测,且具有准确性高、快速、简单、便携等特点。
关键词:呕吐毒素;酶联免疫法;肢体金快速定量法;时间分辨荧光免疫层析法;液相色谱法doi:10.3969/j.issn.l007-550X.2018.09.003中图分类号:TS210.7 文献标识码:A文章编号:1007-550X(2018 ) 09-0020-05目前,基于大型仪器的检测方法,由于仪器不 具有便携性、样品前处理操作比较复杂、检测需要 的时间较长、检测成本较高等原因无法满足短时间 内得出实验结果和现场快速检测的需求。
快速检测 方法与大型仪器方法相比,是一种能够将样品前处 理简化以及短时间内能对相关的质量安全指标得出 检测结果的技术[1]。
近年来,粮食中真菌毒素的危害性受到广泛关 注,其检测方法也越来越受到重视。
呕吐毒素(vomitoxm),又名脱氧雪腐镰刀菌烯醇(D O N),它是一种由镰刀菌属产生的毒性代谢产物,主要污 染小麦、大麦、燕麦、玉米等谷类作物[2]。
粮食中呕吐毒素快速检测方法有酶联免疫吸附 筛查法、胶体金决速定量法和时间分辨免疫层析法。
酶联免疫吸附法(ELISA法)是把抗原和抗体的特异性 免疫反应和酶的高效催化作用有机结合起来的检测 技术[3]也是国标规定的筛查方法[4]。
胶体金快速定量 法是以胶体金层析免疫竞争为原理,以小分子化合 物为检测对象,运用侧流技术发展起来的一种真菌 毒素快速检测方法[5—7],它具有检测速度更快、检测 成本较低,操作更简单等优点。
时间分辨免疫层析法(time—resolved fluoroimmunoassay,T R FIA)是禾lj 用真菌毒素与荧光微球标记的特异性单克隆抗体反 应,用时间分辨荧光免疫层析检测仪测定反应产物 中的荧光强度,前期的研究结果已证实该检测方法 可行[8]。
食品检测FOOD INSPECTION食品安全问题一直是国家和社会关注的重点问题,因此,相关部门一定要高度重视食品安全检测,并注重新技术的引入,比如胶体金免疫层析技术。
胶体金免疫层析技术可以有效发挥食品检测的作用,更好地保障食品安全,提高人们的生活质量,促进社会的稳定发展。
一、胶体金及免疫层析技术的含义1.胶体金技术。
胶体金技术是指氯金酸在某种环境下的一种变化反应而形成的胶体溶液。
其反应过程首先要用的是还原剂,通常有白磷和柠檬酸钠等,在其作用下将氯金酸按相关要求聚合成固定大小的金颗粒,然后再由静电作用将其凝聚成稳定的胶体溶液。
胶体状态下的金颗粒具有高电子密度的特性,其密度一般能达到107个/mm2,呈圆形的斑点,颜色一般为粉红色,其大小肉眼刚好可见,在检测中常用作一种标记物,对实验结果的影响十分重大。
2.免疫层析技术。
免疫层析技术是一种免疫分析技术,主要是根据抗原和抗体的反应来进行检测。
通常包括两大类,一类是非竞争性免疫层析,一类是竞争性免疫层析。
非竞争性免疫层析技术主要针对一些大分子蛋白质的检测。
首先,将采用胶体金标记后的样品与等待检测抗原中的特异性抗体进行结合,这两类物质结合后会出现沉淀现象,此时需要注意将其沉积物放到结合区域中。
其次,将待检测的样品材料放到样品区位置,再利用毛细管将样品与结合区进行完全融合,其中,带有胶体金标记的样品材料会由于受到张力的作用而不断地向前移动。
此时,样品中已经存在的抗原物质便会自动与带有胶体金标记的样品相互结合,形成一种结合体物质。
紧接着,样品溶液会进行固相化,并在通过固相化后的第一层防线时将含有结合体物质抗体材料进行捕获,然后形成新的结合体复合物材料。
那些没有结合体材料的物质不会被捕获,它们会继续向前移动,然后那些结合体在通过下一道防线时会与另一种抗体结合,形成第三种结合体复合材料。
竞争性免疫层析技术主要针对一些单一抗原的小分子抗原适用,比如兽药残留的检测等。
胶体金免疫层析法在食品快速检测中的应用研究进展谢桂芳,赖 飞,王艺蓉,周雪丽,王晓鹭,蔡 滔*(贵州省农产品质量安全监督检验测试中心,贵州贵阳 550001)摘 要:近年来,随着城市化进程加快,各类食品流通更为频繁,食品安全问题日益凸显,人们越来越关注食品安全,而准确、快速的检测方法是保证食品安全的重要手段。
本文介绍了胶体金免疫层析技术的基本原理和制备方法,并概述了其在检测食品中农药残留、霉菌毒素、食源性致病菌、重金属和非法添加剂等方面的应用及前景,为我国食品安全快速定量检测技术提供思路方法。
关键词:胶体金免疫层析技术;食品安全;快速检测The Progress of the Application of Colloidal GoldImmunochromatography in Rapid Food DetectionXIE Guifang, LAI Fei, WANG Yirong, ZHOU Xueli, WANG Xiaolu, CAI Tao* (Guizhou Agricultural Products Quality and Safety Supervision and Testing Center, Guiyang 550001, China) Abstract: In recent years, with the acceleration of urbanization, the circulation of various foods has become more frequent, and food safety issues have become increasingly prominent. People are paying more and more attention to food safety, and accurate and rapid detection methods are important means to ensure food safety. This paper introduces the basic principle and preparation method of colloidal gold immunochromatography technology, and outlines its application and prospects in the detection of pesticide residues, mycotoxins, foodborne pathogens, heavy metals, and illegal additives in food, providing ideas and methods for rapid quantitative detection of food safety in China.Keywords: colloidal gold immunochromatographic technology; food safety; rapidly detection近年来,食品安全事件频发,食品安全问题也受到了社会的高度关注。
赤霉病麦〔呕吐毒素〕中毒呕吐毒素的快速检测
1 适用范围:快速筛查粮食或饲料中呕吐毒素是否超标以及食物中毒发生后快速筛查中毒因子是否为呕吐毒素。
2 检测原理:基于竞争法胶体金免疫层析技术,检测液中如果含有呕吐毒素,其浓度又高于检测试纸的灵敏度,那么会与试纸卡上的抗体结合形成复合物,使应该在试纸上出现的红色T线不显色,结果判为阳性。
反之为阴性。
3 灵敏度:100L常量稀释液,用力振荡2分钟。
静置或离心得到样品上清液。
5测试步骤:取出测试卡,开封后平放在桌面,用滴管逐滴参加3滴样品提取液于测试卡椭圆形孔中,如到30秒时在长方形观测窗中无液体移行,可补加1滴样液,在5~10分钟内判断结果。
6 结果判断
阳性:C线显色,T线不显色,判为阳性。
阴性:C线显色,T线肉眼可见,无论颜色深浅均判为阴性。
无效:C线不显色,无论T线是否显色,该试纸均判为无效。
7 备注与考前须知
所有试纸启封后1小时内使用。
本品为一次性产品,请勿重复使用;请勿使用非本品随附的稀释液。
本品为筛选试剂,任何可疑结果请用其它方法作进一步确认。
8 产品包装:试纸卡5片,2021缩稀释液1瓶,15mL离心管1支〔清洗后可反复使用〕。
9 产品保存:4~30℃阴凉枯燥处保存,不可冷冻,防止阳光直晒,有效期18个月。
胶体金免疫层析技术在食品安全现场快速检测中的应用【摘要】本文主要介绍了胶体金免疫层析技术在食品安全现场快速检测中的应用。
首先解释了该技术的原理,接着分析了其在食品安全快速检测中的优势。
然后详细描述了在食品安全现场检测中的具体操作步骤,并提供了多个应用案例。
最后展望了该技术在食品安全领域的未来发展,并总结了其在食品安全现场快速检测中的潜力和重要性,以及在食品行业推广的前景。
通过本文的介绍,读者可以更全面地了解胶体金免疫层析技术在食品安全现场的应用情况,以及其对食品安全保障的重要性,为食品行业的安全监测提供了新的思路和方法。
【关键词】胶体金免疫层析技术、食品安全、现场快速检测、原理、优势、操作步骤、应用案例、发展、潜力、重要性、推广前景1. 引言1.1 胶体金免疫层析技术在食品安全现场快速检测中的应用胶体金免疫层析技术是一种基于抗原与抗体特异性结合原理的生物分析技术,具有高灵敏度、快速性和简便操作等优点,广泛应用于食品安全现场快速检测中。
通过该技术,可以快速准确地检测食品中的有害物质或符合性指标,为食品安全保障提供了重要手段。
在食品安全领域,胶体金免疫层析技术被广泛应用于检测食品中的农药残留、添加剂、重金属污染等问题。
其高灵敏度和快速性使得可以在现场迅速检测出食品中的有害物质,及时采取相应措施,保障消费者的健康。
通过不断的技术改进和优化,胶体金免疫层析技术在食品安全现场快速检测中的应用范围和效率将得到进一步提升,为食品行业的发展和食品安全保障贡献更大的力量。
相信随着技术的不断发展,胶体金免疫层析技术在食品安全现场快速检测中的应用将会更加广泛和深入。
2. 正文2.1 胶体金免疫层析技术的原理胶体金免疫层析技术是一种基于抗原抗体反应原理的检测方法,其原理主要包括抗原抗体反应、胶体金信号放大和光学检测三个部分。
当目标物质(抗原)存在于样品中时,它会与特定的抗体结合形成抗原抗体复合物。
这个复合物具有高度的特异性和亲和性,可以保证检测的准确性。
呕吐毒素在小麦及面粉等农副产品中的检测方法呕吐毒素又称脱氧雪腐镰刀菌烯醇,是单端孢菌素烯烃中的一种。
作为一种常见的真菌毒素,呕吐毒素在自然界中广泛存在于小麦等粮谷类农作物中,在世界范围内存在着较高的污染率。
小麦一旦被呕吐毒素产毒霉菌株污染,在适宜生长环境(水分活度Aw>0.87)中,产毒菌株会迅速生长,产生呕吐毒素,而小麦中的呕吐毒素又会随小麦粉的生产过程带入到面粉中,严重威胁人体健康。
呕吐毒素属于剧毒或中等毒物,对人有很强的毒性,当人摄入了被呕吐毒素污染的食物后,会导致厌食、呕吐、腹泻、发烧、站立不稳、反应迟钝等急性中毒症状,严重时损害造血系统造成死亡。
由于DON的严重影响引起了各国的普遍重视。
美国食品药物管理局规定食品中呕吐毒素安全标准是1000ug/kg,而欧盟制定的限量标准相对较严,谷粉及玉米粉中允许限量750ug/kg 。
我国2013年国家风险监测计划已将小麦和面粉中呕吐毒素含量的检测列为重点。
呕吐毒素的检测标准1、大麦、小麦、麦片、小麦粉≤1000ug/kg2、玉米、玉米面(渣、片)≤1000ug/kg3、大米、小米、高粱米、大麦米、黍米≤1000ug/kg4、米粉、汤圆粉、面条、饺子皮、馄钝皮、烧麦皮、面糊、面筋、八宝粥罐头≤1000ug/kg呕吐毒素检测方法的国标(1)GB/T23503-2009《食品中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的测定免疫亲和层析净化高效液相色谱法》(2)GB/T5009.111-2003《谷物及其制品中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的测定》第二法免疫测定法(ELISA)呕吐毒素检测方法的行标LS/T6113-2015《粮油检测粮食中脱氧雪腐镰刀菌烯醇测定胶体金快速定量法》呕吐毒素商检推荐行业标准SN/T《1571-2005进出口粮谷中呕吐毒素检验方法液相色谱法》测定呕吐毒素的常用方法如:济南痕量生物提供的胶体金定性卡法、酶联免疫吸附测定法、免疫亲和柱高效液相色谱法、胶体金定量卡法。
食品中呕吐毒素的快速检测胶体金免疫层析法1 范围本方法规定了胶体金免疫层析法测定食品中呕吐毒素的快速检测方法。
本方法的适用范围为谷物加工品及谷物碾磨加工品中呕吐毒素的快速检测。
2 原理试样中呕吐毒素与胶体金标记的特异性抗体发生结合后,抑制了层析过程中抗体与硝酸纤维素膜检测线上呕吐毒素-BSA偶联物的免疫反应,使检测线颜色发生变化,根据检测线颜色变化进行结果判定。
3试剂及耗材除非另有规定,所用试剂均为分析纯,实验室用水应符合GB/T 6682中三级水。
3.1 试剂3.1.1 提取液:水或胶体金免疫层析检测装置专用提取液。
3.1.2 甲醇:分析纯3.2 参考物质呕吐毒素参考物质的中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子量见表1,纯度≥99%。
表1 呕吐毒素参考物质的中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子量注:或等同可溯源物质。
3.3 标准溶液配制准确称取适量的呕吐毒素参考物质(精确至0.0001g),用甲醇溶解,配成0.1mg/mL 的标准储备液,-20 ℃保存,有效期3个月。
3.4 材料3.4.1 呕吐毒素胶体金免疫层析检测装置。
3.4.2 中速定性滤纸。
3.4.3 离心管。
3.4.4 滤膜:0.45 µm 水相滤膜。
4 仪器及设备4.1 天平:感量0.01~0.0001 g。
4.2 粉碎机。
4.3 样品筛:0.9 mm。
4.4 漩涡混合器:1500 rpm/min。
4.5 移液器:100 μL,200 μL,1.0 mL。
4.6 恒温装置:(37.0±2.0)℃。
4.7 设备或方法使用环境条件:温度15 ℃~30 ℃,湿度≤80%。
5 分析步骤5.1 扦样和分样,按GB 5491 执行。
5.2 试样制备5.2.1 样品粉碎:将被测样品(5.1)粉碎,过0.9 mm样品筛,充分混合均匀,备用。
5.2.2 质控样品制备:选取经标准方法确认不含呕吐毒素的样品,称取2份平行样,其中一份作为阴性质控样品,另一份添加标准溶液使其样品中呕吐毒素含量为1.0 mg/kg,作为阳性质控样品。
胶体金免疫层析技术在食品检测中的应用近年来,食品安全问题始终是人们关心的焦点问题,要想高效保证食品质量,提升生活水平,一定要对食品安全剖析检查工作给予高度关注,在此环境下,大量食品安全剖析监测技术纷纷被研制出来,且在实践中被广泛运用,胶体金免疫层析技术便是其中的一种,具备操纵简易、剖析明确、容易鉴别等优势。
胶体金免疫层析技术剖析的定义对于胶体金来说,具体是指在氯金酸溶液的还原剂促进下,生成一定尺寸的金颗粒,而且在静电影响下形成相应的胶体溶液。
这些金颗粒具备较大的电子密度,聚合成相应密度以后便能通过肉眼发现有粉红色的斑点存在,能将其当做免疫层析实验的指示物。
在使用胶体金免疫层析技术的过程中,一定要把特殊性抗体或者抗原牢固在膜中,通过毛细作用让样品在层析条上运动,进而让其和受体产生免疫反应。
但在此进程中,免疫复合物会被阻挡在监测带之内,因此能一目了然的观察实验结果。
在检查食品时,使用此项技术可以实现药物、病菌、毒素以及蛋白质等不同物质的检查,而且具备资金投入少、反应迅速、薄弱交叉反应性的优点。
胶体免疫层析技术在食品检测中的运用此技术最初被运用在医学行业中,且被大范围的推行,利用率较高。
最近几年才被运用在食品测定作业中展开食品检查。
在食品监测领域中此项技术的运用重点有两方面,一方面是食品质量的检查;另一方面则是食品安全的检查,进而符合现代人对食品监测的要求。
所以,一定要加强此技术在食品监测中的利用探究,让其良好的推动食品监测技术的提升。
在食品质量方面的运用。
人们在日常生活中时常触及到的食品类型主要有面食、水果、肉、蔬菜等,然而不管是何种食品,其重点的构成成分依然是糖、维生素、脂肪、矿物质、蛋白质等一些人体所需要的养分物质,其几乎归属高分子有机物质,能利用免疫学手段展开物质检查,此种检查只要进行半定量剖析即可,而利用胶体金免疫层析技术便可高效的对食品物质展开检查,迅速准确的获得最后结果,符合检查标准。
比如:奶牛在常规生产之后最开始几天都生产牛初乳,具备较多的有利元素,营养非常高。
呕吐毒素快速检测试纸条使用说明书【产品简介】脱氧雪腐镰刀菌烯醇(deoxynivalenol)又称呕吐毒素(Vomitoxin),本产品为呕吐毒素胶体金快速检测卡,用于定性检测谷物样品中呕吐残留,整个检测过程只需要5分钟,检测卡灵敏度为250ng/ml(2 50ppb)。
谷物样品的检测限为1μg/ml(1ppm)。
【检测原理】基于竞争法胶体金免疫层析技术,检测液中如果含有呕吐毒素,其浓度又高于检测试纸的灵敏度,则会与试纸卡上的抗体结合形成复合物,使应该在试纸上出现的红色T线不显色,结果判为阳性。
反之为阴性。
【适用范围】快速筛查粮食或饲料中呕吐毒素是否超标以及食物中毒发生后快速筛查中毒因子是否为呕吐毒素。
【包装组成】●呕吐毒素胶体金法检测卡(40份)●一次性塑料滴管(40支)●塑料一次性手套(5只)●使用说明书(1份)【样品处理】1.取5g以上有代表性的粉碎后的谷物样品(过20目筛),准确称取0.5g均匀粉碎试样,加入到配套的15 ml离心管中。
2.向离心管中准确加入纯净水和乙酸乙酯各2mL,将瓶塞盖紧密封,用力振荡5分钟,4000rpm离心1分钟(备注:如实验室没有大离心机设备,可以用小离心管取1.5ml上清液,用小离心机离心)。
3.用吸管取0.6mL上清液到小玻璃杯中,吹干滤液,然后用0.3ml体积稀释液复溶杯底固体。
此溶解液即为检测液.4.取出试纸,开封后平放在桌面,用滴管向试纸孔缓慢而准确地逐滴加入3滴检测液。
5.5~10分钟判断结果,半小时后的结果判读无效。
【结果判断】阴性(-):C、T线均显色。
表示样品中不含有待检测物质或其浓度低于检测限。
阳性(+):检测T线不显色,则表示样品中待检测物质浓度高于检测限。
无效:质控C线未显色,表明操作过程不正确或试纸条已失效。
【贮存条件及有效期】2-30℃,密封干燥,检测卡保存时间18个月,乙酸乙酯为易挥发性有机溶剂,保存为12个月。
真菌毒素胶体金检测试纸基于抗原抗体的免疫原理,利用纳米胶体金层析技术,在真菌毒素的现场检测时具有以下优势:1) 单个样品即可检测,无需仪器设备,特别适合现场检测;2) 灵敏度高: 免疫层析法可检出量可达ng级,ELISA法最低检出量可达pg级,并可定量测定。
胶体金免疫层析技术在食品安全现场快速检测中的应用随着食品工业的快速发展和全球贸易的加速,食品安全问题日益受到人们的关注。
食品安全检测是保障食品质量和保障公众健康的重要环节,快速、准确的检测技术对于食品安全已经成为不可或缺的一环。
胶体金免疫层析技术是一种迅速、敏感、特异性好,并且易于操作的检测技术。
本文将介绍胶体金免疫层析技术的原理、特点及在食品安全现场快速检测中的应用。
一、胶体金免疫层析技术原理胶体金免疫层析技术是基于抗原与抗体之间的特异性结合原理。
首先将目标分子作为抗原,与特异性的抗体反应形成抗原-抗体复合物,然后将其与胶体金颗粒结合。
当抗原-抗体复合物与胶体金颗粒结合时,会发生颗粒聚集,产生可见的颜色变化。
通过颜色的变化可以判断样品中是否存在所需检测的目标分子,从而实现快速检测。
1. 快速性:胶体金免疫层析技术无需复杂的操作步骤,通常能在几分钟内完成检测。
对于食品安全现场快速检测来说,时间就是金钱,因此快速性是其最大的优势之一。
2. 敏感性:胶体金免疫层析技术对目标分子的检测灵敏度高,可以检测到极低浓度的目标分子。
这使得其在食品安全检测中能够及时发现微量的有害物质,保障公众健康。
3. 特异性:胶体金免疫层析技术对目标分子的检测特异性好,能够区分目标分子和其他干扰物质,减少误判的可能性。
4. 易操作性:胶体金免疫层析技术不需要复杂的仪器设备,操作简单,适用于各种现场检测环境。
5. 成本低廉:胶体金免疫层析技术的试剂成本低廉,相对于传统的检测方法,可以大大降低检测成本。
1. 残留农药检测:农药残留是食品安全的一个重要问题,特别是对于农产品出口国家来说,农药残留的限量标准要求更加严格。
胶体金免疫层析技术可以快速检测食品中的农药残留情况,为食品出口提供可靠的检测数据。
2. 食品中毒素检测:食品中的毒素是一种常见的食品安全隐患,例如黄曲霉素、赭曲霉素等。
采用胶体金免疫层析技术可以对食品中的毒素进行快速检测,及时发现食品中的毒素污染问题。
附件2食品中呕吐毒素的快速检测胶体金免疫层析法(KJ201702)1范围本方法规定了食品中呕吐毒素的胶体金免疫层析快速检测方法。
本方法适用于谷物加工品及谷物碾磨加工品中呕吐毒素的快速测定。
2原理样品中呕吐毒素与胶体金标记的特异性抗体结合,抑制抗体和与检测卡中检测线(T线)上呕吐毒素-BSA偶联物的免疫反应,从而导致检测线颜色深浅的变化。
通过检测线与控制线(C 线)颜色深浅比较,对样品中呕吐毒素进行定性判定。
3试剂和材料除另有规定外,本方法所用试剂均为分析纯,水为GB/T6682规定的二级水。
3.1试剂3.1.1提取液:水或胶体金免疫层析检测卡专用提取液。
3.1.2甲醇。
3.2参考物质呕吐毒素参考物质的中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子量见表1,纯度≥99%。
表1呕吐毒素参考物质的中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子量注:或等同可溯源物质。
3.3标准溶液配制准确称取适量呕吐毒素参考物质(精确至0.0001g),用甲醇溶解,配成0.10mg/mL的标准储备液,-20℃保存,有效期3个月。
3.4材料3.4.1呕吐毒素胶体金免疫层析检测卡。
3.4.2中速定性滤纸。
3.4.3滤膜:0.45µm水相滤膜。
4仪器及设备4.1天平:感量分别为0.01g和0.0001g。
4.2粉碎机。
4.3样品筛:0.9mm。
4.4漩涡混合器:1500rpm/min。
4.5移液器:100μL,200μL,1.0mL。
4.6恒温装置:37.0℃±2.0℃。
4.7环境条件:温度15-30℃,湿度≤80%。
5分析步骤5.1试样制备样品粉碎:将待测样品粉碎,过0.9mm样品筛,充分混合均匀,备用。
5.2试样提取准确称取粉碎混匀样品5.0g于离心管中,加入25.0mL水或专用提取液(3.1.1),漩涡混合器(4.4)提取5min,静置1min,中速定性滤纸(3.4.2)过滤,滤液用0.45µm水相滤膜(3.4.3)过滤,将滤液稀释至检测卡(3.4.1)检测范围内,混匀,即得待测液。
小麦中呕吐毒素荧光定量免疫层析快速检测产品评价唐亚娥,王 坛,米 山(铜川市粮油产品质量监督检验站,陕西铜川 727000)摘 要:为在基层检测中更加准确地检出小麦中的呕吐毒素,给予收储单位和贸易商有效的参考,本文选择市场占有率较高的4个呕吐毒素荧光定量免疫层析快速检测厂家,对其进行准确度和精密度评价。
结果表明,4个厂家产品准确度均有回收率超出80%~120%的结果,A厂家高浓度水平检测结果相对标准偏差超出15%,偏差较大不符合粮食收储要求;B、C、D厂家检测结果精密度较好,但存在整体偏低或偏高的风险。
因此各厂家现有产品在收粮现场使用均有瑕疵,各个厂家仍需要进行进一步优化。
关键词:小麦;呕吐毒素;荧光定量;快速检测;产品评价Evaluation of Commercial Fluorescence Quantitative Rapid Test Strips for Detection of Deoxynivalenolin WheatTANG Yae,WANG Tan, MI Shan(Tongchuan Grain and Oil Product Quality Supervision and Inspection Station, Tongchuan 727000, China)Abstract: In order to more accurately detect vomiting toxins in wheat in grassroots testing and provide effective reference for storage units and traders, this article selects four manufacturers with high market share for fluorescence quantitative immunochromatographic rapid detection of vomiting toxins and evaluates their accuracy and precision. The evaluation results show that the accuracy of the products from all four manufacturers has a recovery rate exceeding 80%~120%. The relative standard deviation of the high concentration level detection results from manufacturer A exceeds 15%, which is relatively large and does not meet the requirements for grain storage; the precision of B, C, D manufacturer’s testing results is good, but there is a risk of overall low or high accuracy. Therefore, the existing products of various manufacturers have defects when used at the grain harvesting site, and further optimization is still needed by each manufacturer.Keywords: wheat; deoxynivalenol; fluorescence quantification; quick detection; product evaluation.小麦是我国的主要粮食作物之一,我国2022年小麦产量13 772万t,占全国粮食总产量的20.06%。
胶体金免疫层析技术在食品安全现场快速检测中的应用胶体金免疫层析技术是一种利用抗体对特定抗原的专一性识别来快速检测待检样品中是否含有目标成分的技术。
它的原理是利用胶体金颗粒的特性,在试剂纸上形成一条稀释液前进的前沿,当待检样品中含有目标成分时,会与胶体金颗粒上的抗体结合发生凝聚,导致胶体金颗粒的前进受阻,从而形成一条明显的测试线。
通过观察测试线的形成情况,就能够判断待检样品中是否含有目标成分。
这种技术具有操作简便、快速、灵敏度高、特异性好等特点,因此在食品安全现场快速检测中得到了广泛应用。
胶体金免疫层析技术在食品中毒事件的现场快速检测中发挥了重要作用。
食品中毒事件往往发生突然,而且影响范围广泛,如果不能及时准确地检测出问题食品,后果将不堪设想。
胶体金免疫层析技术可以在现场迅速检测出食品中是否含有有毒物质,为食品安全问题的迅速处理提供了技术支持。
其敏感度高、操作简单的特点,使得它可以在最短的时间内完成检测,为食品安全事件的应急处理提供了重要的技术手段。
胶体金免疫层析技术在食品添加剂和农药残留快速检测中发挥了重要作用。
食品添加剂和农药残留一直是食品安全领域的一个难题,传统的检测方法往往需要耗时耗力,不能满足快速检测的需求。
而胶体金免疫层析技术可以在现场快速检测食品中是否含有添加剂和农药残留,为食品安全监管提供了一种快速、有效的手段。
通过这种技术,可以在生产现场、市场和餐饮场所等地方对食品进行快速检测,保障了广大消费者的食品安全。
胶体金免疫层析技术在食品质量追溯中也具有重要意义。
食品质量追溯是保障食品安全的一项重要工作,通过对食品的原料、生产过程、流通环节等进行追溯,可以找出食品质量问题的来源,防范和控制食品安全风险。
而胶体金免疫层析技术可以在食品的生产环节和流通环节进行快速检测,及时发现和排除问题食品,保障食品质量和食品安全。
这对于食品质量追溯和食品安全管理具有重大的意义。
胶体金免疫层析技术在食品安全现场快速检测中的应用随着社会快速发展,人们对食品安全的关注度也越来越高。
食品安全问题直接关系到每个人的健康,而快速有效的食品安全检测技术就显得尤为重要。
胶体金免疫层析技术是一种先进的生物分析技术,具有快速、灵敏度高、操作简便等优点,因此在食品安全现场快速检测中得到了广泛的应用。
一、胶体金免疫层析技术原理及优势胶体金免疫层析技术是一种基于免疫反应的快速检测技术,其原理是将标记了胶体金颗粒的抗体与待测样品中的靶分子发生特异性识别结合,形成抗原-抗体-胶体金复合物。
随后将复合物加载到免疫层析膜上,待样品在膜上流动时,复合物将随之流动,并在免疫层析膜上形成一个特定的条带,最终通过观察胶体金颗粒在免疫层析膜上的聚集情况来判断待测物质的存在与浓度。
(1)快速性:该技术检测时间短,通常在30分钟以内即可得到结果,适用于快速现场检测。
(2)灵敏度高:胶体金颗粒作为标记物质,具有良好的散射光学性能,检测灵敏度高,可达到ppb或ppm级别。
(3)特异性强:抗体的高特异性保证了该技术对靶物质的特异性识别能力,可准确判断待测样品中目标分子的存在与浓度。
(4)操作简便:仪器设备简单,不需要复杂的实验步骤和条件,操作简便,适合于现场快速检测。
1. 农药残留检测:2. 食品中有害物质检测:食品中有害物质如重金属、致癌物质等对人体健康造成严重威胁,通过胶体金免疫层析技术,可以对食品中的这些有害物质进行快速准确的检测,及时发现并处理食品安全隐患。
3. 食品真伪鉴别:胶体金免疫层析技术还可以用于食品的真伪鉴别,通过对食品成分中的特定分子进行快速检测,判断食品原料的真实性,避免假冒伪劣产品对消费者健康造成危害。
4. 生物毒素检测:食品中的生物毒素是一种常见的食品安全隐患,而胶体金免疫层析技术可以用于生物毒素的快速检测,保障食品安全,防止食品中毒事件的发生。
随着人们对食品安全意识的提高和食品安全检测技术的不断进步,胶体金免疫层析技术将在食品安全现场快速检测中发挥越来越重要的作用。
食品中呕吐毒素的快速检测
胶体金免疫层析法(KJ201702)
1范围
本方法规定了食品中呕吐毒素的胶体金免疫层析快速检测方法。
本方法适用于谷物加工品及谷物碾磨加工品中呕吐毒素的快速测定。
2原理
样品中呕吐毒素与胶体金标记的特异性抗体结合,抑制抗体和与检测卡中检测线(T线)上呕吐毒素-BSA偶联物的免疫反应,从而导致检测线颜色深浅的变化。
通过检测线与控制线(C 线)颜色深浅比较,对样品中呕吐毒素进行定性判定。
3试剂和材料
除另有规定外,本方法所用试剂均为分析纯,水为GB/T 6682规定的二级水。
3.1试剂
3.1.1提取液:水或胶体金免疫层析检测卡专用提取液。
3.1.2甲醇。
3.2参考物质
呕吐毒素参考物质的中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子量见表1,纯度≥99%。
表1呕吐毒素参考物质的中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子量
注:或等同可溯源物质。
3.3标准溶液配制
准确称取适量呕吐毒素参考物质(精确至0.0001g),用甲醇溶解,配成0.10mg/mL的标准储备液,-20℃保存,有效期3个月。
3.4材料
3.4.1呕吐毒素胶体金免疫层析检测卡。
3.4.2中速定性滤纸。
3.4.3滤膜:0.45µm水相滤膜。
4仪器及设备
4.1天平:感量分别为0.01g和0.0001g。
4.2粉碎机。
4.3样品筛:0.9mm。
4.4漩涡混合器:1500rpm/min。
4.5移液器:100μL,200μL,1.0mL。
4.6恒温装置:37.0℃±2.0℃。
4.7环境条件:温度15-30℃,湿度≤80%。
5分析步骤
5.1试样制备
样品粉碎:将待测样品粉碎,过0.9mm样品筛,充分混合均匀,备用。
5.2试样提取
准确称取粉碎混匀样品5.0g于离心管中,加入25.0mL水或专用提取液(3.1.1),漩涡混合器(4.4)提取5min,静置1min,中速定性滤纸(3.4.2)过滤,滤液用0.45µm水相滤膜(3.4.3)过滤,将滤液稀释至检测卡(3.4.1)检测范围内,混匀,即得待测液。
5.3测定步骤
吸取150µL上述待测液加入到检测卡中,恒温装置内反应6min后进行结果判定。
5.4质控实验
每批样品应同时进行空白试验和加标质控试验。
5.4.1空白试验
称取空白试样,按照5.2和5.3步骤与样品同法操作。
5.4.2加标质控试验
准确称取空白试样5.0g或适量(精确至0.01g)置于离心管中,加入适量呕吐毒素标准溶液,使呕吐毒素浓度为1.0mg/kg,按照5.2和5.3步骤与样品同法操作。
6结果判定要求
根据控制线(C线)和检测线(T线)颜色变化进行结果判定,采用目测法对结果进行判定,比色法和消线法判定原则如下:
6.1比色法
6.1.1无效
控制线(C线)不显色,无论检测卡(T线)是否显色,表示操作不正确或检测卡已失效。
6.1.2阳性结果
控制线(C线)显色,检测线(T线)显色明显浅于控制线(C线),判为阳性。
6.1.3阴性结果
控制线(C线)显色,检测线(T线)比控制线(C线)显色深或检测线(T线)与控制线(C线)显色基本一致,判为阴性。
图1 比色法结果判定示意图
6.2消线法
6.2.1无效
控制线(C线)不显色,无论检测卡(T线)是否显色,表示操作不正确或检测卡已失效。
6.2.2阳性结果
控制线(C线)显色,检测线(T线)不显色,判为阳性。
6.2.3阴性结果
控制线(C线)显色,检测线(T线)显色,判为阴性。
图2 消线法结果判定示意图
6.3质控样品要求
空白试验测定结果应为阴性,加标质控试验测定结果应为阳性。
7结论
当检测结果为阳性时,应对结果进行确证。
8性能指标
8.1检测限:呕吐毒素为1.0mg/kg。
8.2判定限:呕吐毒素为0.9mg/kg。
8.3假阴性率:≤5%。
8.4假阳性率:≤10%。
注:假阳性率和假阴性率计算方法参照《食品快速检测方法评价技术规范》(食药监办科〔2017〕43号)执行。
9其他
本方法测定步骤和结果判读也可以根据厂家检测卡的说明书进行,但应符合或优于本方法规定的性能指标。
本方法参比方法为GB 5009.111-2016《食品安全国家标准食品中脱氧雪腐镰刀菌烯醇及其乙酰化衍生物的测定》。
本方法负责起草单位:中国农业科学院油料作物研究所。
验证单位:中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所,南京工业大学食品与轻工学院,
湖北省食品药品监督检验研究院。
主要起草人:李培武、王督、陈爱亮、施祖灏、范志勇。