一氧化氮(Nitric oxide ,NO)含量测定试剂盒说明书

总一氧化氮检测试剂盒产品简介：总一氧化氮检测试剂盒(Total Nitric Oxide Assay Kit, 即Nitrate/Nitrite Assay Kit)采用了硝酸盐还原酶(Nitrate reductase)还原硝酸盐(nitrate)为亚硝酸盐(nitrite)，然后通过经典的Griess reagent检测亚硝酸盐，从而测定出总一氧化氮。

一氧化氮本身极不稳定，在细胞内很快代谢为硝酸盐(Nitrate)和亚硝酸盐(Nitrite)，通过上述方法检测出硝酸盐和亚硝酸盐的总量，就可以推算出总的一氧化氮的量。

本试剂盒采用了NADPH依赖性硝酸盐还原酶(NADPH dependent nitrate reductase)。

高浓度的NADPH会干扰后续的检测，消除NADPH的一种常用方法就是使用Lactate dehydrogenase (LDH)清除NADPH。

本试剂盒采用了LDH清除NADPH的方法，使检测结果更加准确。

对亚硝酸盐的检测下限达到2微摩尔/升，在2-80微摩尔/升的范围内有很好的线性关系。

浓度过高的样品可以适当稀释后再进行检测。

样品范围广，可以检测细胞裂解液、组织裂解液、细胞或组织的培养液、血清、血浆或尿液等中一氧化氮的含量。

酚红和10%血清对测定无明显干扰。

样品需要量少。

根据样品中一氧化氮的浓度不同，仅需0-60微升样品。

检测速度快，仅需约80分钟即可完成检测。

本试剂盒采用了间接的一氧化氮检测方法，如需检测细胞内实际的一氧化氮水平，可以采用碧云天生产的DAF-FM DA (NO荧光探针)(S0019)。

保存条件：-20℃保存，一年有效。

NADPH，Nitrate Reductase，NaNO2 (1M)，Griess Reagent I 和Griess Reagent II需避光保存。

NADPH配制成溶液后必须分装并-70℃保存。

注意事项：RPMI 1640等含有较高浓度硝酸盐的培养液容易对本试剂盒的检测产生干扰，请尽量避免。

一氧化氮检测试剂盒（化学法）说明书修订日期：2016.06.22 Cat number：KGT008Store at4℃for for6months,避光For Research Use Only（科研专用）一、实验原理一氧化氮NO(即血管内皮舒张因子)，在生物体内作为一种反应性极强的自由基，兼有第二信使和神经递质作用，同时又是一种效应分子，在体内具有广泛的生理作用，如松弛血管平滑肌，抑制血小板聚集，调节血流，介导细胞毒效应和免疫调节，参与学习和记忆、动脉粥样硬化等作用。

NO本身半衰期极短，血液中的NO主要由血管内皮细胞、血管平滑肌细胞、血小板、巨噬细胞等产生以硝酸盐的形式存在，通过其浓度可以间接测知NO浓度。

NO遇氧及水生成硝酸盐及亚硝酸盐，后二者遇硝酸盐显色剂可生成淡红色偶氮化合物，通过比色可间接测知NO浓度。

二、试剂盒组份组份KGT008（100assays）保存条件Buffer A100mL4℃Buffer B50mL室温或4℃试剂C粉剂一支4℃避光试剂D粉剂一支4℃避光Buffer E12mL室温亚硝酸钠标准液（2mmol/L）1mL4℃注意事项1．试剂C工作液配制：用时加入双蒸水至30mL，4℃避光保存。

（难溶，可以60℃隔水加热至溶解）2．试剂D工作液配制：用时加入双蒸水至12mL，4℃避光保存。

3．显色剂配制：试剂C工作液︰试剂D工作液︰Buffer E＝2.5︰1︰1的体积比配制（现配现用），配好的显色剂放冰箱保存，如颜色变得很深则不可再用。

4.亚硝酸钠标准液（20umol/L）配制：将亚硝酸钠标准液（2mmol/L）用双蒸水100倍稀释待用，现用现配。

三、操作步骤1．操作方法：于一次性塑料试管中按下表加入试剂试剂空白管标准管测定管双蒸水（mL）a﹡20μmoL/L亚硝酸钠标准液（mL）a﹡样本（mL）a﹡Buffer A（mL）0.80.80.8Buffer B（mL）0.40.40.4混匀后室温放置10分钟，3500～4000转/分，离心10分钟，取澄清的上清液上清液（mL）0.80.80.8显色剂（mL）0.40.40.4混匀,15分钟后,550nm比色，0.5cm光径比色杯，水调零，测各管OD值注意事项a﹡为取样量=标准品量=蒸馏水量)/()/20()mol/gprot (L gprot L mol OD OD OD OD NO 待测样本蛋白浓度标准管浓度值管－空白管标准管值空白管管测定管含量÷⨯-=μμ样品测试前稀释倍数标准管浓度值管－空白管标准管值空白管管测定管含量⨯⨯-=)/20()mol/L (L mol OD OD OD OD NO μμ四、计算1．计算公式血清：组织：2．计算举例(1)兔血清测定管OD 值为0.018，空白管OD 值为0.004，标准管OD 值为0.024。

碧云天生物技术/Beyotime Biotechnology 订货热线：400-1683301或800-8283301 订货e-mail ：******************技术咨询：*****************网址：碧云天网站 微信公众号一氧化氮检测试剂盒产品编号 产品名称包装 S0021S 一氧化氮检测试剂盒 500次 S0021M一氧化氮检测试剂盒2500次产品简介：碧云天生产的一氧化氮检测试剂盒采用了经典的Griess Reagent ，并对其测定的溶液体系进行了优化，使检测下限达到1µM ，在1-100µM 范围内有非常完美的线性关系。

检测速度极快，完成一条标准曲线或5-10个样品的测定只需3分钟。

样品范围广，可以检测细胞或组织及其培养液中的一氧化氮的含量，酚红和10%血清均对测定无明显干扰，也可以检测血清、血浆和尿液中一氧化氮的含量。

包装清单：产品编号 产品名称 包装 S0021S-1 1M NaNO 2 1ml S0021S-2 Griess Reagent I 25ml S0021S-3 Griess Reagent II25ml —说明书1份产品编号 产品名称 包装 S0021M-1 1M NaNO 2 1ml S0021M-2 Griess Reagent I 125ml S0021M-3Griess Reagent II125ml —说明书1份保存条件：-20ºC 避光保存，一年有效。

4ºC 避光保存，半年有效。

注意事项：本产品对人体有害，操作时请小心，并注意有效防护以避免直接接触人体或吸入体内。

如保存不当导致溶液变色或沉淀，则说明该溶液已经失效，请购买新的试剂盒。

不建议使用RIPA 裂解液对细胞或者组织进行裂解，使用RIPA 裂解液可能在后续反应中产生沉淀，影响测试。

推荐使用碧云天的细胞与组织裂解液(一氧化氮检测用)(S3090)或Western 及IP 细胞裂解液(P0013)。

人一氧化氮(NO)ELISA试剂盒使用方法本试剂盒仅供研究使用。

检测范围：48T6μmol/L -200μmol/L使用目的：本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中一氧化氮(NO)含量。

实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人一氧化氮(NO)水平。

用纯化的人一氧化氮(NO)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入一氧化氮(NO)，再与HRP 标记的一氧化氮(NO)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。

TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。

颜色的深浅和样品中的一氧化氮(NO)呈正相关。

用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中人一氧化氮(NO)浓度。

1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。

若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

操作步骤1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。

在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。

加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。

7.温育：操作同3。

8.洗涤：操作同5。

9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

一氧化氮检测试剂盒（化学法）说明书修订日期：2016.06.22 Cat number：KGT008Store at4℃for for6months,避光For Research Use Only（科研专用）一、实验原理一氧化氮NO(即血管内皮舒张因子)，在生物体内作为一种反应性极强的自由基，兼有第二信使和神经递质作用，同时又是一种效应分子，在体内具有广泛的生理作用，如松弛血管平滑肌，抑制血小板聚集，调节血流，介导细胞毒效应和免疫调节，参与学习和记忆、动脉粥样硬化等作用。

NO本身半衰期极短，血液中的NO主要由血管内皮细胞、血管平滑肌细胞、血小板、巨噬细胞等产生以硝酸盐的形式存在，通过其浓度可以间接测知NO浓度。

NO遇氧及水生成硝酸盐及亚硝酸盐，后二者遇硝酸盐显色剂可生成淡红色偶氮化合物，通过比色可间接测知NO浓度。

二、试剂盒组份组份KGT008（100assays）保存条件Buffer A100mL4℃Buffer B50mL室温或4℃试剂C粉剂一支4℃避光试剂D粉剂一支4℃避光Buffer E12mL室温亚硝酸钠标准液（2mmol/L）1mL4℃注意事项1．试剂C工作液配制：用时加入双蒸水至30mL，4℃避光保存。

（难溶，可以60℃隔水加热至溶解）2．试剂D工作液配制：用时加入双蒸水至12mL，4℃避光保存。

3．显色剂配制：试剂C工作液︰试剂D工作液︰Buffer E＝2.5︰1︰1的体积比配制（现配现用），配好的显色剂放冰箱保存，如颜色变得很深则不可再用。

4.亚硝酸钠标准液（20umol/L）配制：将亚硝酸钠标准液（2mmol/L）用双蒸水100倍稀释待用，现用现配。

三、操作步骤1．操作方法：于一次性塑料试管中按下表加入试剂试剂空白管标准管测定管双蒸水（mL）a﹡20μmoL/L亚硝酸钠标准液（mL）a﹡样本（mL）a﹡Buffer A（mL）0.80.80.8Buffer B（mL）0.40.40.4混匀后室温放置10分钟，3500～4000转/分，离心10分钟，取澄清的上清液上清液（mL）0.80.80.8显色剂（mL）0.40.40.4混匀,15分钟后,550nm比色，0.5cm光径比色杯，水调零，测各管OD值注意事项a﹡为取样量=标准品量=蒸馏水量)/()/20()mol/gprot (L gprot L mol OD OD OD OD NO 待测样本蛋白浓度标准管浓度值管－空白管标准管值空白管管测定管含量÷⨯-=μμ样品测试前稀释倍数标准管浓度值管－空白管标准管值空白管管测定管含量⨯⨯-=)/20()mol/L (L mol OD OD OD OD NO μμ四、计算1．计算公式血清：组织：2．计算举例(1)兔血清测定管OD 值为0.018，空白管OD 值为0.004，标准管OD 值为0.024。

人试剂盒说明书人血清一氧化氮NOELISA检测试剂盒人试剂盒说明书,人血清一氧化氮（NO）ELISA检测试剂盒樊克生物专业供应：使用目的：本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本血清试验原理：NO试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）.已知NO浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。

先将NO和生物素标记的抗体同时温育。

洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。

再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。

产生颜色。

颜色的深浅和样品中NO的浓度呈比例关系。

试剂盒内容及其配制自备材料1．蒸馏水。

2．加样器：5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。

3．振荡器及磁力搅拌器等。

安全性1．避免直接接触终止液和底物A、B。

一旦接触到这些液体，请尽快用水冲洗。

2．实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。

3．不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。

操作注意事项1．试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。

稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。

2．实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。

3．不用的其它试剂应包装好或盖好。

不同批号的试剂不要混用。

保质前使用。

4．使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。

5．使用干净的塑料容器配置洗涤液。

使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。

6．洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。

7．底物A应挥发，避免长时间打开盖子。

底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。

避免用手接触，有毒。

实验完成后应立即读取OD值。

8．加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。

9．按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。

样品收集、处理及保存方法1、血清－－－－-操作过程中避免任何细胞刺激。

使用不含热原和内毒素的试管。

收集血液后，1000×g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。

总一氧化氮检测试剂盒产品简介：总一氧化氮检测试剂盒(Total Nitric Oxide Assay Kit, 即Nitrate/Nitrite Assay Kit)采用了硝酸盐还原酶(Nitrate reductase)还原硝酸盐(nitrate)为亚硝酸盐(nitrite)，然后通过经典的Griess reagent检测亚硝酸盐，从而测定出总一氧化氮。

一氧化氮本身极不稳定，在细胞内很快代谢为硝酸盐(Nitrate)和亚硝酸盐(Nitrite)，通过上述方法检测出硝酸盐和亚硝酸盐的总量，就可以推算出总的一氧化氮的量。

本试剂盒采用了NADPH依赖性硝酸盐还原酶(NADPH dependent nitrate reductase)。

高浓度的NADPH会干扰后续的检测，消除NADPH的一种常用方法就是使用Lactate dehydrogenase (LDH)清除NADPH。

本试剂盒采用了LDH清除NADPH的方法，使检测结果更加准确。

对亚硝酸盐的检测下限达到2微摩尔/升，在2-80微摩尔/升的范围内有很好的线性关系。

浓度过高的样品可以适当稀释后再进行检测。

样品范围广，可以检测细胞裂解液、组织裂解液、细胞或组织的培养液、血清、血浆或尿液等中一氧化氮的含量。

酚红和10%血清对测定无明显干扰。

样品需要量少。

根据样品中一氧化氮的浓度不同，仅需0-60微升样品。

检测速度快，仅需约80分钟即可完成检测。

本试剂盒采用了间接的一氧化氮检测方法，如需检测细胞内实际的一氧化氮水平，可以采用碧云天生产的DAF-FM DA (NO荧光探针)(S0019)。

保存条件：-20℃保存，一年有效。

NADPH，Nitrate Reductase，NaNO2 (1M)，Griess Reagent I 和Griess Reagent II需避光保存。

NADPH配制成溶液后必须分装并-70℃保存。

注意事项：RPMI 1640等含有较高浓度硝酸盐的培养液容易对本试剂盒的检测产生干扰，请尽量避免。

人一氧化氮(NO)酶联免疫分析试剂盒使用方法本试剂盒仅供研究使用。

检测范围：6mc/L -200 卩 m (/L 使用目的：本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中一氧化氮 (NO)含量。

实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人一氧化氮(NO)水平。

用纯化的人一氧化氮(NO)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入一氧化氮(NO)，再与HRP标记的一氧化氮(NO)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物 TMB 显色。

TMB 在HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。

颜 色的深浅和样品中的一氧化氮 (NO)呈正相关。

用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度(0D值)，通过标准曲线计算样品中人一氧化氮 (NO)浓度。

试剂盒组成1 •标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。

若不能 马上进行试验，可将标本放于 -20 C 保存，但应避免反复冻融2. 不能检测含 NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP )活性。

操作步骤 1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀2. 加样：分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂， 其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。

在酶标包被板上标准品准确加样 50 1,待测样品孔中先加样品稀释液40 1,然后再加待测样品10 1 (样品最终稀释度为 5倍)。

加样将样品加于酶标板孔底部，尽 量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

3.温育：用封板膜封板后置 37 C 温育30分钟。

48T4. 配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

6. 加酶：每孔加入酶标试剂50 4，空白孔除外。

7. 温育：操作同3。

8. 洗涤：操作同5。

9. 显色：每孔先加入显色剂A50 4，再加入显色剂B50 4，轻轻震荡混匀，37 C避光显色15分钟.10. 终止：每孔加终止液50 4,1终止反应（此时蓝色立转黄色）。

一氧化氮（NO）含量检测试剂盒说明书(货号：NM-W-0132 微量法100T/96S)一、产品简介：一氧化氮（Nitric Oxide，NO）是一种气态分子自由基，在生物体内作为重要的信使分子和效应分子，参与调节血管形成、神经传递、免疫调控及肿瘤生长等多种生理及病理过程。

此外，NO是植物的主要生物活性分子，在植物的生长发育和对胁迫的反应过程中参与了多种生理活动，如种子萌发、叶扩展、根生长、花器官发生、气孔运动的调节以及植物的抗逆反应等。

NO在体内或水溶液中极易氧化生成NO2-。

在酸性条件下，NO2-与重氮盐磺酸胺生成重氮化合物，进一步与萘基乙烯基二胺偶合，产物在550nm处有特征吸收峰，测定其吸光值，可以计算NO含量。

酶标仪、96孔板、台式离心机、恒温水浴锅/培养箱、超声细胞破碎仪、研钵/匀浆器、天平、可调式移液器、冰和蒸馏水。

四、操作步骤：建议正式实验前选取2个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验样本和试剂浪费！1、预实验样本制备℃ 组织样本：称取0.2g样本，加入1mL提取液进行冰浴匀浆后，10000g，4℃离心15min，取上清置于冰上待测。

【注】：若增加样本量，可按照组织质量(g)：提取液体积(mL)为2~5：10的比例进行提取。

℃ 细菌/细胞样本：建议1000万细菌或细胞加入1mL提取液，超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率200W，超声3s，间隔7s，总时间5min），10000g，4℃离心15min，取上清置于冰上待测。

【注】：若增加样本量，可按照细菌/细胞数量（104）：提取液（mL）为1000~2000：1的比例进行提取。

℃ 血清（浆）等液体样本：直接测定。

若液体有浑浊则离心取上清测定。

2、标准溶液的配制：把10μmol/mL标准品母液用蒸馏水稀释成1.25μmol/mL的标准溶3、预实验上机操作：℃ 酶标仪预热30min以上，调节波长至550nm。

4、正式实验：℃ 若预实验∆A 测定小于0.005，可以增加样本量后再进行测定；如果∆A测定大于1.5，建议将样本上清用稀释液适当稀释后再进行测定，并将改变后的W和D代入公式计算；℃ 确定好最适实验条件后，正式实验样本制备同预实验样本制备；℃ 正式实验按照预实验操作步骤进行（标准管和空白管预实验已做，正式实验可选做）。

一氧化氮检测试剂盒（化学法）说明书修订日期：2016.06.22 Cat number：KGT008Store at4℃for for6months,避光For Research Use Only（科研专用）一、实验原理一氧化氮NO(即血管内皮舒张因子)，在生物体内作为一种反应性极强的自由基，兼有第二信使和神经递质作用，同时又是一种效应分子，在体内具有广泛的生理作用，如松弛血管平滑肌，抑制血小板聚集，调节血流，介导细胞毒效应和免疫调节，参与学习和记忆、动脉粥样硬化等作用。

NO本身半衰期极短，血液中的NO主要由血管内皮细胞、血管平滑肌细胞、血小板、巨噬细胞等产生以硝酸盐的形式存在，通过其浓度可以间接测知NO浓度。

NO遇氧及水生成硝酸盐及亚硝酸盐，后二者遇硝酸盐显色剂可生成淡红色偶氮化合物，通过比色可间接测知NO浓度。

二、试剂盒组份组份KGT008（100assays）保存条件Buffer A100mL4℃Buffer B50mL室温或4℃试剂C粉剂一支4℃避光试剂D粉剂一支4℃避光Buffer E12mL室温亚硝酸钠标准液（2mmol/L）1mL4℃注意事项1．试剂C工作液配制：用时加入双蒸水至30mL，4℃避光保存。

（难溶，可以60℃隔水加热至溶解）2．试剂D工作液配制：用时加入双蒸水至12mL，4℃避光保存。

3．显色剂配制：试剂C工作液︰试剂D工作液︰Buffer E＝2.5︰1︰1的体积比配制（现配现用），配好的显色剂放冰箱保存，如颜色变得很深则不可再用。

4.亚硝酸钠标准液（20umol/L）配制：将亚硝酸钠标准液（2mmol/L）用双蒸水100倍稀释待用，现用现配。

三、操作步骤1．操作方法：于一次性塑料试管中按下表加入试剂试剂空白管标准管测定管双蒸水（mL）a﹡20μmoL/L亚硝酸钠标准液（mL）a﹡样本（mL）a﹡Buffer A（mL）0.80.80.8Buffer B（mL）0.40.40.4混匀后室温放置10分钟，3500～4000转/分，离心10分钟，取澄清的上清液上清液（mL）0.80.80.8显色剂（mL）0.40.40.4混匀,15分钟后,550nm比色，0.5cm光径比色杯，水调零，测各管OD值注意事项a﹡为取样量=标准品量=蒸馏水量)/()/20()mol/gprot (L gprot L mol OD OD OD OD NO 待测样本蛋白浓度标准管浓度值管－空白管标准管值空白管管测定管含量÷⨯-=μμ样品测试前稀释倍数标准管浓度值管－空白管标准管值空白管管测定管含量⨯⨯-=)/20()mol/L (L mol OD OD OD OD NO μμ四、计算1．计算公式血清：组织：2．计算举例(1)兔血清测定管OD 值为0.018，空白管OD 值为0.004，标准管OD 值为0.024。

人血清一氧化氮（NO）ELISA试剂盒试验方法人血清一氧化氮（NO）ELISA试剂盒（用于血清、血浆、细胞培养上清液和其它生物体液内），仅供科研使用，不得用于临床！原理本试验采用双抗体夹心ABCELISA法。

用抗人NO单抗包被于酶标板上，标准品和样品中的NO与单抗结合，加入生物素化的抗人NO，形成免疫复合物连接在板上，辣根过氧化物酶标记的Streptavidin与生物素结合，加入底物工作液显蓝色，最终加停止液硫酸，在450nm处测OD值，NO浓度与OD值成正比，可通过绘制标准曲线求出标本中NO浓度。

试剂盒构成（28℃保管）酶标板（CoatedWells） 96孔酶标抗体工作液（EnzymeConjugate） 12ml 10×标本稀释液（SampleBuffer）12ml 20×浓缩洗涤液（WashBuffer）50ml标准品（Standards）：1000μM/瓶 2瓶底物工作液（TMBSolution） 12ml 第一抗体工作液（BiotinylatedAntibody） 12ml 停止液（StopSolution）12ml准备试剂与收集血样1.收集标本：血清、血浆（EDTA）、细胞培养上清液、组织匀浆等尽早检测，28℃保管48小时；更长时间须冷冻（20℃或70℃）保管，避开反复冻融。

2.标准品液配制：使用前加入1ml蒸馏水混匀，配成1000μM的溶液。

设标准管8管，第一管加标本稀释液900ul，第二至第八管加入标本稀释液500ul。

在第一管中加入1000μM的标准品溶液100ul混匀后用加样器吸出500ul，移至第二管。

如此反复作对倍稀释，从第七管中吸出500ul弃去。

第八管为空白对照。

3.10×标本稀释液用蒸馏水作1:10倍稀释（示例：1ml浓稀释液 9ml蒸馏水）。

4.洗涤液：用重蒸水1:20稀释（示例：1ml浓缩洗涤液加入19ml的重蒸水）检测程序1.加样：每孔各加入标准品或待测样品100ul，将反应板充分混匀后置37℃120分钟。

人一氧化氮(NO)酶联免疫分析试剂盒使用方法本试剂盒仅供研究使用。

检测范围：48T6μmol/L -200μmol/L使用目的：本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中一氧化氮(NO)含量。

实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人一氧化氮(NO)水平。

用纯化的人一氧化氮(NO)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入一氧化氮(NO)，再与HRP 标记的一氧化氮(NO)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。

TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。

颜色的深浅和样品中的一氧化氮(NO)呈正相关。

用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中人一氧化氮(NO)浓度。

试剂盒组成1 30倍浓缩洗涤液20ml×1瓶7 终止液6ml×1瓶2 酶标试剂6ml×1瓶8 标准品（400μmol/L）0.5ml×1瓶3 酶标包被板12孔×8条9 标准品稀释液 1.5ml×1瓶4 样品稀释液6ml×1瓶10 说明书1份5 显色剂A液6ml×1瓶11 封板膜2张6 显色剂B液6ml×1/瓶12 密封袋1个标本要求1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。

若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

操作步骤1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

200μmol/L 5号标准品150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液100μmol/L 4号标准品150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液50μmol/L 3号标准品150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液25μmol/L 2号标准品150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液12.5μmol/L 1号标准品150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。

NO试剂盒说明书一氧化碳试剂盒说明书(硝酸还原酶法)一.测定意义：NO化学性质活泼，体内代谢转化为硝酸盐(NO3)和亚硝酸盐(NO2),血清(NO3)与(NO2)浓度之和(NO2+NO3)才能准确代表体内(NO)水平。

血清(NO3+NO2)含量测定，国内有的单位采用金属镉还原法，但该法操作繁琐(血清需除蛋白)，反应不易控制(金属镉可将NO2进一步还原)，且不能完全将NO3还原为NO2，准确性差。

本测试法为一种灵敏、简捷、快速、稳定、易推广的方法。

二、原理：NO化学性质活泼，在体内代谢很快转化为NO2和NO3，而NO2又进一步转化为N03-,而NO2-又进一步转化为NO3-,本法利用硝酸还原酶特异性将NO3-还原为NO2-，通过显色深浅测定其浓度的高低。

一、试剂组成与配制：1.试剂一：液体6ml×2瓶(50T)如6ml×1瓶(25T)，-20℃以下保存。

使用前请放37℃水浴中或室温使其溶解后再用。

2.试剂二：液体6ml×2瓶(50T)如6ml×1瓶(25T)，-20℃以下保存。

使用前请放37℃水浴中或室温后再用。

混合试剂的配制：按试剂一：试剂二=1：1的比例配制，用多少配多少，配好后充分混合后待用，现用现配3、试剂三：液体12ml×1瓶(50T)如6ml×1瓶(25T)，室温保存4、试剂四：液体6ml×1瓶(50T)如3ml×1瓶(25T),室温保存5、试剂五：粉剂×1支，用时加90℃-100℃热蒸馏水20ml(50T)如10ml(25T)[注]，充分溶解，避光保存。

6、试剂六：粉剂×1支，用时加蒸馏水8ml(50T)如4ml(25T),避光冷藏保存，当颜色变成深咖啡色不可再用。

7、试剂七：液体8ml50T(4ml25T)×1瓶，室温保存。

显色剂的配制：需多少配多少试剂五：试剂六：试剂七=2.5：1：1.若能在一月内用完者也可以一次配成。