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新城疫冻干疫苗生产工艺流程1 生产用毒种制备1.1 毒种繁殖将毒种用灭菌生理盐水作适当稀释(如10-4或10-5),尿囊腔内接种10日龄SPF鸡胚,每胚0.1ml。
选接种后72~120小时死亡、且病痕明显的鸡胚,分别收获鸡胚液(尿囊液及羊水),装于灭菌容器内。
将检验无菌、且对1%鸡红细胞凝集价≥1:640(微量法1:512)的鸡胚液混合,定量分装于安瓿中,冷冻保存。
注明收获日期,毒种代数等。
1.2 毒种鉴定1.2.1 病毒含量按含毒鸡胚液量用灭菌生理盐水作为10倍系列稀释，取10-7、10-8、10-9 3个稀释度各尿囊腔内接种10日SPF鸡胚5个，每胚0.1ml，置36~37℃继续孵育，48小时以前死亡的鸡胚弃去不计，在48~120小时死亡的鸡胚随时取出，收获鸡胚液，同一稀释度的胚液等量混合，按稀释度分别测定红细胞凝集价，至120小时，取出所有活胚,逐个收获鸡胚液，分别测定红细胞凝集价，凝集价≥1:160 (微量法1:128)者判为感染，计算EID50，每0.1ml病毒含量应≥108EID50。
1.2.2 纯净应无细菌、霉菌、支原体和外源病毒污染，分别按《无菌检验或纯粹检验标准操作规程》、《支原体检验标准操作规程》、《外源病毒检验标准操作规程》进行。
1.3 毒种保存在-15℃以下保存,应不超过1年。
1.4 毒种继代应不超过3代。
2 制苗材料选择选择发育良好的9~11日龄SPF鸡胚作为制苗材料。
3 制苗用毒液的制备3.1接种取生产用毒种用灭菌生理盐水作适当稀释(如10-4或10-5),每胚尿囊腔内接种0.1ml，接种后密封针孔，置36~37℃继续孵育，不必翻蛋。
3.2 孵育和观察鸡胚接种后,每日照蛋一次，将在60小时前死亡的鸡胚弃去。
60小时后,每4~8小时照蛋一次,死亡的鸡胚随时取出,直至96或120小时,不论死亡与否,全部取出,气室向上直立,置于2~8℃冷却。
3.3 收获将冷却4~24小时的鸡胚取出,用碘酊消毒气室部位,然后以无菌手术剥除气室部卵壳，剪开尿囊膜，吸鸡胚液,每若干个鸡胚的胚液混合为一组。
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实验二鸡新城疫弱毒疫苗的制备新城疫又称亚洲鸡瘟，是由新城疫病毒引起的鸡的一种高度接触性传染病，其主要特征为呼吸困难、腹泻、神经紊乱及黏膜和浆膜出血，一年四季均可发生，为我国养鸡业的头号疾病。
预防和治疗所用的新城疫疫苗种类很多，大致包括灭活疫苗和弱毒疫苗两类。
下面以新城疫弱毒疫苗为例讲述其制备过程。
一、目的与要求1．掌握鸡新城疫弱毒疫苗的制备方法。
2．熟悉鸡新城疫弱毒疫苗制备的操作过程。
二、材料与试剂材料：种蛋、鸡胚孵化箱、冰箱、无菌操作台、手术镊子、注射器、蜡烛、酒精灯、酒精棉和碘酊等。
试剂：灭菌PBS液/生理盐水；青、链霉素溶液。
三、制备前准备1、种毒的选择：种毒属于弱毒力毒株，包括HB1株、F株、LaSota 株、LaSota-Clone30和N79株。
必须符合：①种毒对鸡胚的毒力。
以10倍稀释的种毒0.1ml尿囊腔接种10日龄鸡胚，鸡胚应于接种后24-120h内死亡70%以上，胎儿有明显病变，血凝价在1：640以上，胎儿有明显病变，血凝价在1：640以上。
②种毒对1月龄雏鸡滴鼻免疫的最小免疫量应不大于10-3/1滴。
③种毒对10日龄鸡胚半数感染量（EID50）应不大于10-7/0.1ml。
④种毒对初生雏鸡不致病。
2、种毒的稀释：用灭菌PBS液或0.85%生理盐水10-4～10-6稀释种毒，稀释时最好加入适当双抗溶液，并在4℃作用约4小时。
3、鸡胚的选择：最好选用SPF胚、其次选用非免疫胚，再次选用普通胚。
四、操作过程1、将购买的种蛋放于37℃温箱中孵育，加入适量水调节湿度。
2、孵育至9～11日龄时，将鸡胚置于黑暗的环境下，在照蛋器下，可观察到明显的胚体运动、丰富的血管和气室，用铅笔划出接种部位和气室部位。
划线时要尽量避开胚头和血管（尤其是大血管）。
3、将划好的鸡胚置于经紫外线消毒过的超净台中，先用碘酊消毒，再用酒精棉脱碘；4、用手术镊子在标记部位打孔，打孔时要在接种部位和气室各打一孔。
5、用灭菌注射器吸取0.1ml～0.2ml稀释病毒液，经接种孔注入鸡胚尿囊腔中；6、用石蜡先将接种孔封口后，在将气室孔封口；7、做好标记（时间，名称），置37℃温箱中继续孵育，增殖病毒。
疫苗生产工艺详细流程
1疫苗生产过程
疫苗是为了预防传染病而制造的，是非常重要的预防措施。
为了保证疫苗的安全性，需要按照一系列精确的工艺流程进行生产。
1.1疫苗原料准备
疫苗的原料有多种，包括病原体或其衍生物，生物培养基，抗原制剂，抗凝血剂，抗生素，稀释剂等。
这些原料必须非常干净、有效和纯净，以确保疫苗的有效性和安全性。
1.2疫苗灭活
疫苗原料需要经过灭活处理，以安全地使原料中的病原体具有免疫力而不引起病症。
灭活技术有多种，其中最常用的是热、化学和光照等方法，以确保安全性。
1.3疫苗混合
混合是使用冷激活灭菌的疫苗原料，按照一定的稀释比例，通过高速混合来使成分完全混合。
混合时，需要考虑保存期和抗原强度，以确保安全性和有效性。
1.4疫苗灌注
灌注是将混合疫苗原料注入制药容器，采用自动装置进行灌注装置，以确保每个容器的注射量精确无误。
容器一般是钢皮瓶或塑料瓶等，同时需要适当控制温度，以确保灌注过程的顺畅性。
1.5疫苗封装
封装时，需要将注射液容器封入硬性瓶盖，然后将它们安全地封装在一起，以确保病原体不会轻易外泄，影响安全性。
同时，还要给容器着色、打孔，等操作，以方便后续使用。
1.6疫苗测试
疫苗生产过程完成后，需要进行测试，以评估疫苗的有效性和安全性。
一般的测试方法包括生物活性检测、灭活程度检测和安全性检测等，以确保疫苗满足有效性和安全性要求。
以上就是疫苗生产工艺，它是比较复杂的，关心安全性和有效性，需要精密的生产操作，严格控制程序，以确保疫苗能够准确地预防各种传染病。
疫苗的生产工艺疫苗的生产工艺是指制造疫苗的过程和步骤。
疫苗生产的主要目的是为了预防和控制传染病的流行，保护人类和动物的健康。
一般来说，疫苗的生产工艺可以分为以下几个步骤：首先，疫苗的研发和筛选。
疫苗的研制是一个复杂和持续的过程。
一般情况下，研发疫苗需要经历预研、基础研究、实验室评估、临床试验等多个阶段。
在研发过程中，科学家会选择核心抗原，并使用特定技术或生产工艺进行晶体化、培养和增殖。
第二步，制备疫苗的原材料。
原材料的制备是疫苗生产的关键环节之一。
它包括质量可控的生物材料、培养基和其他辅助材料。
这些材料需要通过严格的筛选和检验来确保其质量和安全性。
第三步，疫苗的制备和培养。
在这个阶段，科学家会利用原材料，通过特定的方法和技术制备疫苗。
这包括病毒培养、分离和纯化等过程。
在制备过程中，科学家需要控制各个环节的条件和参数，以确保疫苗的质量和稳定性。
第四步，疫苗的灭活和灭毒。
一些疫苗需要进行灭活和灭毒处理，以保证疫苗中的病原体不再具有传染性。
这可以通过物理或化学方法来实现，如热处理、辐射灭活、化学灭活等。
第五步，疫苗的配方和调剂。
在这个阶段，科学家会根据具体的疫苗类型和需求，进行疫苗的配方和调剂。
这包括添加适量的辅料、辅助剂和稳定剂等，以提高疫苗的免疫效果和稳定性。
第六步，疫苗的包装和贮存。
在疫苗制备完成后，科学家会将疫苗进行包装，并进行严格的检验和质量控制。
包装通常采用瓶装或注射剂，以方便存储和使用。
最后，疫苗的贮存和运输。
贮存和运输是疫苗生产的最后一个环节。
疫苗需要在特定的温度和条件下存放和运输，以确保其质量和有效性。
这通常需要冷链运输或其他特殊的贮存设备。
总结起来，疫苗的生产工艺包括研发和筛选、原材料制备、制备和培养、灭活和灭毒、配方和调剂、包装和贮存、以及贮存和运输等多个步骤。
每个步骤都需要科学家严格控制和操作，以保证疫苗的质量和安全性。
鸡新城疫灭活疫苗的制备制备油佐剂灭活苗1 材料1.1毒种：鸡新城疫病毒弱毒La sota株。
1.2实验动物：9-10日龄鸡胚若干。
1.3主要试剂：碘酊，1%硫柳汞溶液，7号白油，司盘-80，硬脂酸铝，吐温-80，甲醛等。
主要仪器：孵化箱、1ml注射器、蛋架、打孔器、蜡烛、胶体。
2.实验步骤2.1种毒繁殖：将毒种用灭菌生理盐水作适当稀释，尿囊内接种10日龄SPF鸡胚，每胚0.1mol.选种后72-120小时之间死亡且病痕明显的鸡胚，分别收获鸡胚液，装于灭菌器内定量分装于安领瓶，冷冻保存。
2.2接种前准备；种毒稀释，照蛋，打孔。
2.3接种；取生产用毒种，用灭火理盐水适当稀释（10-4或10-5），每胚尿囊内接种0.1ml.接种。
后密封针孔，置36-37继续孵育。
2.4孵育和观察；鸡胚接种后，每日照室1次，将24小时内死亡的鸡胚弃去，此后，每天照蛋2次，死亡的鸡胚随时取出，4摄氏度保存，冷却24小时。
2.5收获：将冷却的鸡胚取出，用碘酐消毒气室部位，然后以无菌手术剥除气室部卵壳，捐去卵壳膜。
剪破绒毛尿至膜及羊膜(谨防卵黄破裂)。
吸取胚液。
对每个鸡胚在吸取胚液前均应注意检查、凡胎儿腐败、胚液混浊及有任何污染可疑者，弃去不用。
吸取胚液放于同一灭菌的容器内。
（凝集试验和无菌试验）2.6 灭活：可以过滤，再加甲醛溶液，甲醛溶液的最终浓度为0.1％。
然后在37℃灭活16小时，期间振摇3~4次，在4℃保存，应不超过1个月。
（无菌检验和灭活检验）2.7 制苗2.7.1 油相制备：将7号白油与司盘- 80 ( Span - 80)按94 ∶6比例混合再加总量2%的硬脂酸铝溶液混匀后,121 ℃高压灭菌15 min即为油相。
2.7.2 水相制备：将灭活胚液(抗原液)和吐温- 80 ( Tween - 80)以96 ∶4的比例混合，充分搅拌，使吐温-80完全溶解为止，作为水相。
2.7.2 水相制备：将灭活胚液(抗原液)和吐温- 80 ( Tween - 80)以96 ∶4的比例混合，充分搅拌，使吐温-80完全溶解为止，作为水相。
新城疫冻干疫苗生产工艺流程 1 生产用毒种制备1.1 毒种繁殖 将毒种用灭菌生理盐水作适当稀释(如10-4或10-5),尿囊腔内接种10日龄SPF 鸡胚,每胚0.1ml 。
选接种后72~120小时死亡、且病痕明显的鸡胚,分别收获鸡胚液(尿囊液及羊水),装于灭菌容器内。
将检验无菌、且对1%鸡红细胞凝集价≥1:640(微量法1:512)的鸡胚液混合,定量分装于安瓿中,冷冻保存。
注明收获日期,毒种代数等。
1.2 毒种鉴定1.2.1 病毒含量 按含毒鸡胚液量用灭菌生理盐水作为10倍系列稀释，取10-7、10-8、10-9 3个稀释度各尿囊腔内接种10日SPF 鸡胚5个，每胚0.1ml ，置36~37℃继续孵育，48小时以前死亡的鸡胚弃去不计，在48~120小时死亡的鸡胚随时取出，收获鸡胚液，同一稀释度的胚液等量混合，按稀释度分别测定红细胞凝集价，至120小时，取出所有活胚,逐个收获鸡胚液，分别测定红细胞凝集价，凝集价≥1:160 (微量法1:128)者判为感染，计算EID 50，每0.1ml 病毒含量应≥108EID 50。
1.2.2 纯净 应无细菌、霉菌、支原体和外源病毒污染，分别按《无菌检验或纯粹检验标准操作规程》、《支原体检验标准操作规程》、《外源病毒检验标准操作规程》进行。
1.3 毒种保存 在-15℃以下保存,应不超过1年。
1.4 毒种继代 应不超过3代。
2 制苗材料选择 选择发育良好的9~11日龄SPF 鸡胚作为制苗材料。
3 制苗用毒液的制备3.1接种取生产用毒种用灭菌生理盐水作适当稀释(如10-4或10-5),每胚尿囊腔内接种0.1ml，接种后密封针孔，置36~37℃继续孵育，不必翻蛋。
3.2 孵育和观察鸡胚接种后,每日照蛋一次，将在60小时前死亡的鸡胚弃去。
60小时后,每4~8小时照蛋一次,死亡的鸡胚随时取出,直至96或120小时,不论死亡与否,全部取出,气室向上直立,置于2~8℃冷却。
3.3 收获将冷却4~24小时的鸡胚取出,用碘酊消毒气室部位,然后以无菌手术剥除气室部卵壳，剪开尿囊膜，吸鸡胚液,每若干个鸡胚的胚液混合为一组。
收获后的胚液置于灭菌瓶中，作好标识，留样后，结冻保存。
在收获胚液的同时, 应逐个检查鸡胚, 如胎儿腐败、胚液混浊及有任何污染可疑者弃去不用。
4 半成品检验4.1 无菌检验经处理过的胚液,每组分别取样,按《无菌检验或纯粹检验标准操作规程》进行无菌检验,应无细菌生长。
4.2 病毒含量测定按含毒鸡胚液量用灭菌生理盐水作为10倍系列稀释，取10-7、10-8、10-9 3个稀释度各尿囊腔内接种10日SPF鸡胚5个，每胚0.1ml，置36~37℃继续孵育，48小时以前死亡的鸡胚弃去不计，在48~120小时死亡的鸡胚随时取出，收获鸡胚液，同一稀释度的胚液等量混合，按稀释度分别测定红细胞凝集价，至120小时，取出所有活胚,逐个收获鸡胚液，分别测定红细胞凝集价，凝集价≥1:160 (微量法1:128)者判为感染，计算EID50，每0.1 ml病毒含量>107EID50者可用于配制疫苗。
5 配苗及分装将检验合格的若干组鸡胚液滤过,混合于同一容器内,按规定羽份,加一定比例的蔗糖脱脂奶粉作稳定剂,使其最终蔗糖含量为2.5%，脱脂奶粉含量为5%，同时。
分装后迅速加入适宜的抗生素,充分摇匀,定量分装,每羽份病毒含量应≥106EID50进行冷冻真空干燥。
6 成品检验6.1 物理性状6.1.1 外观检查疫苗瓶上的标签，打印出的羽份或头份、生产批号、有效日期清晰可见、位置适当。
瓶上的铝盖稳固不松动。
6.1.2 眼观检查将疫苗拿到与眼平行位置观察呈微黄色，海绵状疏松团块，然后再轻微振动，疫苗松动并与瓶壁分离，判为合格。
6.1.3 溶解性检查用稀释液注射到疫苗瓶内，经轻微振动，疫苗应迅速完全溶解，无粘块或粘团出现，判为溶解性良好。
6.2 无菌检验按《无菌检验或纯粹检验标准操作规程》进行，如有菌生长，应进行杂菌计数，并作病原性鉴定（按《杂菌计数和病原性鉴定操作细则》进行）和禽沙门氏菌检验每羽份非病原菌数应不超过1个（按《禽沙门氏菌检验法》进行）。
6.3 支原体检验按《支原体检验法》进行，应无支原体生长。
6.4 鉴别检验6.4.1 选择发育良好的10日龄SPF鸡胚10只，划出尿囊腔接种部位。
6.4.2 将疫苗用无菌生理盐水稀释至105.0EID/0.1mL，与等量抗鸡新城疫病毒特50异性血清混合，室温中和1小时后，尿囊腔接种，每胚0.1mL。
6.4.3 将接种后鸡胚用石蜡封孔后，置37℃继续孵育，观察120小时，在24~120小时内应不引起特异死亡，且至少存活8只，鸡胚液作红细胞凝集试验，应为阴性。
6.5 外源病毒检验按《外源病毒检验法》进行。
6.6 安全检验下列方法任择其一。
6.6.1 用鸡胚检验将疫苗用无菌生理盐水稀释，尿囊腔内接种10日龄鸡胚10只，每胚0.1ml（含10个使用剂量），接种后24~72小时，鸡胚死亡率应不超过20%为合格。
如死亡率超过20%，可用20个鸡胚重检1次，重检结果死亡率仍超过20%，该批疫苗判为不合格。
6.6.2 用鸡检验用2~7日龄SPF雏鸡20只，合成两组，第1组10只，每只滴鼻接种0.05mL（10个使用剂量）；第2组10只，不接种作为对照，两组在相同条件下分别饲养管理，观察10日，应无不良反应。
如有非特异性死亡，免疫组与对照组均不超过1只。
6.7 效力检验下列方法任择其一。
6.7.1 用鸡胚检验6.7.1.1 鸡胚选择选择发育良好的10日龄SPF鸡胚15个，划出尿囊腔接种部位，作出批组及滴度标记，每一滴度接种5个。
6.7.1.2 疫苗稀释将疫苗按瓶签注明羽份，用灭菌生理盐水稀释至1羽份/0.1mL，再作10倍系列稀释至10-7。
6.7.1.3 接种分别取10-7、10-6、10-5三个稀释度尿囊腔内接种鸡胚各5个，每胚0.1mL，用石蜡封孔。
6.7.1.4 孵育置37℃继续孵育至120小时，每天上、下午各照检1次，48小时以前死亡的鸡胚弃去不计，在48~120小时死亡的鸡胚，随时取出放在2~8℃冰箱中，至120小时取出全部活胚放在2~8℃℃冰箱中24小时。
6.7.1.5 凝集价（HA）测定与计算鸡胚半数感染量（EID50）将冷却鸡胚取出，将同一稀释度的死亡鸡胚液等量混合，分别测定红细胞凝集价；将活胚逐个收获鸡胚液，分别测定红细胞凝集价，HA≥160（微量法128）者判为感染，计算半数感染量，每羽份≥106.5EID50（国家标准每羽份≥106.0EID50），判为合格。
6.7.2 用鸡检验6.7.2.1 鸡的选择选取30-60日龄健康易感鸡（血凝集抑制价应≤4）10只。
6.7.2.2 疫苗稀释将疫苗按瓶签注明羽份，用灭菌生理盐水稀释成每0.05mL 含1/100使用剂量。
6.7.2.3 免疫及攻毒每只鸡滴鼻接种0.05mL，10~14日后，连同条件相同的对，观察10-14日，对照鸡全照鸡3只，各肌肉注射鸡新城疫北京株强毒104.0ELD50部发病死亡，免疫鸡至少保护9只为合格。
6.8 剩余水分测定按《剩余水分测定方法》进行，应符合规定。
6.9 真空度测定按《真空度测定方法》进行，应符合规定。
-7、,算EID 50，每0.1ml 病毒含量应≥108EID 50。
1.3 毒种保存 在-15℃以下保存，应不超过6个月。
1.4 毒种继代 应不超过3代。
2 制苗材料选择 选择发育良好9～10日龄的易感鸡胚作为制苗材料。
3 制苗用毒液的制备3.1 接种 取生产用毒种，用灭菌生理盐水作适当稀释（如10-4或10-5），每胚尿囊内接种0.1ml ，接种后密封针孔，置36～ 37℃继续孵育，不必翻蛋。
3.2 孵育和观察 鸡胚接种后，每日照蛋1次，将60小时前死亡的鸡胚弃去。
此后，每4～6小时照蛋1次，死亡的鸡胚随时取出，直至96小时，不论死亡与否，全部取出，气室向上直立，置于2～8℃冷却4～24小时。
3.3 收获3.3.1 鸡胚液的收获 将冷却的鸡胚取出，用碘酊消毒气室部位，然后以无菌手术破除气室部卵壳，揭去卵壳膜，剪破绒毛尿囊膜及羊膜（谨防卵黄破裂），吸取胚液。
对每个鸡胚在吸取胚液前均应注意检查，凡胎儿腐败、胚液混浊及有任何污染可疑者，弃去不用。
死胚和活胚分别收获，每若干个鸡胚分为一组，吸取胚液放于同一灭菌的容器内，每组抽样测定血凝价，血凝价低于1：160（微量法1：128）者应弃去。
同时作无菌检查，应无细菌生长。
收获的胚液灭活前在2～8℃左右保存，应不超过5日。
3.3.2 鸡胚胎儿收获及浸出液的制备 在收获及胚液的同时，取病变胎儿，去头、脚，用生理盐水洗2～3次，磨碎，制成（1：5）～（1：10）乳剂，加适宜的抗生素适量，然后离心或以4层纱布一层铜纱网滤过，置自然沉淀1～2日，然后取样作无菌检查。
以上清夜作为配制双相油乳剂疫苗用。
4 灭活将上述无菌胚液以4层纱布及一层细铜纱网滤过，混合于一个大玻璃瓶内，吸出数毫升样品备测毒价。
其余胚液和鸡胚浸出液分别计量加入10%甲醛溶液，随加随摇，使其能充分混合，甲醛溶液的最终浓度为0.1%。
加甲醛溶液后最好倾倒另一瓶中，以避免瓶口附近黏附的病毒未能接触灭活剂。
然后在37℃灭活16小时（以瓶内温度达到37℃开始计时）。
期间振摇3～4次。
在2～8℃保存，应不超过1个月。
5 半成品检验5.1 无菌检验取灭活的胚液及鸡胚浸出液分别按附录448进行，应无菌生长。
5.2 灭活检验取10日龄无新城疫病毒抗体的鸡胚6个，每个接种灭活胚液0.23ml，每日照蛋2次，观察5日，鸡胚非特异死亡不应超过1个。
对所有胚液分别测定血凝价，应不出现血凝，认为灭活完全。
如有可疑，应将可疑胚液进行重检，重检不合格者报废。
鸡胚浸出液也按照上述方法检查。
5.3 毒价测定将灭活前取出的胚液进行10倍系列稀释，取10-7、10-8、10-93个稀释度分别接种9～10日龄无鸡新城疫病毒抗体的鸡胚5个，每胚尿囊内0.1ml，每日照蛋2次，观察5日，无论死胚、活胚均应测定血凝价，血凝价〉1：80（微量法1：64）以上者，判为感染，计算EID50,每0.1ml病毒含量≥108EID50,方可用于制苗。
6 单相油乳剂灭活疫苗制备6.1 油相制备取注射用白油94份，加司本-80 6份，混合后，加硬脂酸铝2份，随加随搅拌至透明为止，高压灭菌备用。
6.2 水相制备取吐温-80 4份装入带玻璃珠的瓶中灭菌，冷却后加灭活胚液96份，充分振瑶使吐温-80完全溶解为止。
6.3 乳化取油相3份放于乳化罐内，开动电机慢速转动搅拌，同时徐徐加入水相1份，加完后再以10000r/min搅拌2～5分钟，在终止搅拌前加入1%硫柳汞溶液，使其最终浓度为0.01%。
