【实验】测定土壤中微生物的数量共24页文档

1. 土壤微生物生物量的测定(滴定法)一、实验目的和内容土壤微生物生物量是指土壤中体积小于5～10μm3活的微生物总量，是土壤有机质中最活跃的和最易变化的部分。

耕地表层土壤中，土壤微生物量碳（Bc）一般占土壤有机碳总量的3％左右，其变化可直接或间接地反映土壤耕作制度和微生物肥力的变化，并可以反映土壤污染的程度。

近30年来，国外许多学者对土壤微生物生物量的测定方法进行了比较系统的研究，但由于土壤微生物的多样性和复杂性，还没有发现一种简单、快速、准确、适应性广的方法。

目前广泛应用的方法包括：氯仿熏蒸培养法（FI）、氯仿熏蒸浸提法（FE）、基质诱导呼吸法（SIR）、精氨酸诱导氨化法和三磷酸腺苷（A TP）法。

氯仿熏蒸浸提法（FE）的原理是：土壤经氯仿熏蒸处理，微生物被杀死，细胞破裂后，细胞内容物释放到土壤中，导致土壤中的可提取碳、氨基酸、氮、磷和硫等大幅度增加。

通过测定浸提液中全碳的含量可以计算土壤微生物生物量碳。

二、实验材料和用具仪器：培养箱；真空干燥器；真空泵；往复式振荡机（速率200次每min）；1L广口玻璃瓶；定量滤纸；紫外分光光度计；LNK-872型消煮炉（江苏省宜兴市科教仪器研究所）试剂：1.无乙醇氯仿：市售的氯仿都含有乙醇（作为稳定剂），使用前必须除去乙醇。

方法为：量取500ml氯仿于1000ml分液漏斗中，加入50ml硫酸溶液[ρ(H2SO4)=5%]，充分摇匀，弃除下层硫酸溶液，如此进行3次。

再加入50ml去离子水，同上摇匀，弃去上部的水分，如此进行5次。

将下层的氯仿转移存放在棕色瓶中，并加入约20g无水K2CO3，在冰箱的冷藏室中保存备用。

2.硫酸钾溶液[c(K2SO4)=0.5mol·L-1]称取硫酸钾（K2SO4，化学纯）87.10g，先溶于300ml去离子水中，加热，转移溶液至容器中，再加少量去离子水溶解余下的部分，转移溶液至同一容器中，如此反复多次。

最后定容至1L；3.重铬酸钾[c(1/6 K2Cr2O7)=0.4000mol·L-1]：称取经130℃烘干2～3h的重铬酸钾（K2Cr2O7，分析纯）19.622g，溶于1000ml去离子水中；4.邻啡罗啉亚铁指示剂：称取邻啡罗啉（C12H8N2H2O，分析纯）1.49g，溶于含有0.70gFeSO4·7H2O的100ml 去离子水中，密闭保存于棕色瓶中；5.硫酸亚铁溶液[c（FeSO4·7H2O）＝0.0667mol·L-1]：称取硫酸亚铁（FeSO4·7H2O，化学纯）18.52g，溶解于600ml～800ml去离子水中，加浓硫酸（化学纯）15ml，搅拌均匀，定容至1000ml，于棕色瓶中保存。

微生物培养实验报告
微生物培养实验是利用微生物及其细胞生长、繁殖和生活规律的实验
方法，用于研究微生物的形态、结构和特性，以及评价微生物对环境
因子的适应性和变革性。

本实验通过对土壤中的微生物进行培养，目的是研究微生物在不同物
质及条件的作用，以及测定其细胞增殖率和形态特征。

本次实验的培
养基为细菌培养液，用于土壤中微生物的培养，细菌培养液添加一定
的氮、磷和其它元素，以及含有大量碳、水分的糖为源，微生物可以
从中摄取所需的营养物质，使微生物培养成功。

实验中，我们首先采集土壤样本，并用70%乙醇完成灭菌，把样品装
入细菌培养液中，将培养瓶置于培养箱中，进行恒温振荡摇床控温培养；每天对培养液中的细菌表型进行观察，以观察细胞形态、形状及
计算增殖率。

进行实验足够的时间之后，我们用光学显微镜对培养液
中的细菌表型进行观察，直观观察细菌的形态和结构变化。

经过本实验后，我们发现土壤中微生物的形态特征与正常的细菌株相似，且增殖率也在一定的区间内，通过本次实验我们对土壤中的微生
物种类有了更深入的了解。

总之，通过本次微生物培养实验，受到很大帮助，我们深刻地感觉到，研究微生物种类及其变化规律是非常重要和有益的，有助于我们理解
生态系统中各组分的作用以及变化。

一、实验目的1. 了解土壤中微生物的种类和数量；2. 掌握土壤微生物的分离和纯化方法；3. 熟悉微生物的形态和生理生化特性；4. 培养无菌操作和实验记录能力。

二、实验原理土壤是微生物生活的良好环境，其中含有大量微生物，包括细菌、放线菌、真菌、藻类、原生动物、噬菌体、病毒和线虫等。

微生物在土壤中发挥着重要作用，如土壤肥力的维持、植物生长的促进、有机物的分解等。

本实验通过分离和纯化土壤微生物，观察其形态和生理生化特性，进一步了解土壤微生物的种类和功能。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：土壤样品、牛肉膏蛋白胨培养基、葡萄糖、酵母提取物、琼脂、无菌水、无菌平板、无菌移液器、显微镜、培养箱等。

2. 实验仪器：天平、酒精灯、高压蒸汽灭菌器、恒温培养箱、无菌操作台等。

四、实验方法1. 土壤样品的采集：选取有代表性的土壤样品，注意样品的均匀性和代表性。

2. 土壤微生物的分离和纯化：a. 制备牛肉膏蛋白胨培养基，高压蒸汽灭菌后备用；b. 将土壤样品与无菌水按1:10的比例混合，充分搅拌；c. 将混合液进行系列稀释，取适量稀释液涂布于牛肉膏蛋白胨平板上；d. 将平板倒置放入恒温培养箱中培养，观察菌落生长情况；e. 挑取单个菌落进行纯化，重复以上步骤，直至获得纯菌株。

3. 微生物的形态观察：a. 将纯菌株接种于牛肉膏蛋白胨培养基，培养后进行显微镜观察；b. 观察菌体的形态、大小、排列方式等特征。

4. 微生物的生理生化特性测定：a. 对纯菌株进行革兰氏染色，观察菌体的染色特性；b. 进行糖发酵试验，观察菌株对葡萄糖、乳糖、麦芽糖等糖类的分解能力；c. 进行氧化酶试验，观察菌株的氧化酶活性。

五、实验结果与分析1. 土壤样品的微生物数量：通过平板计数法，估算土壤样品中的微生物数量。

2. 微生物的分离和纯化：成功分离和纯化出多种微生物，如细菌、放线菌、真菌等。

3. 微生物的形态观察：观察到的菌体形态、大小、排列方式等特征与文献报道相符。

土壤微生物数量测定方法土壤微生物是指生活在土壤中的微小生物，包括细菌、真菌、放线菌、古菌等。

土壤微生物在土壤的生物地球化学循环、有机质分解、养分转换和植物健康等过程中起着重要的作用。

因此，对土壤微生物数量的准确测定具有重要意义。

本文将介绍一些常用的土壤微生物数量测定方法。

1.瓶培法：将适量的土壤样品与适量的培养基混合，在37°C下培养约24小时，然后通过平板计数法或最凼稀释法进行测定。

2.膜过滤法：将土壤提取液通过特定孔径的膜过滤器滤过，然后将膜放置在培养基上进行细菌的生长，最后进行计数。

3.间接法：通过测定土壤样品的可培养细菌指标，如氧化还原酶、脱氢酶等的活性，从而推算出土壤中的细菌数量。

4.分子生物学方法：通过PCR扩增土壤DNA中的细菌基因，如16SrRNA基因，再通过测定PCR产物进行细菌数量的测定。

1.直接镜检法：直接在显微镜下观察土壤样品中的真菌，通过计数来估算真菌的数量。

2.平板计数法：将土壤样品均匀撒在培养基上，通过培养方法使真菌生长形成菌落，最后进行计数。

3.膜过滤法：与细菌数量测定相似，将土壤提取液通过膜过滤器滤过，然后将膜放置在适当的培养基上进行真菌的生长，最后进行计数。

4.分子生物学方法：通过PCR扩增土壤DNA中的真菌基因，如18SrRNA基因，再通过测定PCR产物进行真菌数量的测定。

1.直接镜检法：直接在显微镜下观察土壤样品中的放线菌，通过计数来估算放线菌的数量。

2.平板计数法：将土壤样品均匀撒在培养基上，通过培养方法使放线菌生长形成菌落，最后进行计数。

3.膜过滤法：与细菌和真菌数量测定类似，将土壤提取液通过膜过滤器滤过，然后将膜放置在适当的培养基上进行放线菌的生长，最后进行计数。

4.分子生物学方法：通过PCR扩增土壤DNA中的放线菌基因，如16SrRNA基因，再通过测定PCR产物进行放线菌数量的测定。

通过上述方法测定土壤中微生物的数量，可以了解土壤微生物对土壤生态系统功能的影响，并为土壤质量评价和科学合理利用提供依据。

土壤微生物生物量的测定方法1.直接计数法：直接计数法是通过显微镜观察土壤样品中微生物数量来测定土壤微生物生物量。

常用的直接计数法包括滴定法、薄层计数法和电镜计数法。

滴定法是将土壤样品溶解后，通过滴定法来计数微生物细胞的数量。

滴定法主要包括用荧光假单胞菌（Pseudomonas fluorescens）作为参比菌，将细菌与土壤样品混合，经一系列稀释后进行滴定。

通过观察滴定液中菌落的数量，可以推算出原始土壤样品中微生物的生物量。

薄层计数法是将土壤样品制成薄层，然后在显微镜下进行计数。

这种方法可以直接观察微生物的形态特征，通过计算单位面积上微生物的数量来估算微生物生物量。

电镜计数法是利用电镜的高分辨率特性，观察土壤样品中微生物的形态和数量。

这种方法可以观察到更小的微生物和微生物的形态细节，但是操作复杂，成本较高。

2.间接测定法：间接测定法通过测定土壤中微生物活性代谢产物来估算微生物生物量。

常用的间接测定法包括ATP测定法、细胞膜脂肪酸测定法和氮素代谢产物测定法等。

ATP测定法是通过测定土壤中的三磷酸腺苷(ATP)含量来估算微生物生物量。

微生物的ATP含量与其生物量有一定的关系，因此可以通过测定ATP含量来间接估算土壤微生物生物量。

细胞膜脂肪酸测定法是通过测定土壤样品中微生物细胞膜中的脂肪酸含量来估算微生物生物量。

微生物细胞膜中的脂肪酸种类和含量与微生物群落的组成和数量有关，因此可以通过测定脂肪酸的含量来间接估算微生物生物量。

氮素代谢产物测定法是通过测定土壤样品中微生物氮素代谢产物的含量来估算微生物生物量。

微生物的氮素代谢活动与其生物量有关，因此可以通过测定氮素代谢产物的含量来间接估算微生物生物量。

3.分子生物学方法：分子生物学方法是利用PCR技术对土壤样品中微生物的DNA或RNA进行扩增和测定来估算微生物生物量。

常用的分子生物学方法包括引物扩增法、荧光原位杂交法和高通量测序法等。

引物扩增法是通过设计特定的引物对微生物的DNA或RNA进行扩增，并通过PCR反应的产物数量来估算微生物生物量。

土壤微生物检测实验报告实验目的：1.了解土壤微生物检测的原理和方法。

2.掌握土壤微生物检测的实验操作步骤。

3.探究不同土壤样品中微生物数量的差异。

实验原理：土壤微生物检测主要是通过分离、培养和计数来估计土壤微生物的数量。

主要方法包括稀释平板法、滴定法、过滤膜法等。

其中，稀释平板法是应用最广泛的方法之一，它是将土壤样品稀释后，在琼脂胶平板上培养并计数微生物菌落形成的数量来得到微生物数量。

实验材料和仪器：1.土壤样品；2.琼脂胶平板；3.微量移液器；4.灭菌的乙醇；5.灭菌的酒精灯；6.培养箱；7.可移动反应仪；8.移液管；实验步骤：1.准备土壤样品，从不同的地点取样，混合均匀后，取一定量的土壤样品（如10g）。

2.加入一定量的蒸馏水（如90ml），混合均匀。

3.取1ml土壤液体，加入到10ml的蒸馏水中稀释，得到1:10的稀释液。

4.取1ml稀释液，加入到9ml的蒸馏水中稀释，得到1:100的稀释液。

5.重复第4步，得到1:1000的稀释液。

6.从1:10、1:100和1:1000的稀释液中，每个稀释液中各取1ml，分别塗于琼脂胶平板上。

7.将琼脂胶平板在培养箱内培养24-48小时。

8.取出琼脂胶平板，观察并计数每个平板上的微生物菌落。

由于每个样品含有不同数量的微生物，可能需要在某些平板上进行稀释，以避免过于密集菌落的计数误差。

9.计算样品中的微生物数量。

实验结果：通过实验，我们发现来自不同土壤样品的微生物数量是有明显差异的。

同一种土壤类型，在不同的采样地点也会有不同的微生物数量。

例如，采自沿海地区和山区的土壤样品，发现前者的微生物数量要高于后者。

这可能与气候、植被和土壤性质等因素有关。

实验结论：通过本次实验，我们进一步了解了土壤微生物检测的原理和方法，掌握了土壤微生物检测的实验操作步骤，并且发现了不同土壤样品中微生物数量的差异。

本实验提醒我们要在保护环境的前提下，科学利用土地资源，研究土壤微生物的分布、多样性和生态功能，推动生态环境的改善和可持续土地利用。

土壤中细菌总数的测定摘要在生态学、农业科学、环境科学和微生物学等领域中，土壤细菌数量的测定是非常重要的研究内容。

本文介绍了两种主要的土壤细菌数量测定方法：菌落计数法和直接计数法，讨论了各自的优缺点以及操作步骤。

菌落计数法菌落计数法是一种通过在培养基上培养细菌，再进行菌落计数的方式来测定土壤中细菌总数的方法。

其操作步骤如下：1.取一定量的土壤样本，将其加入到含有特定培养基的培养皿中，如TSA、PCA或NA培养基等；2.将培养皿置于适宜的温度下(通常为30℃)，培养一定时间(一般为24~72小时)；3.统计培养皿上出现的菌落数；4.根据不同培养基的菌落特点来进行分类鉴定。

如直径、颜色、质地、形态等；5.计算细菌数量。

此方法的优点是可以准确地测定土壤中特定细菌种群的数目，并且操作简便。

但缺点是需要培养时间长、部分细菌难于培养、还有会产生空心菌落、部分共生细菌会在菌落中互相竞争等。

直接计数法直接计数法是通过使用显微镜对土壤样本中的细菌数量进行计数的方式来测定土壤中细菌总数的方法。

其操作步骤如下：1.取一定量的土壤样本，将其在缓冲盐水中适当稀释；2.取一部分稀释后的样本，在显微镜下观察，并开始计数；3.根据计数结果，计算细菌在原土壤样品中的数量。

此方法的优点是测定速度快，一般只需要数分钟就可以得出结果，并且操作简单，适合于快速测量。

但缺点是对于不同形态的细菌很难区分，不能确定某些细菌是否存活，容易发生误差。

无论使用什么方法，测定土壤中细菌的数量都是非常重要的。

在实验中，根据具体研究需要选择合适的方法，保证实验可重复性。

以上，就是土壤中细菌总数的测定方法的简单介绍。

土壤中分解尿素的细菌的分离与计数实验设计一、实验目的：1．研究培养基对微生物的选择作用，进行微生物数量的测定。

2．能利用选择培养基分离细菌，运用相关技术解决生产生活中有关微生物的计数。

二、实验原理：1．筛选菌株人为提供有利于生长的条件(包括营养、温度、pH等)，同时或其他微生物生长。

在微生物学中，将允许种类的微生物生长，同时和其他种类微生物生长的培养基，称作选择培养基。

根据选择培养的菌种的生理代谢特点加入某种物质以达到选择的目的。

例如，培养基中不加入有机物可以选择培养微生物；培养基中不加入氮元素，可以选择培养的微生物；加入高浓度的食盐可选择培养金黄色葡萄球菌等。

本实验中，目的是分离能分解尿素的细菌（产生脲酶），尿素可以提供氮源，所以，应制备以___________________________________________的选择培养基。

2．统计菌落数目测定微生物数量的常用方法有显微镜直接计数和稀释涂布平板法。

显微镜直接计数不能区分活菌和死菌。

本实验中采用稀释涂布平板法进行计数。

稀释涂布平板法统计样品中活菌的数目的原理：当样品的足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个。

通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。

为了保证结果准确，一般选择菌落数在的平板进行计数。

三、实验步骤：1.________________ __________________ __________________ 准备牛肉膏蛋白胨培养基和选择培养基。

将菌液稀释相同的倍数，在牛肉膏蛋白胨培养基上生长的菌落数目应明显选择培养基上的数目，因此，牛肉膏蛋白胨培养基可以作为，用来判断选择培养基是否起到了选择作用。

2._______________ 从肥沃、湿润的土壤中取样。

应先 3 cm左右，再取样，将样品装入事先准备好的中。

3._______________ 将10g土样加入盛有90 mL无菌生理盐水的锥形瓶中(体积为250 m L)，充分摇匀，吸取上清液，转移至盛有的生理盐水的无菌大试管中，将土样以1、101、102……依次等比稀释至107稀释度，并按照由107～103稀释度的顺序分别吸取进行平板涂布操作。

土壤微生物数量的测定方法土壤微生物数量的测定方法是指用来确定土壤中微生物的数量的一系列方法。

微生物在土壤中的数量是影响土壤肥力、健康状态以及生物多样性的主要因素，所以对土壤微生物数量的测定十分重要。

目前，有几种常用的测定土壤微生物数量的方法，包括计数法、分子生物学方法和非分子生物学方法。

一、计数法计数法是目前最常用的测定土壤微生物数量的方法。

该方法通过对样本中的细胞进行数目和形态的观察，来获得关于微生物数量的信息，然后通过计算微生物数量来估计土壤微生物总数。

1. 总体计数法总体计数法是使用显微镜观察和计数样品中的微生物，把检测到的微生物总数乘以一定的系数，就可以估算出土壤中的总微生物数量。

该方法是实时性强，耗时少，易于操作，但是由于细胞大小不一，活性差异大，难以检测到的微生物会影响准确性，因此不能精确测定土壤中的微生物数量。

2. 半定量计数法半定量计数法是通过将土壤样品进行细胞悬液制备，然后用显微镜观察和计数，来估算土壤中的微生物总数。

该方法也是实时性强，耗时少，易于操作，但是由于细胞大小不一，活性差异大，难以检测到的微生物会影响准确性，因此也不能精确测定土壤中的微生物数量。

二、分子生物学方法分子生物学方法是指使用基于DNA或RNA的技术来测定土壤中的微生物数量的方法。

目前，常用的分子生物学方法有PCR方法、qPCR方法、FISH方法、DGGE方法和pyrosequencing方法。

1. PCR方法 PCR方法是使用聚合酶链反应（Polymerase Chain Reaction, PCR）技术来检测土壤中的微生物数量的方法。

PCR方法可以快速检测出土壤中的微生物，但它不能检测出细菌的种类。

2. qPCR方法 qPCR方法是使用定量聚合酶链反应（Quantitative Polymerase Chain Reaction, qPCR）技术来检测土壤中的微生物数量的方法。

qPCR技术可以检测出微生物的种类，并且可以准确测定土壤中的微生物数量。

一、实验目的1. 掌握土壤细菌分离和计数的方法；2. 了解土壤细菌的种类及分布情况；3. 分析土壤细菌数量与土壤环境因素的关系。

二、实验原理土壤细菌是土壤微生物的重要组成部分，其数量和种类对土壤肥力、生态平衡等具有重要意义。

本实验采用稀释涂布平板法对土壤细菌进行分离和计数，通过观察菌落生长情况，了解土壤细菌的种类及数量。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：（1）土壤样品：采集不同地点、不同土壤类型的土壤样品；（2）培养基：牛肉膏蛋白胨琼脂培养基；（3）试剂：无菌水、酚红指示剂、NaOH、盐酸等。

2. 实验仪器：（1）天平；（2）无菌操作台；（3）显微镜；（4）高压蒸汽灭菌器；（5）恒温培养箱；（6）移液器；（7）涂布器。

四、实验步骤1. 土壤样品的采集与处理：（1）采集不同地点、不同土壤类型的土壤样品；（2）将土壤样品放入无菌袋中，编号；（3）将土壤样品在无菌操作台中过筛，去除大颗粒杂质。

2. 培养基的制备：（1）按照配方称取牛肉膏、蛋白胨、琼脂等试剂；（2）将试剂加入适量无菌水中，加热溶解；（3）调整pH至7.2-7.4；（4）分装至无菌试管中，高压蒸汽灭菌。

3. 土壤样品的稀释：（1）取一定量土壤样品，加入无菌水，充分搅拌；（2）依次进行10倍稀释，得到不同稀释度的土壤滤液；（3）取适量稀释液，涂布于牛肉膏蛋白胨琼脂培养基上。

4. 培养与观察：（1）将涂布好的平板放入恒温培养箱中，37℃培养24小时；（2）观察菌落生长情况，记录菌落数量。

5. 统计与分析：（1）根据菌落数量，计算不同稀释度平板上的细菌数量；（2）分析土壤细菌数量与土壤环境因素的关系。

五、实验结果与分析1. 实验结果：（1）不同土壤样品的细菌数量差异较大；（2）菌落生长情况良好，菌落形态各异。

2. 分析：（1）土壤细菌数量与土壤类型、有机质含量、水分等因素有关；（2）土壤细菌在土壤生态系统中发挥着重要作用，如参与物质循环、降解有机物等。

一、实验目的1. 了解土壤微生物的基本组成和分布特点；2. 掌握土壤微生物分离纯化的方法；3. 学习观察和记录土壤微生物的菌落形态特征；4. 培养无菌操作和实验报告撰写能力。

二、实验原理土壤微生物是土壤生态系统的重要组成部分，它们在土壤肥力、物质循环、环境净化等方面发挥着重要作用。

本实验通过分离纯化土壤微生物，观察其菌落形态特征，了解土壤微生物的种类和数量。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：土壤样品、牛肉膏蛋白胨培养基、琼脂、无菌水、无菌器械等；2. 实验仪器：高压蒸汽灭菌器、恒温培养箱、显微镜、酒精灯、接种环等。

四、实验步骤1. 土壤样品采集：在校园内选取一块土壤，采集土壤样品约100g；2. 培养基制备：按照牛肉膏蛋白胨培养基的配方，称取相应量的牛肉膏、蛋白胨、琼脂等，加入适量蒸馏水，溶解后定容至1000ml，用高压蒸汽灭菌器灭菌；3. 分离纯化：将土壤样品加入无菌水中，充分搅拌后静置，取上层悬液作为实验材料；4. 接种：取适量悬液，分别用稀释平板法和划线分离法进行接种；5. 培养与观察：将接种后的平板放入恒温培养箱中，在适宜的温度下培养，观察菌落生长情况；6. 记录与绘图：记录菌落形态特征，如菌落大小、颜色、边缘、表面等，并绘制菌落图谱。

五、实验结果与分析1. 菌落形态特征：根据菌落的大小、颜色、边缘、表面等特征，将分离得到的菌落分为不同类型，如细菌、放线菌、真菌等；2. 菌落生长情况：在恒温培养箱中，观察菌落生长情况，记录生长速度、菌落形态等；3. 菌落图谱：绘制分离得到的菌落图谱，分析土壤微生物的种类和数量。

六、实验结论1. 土壤中存在丰富的微生物资源，包括细菌、放线菌、真菌等多种类型；2. 通过分离纯化方法，可以有效地从土壤中分离得到纯种微生物；3. 观察和记录土壤微生物的菌落形态特征，有助于了解土壤微生物的种类和数量。

七、实验心得与体会1. 通过本次实验，我了解了土壤微生物的基本组成和分布特点，掌握了土壤微生物分离纯化的方法；2. 在实验过程中，我学会了无菌操作技术，提高了实验技能；3. 通过观察和记录土壤微生物的菌落形态特征，我对微生物的分类和鉴定有了更深入的认识。

土壤微生物实验报告一、实验背景土壤是地球上生命存在的重要基础之一，其中栖息着丰富多样的微生物群落。

这些微生物在土壤的生态系统中发挥着至关重要的作用，如养分循环、有机物分解、土壤结构形成等。

了解土壤微生物的种类、数量和活性对于评估土壤质量、生态平衡以及农业可持续发展具有重要意义。

二、实验目的本实验旨在探究不同土壤类型中微生物的数量和种类差异，以及环境因素对土壤微生物群落的影响。

三、实验材料与方法（一）实验材料1、采集自不同地点的土壤样本，包括农田、森林、草地等。

2、培养基：牛肉膏蛋白胨培养基（用于细菌培养）、马丁氏培养基（用于真菌培养）、高氏一号培养基（用于放线菌培养）。

3、实验仪器：无菌操作台、恒温培养箱、显微镜、移液器、灭菌锅等。

（二）实验方法1、土壤样本采集选择具有代表性的采样地点，使用无菌采样工具采集表层（0 20 厘米）土壤，每个地点采集多个重复样本。

将采集的土壤样本放入无菌袋中，标记好采样地点和时间，迅速带回实验室进行处理。

2、微生物的分离与培养称取一定量的土壤样本，加入无菌水制成土壤悬液。

通过系列稀释法将土壤悬液稀释至合适的浓度。

分别取不同稀释度的悬液涂布于相应的培养基上，每个稀释度设置多个重复。

将涂布好的培养基倒置放入恒温培养箱中培养，细菌培养温度为 37℃，培养时间为 1 2 天；真菌培养温度为 28℃，培养时间为 3 5 天；放线菌培养温度为 28℃，培养时间为 5 7 天。

3、微生物的计数与鉴定培养结束后，对培养基上的菌落进行计数，并根据菌落的形态、颜色、大小等特征初步判断微生物的种类。

选取典型的菌落进行进一步的显微镜观察和生理生化实验，以确定微生物的种类。

四、实验结果（一）不同土壤类型中微生物的数量在农田土壤中，细菌数量最多，其次是放线菌，真菌数量相对较少。

在森林土壤中，真菌的数量相对较多，细菌和放线菌的数量相对较少。

草地土壤中的微生物数量介于农田和森林土壤之间。

（二）微生物的种类通过显微镜观察和生理生化实验，鉴定出了多种细菌、真菌和放线菌。

测定土壤中微生物的数量-北师大版选修1 生物技术实践教案一、实验目的通过测定土壤中微生物的数量，掌握微生物计数的方法和技术，了解微生物的生态和分布规律，培养学生的科学研究能力和实验操作技能。

二、实验原理1. 微生物计数基础微生物计数是指通过方法和技术，对已知体积的液体或其他物质中微生物数量进行计算的操作。

微生物计数可以通过直接计数法、体积法和过滤法等方法实现。

2. 测定土壤中微生物数量的方法测定土壤中微生物数量可以采用稀释平板法和培养基稀释法，其中稀释平板法是比较普遍且常用的方法。

稀释平板法在实验操作上较为简单，易于掌握。

3. 稀释平板法原理稀释平板法是一种简单而有效的微生物计数方法。

实验中通过依次进行十倍的稀释，然后将不同浓度的培养液分别均匀涂在平板上进行培养，最终在平板上形成单个菌落。

通过计算不同浓度的培养液分别对应的菌落数量和体积，可以推算出单位体积中微生物数量。

三、实验材料1.彩色胶体金培养基2.厚质量纸巾3.特制细胞计数板4.稀释液（0.9%的氯化钠溶液）5.研钵和研杵6.小手电（紫外线灯）四、实验步骤1.取出特制细胞计数板，用0.9%氯化钠溶液进行清洗和消毒，然后晾干；2.待计算的土壤中，取5g放入研钵中，加水10ml，研磨均匀；3.取稀释液，加入研钵中，制成1:10的稀释液；4.从稀释液中取出1ml，加到另一个研钵中制成1:100的稀释液；5.从1:100稀释液中取出1ml，加到另一个研钵中制成1:1000的稀释液；6.将1ml、0.1ml和0.01ml的三种不同的稀释液分别注入特制细胞计数板的三个室子中；7.用吸盘将计数板盖在厚质量纸巾上，使计数板保持水平；8.对计数板每个室子的菌落进行计数并记录结果；9.根据计数板板子的面积和三种稀释液的差异计算出单位体积中的微生物数量。

五、实验注意事项1.实验前进行仔细的消毒和清洁，以避免对实验产生污染；2.在实验中尽量减少无菌技术操作的错误，避免实验的结果偏差较大；3.在实验过程中要注意保持细胞计数板和准确的生物量测定，防止出现误差；4.对于实验中的每一步操作，都需要细心、耐心且精确地进行，才能获得准确的实验结果。

土壤微生物数量测定（一）培养基的制备：Ⅰ测定微生物总量培养基：1. 细菌培养基（牛肉膏蛋白胨琼脂培养基）牛肉膏Beefextract 5.0g蛋白胨Peptone 10.0gNaCI 5.0g蒸馏水H20 1000m1PH 7.2~7.42.放线菌培养基（高氏1号琼脂培养基）可溶性淀粉20gKNO31gK2HPO40.5gMgSO4• 7H2O 0.5gNaCl 0.05gFeSO4• 7H2O 0.01gpH 7.2-7.4注：配制时，先用少量冷水，将淀粉调成糊状，倒入少于所需水量的沸水中，在火上加热，边搅拌边依次逐一溶化其他成分，溶化后，补足水分到1000ml，调pH。

另：倒平板之前，在溶化的培养基中加重铬酸钾溶液，每300mL培养基加3%重铬酸钾1mL(l00ppm)。

3.真菌培养基（马丁（Martin）-孟加拉红琼脂培养基）葡萄糖 10.0gMgSO4.7H2O O.5g蛋白胨 5.0g孟加拉红33.4mg （或者每升加1%溶液3.3mL）K2HPO41g蒸馏水H20 1000m1PH 自然(4~5)注：⑴灭菌前加卡那霉素20μg/ml，或者倒平板之前加链霉素。

⑵倒平板之前加乳酸，每100mL培养基加0.lmL。

以上培养基皆加琼脂15g/L。

Ⅱ测定功能菌所用培养基：1.亚硝酸细菌培养基（改良的斯蒂芬逊（Stephenson）培养基A）(NH4)2SO4 2.0gNaH2PO40.25gMnSO4·4H2O 0.01gMgSO4·7H2O 0.03gK2HPO40.75gCaCO3 5.0g蒸馏水1000mlPH 7.2注：CaCO3最后加，不需要溶解，直接调PH，培养基中有这个成分是为了缓冲pH。

因为硝化细菌的生长会产生酸化效应，使得氢离子过剩，到了一定程度硝化作用将无法继续，所以要碱性物质平衡酸碱。

下同。

2.硝酸细菌培养基（改良的斯蒂芬逊（Stephenson）培养基B）NaH2PO40.25gK2HPO40.75gMgSO4·7H2O 0.03gMnSO4·4H2O 0.01gCaCO3 1.0gNa2CO3 1.0gNaNO2 1.0g蒸馏水1000mlPH 7.23. 反硝化细菌培养基柠檬酸钠 5.0 gKNO3 2.0 gKH2PO4 1.0 g,K2HPO4 1.0 gMgSO4·7H2O 0.2 g蒸馏水1000 mlpH值7.2~7.54.好气性自生固氮菌培养基（改良阿须贝(Ashby)无氮培养基）苯甲酸钠 1.5 gK2HPO4 0.2 gMgSO4·7H2O 0.2 gNaCl 0.2 gCaSO4·2H2O 0.1 gPH 7.4—7.6注：在培养基分装入试管时，每管加入一1cm滤纸长条，要露出液面。