HPV16的新型伪病毒对DNA特异性B细胞的靶向实验研究

人乳头瘤病毒(HPV)16,-18,-58型单克隆抗体的制备分析及初步应用的开题报告
一、研究背景和目的：
人乳头瘤病毒(HPV)是一种高危性病毒，能引起宫颈癌及其他生殖系统恶性肿瘤。

其中HPV16、18、58型是目前最常见的高危型HPV，对其的防治成为了当前研究的热点。

单克隆抗体技术是一种常见的分子诊断技术，能够对HPV感染的检测和治疗提供有力的支持。

本研究旨在制备人HPV16、18、58型单克隆抗体，并对其在HPV相关疾病中的应用进行初步探究，为其后续的研究提供支持。

二、研究方法：
（一）制备HPV16、18、58型单克隆抗体：
采集HPV16、18、58型阳性的标本，并将其用于免疫Balb/c小鼠。

收集小鼠脾细胞并进行融合细胞的制备。

筛选稳定的单克隆细胞，通过ELISA方法鉴定单抗。

对生产出单克隆抗体的细胞进行库存，以备后续的实验应用。

（二）对单克隆抗体的特性进行检测：
利用Western Blot方法对单克隆抗体的特性进行检测。

同时，通过比较和分析不同型号单克隆抗体间的交叉反应等性质，来评估其特异性和敏感度。

（三）初步应用：
将制备的HPV16、18、58型单克隆抗体应用于HPV相关疾病检测中。

采用ELISA或Western Blot技术进行检测，并通过对样本的结果进行分析，评估单克隆抗体的应用价值和成效。

三、研究意义：
本研究制备的HPV16、18、58型单克隆抗体，在目前的分子诊断技术中具有广阔的应用前景。

其可以应用于HPV感染的检测和治疗，为实现对宫颈癌等恶性疾病的防治提供一条新的途径。

宫颈癌组织中HPV_(16)DNA基因同源序列的检测杨平;赵文先;伍欣星;程应雅;胡伦颖【期刊名称】《肿瘤防治研究》【年(卷),期】1991(18)3【摘要】206例不同病理诊断的宫颈脱落细胞和宫颈组织DNA,同探针杂交,检测HPV_(16)DNA同源性序列。

结果表明:HPV_(16)DNA探针同宫颈癌脱落细胞杂交(65.2％)和同宫颈癌组织DNA杂交(66.7％),其杂交率无显著差别(P>0.05)。

宫颈炎脱落细胞DNA和宫颈炎组织DNA与HPV_(16)DNA探针杂交率间的差异也无统计学意义。

然而,宫颈癌和宫颈炎之间无论是脱落细胞或是组织DNA同探针杂交有显著差异(前者为65.2—66.7％,后者为26.1—28.5％)P<0.01。

宫颈癌和宫颈炎DNA经酶切电泳后,Southern blot杂交结果提示HPV_(16)DNA整合在癌组织基因组中。

【总页数】3页(P142-144)【关键词】子宫颈肿瘤;人乳头病毒;DNA【作者】杨平;赵文先;伍欣星;程应雅;胡伦颖【作者单位】湖北医学院病毒所分子生物学室;湖医附属二医院妇科【正文语种】中文【中图分类】R737.330.4【相关文献】1.宫颈癌组织中人乳头瘤病毒HPV16型基因组同源序列的检测 [J], 林玉纪;等2.宫颈癌组织基因组中C—MYC癌基因同源序列的检测及其临床意义 [J], 魏赛男;杨平3.广西地区子宫颈癌发病与人乳头瘤病毒感染关系的研究Ⅰ.宫颈癌组织的HPV16DNA相关序列检测及HPV型别的分布调查 [J], 古明华;李力;陈心秋;李洁;李菲;吴继宁;林玉纯;刘宝印;唐家龄;赵恒毅;张洁清4.中国妇女宫颈癌组织中HPV_(16)L_1晚期基因克隆及重组质粒的构建 [J], 谷鸿喜;凌虹;隋丽华;钟照华;郭淑元;郭彩玲5.江西地区宫颈癌及癌前病变组织DNA中HPV16型基因组相关序列的检测 [J], 郭韵玉;龚林;曾晓南;杨学志;邓水生;林玉纯因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

人乳头瘤病毒16型E7基因靶向调控cGAS-STING信号通路抑制宫颈癌细胞免疫功能的研究阿尼克孜·阿不都艾尼夏日瓦娜·阿巴斯木则帕尔·太来提程祥许爱敏（喀什地区第一人民医院，喀什 844000）中图分类号R737.33 文献标志码 A 文章编号1000-484X（2024）02-0293-06［摘要］目的：探讨HPV16 E7靶向调控cGAS-STING信号通路对宫颈癌细胞免疫功能的影响。

方法：体外构建HPV16 E7过表达和干扰质粒，转染至SiHa细胞，qPCR检测HPV16 E7 mRNA表达水平，流式细胞术检测CD95、MICA/B、CD73、CD39、CTLA-4和CD25表达。

在此基础上分别转染cGAS-siRNA和STING-siRNA至SiHa细胞，CCK8检测细胞活力，流式细胞术检测细胞凋亡。

qPCR和Western blot分别检测cGAS、STING、IFN-Ⅰ、HPV16 E7的mRNA及蛋白表达。

流式细胞术检测细胞CD95、MICA/B、CD73、CD39、CTLA-4和CD25表达。

结果：STING-siRNA+HPV16 E7过表达组CD95和MICA/B水平降低（P<0.05），CD73、CD39、CTLA-4和CD25水平升高（P<0.05）。

cGAS、STING和IFN-Ⅰ蛋白表达水平降低（P<0.05）。

STING-siRNA+HPV16 E7干扰组结果与之相反。

结论：HPV16 E7靶向调控cGAS-STING信号通路进而抑制宫颈癌细胞免疫功能。

［关键词］HPV16 E7；宫颈癌；cGAS-STING；免疫功能Human papillomavirus type 16 E7 gene targeted cGAS-STING signaling pathway to suppress immune function in cervical cancer cellsANIKEZI Abuduaini，XIARIWANA Abasi，MUZEPAER Tailaiti，CHENG Xiang，XU Aimin. The First People's Hospital of Kashgar， Kashgar 844000， China［Abstract］Objective：To explore the effect of HPV16 E7 targeted cGAS-STING signaling pathway on immune function of cer‐vical cancer cells. Methods：HPV16 E7 overexpression and interference plasmids were constructed in vitro and transfected into SiHa cells. mRNA expression level of HPV16 E7 was detected by qPCR， and expressions of CD95， MICA/B， CD73， CD39， CTLA-4 and CD25 were detected by flow cytometry. On this basis， cGAS-siRNA and STING-siRNA were transfected into SiHa cells respectively. Cell viability was detected by CCK8，and cell apoptosis was detected by flow cytometry. mRNA and protein expressions of cGAS，STING， IFN-Ⅰ and HPV16 E7 were detected by qPCR and Western blot respectively. Expressions of CD95， MICA/B， CD73， CD39，CTLA-4 and CD25 were detected by flow cytometry. Results：Levels of CD95 and MICA/B were decreased in STING-siRNA+HPV16 E7 overexpression group （P<0.05）， while levels of CD73， CD39， CTLA-4 and CD25 were increased （P<0.05）. Protein expression levels of cGAS， STING and IFN-Ⅰ were decreased （P<0.05）. Results of STING-siRNA+HPV16 E7 interference group were opposite. Conclusion：HPV16 E7 inhibits the immune function of cervical cancer cells by targeting cGAS-STING signaling pathway.［Key words］HPV16 E7；Cervical cancer；cGAS-STING；Immune function在全球妇女常见的恶性肿瘤中，宫颈癌是女性生殖系统最常见的恶性肿瘤之一［1-2］。

HPV16与宫颈癌发生发现的研究进展摘要：宫颈癌是女性常见的恶性肿瘤之一，在全球范围内有着较高的发病率。

现有医学证据表明，HPV（高危型人乳头状瘤）持续感染是宫颈癌前病变的必要条件，而相关数据显示，有超过99%的宫颈癌患者可检测出高危型HPV DNA的存在。

本文就HPV16与宫颈癌的发生、发现相关的研究成果进行综述。

关键词：宫颈癌；HPV16；E2基因/蛋白；研究进展宫颈癌为15-44岁女性高发的一种恶性肿瘤，在中国，宫颈癌具有较高的发病率与死亡率，有关宫颈癌的发病机制、病理改变以及诊治方案的研究备受关注。

基于现有的医学研究与文献资料来看，在宫颈癌前病变以及宫颈癌的发生、发展中，HPV持续感染是其必要条件。

HPV为鳞状上皮细胞细胞核内的小DNA病毒，具有无囊膜以及可复制等特性。

围绕HPV感染与宫颈癌发生之间的关系，有研究数据表明，在高危型HPV中，HPV16型的占比相对较高，而宫颈癌患者以及癌前病变患者也有超过半数可检测出HPV16型感染。

1 HPV16变异与宫颈癌HPV16基因组长约7900bp，一般将其分为早期区、晚期区、长期控制区以及小非编码区。

在所有宫颈癌患者中，HPV16感染型的占比相对较高。

回顾既往有关HPV16的研究，2001年，Hildesheim指出，HPV16不同变异体与宫颈癌之间的相关性存在一定的差异，HPV16变异影响着病毒的一系列活动（如持续感染、组装等），并参与到宫颈癌的发病进程之中。

2013年，Cornet等人对有关HPV16与肿瘤发生发展相关性的研究进行了Meta分析，并提出了欧洲型（E）变异体是占比最高的亚型，且此种变异与HPV持续感染、宫颈癌的进展之间有着密切关联。

上述研究表明，HPV的不同变异体与女性的宫颈癌风险相关。

2017年9月7日，Cell上的一份报道指出，并非所有的感染都是平均的：相关研究人员对5570例人类细胞、组织样本的HPV16基因组进行了分析，结果显示，该病毒由大量独特基因组组成。

HPV16 E7c与人β防御素2融合基因表达质粒的构建、表达与免疫功能实验研究的开题报告
研究背景与意义:
人类乳头瘤病毒(HPV)感染是导致宫颈癌和其他妇科癌症的主要原因之一。

感染HPV16和18型病毒株增加了罹患宫颈癌的风险，并且这两
种病毒占所有宫颈癌的70％以上。

因此，发展HPV16和18预防和治疗
新策略至关重要。

人β防御素2(DEFB2)是一种天然免疫反应分子，具有广谱抗病毒和
抗肿瘤活性。

因此，将HPV16 E7c与DEFB2基因融合可能会提高病毒病和肿瘤的免疫保护作用。

因此，本研究旨在构建HPV16 E7c和DEFB2基因的融合质粒，并研究其免疫功能，以寻求一种新的HPV16相关疾病的预防和治疗策略。

研究方法:
1.利用PCR扩增HPV16 E7c和DEFB2基因序列，并进行DNA连接。

2.将E7c-DEFB2融合基因克隆到表达载体pUC57中。

3.转化大肠杆菌DH5α菌株，并筛选获得重组融合质粒。

4.提取重组质粒进行限制性酶切和测序验证。

5.将重组质粒转染入HEK293T细胞，用Western blot检测蛋白表达。

6.合成E7c、DEFB2和E7c-DEFB2的多肽，用于实验分析多肽的免
疫反应。

预期结果和意义:
预计成功构建HPV16 E7c和DEFB2基因的融合质粒，并在
HEK293T细胞中成功表达融合蛋白。

使用合成的多肽对小鼠进行免疫，
并通过检测小鼠的免疫反应来评价E7c-DEFB2多肽的免疫效果。

如果本研究成功，本研究将提供一种新的HPV16相关疾病预防和治疗策略。

(10)申请公布号(43)申请公布日 (21)申请号 201511018981.3(22)申请日 2015.12.29C12Q 1/68(2006.01)C12Q 1/70(2006.01)(71)申请人中国医学科学院医学生物学研究所地址650118 云南省昆明市茭菱路935号(72)发明人孙强明 席珏敏 陈俊英 潘玥王晓丹 赵玉娇 邱丽娟 姜黎明罗佳(74)专利代理机构昆明正原专利商标代理有限公司 53100代理人徐玲菊 蒋文睿(54)发明名称一种16型、18型HPV 病毒基因拷贝数的绝对定量检测方法(57)摘要本发明提供一种16型、18型HPV 病毒基因拷贝数的绝对定量检测方法，通过检索NCBI 16型、18型HPV 基因组序列，获取HPV E6/E7基因序列信息，分别以31-934位点区域和41-980位点区域构建16型、18型HPV E6/E7标准品质粒，参照所得16型、18型HPV E6/E7目的基因序列，分别在上述位点区域内设计16型、18型HPV E6、E7荧光定量PCR 特异性引物，利用所得16型、18型HPVE6/E7标准品质粒分别检测宫颈癌患者组织样品的16型、18型HPV 病毒拷贝数。

该检测体系的建立既可以通过检测E6基因，又可以通过检测E7基因，来达到对宫颈癌患者组织中的HPV DNA 拷贝数进行绝对定量的目的，从而对宫颈癌的早防、早治提供参考。

(51)Int.Cl.(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请权利要求书2页 说明书14页 附图6页CN 105483249 A 2016.04.13C N 105483249A1.一种16型、18型HPV病毒基因拷贝数的绝对定量检测方法，其特征在于经过下列各步骤：（1）构建16型、18型HPV E6/E7标准品质粒：a．根据NCBI数据库中16型HPV （NCBI Reference Sequence： NC_001526.2）和18型HPV （GenBank：AY262282.1）基因序列，针对E6/E7基因区，按下述设计特异性引物：16型HPV E6/E7的PCR正、反向引物：HPV16 E6/E7For：5'-CGT AAC CGA AAT CGG TTG AAC-3'HPV16 E6/E7Rev：5'-CAG CCT CTA CAT AAA ACC ATC-3'18型HPV E6/E7的PCR正、反向引物：HPV18 E6/E7For：5'-AAC CGA AAA CGG TCG GGA CC-3'HPV18 E6/E7Rev：5'-TAG CTT GTA CAT AAA ACC AGC-3'；b．宫颈癌组织中总DNA的提取：先将1 mL HPV组织保存液吸入1.5 mL灭菌的EP管中，以13000rpm在4℃下离心5min；弃上清，向沉淀中加入1mL Tris-HCl 洗涤缓冲液，以13000rpm 在4℃下离心5min；弃上清，再加入1mL Tris-HCl洗涤缓冲液，以13000rpm在4℃下离心5min，弃上清；向沉淀中加入200 µL浓度为0.1mg/mL的蛋白酶K裂解液，在50℃下消化过夜；然后以95℃沸水煮沸变性10min；再以13000rpm在4℃下离心5min，将上清转移至0.5 mL EP 管中，在-70℃下冻存，得到16型、18型HPV基因组DNA；c．将步骤b所得16型、18型HPV基因组DNA通过PCR的方法，利用步骤a的特异性引物分别扩增16型、18型HPV E6/E7基因，分别得到对应的扩增产物，再将扩增产物分别连接到pMD-18T Vector克隆载体上，转化DH5α感受态细胞，挑单克隆进行测序鉴定，分别获得16型、18型HPV目的基因序列鉴定正确的阳性菌株；d．将步骤（1）c所得序列鉴定正确的阳性菌株分别进行常规培养，分别获得16型、18型HPV标准品质粒，并用紫外分光光度计分别测定16型、18型HPV标准品质粒的浓度，再按下列公式计算标准品质粒的拷贝数：Number of copies（copies/μl） = (Amount×6.022×1023)/（Length×1×109×650）其中，Amount为紫外分光光度计测得标准品质粒所测含量（ng/μl），Length代表模板DNA长度；（2）参照步骤（1）c所得16型、18型HPV目的基因序列分别设计下列16型、18型HPV E6和E7的荧光定量PCR特异性引物：16型：HPV16 E6For：5'-TGC GAC GTG AGG TAT ATG ACT TTG-3'HPV16 E6Rev：5'-ACG GTT TGT TGT ATT GCT GTT CTA-3'16型：HPV16 E7For：5'-TTA GAT TTG CAA CCA GAG ACA-3'HPV16 E7Rev：5'-GCA CAA CCG AAG CGT AGA GTC-3'18型：HPV18 E6For：5'-ACA TTG GAA AAA CTA ACT AAC-3'HPV18 E6Rev：5'-TGC AGC ACG AAT GGC ACT GG-3'18型：HPV18 E7For：5'-AAT TCC GGT TGA CCT TCT ATG-3'HPV18 E7Rev：5'-GCT CAA TTC TGG CTT CAC ACT T-3'（3）利用步骤（1）d所得16型、18型HPV标准品质粒分别检测宫颈癌组织中的E6和E7拷贝数，具体检测方法如下：a．将步骤（1）d所得16型、18型HPV标准品质粒分别用双蒸水按梯度稀释至10-6，按PCR反应体系以SYBR法实时荧光定量PCR检测标准品质粒扩增效率和特异性，通过荧光定量PCR检测直接获得16型、18型HPV标准品质粒的扩增曲线与溶解曲线，同时根据荧光定量PCR检测所得标准品Ct值作为X轴，标准品拷贝数log10作为Y轴分别绘制16型、18型HPV标准品质粒的标准曲线，进而得到16型、18型HPV标准品质粒的标准曲线方程：所述PCR反应体系如表1：表1 荧光定量PCR反应体系（反应总体积为20μl）成分体积模板 1 μl步骤（3）的荧光定量PCR特异性正向引物（10μM） 1 μl步骤（3）的荧光定量PCR特异性反向引物（10μM） 1 μl2×SYBR green Master Mix10 μl双蒸水7 μl采用的反应程序如下：b．按步骤（3）a提供的PCR反应体系以SYBR法实时荧光定量PCR检测宫颈癌组织DNA，分别根据步骤（3）a利用标准品质粒得到标准曲线和标准曲线方程，进而获得宫颈癌组织中HPV DNA的拷贝数。

HPV-16 E6、E7基因慢病毒真核表达载体的构建及鉴定方芳;胡尔西旦·尼牙孜;武贵臻;阿布力孜·阿布杜拉;盛磊【摘要】Objective To construct the eukaryotic expression vector for human papillomavirus (HPV)E6 and E7 genes.Methods We amplified the full-length HPV-16 E6 and E7 genes from the total RNA of the SiHa cell line by RT-PCR technique and sub-cloned the gene into pLenti6/V5vector,which was identified and confirmed by DNA sequencing.The construction of E6 and E7 transfected viruses was used to package cells.Then we harvested viral supematant and determined the titer.Results The plasmid sequencing was completely consistent with E6,E7 gene sequence,which showed that the vector was successfully construc-ted.The titer of E6 was 1.5×108 TU/mL,and 2×10 8 TU/mL of E7,satisfying the requirements of the subsequent researches.Conclusion The successful construction of HPV-16 E6 and E7 gene eukaryotic ex-pression vector could lay the material foundation for furthering study of the pathogenesis of HPV E6 and E7 genes.%目的：构建人乳头瘤病毒（HPV）E6、E7基因慢病毒真核表达载体。

HPV16E7多肽对抗原特异性CTL免疫表型及其功
能的影响的开题报告
题目：HPV16E7多肽对抗原特异性CTL免疫表型及其功能的影响
研究背景和意义：
宫颈癌是女性最常见的恶性肿瘤之一，人类乳头瘤病毒16型（HPV16）是其主要致病因素。

研究表明，CTL对于清除HPV感染和预防宫颈癌的发生和发展具有重要作用。

HPV16E7是HPV16的关键抗原之一，在CTL的免疫监视和清除HPV感染中发挥着重要作用。

因此，调节HPV16E7多肽对抗原特异性CTL的免疫功能和表型，对于预防和治疗宫颈癌具有重要意义。

研究方法：
本研究采用细胞培养技术，将人体外周血中的CTL分离、培养，并经HPV16E7多肽处理后收集细胞、血清和文化液，进行流式细胞术、ELISA及其他免疫学实验，分析HPV16E7多肽对抗原特异性CTL的免疫表型和功能等方面的影响。

研究内容：
1. 确定HPV16E7多肽的最佳处理浓度和处理时间。

2. 通过流式细胞术监测HPV16E7多肽处理后CTL的免疫表型。

3. 通过ELISA测定HPV16E7多肽处理后CTL的细胞因子水平。

4. 通过细胞增殖检测HPV16E7多肽处理后CTL的功能改变。

5. 探究HPV16E7多肽处理的抗原特异性CTL的免疫学机制。

预期结果：
本研究将进一步探究HPV16E7多肽对抗原特异性CTL的免疫表型和功能的影响，为研究宫颈癌的免疫治疗提供理论和实验依据。

研究预计能够得出HPV16E7多肽对抗原特异性CTL的免疫监视和清除HPV感染的影响，为临床治疗提供实验依据。

HPV16型E7抗原B细胞表位的预测与鉴定的开题报告一、研究背景人乳头瘤病毒（human papillomavirus，HPV）感染是导致宫颈癌及其他生殖系统恶性肿瘤的主要原因，其中HPV16型是最为常见的致癌型别之一。

HPV16型E7蛋白是一种重要的致癌蛋白，其可以通过与宿主细胞的逆转录酶、pRB等蛋白相互作用，抑制宿主细胞周期的正常调节，增强细胞的增殖和分化，从而导致细胞的癌化和肿瘤的形成。

因此，E7蛋白可能成为抗癌疫苗及肿瘤治疗的重要靶点之一。

细胞免疫学是肿瘤免疫学研究的基础和核心，其主要研究免疫细胞对肿瘤细胞的杀伤作用，从而为肿瘤的预防和治疗提供理论和实验基础。

对于E7蛋白的B细胞表位的预测和鉴定是肿瘤免疫学研究的核心之一，也是E7蛋白作为靶点的关键之一。

因此，对于HPV16型E7抗原B细胞表位的预测和鉴定具有非常重要的研究意义。

二、研究目的本研究旨在通过文献调研及计算机模拟方法对HPV16型E7抗原B细胞表位的预测和鉴定进行研究，旨在为E7蛋白的肿瘤免疫学研究提供理论和实验基础，进一步深入了解肿瘤免疫学的研究方法和应用，并为肿瘤的预防和治疗提供科学依据。

三、研究内容和方法研究内容：1. HPV16型E7抗原B细胞表位的预测：通过文献调研、多肽预测软件及数据库，对E7蛋白的肽段进行筛选和分析，预测其可能的B细胞表位。

2. HPV16型E7抗原B细胞表位的鉴定：采用重组蛋白技术，合成并表达预测得到的肽段，通过 ELISA 免疫分析方法，对其与B细胞的抗体结合能力进行鉴定。

研究方法：1. 文献调研：收集和整理HPV16型E7蛋白的相关文献，系统回顾和分析B细胞表位预测和鉴定的研究方法和进展，了解目前研究热点和难点。

2. 多肽预测软件及数据库：利用多肽预测软件和数据库，进行多肽结构和功能的预测和模拟研究，确定可能的B细胞表位。

3. 重组蛋白技术：利用基因工程技术，将HPV16型E7蛋白预测得到的肽段合成并表达成重组蛋白。

结直肠癌HPV16型感染与核因子-κB活化的关系研究周宇;叶文桃;麦海妍【期刊名称】《肿瘤防治研究》【年(卷),期】2004(31)5【摘要】目的探讨结直肠癌HPV16型感染与核因子κB(NF κB)活化的关系。

方法应用凝胶电泳迁移率分析 (EMSA)检测 5 0例结直肠癌、30例结直肠腺瘤和 2 0例正常大肠组织核因子NF κBDNA结合活性 ,并用多聚酶链反应 (PCR)和southernblot检测HPV16型DNA。

结果结直肠癌、腺瘤分别与正常结直肠组织比较 ,NF κBDNA结合活性和HPV16型DNA阳性率均明显增高 ,差异有显著性(P <0 .0 5 ) ;结直肠癌和结直肠腺瘤比较,NF κBDNA结合活性和HPV16型DNA 阳性率差异均无显著性 (P>0 .0 5 )。

HPV16型DNA阳性和阴性结直肠癌患者比较,NF κBDNA结合活性差异有显著性 (P <0 .0 5 )。

结论NF KB活化参与HPV16型在结直肠癌的致癌过程。

【总页数】3页(P264-266)【关键词】结直肠癌;HPVl6型感染;核因子-κB活化;NF-κB;人乳头瘤病毒;EMSA;肿瘤【作者】周宇;叶文桃;麦海妍【作者单位】广东医学院附属医院消化内科【正文语种】中文【中图分类】R735.3【相关文献】1.结直肠癌组织中活化T细胞核因子的表达及意义 [J], 常颖;袁庆鑫2.骨保护蛋白/核因子-κβ受体活化因子/核因子-κβ受体活化因子配体轴与心脏瓣膜病合并持续性心房颤动患者改良迷宫术后心房颤动复发的关系及其作用机制研究[J], 王健;戴婷;蒋国军;曹海龙3.核因子-κB活化与结肠直肠癌临床病理关系研究 [J], 周宇;叶文桃;麦海妍4.结直肠癌HPV16型感染和Ag-NOR的关系及预后价值 [J], 周宇;叶文桃;麦海妍;于皆平;沈志祥;罗和生5.HPV16型感染与结直肠癌临床病理特征和预后关系的研究 [J], 周宇;于皆平;沈志祥;罗和生因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

microRNA与人乳头瘤病毒16型的作用靶点研究开
题报告
研究背景：
人乳头瘤病毒16型（human papillomavirus type 16, HPV16）是引起宫颈癌的主要原因。

近年来的研究表明，microRNA（miRNA）在
HPV16 与宫颈癌发生和发展中扮演着重要的作用。

miRNA 是一类长度为18-24bp 的非编码 RNA，能够通过结合靶基因的 3'UTR 区域抑制靶基因
的表达，从而影响细胞的生长和转化。

研究目的：
本研究旨在探究 HPV16 对人宫颈上皮细胞 miRNA 表达的影响及其
在宫颈癌发生和发展中的作用靶点。

具体目标包括：（1）筛选 HPV16
感染宫颈上皮细胞中差异表达的 miRNA；（2）揭示 HPV16 与差异表达miRNA 的相互作用机制；（3）鉴定 HPV16 组份与 miRNA 相互作用的靶点和通路。

研究方法：
本研究拟通过以下步骤实现目标：（1）利用测序和定量PCR 技术，筛选差异表达 miRNA；（2）构建 luciferase 报告基因系统，检测差异表达 miRNA 对 HPV16 基因组和蛋白质进行调控的作用；（3）分析差异表达 miRNA 与宫颈癌细胞系的基因表达谱的相关性；（4）利用生物信息
学软件分析 miRNA 的靶点和通路。

研究意义：
本研究将有助于深入了解 HPV16 与宫颈癌发生和发展的关系，对于揭示 miRNA 与癌症病理学、基因组学、转录组学等方面的关系也具有重要意义。

此外，本研究还将为最终实现以 HPV 疫苗为主的宫颈癌预防和
治疗提供理论指导。

应用核酸杂交技术检测宫颈组织中HPV16DNA序列徐爱强;张建国【期刊名称】《实用癌症杂志》【年(卷),期】1990(5)3【摘要】应用[α—^(32)P]—HPV16 DNA探针和Southern blo核酸杂交技术检测了154份宫颈活检组织标本。

在低限制性条件和高限制性条件下;宫颈癌组织HPV16 DNA杂交的阳性率分别为50.86％(59/116)和37.07％(43/116),且鳞癌与腺癌之间无显著性差异(P>0.90);正常宫颈组织的阳性率则分别为5.56％(2/36)和0.00%(0/36)。

宫颈癌组织HPV16 DNA杂交的阳性率均显著地高于正常宫颈组织(P<0.001)。

另外,在2例宫颈间变组织中检出1例HPV16 DNA阳性杂交结果。

上述给果提示:HPV16及其相关型感染与宫颈癌之间可能存在病因学联系。

【总页数】3页(P167-169)【作者】徐爱强;张建国【作者单位】不详;不详【正文语种】中文【中图分类】R737.330.2【相关文献】1.原位核酸分子杂交技术检测宫颈鳞状上皮病变HPV感染 [J], 丘佳明;叶凯;杨之蕙;金蔚2.应用原位PCR和原位杂交技术检测宫颈癌及癌前病变组织中HPV DNA [J], 李西启;徐廷香;赵秀娥;王涛;王剑波;刘彦仿3.应用组织芯片技术研究人宫颈鳞状细胞癌及宫颈上皮内瘤样变组织中HPV16感染与端粒酶hTERT表达的关系 [J], 赵富玺;孙瑞芳;王晋芬;陈向伟4.用原位杂交技术检测人子宫颈癌组织中HPV16E6转化基因的研究 [J], 卞继峰;于修平5.用光敏生物素标记HPV16,18DNA探针检测宫颈癌组织核酸相关序列 [J], 张晓燕;谷鸿喜;迟明超;李绍贤;隋丽华;娄阁;关光伟因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

HPV16型E6基因沉默细胞克隆的建立及深入研究的开题报告一、研究背景和意义：宫颈癌是一种流行于女性的恶性肿瘤，它的主要原因是人类乳头瘤病毒(HPV)感染，其中型别16是最常见的致癌病毒。

在HPV16感染的过程中，E6基因是一个具有重要生物学功能的病毒蛋白。

病毒E6蛋白可以结合并分解宿主细胞的p53蛋白，使得宿主细胞失去抑制癌症发生的能力。

因此，病毒感染的宿主细胞往往表现出失控生长的现象，最终导致宫颈癌的发生。

目前研究表明，沉默HPV16 E6基因的宿主细胞可以对病毒的致癌作用进行抑制，为研究HPV16感染机制以及宫颈癌治疗提供了新的可能性。

因此，本课题旨在通过建立HPV16 E6基因沉默的细胞克隆，并对其生物学特性进行深入研究，为进一步的宫颈癌治疗研究提供基础实验支持。

二、研究内容：1.构建HPV16 E6基因沉默的表达载体，并在宫颈癌细胞系SiHa中进行转染。

2.筛选出成功沉默HPV16 E6基因的细胞克隆。

3.对比沉默和未沉默HPV16 E6基因细胞克隆的生长特性以及亚细胞结构特征。

4.对比沉默和未沉默HPV16 E6基因细胞克隆对DNA损伤的反应。

5.研究沉默和未沉默HPV16 E6基因细胞克隆的凋亡特性。

6.探究沉默和未沉默HPV16 E6基因细胞克隆活性氧的水平及其与癌症发生的关系。

三、研究方法：1.合成shRNA序列，构建shRNA表达载体。

2.在宫颈癌细胞系SiHa中采用脂质体介导的方法进行转染，用Real-time PCR和Western blot检测细胞中病毒E6基因的表达水平。

3.通过克隆盘稀释法选出单个克隆。

4.采用细胞增殖分析和MTT实验测定细胞的增殖能力。

5.采用光镜、电子镜等技术观察细胞的亚细胞结构。

6.利用单细胞凝胶电泳技术(DNA comet assay)检测细胞对DNA损伤的反应。

7.测定细胞的凋亡指标，包括Annexin V-FITC/PI双染法、Terminal deoxynucleotidyl transferase dUTP nick end labeling(TUNEL)法等。

新型CAR-T细胞靶向杀伤HPV16阳性宫颈癌细胞的探索研究张英;滕娇;汪月;邓丽娜;杨奕娜【期刊名称】《转化医学电子杂志》【年(卷),期】2018(005)012【摘要】目的:制备特异性杀伤HPV16阳性宫颈癌细胞的CAR-T细胞,初步探索CAR-T细胞治疗宫颈癌的可行性.方法:以HPV16 E711-19:HLA-A?0201复合物为靶点,合成第三代CAR基因序列,并克隆到慢病毒表达质粒,通过293T细胞包装慢病毒,将其转导人外周血T细胞,制备CAR-T细胞,采用流式细胞术检测CAR-T细胞的转导效率.将CAR-T细胞分别与宫颈癌细胞株HPV16+Ca Ski和HPV18+HeLa 共培养,使用CCK-8试剂盒检测CAR-T细胞的杀伤效果,以及利用ELISA测定CAR-T细胞分泌IFN-γ和IL-2的水平.结果:流式细胞术检测显示T细胞的慢病毒转导效率为41.2％,其中CD4+T细胞为85.2％,CD8+T细胞为30.9％.体外共培养实验CAR-T细胞与Ca Ski和HeLa细胞为10:1时,对应的细胞活力分别为56.8％和98.3％.CAR-T细胞对Ca Ski细胞具有较强的细胞毒性,而对HeLa细胞的杀伤作用较小.Ca Ski细胞培养基中IFN-γ浓度达到100 pg/mL,IL-2浓度达到24pg/mL,而HeLa细胞培养基中IFN-γ为16 pg/mL,IL-2为6 pg/mL.结论:我们成功制备靶向杀伤HPV16阳性宫颈癌细胞的CAR-T细胞,为CAR-T细胞治疗宫颈癌提供了初步的研究支持.【总页数】5页(P17-21)【作者】张英;滕娇;汪月;邓丽娜;杨奕娜【作者单位】深圳市宝安区中心医院,广东深圳518102;深圳爱生再生医学科技有限公司,广东深圳518118;深圳爱生再生医学科技有限公司,广东深圳518118;深圳市宝安区中心医院,广东深圳518102;深圳市宝安区中心医院,广东深圳518102【正文语种】中文【中图分类】R737.33【相关文献】1.宫颈癌细胞冻融抗原负载树突状细胞激发细胞毒性T淋巴细胞杀伤宫颈癌细胞的体外研究 [J], 王健敏;程琪2.RNA干扰抑制HPV16E6基因的表达对HPV16阳性宫颈癌细胞中基因表达谱的影响 [J], 马天有;归巧娣;施瑞洁;李玲;刘文康3.靶向切割HPV16E6 mRNA的核酶诱导宫颈癌细胞CaSKi凋亡的研究 [J], 郑燕芳;张积仁4.重组腺病毒Ad-sh-HPV16E7对宫颈癌细胞系Caski表面分子MHC-Ⅰ表达水平及对NK细胞杀伤性影响 [J], 李秀玉;李忠新;胡波5.新型靶向人源BCMA的CAR-T细胞构建及其对BCMA阳性肿瘤细胞的杀伤作用观察 [J], 尚凤琴;李晓瑞;余卓营;张野;石冰洁;王建勋因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

所有HPV-16阳性宫颈癌患者中均检测出HPV-16特异性细胞毒性T淋巴细胞应答反应Valdespino V;Gorodezky C;Ortiz V;朱国栋【期刊名称】《世界核心医学期刊文摘：妇产科学分册》【年(卷),期】2005(000)005【摘要】The specific CTL response against human papillomavirus (HPV) antigens in women with cervical cancer has been poorly studied. Immunological monitoring of this response is central for understanding the principles that underlie successful im munotherapeutic strategies. The aim of the study was to investigate the HPV16 E6 /E7-specific CTL immune response in a group of untreated HPV16-positive cervic al cancer patients. Peripheral blood mononuclear cells from 21 untreated cervica l cancer patients and 4 healthy controls were isolated prior to any therapy. Aut ologous monocyte-derived dendritic cells (MDDCs) were transiently transfected w ith HPV16 E6 or E7 expression vectors and used for one round of in vitro restimu lation and as target cells in chromium release assays with restimulated peripher al blood lymphocytes. Transfected monocyte-derived dendritic cells were differe ntiated to exhibit a fully mature phenotype. HPV16 E6and E7 transgenes were expr essed and translated as measured by RT-PCR and intracellular flow cytometry, re spectively. All HPV16-associated cervical cancer patients showed evidence of sp ecific CTLs. Lytic activity for HPV16 E6 (11/12) and/or E7 (8/9) wasabove 30%a t the 100:1 effector to target ratio. None of the HPV16-negative cervical cance r patients or healthy controls were above 15%of lysis. These data suggest that HPV-specific cytolytic immune responses can be detected in all untreated cervic al cancer patients. Our approach, using dendritic cells for restimulation and as target cells, may enhance immunomonitoring of cervical cancer patients.【总页数】1页(P44-44)【作者】Valdespino V;Gorodezky C;Ortiz V;朱国栋【作者单位】【正文语种】中文【中图分类】R737.33【相关文献】1.宫颈癌及癌前病变中的HPV-16的整合感染状态 [J], 熊矿辉;王丽霞;周红2.乙型肝炎患者外周血病毒特异性CD8阳性细胞毒性T淋巴细胞的数量和功能分析 [J], 范振平;施明;徐东平;张文瑾;张玲霞;王福生3.新疆地区宫颈癌和CIN患者HPV-16感染和血清中HPV-16 L1抗体的检测及其临床意义 [J], 阿尼克孜·阿不都艾尼;马正海;史茜;候向前;玛依努尔·尼牙孜;朱开春4.宫颈癌及癌前病变中的HPV-16整合人宿主基因组的发生情况及其在宫颈癌筛查中的应用 [J], 王霞5.调控SOX2对HPV-16阳性宫颈癌细胞增殖转移的影响 [J], 刘丽丹;贺漪;黄浩梁;王李菲因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

人乳头瘤病毒（HPV）疫苗的研究进展[关键词] 宫颈癌健康网讯: 李娟王佑春宫颈癌是严重危害妇女健康和生命的疾病，每年约有50万新发病例，25万人死亡，是引起妇女死亡的第二大原因，其中大部分在发展中国家，占80%左右［1］。

1977年德国学者Zur Hausen等从宫颈癌标本中发现了人乳头瘤病毒（human papillomavirus，HPV）DNA，推测HPV感染与宫颈癌发生有关。

进一步的分子流行病学证据表明，HPV与人类多种癌症，特别是与宫颈癌有着密切的关系。

由国际癌症研究机构（IARC）组织在22个国家进行了针对引起侵袭性宫颈癌（ICC）的HPV类型的调查［2］。

组织学确诊为ICC的1000个病例中有99.7%发现HPV DNA阳性，其上HPV的类型主要为HPV16（53%）和HPV18（15%）。

1 机体对HPV感染的免疫反应 HPV属乳头多瘤空泡病毒科（Papovaviridae）乳头瘤病毒属，是一类感染表皮和粘膜鳞状上皮的小DNA病毒。

其基因组为双链环状DNA，长7.5～8.0kb，含8个开放阅读框（open reading frames，ORFs），依功能不同分3个区:（1）早期区（early region，E区）:分别编码E1、E2、E4、E5、E6、E7等六个早期蛋白，参与病毒DNA的复制、转录、翻译调控和转化等功能。

（2）晚期区（late region，L区）:编码主要外壳蛋白L1和次要外壳蛋白L2。

（3）非编码区（uncoding region，UCR）或上游调控区（URR）:含有HPV 基因组DNA的复制起点和HPV表达所必需的调控元件。

按照HPV感染与宫颈癌发生的危险性，将HPV分为低危型（HPV1，6，11等）和高危型（HPV16，18，31，45等）。

低危型HPV 主要引起表皮细胞良性增生，如HPV6和11型可引起生殖器疣和儿童复发性乳头瘤。

高危型HPV与宫颈上皮内瘤的发生和恶变以及其他上皮性肿瘤的发生相关。

HPV16L1-UL138多表位嵌合病毒样颗粒的制备及免疫效应分析的开题报告一、研究背景与意义乳头状瘤病毒（Human papillomavirus, HPV）是一种常见的DNA病毒，被认为是导致人类最常见的性传播感染之一。

HPV感染具有潜伏期长、易复发、易慢性化和慢性感染转变为恶性肿瘤的危险性等特点，其致癌作用已被广泛关注。

HPV16是乳头状瘤病毒家族中最常见的亚型之一，被认为是导致宫颈癌和其他相关癌症发生的主要致病因素之一。

然而，由于HPV病毒颗粒的复杂性和多样性，研究HPV16的结构和免疫学特性一直是一项具有挑战性的任务。

最近，一种新的多表位嵌合病毒样颗粒（VLPs）被发现，其中包含了HPV16L1蛋白和UL138蛋白的部分表位，能够拓宽我们对HPV16病毒的认识，并可能成为新型疫苗和免疫治疗策略的候选对象。

因此，本研究旨在制备和表征HPV16L1-UL138多表位嵌合病毒样颗粒，并探究其在小鼠体内的免疫效应，为深入了解HPV16的生物学特性、开发新型疫苗和免疫治疗策略提供有益参考。

二、研究内容和方法1. 制备和表征HPV16L1-UL138多表位嵌合病毒样颗粒本研究将通过使用重组蛋白表达技术和纯化技术制备HPV16L1-UL138嵌合蛋白，并进行质谱分析、透射电镜观察等手段来表征其结构和性质。

2. 免疫效应分析本研究将通过小鼠模型进行免疫效应分析，包括血清抗体水平的测定、淋巴细胞增殖和细胞因子分泌等实验，以评估HPV16L1-UL138多表位嵌合病毒样颗粒的免疫保护效应。

三、预期结果与意义本研究预期得到HPV16L1-UL138多表位嵌合病毒样颗粒的高效制备和免疫效应分析结果，在HPV16生物学领域及疫苗和免疫治疗策略的开发方面具有重要意义。

同时，该研究结果还将为理解其他HPV亚型和病毒类似体颗粒的结构和功能提供有益的启示。