亚甲蓝病毒灭活新鲜冰冻血浆制备冷沉淀的有效成分分析

影响冷沉淀质量的关键因素分析冷沉淀（cryoprecipitate）是新鲜冰冻血浆（FFP）在低温（约0~4℃）解冻后沉淀的白色絮状物，是FFP的部分凝血因子浓集制品，其中主要成分有：Ⅷ因子、纤维蛋白原以及血管性血友病因子，纤维结合蛋白、ⅩⅢ因子等。

冷沉淀因其制作工艺简单、价格低廉，临床应用广泛。

适用于先天性或获得性纤维蛋白原缺乏症及Ⅷ因子缺乏症患者，血管性血友病（vWD）、儿童及成年人轻型甲型血友病患者，DIC及大出血患者的替代治疗等。

因冷沉淀中的Ⅷ因子为不稳定凝血因子，受多种因素影响，所以每袋冷沉淀Ⅷ因子含量各不相同，通过查阅相关资料及跟踪验证，对影响冷沉淀质量的关键因素分析，现报告如下：1 冷沉淀的制备方法冷沉淀制品是以新鲜冰冻血浆为原料，近年来因多联采血袋的广泛应用，冷沉淀的制作工艺更加简单，安全性更强，各地中心血站均能生产。

目前国内冷沉淀的制备常用两种方法[1]：1.1 离心法取出待制备冷沉淀的新鲜冰冻血浆（FFP），置室温中约5分钟，待双联袋导管（连接管）变软后，将血浆置入2～6℃水浴箱中融化。

当血浆基本融化时，取出血浆，在2±2℃的环境下重离心，使冷沉淀凝血因子下沉于塑料袋底部。

将上清分入空袋内，血袋底部的沉淀内大约含有20～30ml血浆，即为冷沉淀凝血因子。

1.2 虹吸法取出待制备冷沉淀的新鲜冰冻血浆（FFP），置室温中约5分钟，待双联袋导管（连接管）变软后，将新鲜冰冻血浆袋置于2～6℃水浴箱中，另一空袋悬于水浴箱外且位置低于血浆袋，两袋形成一定的高度落差。

新鲜冰冻血浆融化时，上清血浆随时被虹吸入空袋中，冷沉淀遗留在新鲜冰冻血浆袋中。

在融化过程中控制水浴温度在2～6℃。

待新鲜冰冻血浆融化至约40～50ml时，即为冷沉淀凝血因子。

以上两种方法制备好的冷沉淀需迅速放入速冻机中冷冻，于-20℃以下冰箱中保存，保存期不超过一年，输注前于37℃水浴融化，并于4小时内输注。

2 冷沉淀的质量标准根据《全血及成分血质量要求》GB18469-2001规定，冷沉淀外观：肉眼观察30℃~37℃融化的冷沉淀凝血因子无纤维蛋白析出、无黄疸、无气泡、无重度乳糜。

病毒灭活血浆与普通冰冻血浆临床应用价值对比探讨陈浩峰;叶伙梅【摘要】目的对比分析病毒灭活血浆与普通冰冻血浆临床应用价值,对指导临床合理使用血浆提供依据.方法收集某三甲医院2014年1月-2017年8月期间输注血浆的患者200例,分为普通冰冻血浆组与病毒灭活血浆组,观察患者治疗前后的PT 值和APTT值以及观察治疗前后PT、APTT、Fg、TT的变化值和血浆的使用量是否存在显著差异.结果普通冰冻血浆组输血后的PT值和APTT值比较输血前存在显著差异(P<0.05),病毒灭活血浆组输血后的PT值比较输血前存在显著差异(P<0.05).普通冰冻血浆组与病毒灭活血浆组比较血浆使用量、PT降低值、APTT 降低值、TT降低值、Fg升高值比较均没有统计学差异(P>0.05).结论病毒灭活血浆改善患者凝血功能方面的作用与普通冰冻血浆没有明显区别,但病毒灭活血浆在改善内源性凝血系统或者共同凝血途径凝血因子缺乏的凝血障碍可能没有明显效果.病毒灭活血浆可以在大部分情况下取代普通冰冻血浆应用于临床.【期刊名称】《实验与检验医学》【年(卷),期】2018(036)004【总页数】2页(P632-633)【关键词】病毒灭活血浆;普通冰冻血浆;临床应用【作者】陈浩峰;叶伙梅【作者单位】云浮市人民医院,广东云浮 527300;云浮市人民医院,广东云浮527300【正文语种】中文【中图分类】R446.11;R457.1+4目前，临床使用血浆的量越来越大，血浆种类日渐丰富，正确使用血浆对指导临床合理用血有重要意义。

某三甲医院的日常血浆供应以普通冰冻血浆与病毒灭活血浆为主，新鲜冰冻血浆供应较少，故对比探讨病毒灭活血浆与普通冰冻血浆的临床应用价值。

1 方法1．1 一般资料收集某三甲医院 2014年 1月－2017年8月期间输注血浆的患者200例。

所有患者都以补充凝血因子，改善凝血功能为目的，输血治疗前后凝血功能检测指标完整。

冷沉淀的制备及应用范围冷沉淀是新鲜冰冻血浆在1~6C条件下不溶解的白色沉淀物，它是POOI博士在1964-1965年期间发现的，被加热37C时呈溶解的液态，主要含有第忸因子、纤维蛋白原、血管性血友病因子（VWF）第X皿、以及纤连蛋白等成分。

现就冷沉淀的制备、临床应用及效果给大家介绍一下。

1 冷沉淀的制备与质量1.1 冷沉淀的制备选取健康无偿献血者, 各项检查指标合格,采集400 mL全血后6~8 h内经分离新鲜液体血浆于-50 C冻成型后的新鲜冰冻血浆放置-30 C保存。

制备冷沉淀时，将-30 C保存血浆放置于1~6C环境下溶解、分离出冷不溶物，放置-30 C冻存或直接应用于临床。

1.1.1 离心法（PooI）1.1.1.1 原料血浆的融化1.1.1.1.1 4 C冷藏箱法：将原料血浆从-30 C冰箱内取出，置于1~6C冷藏箱内缓慢融化。

1.1.1.1.2 水浴融化法：将原料血浆从-30 冰箱取出，值室温5 分钟，待双联袋间的塑料管变软后，放入15C水浴箱内，启动摇摆装置，约30分钟后温度调至4C,当原料血浆袋全部融化时（约60~90 分钟），然后把水温调至0~2C。

1.1.1.2融化后的原料浆于0~4C以离心力2000g离心10分钟，使冷沉淀下沉于塑料袋底部，快速去除上清液，剩20~30 mL左右即为冷沉淀。

1.1.2连续融化虹吸法（Mason）,将原料浆袋置于1~6C水浴装置中，另一空袋悬于水浴箱外且位置低于血浆袋，两袋之间形成一定的落差，血浆溶化后随时被虹吸至空袋内，当融化至剩下40~50ml时，闭合导管，阻断虹吸，将冰冻血浆袋和冷沉淀热和断离。

1.2 冷沉淀的质量冷沉淀质量受温度、时间以及其他各种因素影响。

从采血到制备过程中室温制备原料浆会使第忸因子含量偏低；说明温度对冷沉淀质量有影响。

经研究使用亚甲蓝光照法（MB）进行病毒灭活的冷沉淀与原血浆比较，忸因子和血管性血友病因子（Vwf）活性分别别下降30呀口11%纤维蛋白原浓度下降40%血液4C保存18 h 其忸因子含量与6C保存6~8 h相比下降23%冷沉淀制备时间对凝血因子含量有影响,FFP 一旦融化，忸因子活性随时间延长而明显降低,12 h 衰减41.17%,24 h 衰减42.82%,改良水浴融化虹吸法制备冷沉淀F忸含量明显高于Pool。

新鲜冰冻血浆VS冰冻血浆VS病毒灭活冰冻血浆在临床输血过程中，患者可能对血浆类型有所疑虑。

例如，有的患者看到旁边的病床输的是去病毒冰冻血浆，而自己输的是普通冰冻血浆，可能会感到不解。

特别是那些之前接受过新鲜冰冻血浆的患者，现在输的是普通冰冻血浆，可能会质疑：“难道血液不是越新鲜越好吗？”他们可能还注意到，心里因素导致患者认为输完普通冰冻血浆后的效果似乎没有之前输新鲜冰冻血浆时显著。

在当前各种病毒严重的背景下，患者还可能担心血浆中的病毒问题，因此更倾向于选择去病毒血浆。

有些时候临床医生也会区分不出这些血浆种类，为了解答这些疑虑，我们可以简要解析这几种血浆的区别。

根据血浆的来源和制备方法，我们可以将其分为新鲜冰冻血浆,病毒灭活新鲜冰冻血浆，冰冻血浆，去冷沉淀冰冻血浆，病毒灭活冰冻血浆。

怎么没有普通冰冻血浆呢？其实冰冻血浆就是普通冰冻血浆，只是习惯于叫法不一致。

制备流程新鲜冰冻血浆(fresh frozen plasma,FFP)是指采集后储存于冷藏环境中的全血在6~8小时内(根据保养液不同，ACD为6小时，CPD或CDPA-1为8小时)但不超过18小时内将血浆分离出并速冻成固态的成分血。

FFP保留了血浆的各种有效成分，含有全部凝血因子(包括不稳定的第V因子和第Ⅷ因子)、抗凝血酶和 ADAMTS13(一种血管性血友病因子裂解酶)。

FFP含各种凝血因子约0.7~1IU/ml,纤维蛋白原1~2mg/ml血浆蛋白≥50g/L。

简单概括是指在献血者献血后的6-8小时内，将血浆分离并迅速储存于-20℃以下的冷冻环境中的血液制剂，自血液采集之日起保存期为1年。

冰冻血浆(frozen plasma，FP)的来源主要有:①FFP 保存1 年后转化为FP,缺乏V、Ⅷ因子;②全血采集18小时后至全血有效期内分离的血浆，可能缺乏 V、Ⅷ因子。

FP 在≤-18℃条件下储存,自原采集日起储存4年。

简单概括有两种来源，一种是在献血者献血后在有效期内离心分离出的血浆并迅速冰冻呈固态的成分血液，另一种是新鲜冰冻血浆一年保存期满后的血浆。

新鲜冰冻血浆与普通冰冻血浆制备冷沉淀的质量分析目的通过对新鲜冰冻血浆、普通冰冻血浆制备冷沉淀Ⅷ因子质量测定，来确定普通冰冻血浆是否合适做冷沉淀原料浆。

方法随机抽取2009～2010年新鲜冰冻血浆、普通冰冻血浆各10份，制备冷沉淀后，利用凝血法，检测其中Ⅷ因子含量并计算FⅧ合格率。

结果新鲜冰冻血浆FⅧ含量为（0.94±0.13）IU/mL，普通冰冻血浆FⅧ含量为（0.42±0.16）IU/mL，两组差异有统计学意义。

结论冷沉淀制备需要用新鲜冰冻血浆。

标签：新鲜冰冻血浆；普通冰冻血浆；冷沉淀；FⅧ冷沉淀是用新鲜冰冻血浆（FFP）制备的成分血，主要用于血友病A，也可用于因大失血、肝功能障碍等凝血因子减少而导致的出血性疾病的辅助治疗[1]，目前本站制备冷沉淀用数字控制水浴式血浆融化箱制备。

笔者分别用新鲜冰冻血浆和普通冰冻血浆制备冷沉淀的情况，报道如下：1 材料与方法1.1 仪器与试剂正常参比血浆（凝血因子Ⅷ含量：1.04 IU/mL）、APTT试剂（凝血因子Ⅷ含量：1.04 IU/mL）、缺凝血因子Ⅷ、稀释液（凝血因子Ⅷ含量：1.04 IU/mL）、0.02 mol/L CaCl2溶液购自中国医学科学院中国协和医科大学输血研究所四川协和生物技术有限责任公司；仪器：全自动血液凝固分析装置清洗液购自德国Dade Behring Marburg公司；数字控制水浴式血浆融化箱CT-4T.6型，热合机SE-250型，全自动凝血仪CA-501型。

1.2 取样新鲜冰冻血浆，10袋，2010年本站体检合格的献血者，用四联袋静脉抽全血400 mL（200 mL）6 h内分离出血浆200 mL±10%，立即放入-50℃以下血浆速冻机速冻后，移至-30℃冰柜中备用。

普通冰冻血浆10袋，2009～2010年本站体检合格的献血者，用四联袋静脉抽全血400 mL（200mL）超过8 h分离出血浆200 mL±10%，放入-50℃以下血浆速冻冰箱速冻后，移至-30℃冰柜中备用。

冷沉淀成分
冷沉淀的成分主要包括丰富的凝血因子Ⅷ、纤维蛋白原、血管性血友病因子、纤维结合蛋白以及凝血因子XⅢ等。

具体来说，冷沉淀中因子Ⅷ的含量不少于80IU，纤维蛋白原含量不少于150mg。

冷沉淀是由新鲜冰冻血浆在0~4℃解冻，收集到的不溶冷沉淀物。

融化后应在6小时内输完，输速不低于200ml/h。

每袋冷沉淀是由400ml全血制成，体积为25ml±5ml/袋。

冷沉淀主要用于治疗缺乏凝血因子Ⅷ及纤维蛋白原而出血不止的患者或血友病患者，以及其他多种疾病，如肝功能衰竭和烧伤等。

它能够改善症状，但使用时应根据具体情况进行评估和调整。

新鲜冰冻血浆中的病毒灭活
吴克
【期刊名称】《《国外医学：预防．诊断．治疗用生物制品分册》》
【年(卷),期】1994(017)005
【摘要】血液制品具有传播病毒感染的危险性。

本文介绍了溶剂/去污剂法（SD 法）和亚甲蓝法（MB法）用于新鲜冰冻血浆（FFP）病毒灭活的研究现状及存在问题,探讨了今后的研究方向。

【总页数】4页(P212-215)
【作者】吴克
【作者单位】
【正文语种】中文
【中图分类】R392－33
【相关文献】
1.病毒灭活新鲜冰冻血浆制备前后凝血因子变化研究 [J], 刘芳
2.输注病毒灭活血浆、新鲜冰冻血浆和冷沉淀对新生儿凝血功能的影响分析 [J], 何秋贤;李锦荣;梁翠苗
3.白细胞过滤及病毒灭活新鲜冰冻血浆制备冷沉淀的质量分析 [J], 肖乐宇;肖声宇;任明臣;李建伟;史海琴;张鹏
4.病毒灭活血浆与新鲜冰冻血浆在血浆置换治疗中的效果分析 [J], 丁琪
5.滤除白细胞与病毒灭活对新鲜冰冻血浆凝血功能及制备冷沉淀的影响 [J], 李炜华
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病毒灭活血浆与新鲜冰冻血浆在血浆置换治疗中的效果分析作者：丁琪来源：《中国当代医药》2013年第14期[摘要] 目的探讨血浆置换中应用病毒灭活血浆与新鲜冰冻血浆的效果差异。

方法 2012年1～6月洛阳市26例进行血浆置换患者分别采用新鲜冰冻血浆及病毒灭活血浆治疗，并对两组治疗前后的血凝、蛋白等指标进行比较。

结果应用病毒灭活血浆组治疗后患者PT、APTT与治疗前比较差异有统计学意义（P < 0.05），两组治疗前后清蛋白检测差异无统计学意义（P > 0.05）。

结论大量应用血浆制品时，病毒灭活血浆安全性仍较高，但若患者有出血倾向则易选用新鲜冰冻血浆（FFP）做置换液，临床效果更佳。

[关键词] 病毒灭活血浆；新鲜冰冻血浆；血浆置换；效果[中图分类号] R457.1+4 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2013）05（b）-0062-02亚甲蓝光化学（MB）法灭活血浆中的病毒是一种最安全、有效的适合于临床用单袋血浆病毒灭活的方法，其灭活效果已被大量实验证实[1-2]，输注病毒灭活血浆成为当前国内外预防输注血浆制品传播传染病的有效措施，MB法病毒灭活血浆技术，已被推广应用于全国部分血站。

对于MB法病毒灭活血浆后，对于血浆内有效成分的影响国内各家血站报道不一，但是都一致显示MB法病毒灭活后的血浆有效成分有所改变[3-4]。

但是这些或多或少的改变是否影响临床应用效果，尤其是在血浆置换中大量应用血浆时是否有影响，国内目前尚无报道。

笔者对此情况进行了研究，具体如下：1 资料与方法1.1 一般资料2012年1～6月随机采用库存新鲜冰冻血浆。

无偿献血者的血液（400 mL/袋），于采集后6 h内分离制备的新鲜血浆（5000 g/min，10 min，4℃），按照操作规程制备成新鲜冰冻血浆（200 mL/袋）。

在净化间将血浆与一次性病毒灭活输血过滤器相连。

向血浆中加入亚甲蓝，混匀后使亚甲蓝的浓度为1 μg/mL，并在31800LX强度的光照下4℃摇动照射30 min，然后把经光照后的血浆通过一次性血浆灭活血袋的滤器滤除亚甲蓝，制备成病毒灭活血浆。

病毒灭活冰冻血浆与新鲜冰冻血浆临床应用价值对比分析目的：分析病毒灭活冰冻血浆与新鲜冰冻血浆临床应用价值。

方法：选取2015年1月至2015年6月之间于我院接受输血治疗的患者400例，将其随机均分为两组。

采用病毒灭活冰冻血浆治疗对照组患者，采用新鲜冰冻血浆治疗观察组患者，分别检测两种血浆的血浆蛋白值与凝血相，并观察患者的不良反应情况。

结果：两组的ALB与TP比较无显著差异，对照组的G、FIB高于观察组，A/G、TT、APTT与PT均低于观察组，差异显著，P＜0.05；输血治疗期间与治疗后，对照组的不良反应发生率为0，低于观察组，但是无显著差异，P>0.05。

结论：在治疗需要输血的患者时，输注病毒灭活冰冻血浆风险较低，不容易发生输血反应或传播疾病，但是新鲜冰冻血浆补充凝血因子的效果较好，可改善患者的凝血障碍，所以应结合患者的具体情况选择合适的血浆。

标签：病毒灭活冰冻血浆；新鲜冰冻血浆；应用价值；不良反应近几年，临床上开始广泛应用成分血进行输注，其中，在输注血浆时，主要是采用病毒灭活冰冻血浆（当地血站制作）治疗。

虽然这种血浆可以灭活血浆中的有害物质，如病毒等，使血浆输注导致的输血反应与有关风险降低，但是也会造成补充凝血因子的效果降低，从而导致患者无法获得理想的质量效果[1]。

笔者对比分析了病毒灭活冰冻血浆与新鲜冰冻血浆临床应用价值，现进行如下报道。

1 资料与方法1.1 临床资料选取2015年1月至2015年6月之间于我院接受输血治疗的400例患者作为研究对象，将其随机分为两组，每组各200例。

对照组包括男性121例，女性79例；年龄20～66岁，平均（42.5±3.8）岁。

观察组包括男性119例，女性81例；年龄21～65岁，平均（42.7±3.5）岁。

年龄、性别等一般资料在两组患者之间无显著差异，P>0.05，无统计学意义，可以进行对比。

本次研究排除存在无法耐受治疗者、存在认知障碍者、重要脏器严重功能不全者、心血管疾病患者。

亚甲蓝光化学法灭活血浆病毒对血浆成分的影响作者：王艳芳来源：《健康周刊》2018年第02期【摘要】血浆病毒灭活是指利用物理化学手段对血浆进行处理，使病毒蛋白的结构受到损害，这样血浆中的病毒就会失去活性，变得没有致病和繁殖能力。

临床输血是救治病患的必要手段，但是血浆在运输和存储的过程中有一定程度的病毒传播风险，尽管在采集鲜血时会对各个步骤进行严密控制，但是病毒感染血液的情况确实无法完全避免。

亚甲蓝光化学法是一种用于单袋血液病毒灭活的技术，是近几年研发的新型血浆病毒灭活技术，具有安全、高效的特点，不过也存在一些未解决的弊端，比如缺少灭活后血浆的各项质控指标。

为了强化亚甲蓝光化学法的作用，需要对其血浆病毒灭活对血浆成分的影响进行研究，通过临床分析，得出有效结论，在下一步的工作中科学的使用亚甲蓝光化学法。

【关键词】亚甲蓝光化学法血浆病毒灭活血浆成分一、亚甲蓝光化学法灭活血浆病毒研究的必要性亚甲蓝又称为亚甲基蓝和次甲蓝，是一种芳香杂环化合物，通常被用作化学领域，亚甲蓝的水溶液在氧化性环境中会变成蓝色，在氨水等还原剂中会变成无色状态，根据其不同的性状可进行不同的功用。

从化合物信息上看亚甲蓝又是一种解毒药，能将高铁还原型蛋白还原成血红蛋白。

在临床治疗中，血液输注是必要环节，它能通过各个采血机构传递来的血液帮助重症危急病患缓解痛苦。

但是由于各种检测方法、检测试剂等原因，无法做到血液处理的健全，因此，选择合适的病毒灭活方法非常重要。

经过十几年的发展，血浆病毒灭活技术有了很大进步，但是也存在不少争议。

一方面通过血浆病毒灭活有效控制各种病毒性细菌和艾滋病毒，另一方面该技术还在不断研发中，需要更精确的论证和更有力的证据说明它的有效性，所以亚甲蓝光化学法对血浆病毒灭活问题的处理还有待商榷和进步。

因此对其的研究具有十分重要的价值意义，笔者结合自己的工作经验，在临床实验的基础上对亚甲蓝光化学法灭活血浆病毒对血浆成分的影响进行了研究。

病毒灭活新鲜冰冻血浆制备前后凝血因子变化研究目的研究病毒灭活制备新鲜冰冻血浆前后凝血因子差异，为以后制备血浆制品奠定基础。

方法依据处理方式不同将某医院自2015年12月—2016年12月期间收治的42份新鲜冰冻血浆随机分为两组，即为参照组（n=21）与实验组（n=21），予以常规处理样本数据作为参照组，实行病毒灭活制备新鲜冰冻血浆样本作为实验组，对两组样本经不同干预之后组建数据差异予以分析。

结果实验组样本资料在凝血酶原时间（14.23±2.31）s、血浆纤维蛋白原（2.41±0.68）g/L、凝血酶时间（22.65±6.35）s等方面对比参照组数据，差异无统计学意义（P>0.05）。

实验组样本资料在凝血因子VII（85.64±10.21）%、活化部分凝血酶原时间（58.65±5.23）s等指标与参照组数据进行对比差异有统计学意义（P＜0.05）。

结论病毒灭活制备新鲜冰冻血浆虽然降低了凝血因子含量，但是也仍然超过国家标准，这种病毒灭活方式制备之后可以确保提升注射安全性，可以根据临床实际情况合理选择。

标签：病毒灭活新鲜冰冻血浆；凝血因子；研究[中圖分类号] R457 [文献标识码] A [文章编号] 1672-5654（2017）08（b）-0041-02Comparative Study on the Change of the Blood Coagulation Factor before and after the Preparation of the Fresh Frozen Plasma with Virus Inactivated LIU FangLaboratory Department，Heze Disease Control and Prevention Center，Heze，Shandong Province，274000 China[Abstracts] Objective This paper tries to study the changes of the blood coagulation factor before and after the preparation of the fresh frozen plasma，and set the foundation of the preparation of the plasma products. Methods 42 bags fresh frozen plasma treated in this hospital from December 2015 to December 2016 were divided into the control group and the experimental group，with 21 cases in each group according to different methods of disposing，the control group adopted conventional disposing method，and the experimental group adopted virus inactivated disposing method，then the data discrepancy after different interventions of the two groups was analyzed. Results The prothrombin time （14.23±2.31）s，plasma fibrinogen （2.41±0.68）g/L，thrombin time （22.65±6.35）s and other aspects of the experimental group have no significant difference with the control group （P>0.05）. The coagulation factor VII （85.64±10.21）%，activated partial thromboplastin time （58.65±5.23）s of the experimental group has statistically significant difference（P＜0.05）. Conclusion Using virus inactivated method to prepare the fresh frozen plasma can decrease the blood coagulation factor content，but still exceeds the national standards. This method can increase the injection safety and need to be chosen according to the clinical situation.[Key words] Fresh frozen plasma with virus inactivated；Blood coagulation factor；Study新鲜冰冻血浆拥有的凝血因素相对丰富，适用于缺少众多凝血因子引发的严重贫血疾病[1]，且也能用于凝血实验异常或者大量失血之后需要实行侵入性操作来避免出血。

中文摘要亚甲蓝病毒灭活血浆与新鲜冰冻血浆比较蛋白质组学研究目的：血浆占血液成分的50%，血浆输注是临床治疗的重要组成部分。

临床主要应用亚甲蓝病毒灭活血浆和新鲜冰冻血浆，以往涉及两种血浆的对比研究多注重于分析血浆凝血因子、血浆蛋白含量及相应临床生化指标的改变，但对这两种血浆中特异性差异蛋白的研究甚少。

本课题应用比较蛋白质组学的研究方法分析亚甲蓝病毒灭活血浆和新鲜冰冻血浆这两种血浆中特异性差异蛋白的改变，为临床医生对需要输血病人的治疗提供实验和理论依据，以减少血浆不合理输注和输注无效，特别是对一些特殊病例提供参考资料。

方法：1.对临床62例输注不同血浆患者的输血后凝血酶原时间和纤维蛋白原含量进行统计学分析。

2.三氯醋酸（TCA）/丙酮沉淀法去除血浆中高丰度白蛋白。

3.硫酸铵沉淀法去除血浆中高丰度白蛋白。

4.SDS-PAGE分离鉴定去除血浆中高丰度白蛋白后的血浆蛋白。

5.Clean-up去除血浆蛋白中干扰2DE的物质。

6.SDS-PAGE和2-DE验证clean-up是否有效去除血浆蛋白中干扰2DE的物质。

7.2-DE分离病毒灭活血浆和新鲜冰冻血浆的血浆蛋白。

8.采用质谱法分析鉴定两种血浆中显示差异明显的蛋白点。

9.重新收集两种不同的血浆18-74例，进行Western blot和ELISA检测验证其中两种差异明显的蛋白质含量。

结果：1.经统计分析临床中应用两种不同血浆后患者的化验数据，结果提示两种血浆的应用均具有一定的治疗效果，但新鲜冰冻血浆(FFP)组患者的凝血酶原时间(PT)值优于亚甲蓝病毒灭活血浆(MB-FP)组(P<0.05)，有统计学意义，而两种的纤维蛋白原含量差异(P>0.05)，无统计学意义。

2.三氯醋酸/丙酮沉淀法去除高丰度白蛋白比饱和硫酸铵沉淀法去除高丰度白蛋白的效果好。

3.两种方法去除血浆中高丰度白蛋白后的血浆，再应用clean-up方法对去除血浆中的干扰2DE的物质效果不明显。

影响冷沉淀质量的关键因素分析冷沉淀（cryoprecipitate）是新鲜冰冻血浆（FFP）在低温（约0~4℃）解冻后沉淀的白色絮状物，是FFP的部分凝血因子浓集制品，其中主要成分有：Ⅷ因子、纤维蛋白原以及血管性血友病因子，纤维结合蛋白、ⅩⅢ因子等。

冷沉淀因其制作工艺简单、价格低廉，临床应用广泛。

适用于先天性或获得性纤维蛋白原缺乏症及Ⅷ因子缺乏症患者，血管性血友病（vWD）、儿童及成年人轻型甲型血友病患者，DIC及大出血患者的替代治疗等。

因冷沉淀中的Ⅷ因子为不稳定凝血因子，受多种因素影响，所以每袋冷沉淀Ⅷ因子含量各不相同，通过查阅相关资料及跟踪验证，对影响冷沉淀质量的关键因素分析，现报告如下：1 冷沉淀的制备方法冷沉淀制品是以新鲜冰冻血浆为原料，近年来因多联采血袋的广泛应用，冷沉淀的制作工艺更加简单，安全性更强，各地中心血站均能生产。

目前国内冷沉淀的制备常用两种方法[1]：1.1 离心法取出待制备冷沉淀的新鲜冰冻血浆（FFP），置室温中约5分钟，待双联袋导管（连接管）变软后，将血浆置入2～6℃水浴箱中融化。

当血浆基本融化时，取出血浆，在2±2℃的环境下重离心，使冷沉淀凝血因子下沉于塑料袋底部。

将上清分入空袋内，血袋底部的沉淀内大约含有20～30ml血浆，即为冷沉淀凝血因子。

1.2 虹吸法取出待制备冷沉淀的新鲜冰冻血浆（FFP），置室温中约5分钟，待双联袋导管（连接管）变软后，将新鲜冰冻血浆袋置于2～6℃水浴箱中，另一空袋悬于水浴箱外且位置低于血浆袋，两袋形成一定的高度落差。

新鲜冰冻血浆融化时，上清血浆随时被虹吸入空袋中，冷沉淀遗留在新鲜冰冻血浆袋中。

在融化过程中控制水浴温度在2～6℃。

待新鲜冰冻血浆融化至约40～50ml时，即为冷沉淀凝血因子。

以上两种方法制备好的冷沉淀需迅速放入速冻机中冷冻，于-20℃以下冰箱中保存，保存期不超过一年，输注前于37℃水浴融化，并于4小时内输注。

2 冷沉淀的质量标准根据《全血及成分血质量要求》GB18469-2001规定，冷沉淀外观：肉眼观察30℃~37℃融化的冷沉淀凝血因子无纤维蛋白析出、无黄疸、无气泡、无重度乳糜。