3种粒线虫多重PCR检测方法
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扌直逖碌妇2021,47(3):160-164Plant Protection实验方法与技术Experimental Method&Technology利用多重PCR技术快速检测4种水稻病原细菌莫瑾12,王哲2,周慧平2,朱宏建】,朱水芳】,廖晓兰"(1湖南农业大学植物保护学院,长沙410128;2长沙海关技术中心,长沙410004)摘要对水稻中多种病原细菌的检测#吏用常规方法往往耗时耗力,而多重PCR可以更加高效地进行多种细菌的检测。
根据水稻细菌性谷枯病菌gyrB基因,水稻细菌性叶鞘褐腐病菌PfsI/R quoru-sensing位点以及水稻细菌性条斑病菌和水稻白叶枯病菌含铁细胞接受因子基因设计引物,建立4种水稻病菌的多重PCR检测方法,对方法进行特异性和灵敏度测试#并对采自不同地区的水稻样本进行检测。
结果显示,多重PCR方法能同步地快速检测出水稻细菌性谷枯病菌、水稻细菌性叶鞘褐腐病菌、水稻细菌性条斑病菌或水稻白叶枯病菌,检测灵敏度达到10?cfu/-L的菌液浓度,利用该方法对我国不同地区的58份水稻种子进行检测,其中17个样本检测出水稻细菌性条斑病菌或水稻白叶枯病菌,未检测到水稻细菌性谷枯病菌和水稻细菌性叶鞘褐腐病菌。
关键词多重PCR&水稻病原细菌&检测中图分类号:S435.111文献标识码:A DOI:10.16688/j.zwbh.2020205A multiplex PCR method for rapid detection of four rice pathogenic bacteriaMO Jin1'2,WANG Zhe2,ZHOU Huiping2,ZHU Hongjian1,ZHU Shuifang1,LIAO Xiaolan1(1.Colleee of Plan t Pro t ec&i on,Hunan Agricu/t u ral Univers i ty,Changsha410128,China;2.Technology Center of Changsha Customs,Changsha410004,China')Abstract Multiplex PCR is an efficient and simple method to detect a variety of pathogenic bacteria in rice at the same time.A multiplex PCR detection method was established for four rice pathogenic bacteria,and the primers were designed based on the gyrB gene of Burkholderia glumae,^he PfsI/R quorum sensing locus of Pseudomonas fuscovaginae and the iron-containing cell-receiving factor genes of Xanthomonas oryzae pv.oryzae and U.oryzae pv.oryzicola.The specf i city and sensitivity of the multiplex PCR method were validated,and rice samples from different regions were tested using this method.The results showed that the multiplex PCR method can fast and accura ely de ec=four rice pa hogenic bac eria.The de ec abili y of=his mehodreached103cfu/mLin=he bac erial solu ion.Among58rice samples from differen=regions,neiher B.glumae nor P.fuscovaginae was detected,while X.oryzae pv.oryzae or X.oryzae pv.oryzicola were positive in17samples.Keywords multiplexPCR;ricepathogenicbacteria;detection水稻细菌性谷枯病(病原菌:Burkholderia glu~ mae)(~22、水稻细菌性叶鞘褐腐病(病原菌:Pseudomonas fuscovaginae):3_4)、水稻白叶枯病(病原菌:Xnnthomonas oryzae pv.oryzae)和水稻细菌性条斑病(病原菌:X.oryzae pv.oryzicola)5^6等水稻细菌性病害,对水稻危害严重,导致严重减产&其中水稻细菌性谷枯病、水稻细菌性条斑病和水稻白叶枯病属于我国进境检疫性病害,水稻细菌收稿日期:2020-04-19修订日期:2020-05-13基金项目:海关总署科研项目(2O17IKO53)*通信作者E-mail:359437372@ 性叶鞘褐腐病是马来西亚等稻种进口国的进境检疫性病害&目前有多种关于这4种病原菌检测技术的报道。
多重PCR检测四种食源性病原弧菌食源性病原弧菌主要包括副溶血性弧菌、沙门氏菌、志贺氏菌和大肠杆菌等。
这些细菌均具有较强的致病性,容易引起食物中毒等食品安全问题。
为了有效检测这些病原弧菌,多重PCR技术应运而生。
多重PCR检测技术是一种能够同时检测多个目标基因的PCR方法。
在这个过程中,不同的引物对应着不同的目标基因,通过特定的PCR扩增剂进行扩增。
在PCR反应过程中,如果存在目标基因,则会产生相应的扩增产物,从而被检测出来。
对于四种食源性病原弧菌的多重PCR检测,首先需要针对每种细菌设计特定的引物。
这些引物需要能够特异性与各自的目标基因序列进行结合,从而实现对目标基因的特异性扩增。
接下来,需要选择适合的PCR扩增剂,确保PCR反应的顺利进行,并产生足够的扩增产物。
在完成引物设计和PCR扩增剂选择后,就可以开始进行多重PCR实验操作。
需要将四种细菌的DNA样本进行混合,以实现对四种病原弧菌的同时检测。
随后,在PCR仪中进行多重PCR反应,通过调整不同的反应条件,如温度、时间等,以确保每种目标基因的特异性扩增。
通过凝胶电泳等手段对扩增产物进行检测,观察是否存在目标基因的特异性扩增条带。
多重PCR检测四种食源性病原弧菌具有较高的特异性和灵敏度,能够实现对这四种细菌的同时检测。
该方法还具有快速、简便等优点,可以在短时间内对大量样本进行检测。
在应用方面,多重PCR检测技术可以应用于食品检验、疾病诊断等领域,为食品安全和临床诊断提供有效的技术支持。
本文介绍了多重PCR检测四种食源性病原弧菌的方法。
该方法具有高特异性、高灵敏度和快速简便等优点,为食品安全和临床诊断等领域提供了有效的技术支持。
然而,尽管该方法具有许多优点,但仍存在一定的局限性,如可能受到实验条件、引物设计等因素的影响而出现假阳性或假阴性结果。
因此,在应用过程中需要结合其他检测方法进行综合判断。
未来研究方向应包括优化多重PCR反应条件、提高引物设计的准确性以及发掘更多新型的多重PCR技术,从而进一步提高检测的准确性和灵敏度。
周登攀,郝小军,向本春.樱桃病毒PNRSV、CGRMV、PDV多重RT-PCR检测方法的建立与应用[J].江苏农业科学,2018,46(11):40-43.doi:10.15889/j.issn.1002-1302.2018.11.009樱桃病毒PNRSV、CGRMV、PDV多重RT-PCR检测方法的建立与应用周登攀,郝小军,向本春(石河子大学农学院/新疆绿洲农业病虫害治理与植保资源利用自治区普通高校重点实验室,新疆石河子832003) 摘要:采用多重RT-PCR方法,建立可同时检测李属坏死环斑病毒(Prunusnecroticringspotvirus,简称PNRSV)、李矮缩病毒(Prunedwarfvirus,简称PDV)、樱桃绿环斑驳病毒(Cherrygreenringmottlevirus,简称CGRMV)的方法。
根据GenBank中PNRSV、PDV、CGRMV的保守基因序列设计特异性引物,并对多重RT-PCR的退火温度、循环数、灵敏度、特异性、dNTPs浓度等因素进行优化,建立能同时检测3种樱桃病毒的多重RT-PCR方法。
该方法能同时扩增出PNRSV(675bp)、CGRMV(363bp)、PDV(304bp)特异片段,扩增产物大小与预期相符。
测序结果表明,3种病毒的序列与相应参考序列相似性达90%以上。
多重RT-PCR反应条件优化结果显示,在退火温度为58℃、35个循环条件下,效果均较为理想;dNTP的浓度对试验结果影响不大,最适的浓度为0.6mmol/L;灵敏度分析结果显示,最低检测浓度为59.7ng/μL。
应用该方法对新疆石河子地区的樱桃样本进行检测,结果显示,该方法可以准确、快速、灵敏地同时检测单一或复合侵染的3种樱桃病毒。
关键词:樱桃绿环斑驳病毒;李属坏死环斑病毒;李矮缩病毒;多重RT-PCR;病原检测;大样品快速检测 中图分类号:S436.629 文献标志码:A 文章编号:1002-1302(2018)11-0040-04收稿日期:2017-01-13基金项目:兵团农作物病害安全防控创新团队项目(编号:0205-KC0017)。
3种粒线虫多重PCR检测方法3种粒线虫多重PCR检测方法剪股颖粒线虫[Anguina agrostis(Steinbuch,1799)Filipiev,1936]、小麦粒线虫[Anguina tritici(Steinbuch,1799)Filipjev,1936]和维氏粒线虫[Anguina wevelli(Van den Berg,1985)Siddiqi,2000]都是重要的植物病原线虫,它们在成熟种子和虫瘿中的虫态通常是幼虫,而这3种线虫的幼虫形态非常相似,难以根据其特征对它们进行快速准确的种类鉴定.本研究根据这3种线虫的rDNA-ITS区域序列,分别设计筛选了特异性引物AgrFl/AgrRl、TriFl/TriRl、WevFl/WevRl,构建了这3种线虫单条幼虫多重PCR检测体系,获得3个大小差异明显的片段,表明这些引物设计合理,适合这3种线虫的快速准确检测.作者:马以桂王金成谢辉周春娜杜宇黄国明李芳荣 MA Yi-gui WANG Jin-cheng XIE Hui ZHOU Chen-na DU Yu HUANG Guo-ming LI Fang-rong 作者单位:马以桂,MA Yi-gui(华南农业大学,广州,510642;天津出入境检验检疫局,天津,300456)王金成,黄国明,WANG Jin-cheng,HUANG Guo-ming(天津出入境检验检疫局,天津,300456)谢辉,周春娜,XIE Hui,ZHOU Chen-na(华南农业大学,广州,510642) 杜宇,DU Yu(云南出入境检验检疫局,昆明,650228)李芳荣,LI Fang-rong(深圳出入境检验检疫局,深圳,518010)刊名:植物病理学报ISTIC PKU英文刊名:ACTA PHYTOPATHOLOGICA SINICA 年,卷(期):2006 36(6) 分类号:S4 关键词:剪股颖粒线虫小麦粒线虫维氏粒线虫 DNA 多重PCR。