纤维素含量的测定
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纤维素的测定 ------比色法之青柳念文创作
纤维素由葡萄糖基组成,它是组成植物细胞壁的基本成分.其含量的多少关系到植物的机械组织是否发达,作物抗倒伏、抗病虫害的才能是否较强,而且影响到食粮作物、纤维作物和蔬菜作物等的产量和品质.
在各种食粮中纤维素的含量各不相同,与籽粒皮层厚薄成正比.同种食粮中,原粮纤维素
维素含量最高,加工粗加工精度越高,纤维素含呈越少,如小麦尺度粉约O.7%.稻谷约9.0%,糙米约1.0%,白米约0 4%.因此,根据纤维素的含量的测定,可以辨别籽粒皮层的厚薄,食粮加工精度高低和营养价值评估.
纤维素的测定方法有酸碱醇醚法、酸性洗涤剂法、碘量法及比色法.第一个是国标法,但比较繁琐,后者操纵比较简单.
一、方法原理
纤维素是由葡萄糖基组成的多糖,在酸性条件下加热使其水解成葡萄糖.然后在浓硫酸作用下,使单糖脱水生成糠醛类化合物.操纵蒽酮试剂与糠醛类化合物的蓝绿色反应即可停止比色测定.
二、仪器和试剂
1.主要仪器 恒温水浴、冰罐、电炉、玻璃坩埚、漏斗、定时钟、分光光度计等.
2.试 剂 60% H2SO4溶液、浓H2SO4.
2%蒽酮试剂:2g蒽酮溶解于100rnl乙酸乙酯中,贮置于棕色试剂瓶中.
纤维素尺度液:准确称取100mg纯纤维素,放入100Inl量瓶中,将量瓶放入冰浴中,然后加冷的60%H2SO4 60— 70ml,在冷的条件下消化处理20—30min,然后用60%H2SO4稀释至刻度,摇匀.吸取此液5.0ml放入另外一50ml量瓶中,将量瓶放入冰浴中,加蒸馏水稀释刻度,则每毫升含100μg纤维素.
三、操纵步调
1.绘制纤维素尺度曲线
(1)取6支小试管,分别放入0、 0.40、0.80、1.20、1.60、2.00ml纤维素尺度液.然后分别加入2.00、1.60、1.20、0.80、 0.40、0ml蒸馏,摇匀.则每管依次含纤维素0、40、 80、120、160、200μg.
(2)向每管加0.5ml% 蒽酮试剂,再沿管壁加5.0ml浓H2SO4,塞上塞子,微微摇动,促使乙酸乙酯水解,当管内出现蒽酮絮状物时,再激烈摇动促进蒽酮溶解,然后当即放入沸水浴中加热10min ,取出冷却.
(3)在分光光度计上620urn波长下比色,测出各管消光值 .
(4)以所测得的消光值为纵坐标,以纤维素含量为横坐标,绘制纤维素尺度曲线.
2.样品的测定
(1)准确称取风干的样品100mg,放入100rnl量瓶中,将量瓶放入冰浴中,加冷的60%H2SO4.60—70ml,在冷的条件下消化处理半小时,然后用60%H2SO4.稀释至刻度,摇匀,用玻璃坩埚漏斗过滤.
(2)吸取上述滤液5.0ml,放入5ml量瓶中,将量瓶置于冰浴中,加蒸馏水释至刻度,摇匀.
(3)吸取上液2.0ml,加0.5ml 2% 蒽酮试剂,再沿管壁加5.0ml浓 H2SO4 ,盖上塞子,以后操纵同纤维素尺度液,测出样品在620urn波长下的消光值.
四、成果计算
以样品测定消光值,在尺度曲线上查出相应的纤维素含量,然后均按下式计算样品中纤维素含量:
X=A*10-6*C*100
B
式 中 :A——在尺度曲线上查得的纤维素含量值(μg) ;
B—— 样品重(g)
10-6—— 将μg换算成g的系数
C—— 样品稀释倍数
X——样品中纤维素含量(%)
五、说明1.此法需用纯纤维素样品作尺度曲线.
2.纤维素加60%H2SO4时,一定要在冰浴条件下停止.
参考文献:作物品质分析 农业出版社 主编:牛森