PCR实验室报批细节、注意事项、常见问题问答

pcr 操作中最应该注意的事项PCR（Polymerase Chain Reaction）是一种常用的分子生物学技术，用于扩增DNA片段。

在进行PCR操作时，有一些非常重要的事项需要特别注意，以确保实验的准确性和可靠性。

以下是在PCR操作中最应该注意的事项：1. 实验室操作规范：在进行PCR操作之前，需要做好实验室操作规范的准备工作，包括戴好实验手套、穿好实验服、清洁操作台面等。

避免在实验室中进食、饮水或使用手机等。

2. 检查实验仪器和试剂：在开始PCR实验之前，需要确保PCR仪器的正常运转和试剂的完整性。

检查PCR仪器的温控系统、离心机的转速、试剂的保质期等，确保实验条件的准确性。

3. 建立阳性和阴性对照：在每次PCR实验中，都要包括阳性对照和阴性对照，以验证实验的准确性。

阳性对照应包括已知的阳性样品，而阴性对照则应该是未添加DNA模板的反应混合物。

4. 采用单独的PCR实验室：为了避免PCR实验中的污染，最好在专门的PCR实验室中进行实验，避免与其他实验室中的DNA样品混合。

5. 严格控制实验条件：在PCR实验中，需要严格控制实验条件，包括温度、时间、试剂比例等。

确保PCR反应体系的均匀混合、温度梯度的准确性和反应时间的精确控制。

6. 避免污染：PCR实验非常容易受到外源DNA的污染，因此需要避免在实验室中的DNA样品和PCR产物的交叉污染。

实验中应该使用滤器枪头、一次性试剂盒等措施，避免污染的发生。

7. 定期维护PCR仪器：PCR仪器的维护对实验的准确性非常重要。

定期清洁PCR仪器的加热盖、检查温度控制系统的准确性、更换磁力搅拌器的磁子等，确保PCR仪器的正常运转。

8. 标记实验样品：在进行PCR实验时，需要对实验样品进行正确的标记，包括样品的编号、实验日期、PCR程序名称等。

避免实验样品的混淆和实验结果的不准确。

9. 注意PCR产物的保存和处理：PCR产物的保存和处理对实验结果的可靠性有着重要的影响。

精品文档报批细节1、技术档案：技术人员简历表、培训档案、要求有实质性文件如每人的学历证书、上岗证、科研成果（课题）、技术文章、获奖证书等的复印件2、仪器档案：实验室所有仪器的购买、使用、校正、放置地点、出厂编号、说明书复印件等实验室所有仪器维护校正记录如：加样器、温度计、温湿度计需出具计量局校正报告文件（可每种只校正一套作为标准）。

扩增仪需有仪器厂家专业技术人员维护校正报告，和校正后的参数。

加样器的出厂编号、使用时间、校正记录。

5700维护后验证记录—用同一公司或校准试剂或用自制质控血清并记录数值3、其他细节:垃圾处理：按生物污染性制品，交医院统一处理。

仪器简单操作流程标记笔、枪头盒等一些小物品都要标明分区。

仪器的申请、采购、使用、验证程序样本采集（针对临床医护人员）、运输、收集程序样品的唯一编号原则—应区分开不同天、不同种类的标本标本的保存程序—包括处理前、刚处理后、报告发放后的原始标本（原则上至少保留一周）应有专人负责。

检测结果的保存、备份记录、质控记录保存，除电脑记录外应有相应的手抄记录（类似于基因日检测统计表类型的）。

抱怨记录—应有时间、事件（项目）、接待人、处理方法、处理结果、处理人签字确认.精品文档注意事项1、回答任何问题都应与自己写的SOP文件相一致尮写你所做的,做你所写的.2、SOP文件不能写的太虚,无法做到的东西不要写,比如公司版的SOP文件里的加样器的校准一般实验室就做不到.模棱两可也不要写,比如消毒时间一到两小时不能这样写,多少就是多少.3、处理标本要在生物安全柜内,而加样则在柜外.4、各区门口要贴有各区的工作制度,限入标志.还要准备两个登记本,一个来记录紫外消毒,一个来记录工作人员出入.区内还要有一个工作记录本,用来记录各区每天的工作内容,便于监测每天的工作全过程.5、每把枪的用途要清楚,不能弄乱.比如稀释阳模的枪和处理标本的枪不可混用.6、普通离心机处理分泌物标本时应在离心后静置20分钟才能开盖.(许斌这样认为)7、所有仪器、设备都要有档案卡.8、所有的清洁消毒要在实验结束后马上进行,尤其是仪器、设备.像扩增仪，每天都要清洁，做完的反应管决对不能留在样品槽内。

PCR实验操作注意事项及PCR实验室试剂配制要求PCR实验操作注意事项如果操作不规范，样品间的交叉污染是很容易出现的，从而产生假阳性问题。

因此，不仅要在进行扩增反应时要谨慎对待，在样品的收集、抽提和扩增的所有环节都应谨慎操作，一般需做到以下几点：1、检测人员必须通过国家临检中心业务培训并取得合格证书;PCR实验室内工作人员必须参加由国家卫生部或各省临床检验中心举办的临床基因扩增培训班，并持证上岗。

PCR实验室通过验收，实验室至少必须应有两个以上持有“临床基因检测上岗证”。

2、戴一次性手套，若不小心溅上反应液，应立即更换手套，避免反应液飞溅，若不小心溅到手套或桌面上，应立刻更换手套并用稀酸擦拭桌面;3、检测设备必须符合标准PCR荧光实验室设置要求荧光定量PCR仪+实时荧光定量试剂+通用电脑+自动分析软件，构成PCR-DNA/RNA实时荧光定量检测系统。

4、使用一次性吸头，严禁与PCR产物分析室的吸头混用，吸头不要长时间暴露于空气中，避免空气中气溶胶的污染;5、操作多份样品时，制备反应混合液，先将dNTP、缓冲液、引物和酶混合好，然后再分装，这样既可以减少操作次数，避免污染，又可以增加反应的度；6、加入反应模板，加入后盖紧反应管;7、操作时设立空白对照和阴阳性对照，既可验证PCR反应的可靠性，又可以协助判断扩增系统的可信性;8、由于实际操作时加样器很容易受产物气溶胶或标本DNA的污染，所以操作者好使用高压处理过的或可替换的加样器。

假如没有这种特殊的加样器，至少在PCR操作过程中加样器应该专用，严禁交叉使用，尤其是PCR产物分析所用加样器不能拿到其它两个相邻区域使用;9、重复实验，验证结果，慎下结论。

PCR实验室试剂配制要求：PCR扩增所需要的试剂均应在装有紫外灯的负压工作台或超净工作台进行配制和分装，所有的吸头和加样器都需固定放于其中，吸头不能用来吸取扩增后的DNA和其它来源DNA：1、PCR用水应为高压的双蒸水;2、引物和d-NTP用高压的双蒸水在无PCR扩增产物区配制;3、引物和d-NTP应分装储存，分装时应标明分装时间，以备发生污染时及时查找原因和追溯污染源头;。

pcr实验操作流程及注意事项
哎呀呀，PCR 实验可真是个精细活儿！要想把这个实验做好，操作流程和注意事项可得牢记在心呀！
首先，准备工作得一丝不苟。

各种试剂、仪器都要准备齐全，就像战士上战场前要检查好装备一样。

然后，样品处理可不能马虎哟！得小心翼翼地提取样本中的核酸，这一步就如同在沙堆里寻找金子，需要耐心和细心。

接着，进行PCR 反应的设置，试剂的添加量要精准无误，温度和时间的设置更是关键。

嘿，这可不像随意做菜加盐，多一点少一点都不行呀！
反应过程中，要密切关注仪器的运行状态，稍有异常就得赶紧处理，千万别等到出了大问题才着急。

扩增完成后，产物的检测也不能掉以轻心哇！要确保检测方法准确可靠，不然前面的努力不都白费啦！
再说说注意事项。

实验环境得保持清洁无菌，不然杂菌会捣乱的呀！操作过程中要防止交叉污染，这就好比不能让不同的河流混在一起。

还有，试剂的保存要严格按照要求来，过期的试剂可不能用，就像过期的食品不能吃一样。

实验人员自身也要做好防护，保护自己的同时也是保证实验的准确性。

哇塞，PCR 实验可不简单，但只要严格按照流程，注意每一个细
节，就能取得成功，为科学研究贡献有价值的结果呀！
总之啊，PCR 实验操作流程和注意事项一定要牢记，这可不是闹着玩的，要以严谨的态度对待，才能得出可靠的实验结果哟！。

PCR检测常见问题与解决途径PCR 检测常见问题与解决途径利用 PCR 方法检测转基因成分时，经常出现假阳性、假阴性、非特异性扩增和涂抹带。

尤其是假阳性和假阴性可使检测结果得出错误结论，有时可造成严重后果。

为了提高转基因检测的准确性和可靠性，PCR 检测应尽量减少假阳性、假阴性、非特异性扩增和涂抹带现象的发生。

一个好的PCR 方法不但要求特异性好、灵敏度高、还要求具有高的可重复性、重现性、鲁棒性，尽量减少假阳性、假阴性和非特异性扩增。

本文对 PCR 检测中出现的假阳性、假阴性、非特异性扩增和涂抹带的原因及其解决方法予以综述。

一、假阳性：（一）假阳性现象假阳性是指检测阴性材料得到阳性结果。

如果一次实验中的几个阴性对照中出现一个或几个阳性结果，提示本次实验中其它标本的检测结果可能有假阳性。

实验中设立的阴性对照可提示有无假阳性结果出现。

（二）造成假阳性的原因1.样品间交叉污染：样本污染主要有收集样本的容器被污染，或样本放置时，由于密封不严溢于容器外，或容器外粘有样本而造成相互间交叉污染；样本核酸模板在提取过程中，由于吸样枪污染导致标本间污染；2.PCR 试剂的污染：主要是由于在 PCR 试剂配制过程中，由于加样枪、容器、双蒸水及其它溶液被 PCR 核酸模板污染。

3. PCR 扩增产物污染：这是 PCR 贝量大 (一般为 1013 拷贝 /ml)，远远高于物污染，就可形成假阳性。

反应中最主要最常见的污染问题。

因为PCRPCR 检测数个拷贝的极限，所以极微量的产物拷PCR 产4. 气溶胶污染：在空气与液体面摩擦时就可形成气溶胶，在操作时比较剧烈地摇动反应管，开盖时、吸样时及污染进样枪的反复吸样都可形成气溶胶而污染。

据计算一个气溶胶颗粒可含 48000 拷贝，因而由其造成的污染是一个值得特别重视的问题。

5.实验室中克隆质粒的污染：由于克隆质粒在单位容积内含量相当高，另外在纯化过程中需用较多的用具及试剂，而且在活细胞内的质粒，由于活细胞的生长繁殖的简便性及具有很强的生命力，其污染可能性也很大。

pcr操作中最应该注意的事项PCR操作是分子生物学领域中常用的一种技术手段，可以对DNA进行扩增，是基因检测、基因工程等领域的重要工具。

然而，PCR操作需要严格的操作要求和技术技巧，以确保实验结果的准确性和可靠性。

本文将从PCR操作中最应该注意的事项展开讨论，包括实验前的准备工作、PCR反应的操作过程、结果分析及实验后的清洁工作等，希望对读者有所帮助。

一、实验前的准备工作1.1仪器与试剂准备在进行PCR反应之前，首先要检查PCR仪、恒温水浴、移液器、离心机等设备是否处于正常工作状态。

另外，准备好所需的试剂，包括DNA模板、引物、dNTPs、Taq酶和缓冲液等。

要确保试剂的新鲜性和质量，避免使用过期或受污染的试剂。

1.2实验操作区域的准备PCR反应对环境的洁净度要求较高，实验室操作台面、仪器表面和玻璃器皿等要进行彻底的清洁和消毒。

同时，保持实验室的通风良好，避免污染物进入实验区域。

1.3携带物品的准备进行PCR反应时，实验人员应穿戴实验服和手套，并保持良好的实验卫生习惯。

另外，要准备好一次性使用的移液器垫、废弃物箱等，以便及时清理实验过程中产生的废弃物。

二、PCR反应的操作过程2.1反应管的配制在进行PCR反应之前，需要按照实验方案准确计量引物、dNTPs、DNA模板、Taq酶和缓冲液等反应组分，将它们依次加入到反应管中，并轻轻摇匀，避免气泡的产生。

此外，要在反应管上标记好样品编号和反应组分，以免混淆。

2.2反应体系的设定PCR反应的反应体系包括反应液的配制、PCR管中样品的加入以及PCR管的密封等步骤。

在这些步骤中，要严格控制反应体系的配制，并确保各项反应组分加入的准确性和稳定性。

2.3 PCR反应条件的设定PCR反应的条件包括反应温度、反应时间、循环次数等，这些条件的设定对PCR扩增效果具有显著影响。

在进行PCR反应时，要根据引物的Tm值和DNA模板的特性，合理设置温度梯度和扩增循环次数，以获得理想的PCR产物。

pcr扩增实验注意事项-回复PCR扩增实验注意事项PCR（聚合酶链式反应）是一种在分子生物学研究中广泛应用的技术，可快速扩增特定DNA片段。

然而，进行PCR实验时需要注意一些关键事项，以确保实验的准确性和可重复性。

本文将一步一步回答关于PCR扩增实验的注意事项。

一、准备工作在进行PCR实验之前，确保已经做好以下准备工作：1. 搭建无菌工作环境：将实验室工作台面清洁消毒，并使用紫外灯照射，以消除可能存在的DNA污染。

2. 准备所需试剂：确保准备充足的PCR反应缓冲液、核酸模板、引物、dNTPs、MgCl2和聚合酶。

3. 校准PCR仪：使用一个已知序列的DNA模板进行校准，确保PCR仪能够准确地控制温度。

4. 分装试剂：根据实验计划，适当分装PCR反应液和试剂，以减少可能的污染和误操作。

二、引物设计PCR的成功与否与引物的选择和设计密切相关。

在设计引物时，请注意以下事项：1. 引物长度：引物通常应在18-25个碱基对之间，过短的引物可能导致非特异性扩增，而过长的引物则可能导致扩增效率降低。

2. 引物的碱基组成：尽量避免引物中含有多个连续的相同碱基，因为这可能导致引物间的结合不稳定，从而影响PCR反应的效果。

3. 特异性：确保引物与目标DNA序列的互补区域具有足够的特异性，以避免非特异性扩增。

三、试剂与材料的处理在PCR实验中，以下几点是需要注意的：1. 使用质优的试剂和材料：确保所使用的试剂和材料质量优良，避免使用过期或受污染的试剂，以免对实验结果产生负面影响。

2. 避免污染：使用无菌技术进行试剂和材料的处理，避免外源性DNA的污染。

同时避免重复使用塑料制品，以减少可能的交叉污染。

3. 根据需要冷藏保存：将PCR试剂储存在适当的温度下（通常为-20），以保持试剂的稳定性。

四、PCR反应条件设置PCR反应条件的设置对实验结果至关重要，以下几点需要注意：1. 反应体系的优化：根据实验需求，优化PCR反应的组分浓度，如引物浓度、dNTPs浓度和MgCl2浓度。

PCR操作有哪些注意事项PCR（聚合酶链式反应）是在分子生物学和遗传工程中常用的一种技术，可以扩增DNA片段。

虽然PCR操作看似简单，但是在实验过程中仍然需要注意一些重要的事项，以确保实验结果的准确性和可靠性。

1. 实验前准备在进行PCR实验之前，有几个准备工作需要提前完成： - 准备好所需的实验物质，包括DNA模板、引物、聚合酶、缓冲液等。

确保这些实验物质的质量良好，没有污染。

- 根据实验需要选择合适的PCR仪，调试好仪器参数，确保温度控制精确可靠。

- 设计合适的引物序列，确保引物能够特异性地结合到目标DNA序列上。

2. 实验操作在进行PCR操作时，需要注意以下几个关键环节： - 保持实验环境的清洁和无菌。

实验过程中，使用无菌技术操作，避免污染。

- 遵循好实验的基本原则，比如每个样本使用单独的PCR管，避免交叉污染。

- 在开始PCR反应之前，进行负对照实验，即只使用纯水或者没有模板DNA的样品作为对照，确保实验没有污染。

- 严格按照实验方案中的步骤进行操作，尽量避免实验操作的变异。

- 注意各步骤中的温度和时间控制，以确保PCR反应的有效性和效率。

3. 实验后处理实验结束后，还需要注意以下事项： - 将PCR产物进行凝胶电泳分析，验证反应结果。

如果需要定量PCR产物，可以使用荧光定量PCR技术进行分析。

- 将实验用具进行严格的清洁和消毒处理，避免实验交叉污染。

- 正确保存PCR产物，避免DNA降解。

通常可以将PCR产物保存在低温下，比如-20°C冷冻保存或制备浓缩保存。

4. 安全注意事项在进行PCR实验时，还需要注意一些实验安全措施： - 使用实验室必需的个人防护装备，比如实验手套、防护眼镜等。

- 遵循实验室中的安全操作规程，防止发生事故或暴露于有害化学物质。

- 合理储存和处理实验废液和废弃物，以保护环境和他人的安全。

综上所述，PCR操作需要注意实验前的准备、实验操作的细节、实验后的处理以及安全事项。

报批细节1.技巧档案：技巧人员简历表.培训档案.请求有本质性文件如每人的学历证书.上岗证.科研成果（课题）.技巧文章.获奖证书等的复印件2.仪器档案：试验室所有仪器的购置.应用.校订.放置地点.出厂编号.解释书复印件等试验室所有仪器保护校订记载如：加样器.温度计.温湿度计需出具计量局校订陈述文件（可每种只校订一套作为尺度）.扩增仪需有仪器厂家专业技巧人员保护校订陈述,和校订后的参数.加样器的出厂编号.应用时光.校订记载.5700保护后验证记载—用同一公司或校准试剂或用克己质控血清并记载数值3.其他细节:垃圾处理：按生物污染性成品,交病院同一处理.仪器简略操纵流程标识表记标帜笔.枪头盒等一些小物品都要标明分区.仪器的申请.倾销.应用.验证程序样本收集（针对临床医护人员）.运输.收集程序样品的独一编号原则—应区离开不合天.不合种类的标本标本的保管程序—包含处理前.刚处理后.陈述发放后的原始标本（原则上至少保存一周）应有专人负责.检测成果的保管.备份记载.质控记载保管,除电脑记载外应有响应的手抄记载（相似于基因日检测统计表类型的）.抱怨记载—应有时光.事宜（项目）.招待人.处理办法.处理成果.处理人签字确认注意事项1.答复任何问题都应与本身写的SOP文件相一致."写你所做的,做你所写的".2.SOP文件不克不及写的太虚,无法做到的器械不要写,比方公司版的SOP文件里的加样器的校准一般试验室就做不到.含糊其词也不要写,比方"消毒时光一到两小时"不克不及如许写,若干就是若干.3.处理标本要在生物安然柜内,而加样则在柜外.4.各区门口要贴有各区的工作轨制,限入标记.还要预备两个登记本,一个来记载紫外消毒,一个来记载工作人员出入.区内还要有一个工作记载本,用来记载各区天天的工作内容,便于监测天天的工作全进程.5.每把枪的用处要清晰,不克不及弄乱.比方稀释阳模的枪和处理标本的枪不成混用.6.通俗离心计心情处理排泄物标本时应在离心后静置20分钟才干开盖.(许斌如许以为)7.所有仪器.装备都要有档案卡.8.所有的干净消毒要在试验停滞后立时进行,尤其是仪器.装备.像扩增仪,天天都要干净,做完的反响管决对不克不及留在样品槽内.9.各区的拖把.抹布不得混用,标识表记标帜清晰.10.生物防护意识要强,手套要随时改换.生物防护安然的包管要从三个方面:轨制.硬件.意识.11.爆管若何处理:立刻停滞试验,水浴里的水要倒失落,冲洗.所有可能污染的地方要用消毒液擦洗,紫外照耀,通风排风.12.各区应有日常工作核查表,做为天天工作记载的填补.13.各区要有泡有消毒液的生物污物桶,用来处理生物垃圾.14.验收组带来的标本要按日常平凡看待临床标本一样处理,要有吸收记载,成果登记等.15.谢绝德律风或代领等非正常方法发放陈述单.16.存放标本的冰箱要上锁,钥匙及电脑材料的暗码要由本科室人员专人保管.17.陈述单上要注明试剂的检测下限,不克不及写成参考规模.除了有操纵者,还要有核校者,且两者姓名除了电子打印还要用手签.定量成果不克不及有阴阳性提醒,只能报数值.18.SOP文件中PE5700的温湿度请求应当为温度15－30℃.湿度为< 80％.19.SOP中病院申报试验室留意事项专家组不雅赏试验室答复的问题1,“你们的冰箱的铁链我可以从底下抽上来,试验室能做好保密性吗？可以的,你们能做到就行,留意保密！2,试验室须要设置装备摆设冷冻离心计心情,生物安然柜,假如做HCV时,留意从新添置新试验室.3,生物防护中是否有锐器的防护留意事项？4,试验室的温湿度计的放置地位？最好放在试验室内.5,试验室中若何做好离心管克制物的检测？而非爆管.裂管的检测！6,在做HCV时划定从抽血化验到送达试验室要几个小时要有明划定！3小时阁下！7,溶血标本有何具体的断定尺度？脂血呢？试验室末次会议的提问1,你们单位（达安）试剂,当我们新颖标本做HBV时,提取中40微升+40微升提取液处理,待放置留宿后,第二天加样时,有的标本特难取样,有何处理办法？2,试验室中垃圾你们若何处理的？3,试验室中阴性尺度检测后变成阳性你怎么办？（我们试验室一共有三管阴性阴性对比,第一个阴性检测管是试剂什么都不加,直接上机,第二个阴性检测管是试剂中参加在试验开端时打开盖的离心管带有蒸馏水的,第三个阴性检测管是与试验一路提取的阴性血清.）4,试验中假如阳性质控,阳性梯度,标本呈阴性请分离解释？5,试验室必须设置装备摆设生物安然柜,高速离心计心情！临床基因扩增磨练试验室技巧验收现场问卷（面试和/或面试）一. 现有一个患者向你提出：“我在你们病院检测HBV DNA 为阳性,但在另一家病院检测为阴性,你们病院是怎么做的检测？”,此时,你怎么办？（该题主如果考试验室人员是否知道并遵照所制订的抱怨处理程序）二．现有一个临床大夫拿着几张HBV DNA定量PCR磨练陈述单找到PCR试验室,说：“你们的PCR成果到底准不准,我这个病人刚开端检测,HBV DNA是5×107拷贝数/ml,用了拉米呋啶治疗后二周,再检测成果为3×107拷贝数/ml,降了许多,但再过二周检测,又变成了6×107拷贝数/ml,升高许多,这到底是怎么回事？”,假如这个大夫刚好问的是你,你怎么办？并若何解释其提出的问题？(该题除了考试验室人员是否知道并遵照所制订的抱怨处理程序外,还请求其对特定PCR磨练的批间变异有充分的熟悉)答复思绪：这两题分离对应患者和临床大夫提出的抱怨.考点为你是否按照所制订的程序来处理：无论是患者照样大夫提出抱怨,我们都应当“按照”程序先记载抱怨人姓名.抱怨内容等,然后等问题解决跋文录处理成果等,最跋文录反馈看法等.留意：一般问题中消失“此时,你怎么办？”,其考察的重点均为“情势”而非“内容”.所以标题中无论病人抱怨的是办事立场不好照样成果陈述不准,大夫抱怨的是检测成果和临床诊断不符照样陈述发放不实时,答复的偏向都应当是：“我们招待他们后,先在登记表上记载抱怨的什么什么相干信息,做响应处理,解决跋文录处理成果,最后填反馈表,归档总结,跟着今后改良等等等等”.对各类具体问题的处理就按照现实情形来答复就行.假如标题中消失要你具体“解释某某提出的问题”时,这时是具体考察某一“内容细节”了.第二题中看你对PCR磨练的批间变异有否充分的熟悉：一般PCR检测试剂盒消失着必定的批间甚至批内差别,并且PCR检测前处理也消失着必定的误差,剖析软件相干参数的选择也会使定量成果产生变动,这是办法学造成的不成防止的事实.同一操纵人.同一仪器.同一批号试剂.同一份标本同时做多份平行管,得到的成果都邑不尽雷同.所以我们都邑许可成果消失必定规模的误差,一般为一个数目级的拷贝数.5×107.3×107和6×107均在许可的误差规模内,消除了各类影响身分后,消失这种情形很正常,这说清晰明了该病人用药后果不佳.若定量成果有1～2个数目级甚至更大的变更才干反应用药疗效.三．现有一人打德律风到科室,说：“我孩子在你们病院做了一项丙肝的PCR检测,名字叫XXX,请你告诉我检测成果好吗？”.假如是你刚好接了这个德律风,你会如何去做？（该题考的是试验室人员在患者请求以电子邮件.德律风.传真等方法传递陈述时,是否能按响应的程序去做）答复思绪：也是考情势.“对于这种非正常的陈述发放情势,我们按照程序,是如许如许处理的.”因为各个病院现实情形不合,所以无论你如何处理,只要程序中表现了对患者成果的保密原则,具体细节不会太请求.在程序中按以下几个方法写都是可以的：1、我们均不以任何非正常情势发放陈述.（最爽性！就是有点合情合理,不过对我们来说省事）2.其实有特别情形,可以德律风查成果,其它发放情势不成.但必须确认身份,包含查对其所查询的患者姓名.性别.年纪.检测项目.送检大夫.送检日期.病区床号等情形,并供给患者ID号.3.可以经由过程德律风.图文传真.电子邮件等情势传送成果,和上面一样,须要核实身份.（最宽松了,不过麻烦了许多）要留意的是：这些情形均应明白告诉查询者,这几种非正常情势发放的陈述均仅为临床供给参考,试验的最终成果以正式检测陈述单为准.特别情形陈述发放后需具体登记,签订陈述人姓名,试验室负责人签字.“陈述的准确发放”为考察重点,一般可能还会引申出“你们是若何发放检测成果陈述？”之类的问题,按照程序中写的现实情形答复就行的了.只要遵守保密原则就OK.最简略的无非把工作都推给病院：说门诊患者陈述单送至办事台门诊陈述发放处,由那边的大夫确认身份后发放.（具体她们是怎么确认.确不确认这已经不关我们的事了）.若写病人到科室领陈述也行,只是“我们怎么确认病人身份”要在程序中表现：讯问相干信息.依据收费单或病历独一条形码（若病院采取盘算机收集体系）确认等等.四．现有你科室同事,拿了一份血清标本给你,说：“这是我一个熟人的标本,他要做HCV RNA检测,刚好他还做生化和免疫检测,我从生化标本分了一些出来,给你做HCV RNA.”你以为如许行吗？为什么？（该题主如果考试验室人员对有关标本的收集程序是否清晰并遵照）答复思绪：问到了“为什么？”暗示具体考到细节了.按照我们的收集程序,做PCR尤其是RNA项目须要自力取血,不克不及从其它检测的标本平分出一些来做.并且对RNA标本的收集.保管.运输都有严厉的请求.一般验收组会对这类问题加以引申.问你天天标本在哪儿收集？采血的人员有否经由专门培训？收集的标本若何保管？还可以趁便问你成果发放后的标本若何保管.保管在哪儿？保管多久？甚至要你把这多久多久前的标本拿出来给他们看.五．某一天,你在做HBV DNA荧光定量PCR检测（办法的定量测定规模为103～107拷贝数/ml）中,发明有1份标本的测定Ct值超出办法的测定上限,此时你怎么办？对于没有特异扩增曲线的标本你又怎么陈述成果？答复思绪：此为具体问题：标题已经假设了办法的定量测定规模为103～107拷贝数/ml,我们就按照这个假设来斟酌.先看是否为特异扩增的曲线（即看曲线是否为尺度的S形曲线）,若为尺度S形曲线暗示的确为阳性标本,Ct值超出检测上限,暗示未知标本HBV DNA浓渡过大,不在检测线性规模内,应当进行浓度梯度稀释（1/10.1/100.1/1000……）,重做试验,看哪个梯度处于线性规模内,得到原始浓度乘以响应稀释倍数即得.若不是特异扩增的曲线（也就是罕有的那种前面翘.与阈值线有交点的阴性曲线,盘算机不会具体剖析,见有交点就给Ct值,并且Ct值还很小,小于测定上限的Cycle数）,按阴性报.六．在PCR检测的核酸提取离心中,如发明有一管离心管消失决裂,此时你怎么办？（该题是考试验室人员对于其制订的试验室及仪器装备消毒干净程序是否知道并遵照）答复思绪：按照离心计心情的消毒干净程序：必须先停滞试验,将决裂管密封放入生物垃圾桶,再用75%酒精擦拭离心室消毒,用移动紫外灯照耀30～60分钟后才干开端试验.可以引申出：离心管决裂,可能质量有问题,为防止今后同类工作的产生,按照耗材质检程序进行离心管质检试验,若不及格停滞应用,从新购置并进行质检,及格的耗材才干应用.七．有一个PCR试验室的荧光定量PCR仪如ABI 7000因某种原因搬动到了另一个试验台面,试验室只是将仪器外概况擦了擦,即用于通例扩增检测工作,你以为该试验室做得对吗？为什么？（该题是考试验室人员对于其制订的PCR仪校准程序是否知道并遵照）答复思绪：考察试验室人员对于其制订的PCR仪校准程序是否知道并遵照.仪器移动应当按照程序进行校准后才干从新用于通例扩增检测工作,以包管试验成果.7000型核酸扩增荧光检测仪为庞杂周详仪器,其校准工作需由专业工程师进行.试验室接洽仪器厂家派技巧人员来校准仪器.日常平凡就算不搬动仪器,试验室也应与仪器厂家达成协定,按期校准仪器.八．有一位试验室工作人员在做PCR试验中,一开端将化验单带至标本处理区,核酸提取完成后,进入了扩增区,但将化验单忘在了标本处理区,此时,他应当如何做？（该题是考试验室人员对于其制订的试验室单一流向工作程序是否知道并遵照）答复思绪：很简略,按照单一流向原则,该试验员不克不及直接回2区拿单,要么请其他当日未进过扩增试验室的人员帮拿,要么严厉按请求淋浴.更衣服后再次进入2区拿化验单.。

PCR实验流程如下：
试剂准备阶段：在试剂贮存和准备区的超净工作台或生物安全柜进行，用确保无污染的移液器、枪头及容器等进行分装。

所有的PCR体系都应该在-20℃保存，除了ddH2O之外，其余的试剂组份需完全融化之后再加入，以免影响浓度。

配制反应体系应在快速进行，以减少非特异性扩增。

体系配制完成之后应马上进行PCR反应。

样本制备阶段：样本制备是整个PCR反应中最为关键的环节，在接收样本时一定要确保样本的密封性以及样本编号的唯一性。

严格遵守操作规程进行加样操作，操作时候尽量少说话或者不说话。

所有操作需要在生物安全柜内进行，操作前后生物安全柜需要进行紫外灯消毒，注意生物安全柜中物品的排放。

戴手套并勤于更换，要有无核酸观念。

在样本检测的同时设立对照（阳性对照、阴性对照、阴性模板、试剂对照）。

PCR实验注意事项：
引物长度通常在18-22个碱基之间。

解链温度Tm值通常要在52-58度之间。

GC含量也是一个重要的因素。

以上信息仅供参考，具体步骤和注意事项可能会因实际情况而有所不同，建议咨询专业人士获取更准确的信息。

核酸pcr实验室注意事项核酸PCR实验室是进行核酸扩增实验的地方，关键是确保实验环境的无菌和干净，以避免污染和假阳性结果。

以下是核酸PCR实验室的注意事项：1. 实验室设计：- 实验室应具备独立的空间，避免与其他实验室或办公区域的交叉污染。

- 实验室应有足够的空间来分隔样品制备区、试剂区和扩增区域。

- 实验室应有足够的通风系统，确保空气流动，减少可能的污染。

2. 实验设备和仪器：- 实验室应该配备必要的设备和仪器，如PCR仪、离心机、显微镜等，并保持设备经常性的维护和校准。

- 足够的冰箱和冷冻设备为试剂和样品提供充足的存储温度，防止试剂退化和样品污染。

3. 实验室操作人员：- 实验室人员应穿戴合适的实验服和手套，以避免污染样品和试剂。

- 操作人员应经过相关培训，了解实验室安全操作规程和实验流程，并严格遵守相关操作规定。

- 实验室应有足够数量的人员，并保持适当的轮班制度，确保实验室中有足够的人员监督和操作。

4. 样品处理和制备：- 实验室中的样品应与其他实验室隔离，并避免交叉污染。

- 样品的处理和制备应在无菌条件下进行，并且使用无菌器械和试剂。

- 避免使用重复利用的样品制备器械，以防止潜在的交叉污染。

5. 废物处理：- 废液、废纸巾和器材应妥善处理，确保不会对实验室环境和操作人员产生污染。

- 对于有可能带有核酸残留的废液和器材，应进行适当的处理，如高温灭活或化学灭活。

6. 试剂管理：- 实验室应有足够的试剂储备，以满足实验需求，并保持试剂的适当储存条件。

- 试剂的取用应遵循正确的操作规程，避免交叉污染和试剂浓度的变化。

7. PCR反应条件设置：- PCR反应条件的设计应合理，包括引物的浓度和扩增温度的选择等。

- PCR反应体系应配置在无菌条件下，并避免暴露在阳光直射下，以避免实验结果的误差。

8. 实验结果验证：- PCR扩增后的产物应进行准确的分析和检测，以验证实验结果的准确性和可靠性。

- 对于阳性结果的样品，应进行复核扩增或者测序验证，在防止假阳性结果的同时，也可以验证实验方法的可靠性。

《pcr 操作过程中的注意事项》
1.试剂得选好，这就像做饭得有好食材，关键。

比如要用质量可靠的试剂盒，要是试剂不行，
结果可不准。

2.操作得规范，这就像开车得守规矩，必须。

比如严格按照操作规程来，要是操作不规范，容
易出错。

3.环境得干净，这就像住的地方得整洁，得有。

比如实验室要保持清洁，要是环境脏，会污染
样本。

4.温度得控制好，这就像烤面包得掌握火候，得准。

比如PCR 仪的温度要设置正确，要是温
度不对，反应不成功。

5.样本得处理好，这就像打扮得先洗脸，得细。

比如样本要提取干净，要是样本处理不好，影
响结果。

6.防止污染，这就像保护宝贝得小心，得严。

比如戴手套、勤消毒，要是不防污染，结果就乱
了。

7.仪器得校准，这就像手表得调准时间，得对。

比如PCR 仪要定期校准，要是仪器不准，结
果不靠谱。

8.耐心得有，这就像钓鱼得有耐心，得等。

比如PCR 反应需要时间，不能着急，要是没耐心，
容易出错。

9.记录得做好，这就像记账得清楚，得全。

比如实验过程要详细记录，要是记录不好，出问题
都不知道咋回事。

10.安全得注意，这就像过马路得小心，得紧。

比如使用有毒试剂要注意防护，要是不注意安全，
会受伤。

结论：PCR 操作注意事项多，得认真对待才能做好实验。

PCR操作注意事项PCR（聚合酶链式反应）是生物学和遗传学领域中常用的实验技术，它能够扩增特定的DNA片段。

但是，进行PCR反应时需要注意一些细节，以确保实验结果的可靠性和准确性。

本文将介绍PCR操作时的一些注意事项。

1. 实验前准备在开始PCR实验之前，需要进行一些实验前准备工作，包括：•实验室的清洁：保持实验室的干净整洁，特别是工作台面和实验仪器。

•避免污染：在实验室操作PCR反应前，必须使用无RNase和DNase的试剂和设备，以避免DNA样本的污染。

•实验器材准备：检查和准备PCR试剂盒、PCR机、电源、离心机、DNA样本等实验器材。

2. DNA样本处理对于PCR实验中的DNA样本处理，需要注意以下几点：•避免冻融：避免多次冻融DNA样本，以免降低样本的质量和浓度。

•戴手套：操作PCR反应时，务必戴上手套，防止DNA的污染和降解。

•分装样本：在处理DNA样本时，使用无菌的分装器具，并避免交叉污染。

3. PCR反应体系的准备PCR反应体系的准备对PCR实验的结果至关重要。

以下是几点需要注意的事项：•避免扩增抑制物：当样本中含有扩增抑制物时，会影响PCR反应的准确性。

因此，在准备PCR反应体系时应注意去除扩增抑制物。

•正确的试剂加入顺序：按照试剂盒说明书中的指示，按正确的顺序将试剂加入反应管中。

•负空白对照：每次进行PCR反应时，务必设置负空白对照，以检测可能的污染和控制反应的准确性。

4. PCR条件的设置PCR反应的条件设置直接影响扩增效果和特异性。

以下是几点需要注意的事项：•温度梯度实验：对于新的引物和目标DNA，建议进行温度梯度实验，优化PCR反应的温度条件。

•靶序列选择：合理选择引物的靶序列，使其具有特异性和适当的扩增长度，避免非特异性扩增和产物大小偏差。

5. 实验后处理PCR反应结束后，还需要进行一些实验后处理。

以下是几点需要注意的事项：•保存PCR产物：及时将PCR产物转移到-20℃的冰箱中保存，避免变性和降解。

PCR实验室核酸检测的常见问题检验科人员是核酸检测工作的主力军，我们不但要保证检测结果的有效性，还时刻面临着被感染的风险。

本文为大家讲解《PCR实验室新冠核酸检测操作注意事项》，重点从新冠病毒生理特性、荧光PCR原理、PCR实验室筹备规范、样本检测环节操作、实验室数据分析、常见问题解析等几个方面讨论学习。

1、传染源目前所见传染源主要是新型冠状病毒感染的患者。

无症状感染者也可能成为传染源。

2、传播途径经呼吸道飞沫和密切接触传播是主要的传播途径。

在相对封闭的环境中长时间暴露于高浓度气溶胶情况下存在经气溶胶传播的可能。

由于在粪便及尿中可分离到新型冠状病毒，应注意粪便及尿对环境污染造成气溶胶或接触传播。

3、荧光PCR原理重复进行“变性- 退火- 延伸”三个过程，模板DNA的量就会呈指数倍增加，理论上讲经过n 个循环之后，模板量就会达到2的n次方。

4、常见问题解析①新冠试剂出现翘尾，怎么处理？答：如果是个别单一通道翘尾，不管是FAM还是VIC通道，首先按照要求复查，复查建议重新采样，如果不方便重新采样建议对原有样本进行重新提取核酸验证，如果复查阴性判读阴性，如果复查还是同一通道翘尾，就要对结果仔细审核，一是要排除实验室污染，二是要对病人信息了解清楚，从临床症状及接触史排查，如果没法确认，建议必须重新采样复查，如有必要可以采用另一家试剂来验证。

如果出现大量的弱阳性扩增翘尾，首要原因是考虑实验室污染，可以通过做环境样本和阴性对照做验证排除。

②N基因和1ab基因是新冠病毒的特有基因吗，灵敏度哪个更高？是否会和其他冠状病毒片段重叠？答：N基因跟1ab都是特异的，不会跟其他呼吸道病原体交叉反应。

设计时候，两个基因的序列不一样，导致灵敏度不一样，N基因的灵敏度比1ab 灵敏度高。

③新冠检测结果和临床诊断不符合，怎么解读？答：新冠病毒由于是RNA病毒，容易降解，另外检测结果也和取样，核酸提取以及样本本身的核酸浓度有关，需要逐一分析，同时可以结合临床症状判读。

SBT－PCR实验注意事项编表及出入库１．批量编表时要注意DNA编号是否断码，错码，漏码。

２．重扩编表时要找对编号对应位点，不要遗漏，不可重复。

３．样品管理实验员出完库后，要核对DNA数目及出库单上签名４．出的是96孔整板批量DNA时，要与样本制备组交接并核对孔内DNA的量均一性及有无特殊孔内有异物，如无问题在交接单签名。

加样品：1.所有加DNA样品的操作须两人一起，一人加样，另一人看其操作（复核人），加完一板，应换人操作，以免疲劳出错。

2.加模板前先按反映表将反应板进行标号，一一对应。

3.把模板从EP管转到96孔板，加样前和加样后都要检查模板DNA编号及位置是否与反应表一致（重扩表尤其需要小心注意）。

4.样品揭盖前一定要离心。

配Mix：1.所有的试剂应避免反复冻融，即融即用，并尽量减少在4度的存放时间，尤其是用于DR位点的试剂，如dNTP，只可冻融一次，最好每次用新的dNTP。

每次操作前先根据产量来预备物料量，取之有方，备量得当。

每次新拿出来的试剂融化后都应震荡均匀，离心后再用。

Mix少配、错配成分1)少配这个根据配的EP管的大小来说明,根据MIX的总体积选择合适的EP管,再按合适的比例配制:少于10个按原来个数配,重扩批量都一样200ul 500ul 1.5ml 2ml 批量按106%配，重扩可稍微少点因为模板加量MIX可相少加；5ml 7ml 10ml按110%配,由于管壁残留多.2)错配:这主要是试验员的责任心问题，如果实在不行可以把物料重新合理排放。

计算时一定要验算，看清位点一个人固定一定的环节一段时间这个方法可行。

实验过程中尽量避免随便交接，要负责到底，除非特殊情况，交接时一定要说清楚。

2.注意DRB1的Buffer及酶与其它位点的不同3.最后加酶前，应先旋涡震荡均匀（DR的引物在用前也应先震荡均匀离心），加完酶以后再震荡离心。

在震荡时注意不要把离心管握得过紧，这样液体将不能漩涡起来，只需要握住离心管同时顶住盖子避免过于激烈时爆开。

PCR实验室报批细节、注意事项、常见问题问答第一篇：PCR实验室报批细节、注意事项、常见问题问答报批细节1、技术档案：技术人员简历表、培训档案、要求有实质性文件如每人的学历证书、上岗证、科研成果（课题）、技术文章、获奖证书等的复印件2、仪器档案：实验室所有仪器的购买、使用、校正、放置地点、出厂编号、说明书复印件等实验室所有仪器维护校正记录如：加样器、温度计、温湿度计需出具计量局校正报告文件（可每种只校正一套作为标准）。

扩增仪需有仪器厂家专业技术人员维护校正报告，和校正后的参数。

加样器的出厂编号、使用时间、校正记录。

5700维护后验证记录—用同一公司或校准试剂或用自制质控血清并记录数值3、其他细节: 垃圾处理：按生物污染性制品，交医院统一处理。

仪器简单操作流程标记笔、枪头盒等一些小物品都要标明分区。

仪器的申请、采购、使用、验证程序样本采集（针对临床医护人员）、运输、收集程序样品的唯一编号原则—应区分开不同天、不同种类的标本标本的保存程序—包括处理前、刚处理后、报告发放后的原始标本（原则上至少保留一周）应有专人负责。

检测结果的保存、备份记录、质控记录保存，除电脑记录外应有相应的手抄记录（类似于基因日检测统计表类型的）。

抱怨记录—应有时间、事件（项目）、接待人、处理方法、处理结果、处理人签字确认注意事项1、回答任何问题都应与自己写的SOP文件相一致.“写你所做的,做你所写的”.2、SOP文件不能写的太虚,无法做到的东西不要写,比如公司版的SOP文件里的加样器的校准一般实验室就做不到.模棱两可也不要写,比如“消毒时间一到两小时”不能这样写,多少就是多少.3、处理标本要在生物安全柜内,而加样则在柜外.4、各区门口要贴有各区的工作制度,限入标志.还要准备两个登记本,一个来记录紫外消毒,一个来记录工作人员出入.区内还要有一个工作记录本,用来记录各区每天的工作内容,便于监测每天的工作全过程.5、每把枪的用途要清楚,不能弄乱.比如稀释阳模的枪和处理标本的枪不可混用.6、普通离心机处理分泌物标本时应在离心后静置20分钟才能开盖.(许斌这样认为)7、所有仪器、设备都要有档案卡.8、所有的清洁消毒要在实验结束后马上进行,尤其是仪器、设备.像扩增仪，每天都要清洁，做完的反应管决对不能留在样品槽内。

实验中的一些好习惯加入试剂之前,把它混匀一下,以免放置时间长了浓度不均移液枪用完之后要归到最大计量的位置，防止久而久之弹簧失去弹性一定要记着关水浴箱，切记切记多和大家讨论，同时多关注别人讨论的经验，这几乎是最快提高的捷径了所有的试剂都自己配，出了问题才好找原因防止RNA酶污染的措施1. 所有的玻璃器皿均应在使用前于180℃的高温下干烤6hr或更长时间。

2. 塑料器皿可用0.1% DEPC水浸泡或用氯仿冲洗（注意：有机玻璃器具因可被氯仿腐蚀，故不能使用）。

3. 有机玻璃的电泳槽等，可先用去污剂洗涤，双蒸水冲洗，乙醇干燥，再浸泡在3% H2O2 室温10min，然后用0.1% DEPC水冲洗，晾干。

4. 配制的溶液应尽可能的用0.1% DEPC，在37℃处理12hr以上。

然后用高压灭菌除去残留的DEPC。

不能高压灭菌的试剂，应当用DEPC处理过的无菌双蒸水配制，然后经0.22μm滤膜过滤除菌。

5. 操作人员戴一次性口罩、帽子、手套，实验过程中手套要勤换。

6. 设置RNA操作专用实验室，所有器械等应为专用。

二、常用的RNA酶抑制剂1. 焦磷酸二乙酯（DEPC）：是一种强烈但不彻底的RNA酶抑制剂。

它通过和RNA酶的活性基团组氨酸的咪唑环结合使蛋白质变性，从而抑制酶的活性。

2. 异硫氰酸胍：目前被认为是最有效的RNA酶抑制剂，它在裂解组织的同时也使RNA酶失活。

它既可破坏细胞结构使核酸从核蛋白中解离出来，又对RNA酶有强烈的变性作用。

3. 氧钒核糖核苷复合物：由氧化钒离子和核苷形成的复合物，它和RNA酶结合形成过渡态类物质，几乎能完全抑制RNA酶的活性。

4. RNA酶的蛋白抑制剂（RNasin）：从大鼠肝或人胎盘中提取得来的酸性糖蛋白。

RNasin是RNA 酶的一种非竞争性抑制剂，可以和多种RNA酶结合，使其失活。

5. 其它：SDS、尿素、硅藻土等对RNA酶也有一定抑制作用。

因为DEPc不加选择的修饰蛋白质和RNA，因此在分离和纯化RNA过程中不能使用，而且它与一些缓冲液(例如Tri)不能相容在所有RNA实验中，最关键的因素是分离得到全长的RNA。

验证PCR注意事项PCR（聚合酶链反应）是一种被广泛应用的基因检测技术，可以在短时间内扩增小片段DNA，使其数量快速增加。

然而，PCR技术操作繁琐，在实验过程中存在许多需要注意的事项，下面我将详细回答并讨论PCR技术的注意事项。

1. 实验室准备：在进行PCR实验前，要充分准备实验室所需的基本设备和试剂，如PCR仪、热循环程序控制器、离心机、PCR试剂盒等。

还需要保证空间干净整洁，避免交叉污染。

2. 基因组DNA提取：PCR反应的第一步是提取样本中的DNA，注意要选择适当的提取方法。

常用的方法有酚/氯仿法、磁珠法、硅胶膜法等，具体选择取决于样本类型和实验目的。

此外，提取过程中要避免样本的污染，严格遵守操作规程。

3. 靶标序列选择与设计：设计引物是PCR反应成功的关键。

引物应与目标DNA序列互补，长度在18-30碱基之间，GC含量约为50-60%。

引物间应该没有互补碱基片段，以避免引物二聚体的产生。

在设计引物时，可以利用一些在线工具进行引物评估，确保引物的特异性和稳定性。

4. 引物浓度的优化：引物浓度的优化对PCR反应的成功与否至关重要。

引物过多会导致引物二聚体或非特异性扩增，引物过少则可能导致不稳定的扩增。

一般来说，引物的最佳浓度为0.1-0.5μmol/L。

5. PCR反应体系的优化：PCR反应体系主要包括引物、DNA模板、dNTPs、聚合酶、缓冲液和Mg2+等。

体系中各个组分的浓度和比例需要优化，以确保PCR反应的成功。

一般来说，每个PCR反应管中最终反应体积为20-50μl，引物浓度为0.2-0.5μmol/L，模板DNA浓度为10-200ng。

6. 热循环程序设置的优化：PCR反应的关键步骤是反应体系的热循环程序。

温度和时间的设置需要根据引物和目标序列的特性进行优化。

常规的PCR热循环程序包括：变性（94-98C）、退火（50-68C）和扩增（72C）等步骤，反应周期数一般为25-40个。