靶向沉默p65基因对人乳腺癌细胞MDA MB 231增殖及凋亡的影响

下调P55PIK基因表达对乳腺癌MDA-MB-231细胞体外增殖和迁移能力的影响

李襄;胡艺冰;孙黎;曹小年;王桂华;丁庆庆;吴亚群;胡俊波

【摘 要】目的 通过RNA干扰(RNA interference,RNAi)抑制P55PIK基因表达,观察下调P55PIK对人乳腺癌细胞株MDA-MB-231体外增殖和迁移能力的影响.方法 利用脂质体将特异性针对P55PIK的siRNA瞬时转染P55PIK高表达细胞株MDA-MB-231,以转染无关序列siRNA(siRNA-NC)和未转染细胞作为对照.通过Western blot检测其对P55PIK表达的下调效果,MTT法和Transwell实验分别检测MDA-MB-231细胞的增殖和迁移能力.结果 siRNA-P55PIK明显下调MDA-MB-231细胞中P55PIK蛋白的表达;MTT检测显示下调P55PIK后,MDA-MB-231生长明显受到抑制;Transwell实验显示siRNA-P55PIK组穿膜细胞数为(5.2±1.3),显著低于siRNA-NC组(18.6±3.8)和空白对照组(18.4±4.3)(P<0.05).结论 应用RNAi抑制P55PIK基因的表达可抑制MDA-MB-231细胞体外增殖和迁移能力,为乳腺癌的靶向治疗提供了新思路.%Objective To explore the effect of

siRNA mediated downregulation of P55PIK on proliferation and migration

of breast cancer cells in vitro. Methods Western blot was used to detect

the expression of P55PIK in 3 breast cancer cell lines (MDA MB

231,MCF7,and T47D). P55PIK targeted siRNA was transfected into MDA MB

第３５卷　第３期　吉　林　医　药　学　院　学　报　Ｖｏ１．３５　Ｎｏ．３　２０１４年０６月　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｊｉｌｉｎ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｃｏｌｌｅｇｅ　Ｊｕｎ．２０１４　

文章编号：１６７３—２９９５（２０１４）０３－０１６１－０５　・论著・　

ＥＲ—ｏｄ６基因沉默对ＥＲ阴性乳腺癌ＭＤＡ—ＭＢ一２３１细胞的作用及其影响　

李东阳　，王白石　，崔枉花　，罗　速　（１．天津市泰达医院检验科，天津３００４５７；２．天津医科大学中新生态　

城医院检验科，天津３００４６７；３．吉林医药学院药学院，吉林吉林１３２０１３；４．北华大学基础医学院，吉林吉林　

１３２０１３）　

摘　要：目的　探讨ＥＲ一仅３６基因与人雌激素受体（ＥＲ）阴性乳腺癌细胞ＭＤＡ—ＭＢ一２３１的内在联系。观察其　对ＥＲ阴性乳腺癌细胞的影响。为探索ＥＲ阴性乳腺癌的基因治疗提供新的途径。方法　利用ＲＮＡｉ技术，构　

建靶向ＥＲ—ｃｘ３６基因的短发夹状ＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）重组质粒，脂质体法将ｐＲＮＡＴ．Ｕ６．１／Ｎｅｏ．ＥＲ．０ｔ３６导入雌激素受　

体阴性乳腺癌细胞ＭＤＡ－ＭＢ一２３１，利用ＲＴ—ＰＣＲ法检测ＭＤＡ—ＭＢ一２３１细胞ＥＲ．ａ３６基因表达的抑制情况；ＭＴＴ　法检测雌激素受体阴性乳腺癌细胞ＭＤＡ．ＭＢ．２３１的增殖情况。结果　①ＰＣＲ、酶切鉴定、ＤＮＡ测序证实小干　

扰质粒构建成功，无碱基突变；②ＥＲ—ｃｄ６一ｓｉＲＮＡ表达载体转染ＥＲ阴性乳腺癌细胞ＭＤＡ—ＭＢ－２３１可有效抑制　ＥＲ—ｏｄ６ｍＲＮＡ表达（抑制效率＝８６．３％），Ｐ＜０．０１；③ＭＴＦ实验结果表明ＥＲ—ｃｄ６沉默可有效抑制ＥＲ阴性乳　

腺癌细胞ＭＤＡ—ＭＢ一２３１的增殖，提示ＥＲ—ｃｄ６参与ＭＡＰＫ／ＥＲＫ信号转导通路调节细胞增殖。结论　ＥＲ．ｅｄ６　

参与ＭＡＰＫ／ＥＲＫ信号转导途径，与ＥＲ阴性乳腺癌的发生、发展关系密切。ＲＮＡｉ有效沉默ＥＲ．ｃｄ６基因是ＥＲ　阴性乳腺癌基因治疗的有效手段。ＥＲ．ｃｄ６可能成为ＥＲ阴性乳腺癌基因治疗的新靶点。　

靶向daintainAIF-1的siRNA抑制乳腺癌细胞MDA-MB-

靶向daintain/AIF-1的siRNA抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231的增殖和迁移

目的 构建靶向daintain/AIF-1的siRNA表达载体pRNAT-H1.1-daintain/AIF-1(pRNAT-DT),研究靶向daintain/AIF-1的siRNA对乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖和迁移的影响.方法 设计合成靶向daintain/AIF-1的siRNA模板双链,将其克隆入siRNA空载体pRNAT-H1.1, 用脂质体法导入乳腺癌细胞MDA-MB-231中;RT-PCR 和

Western印迹方法检测 daintain/AIF-1 以及cyclin D1的表达;MTT方法检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞周期; Trans-well细胞板检测细胞迁移.结果 针对序列1和序列2的siRNA表达载体pRNAT-DT均能有效抑制daintain/AIF-1的表达.靶向daintain/AIF-1的siRNA抑制细胞增殖和cyclin D1表达,阻滞细胞周期由S期向G2/M期转变.同时,daintain/AIF-1表达的下调抑制了细胞的迁移.结论 靶向daintain/AIF-1的siRNA抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231的增殖和迁移.

作 者：刘收 陈正望 LIU Shou CHEN Zhengwang 作者单位：华中科技大学生命科学与技术学院分子生物物理学教育部重点实验室,武汉市,430074 刊 名：医学分子生物学杂志 ISTIC英文刊名：JOURNAL OF MEDICAL MOLECULAR BIOLOGY 年，卷(期)：2008 5(3) 分类号：Q813 关键词：细胞因子daintain/AIF-1 siRNA 增殖 迁移

siRNA沉默Smad4对奥沙利铂抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞侵袭和迁移的影响

马琳艳;宋乐乐;黄莹莹;孙小锦;董淑英;蒋志文;刘浩

【摘 要】目的 探讨Smad4基因沉默对奥沙利铂(OXA)抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231侵袭迁移能力的影响及其作用机制.方法 采用MTT法检测不同浓度OXA(0,0.25,0.5,1,2,4μmol/L)对MDA-MB-231细胞的增殖抑制作用;Smad4

siRNA转染MDA-MB-231细胞株,并用Western blot检测转染后Smad4蛋白表达;Transwell小室法和细胞划痕实验检测MDA-MB-231细胞侵袭迁移活性;Western blot和ELISA检测细胞中TGF-β和MMP-9蛋白表达和活性的变化.

结果 1μmol/L OXA作用于MDA-MB-231细胞24,48,72 h细胞存活率分别是(77.42±3.98)％,(60.38±3.65)％和(40.15±4.37)％.siRNA转染后MDA-MB-231细胞中Smad4的表达明显被抑制(P＜0.05);Smad4 siRNA转染可增强OXA抑制MDA-MB-231细胞的侵袭和迁移活性(P＜0.05);Smad4 siRNA转染使OXA下调细胞中TGF-β和MMP-9蛋白表达和活性明显增强(P＜0.05). 结论 下调Smad4的表达可以增强OXA抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞侵袭迁移的活性,其机制可能与影响TGF-β/Smad4通路并下调MMP-9表达有关.

【期刊名称】《山西医科大学学报》

【年(卷),期】2015(046)008

【总页数】6页(P756-761)

【关键词】乳腺癌;Smad4;小干扰RNA;奥沙利铂;侵袭;迁移

【作 者】马琳艳;宋乐乐;黄莹莹;孙小锦;董淑英;蒋志文;刘浩 【作者单位】蚌埠医学院药学系,安徽省生化药物工程技术研究中心,蚌埠233030;蚌埠医学院第一附属医院药剂科;蚌埠医学院第一附属医院药剂科;蚌埠医学院药学系,安徽省生化药物工程技术研究中心,蚌埠233030;蚌埠医学院药学系,安徽省生化药物工程技术研究中心,蚌埠233030;蚌埠医学院药学系,安徽省生化药物工程技术研究中心,蚌埠233030;蚌埠医学院药学系,安徽省生化药物工程技术研究中心,蚌埠233030