巴氏染色的几点体会

巴氏染色原理
巴氏染色原理是由德国微生物学家巴氏（F. Loeffler）和日本细菌学家小野寺（K. Kitasato）于1884年共同提出的。

该原理是指用一种特定的染色方法，可以
将细菌染色成蓝色或紫色，而其他组织则保持无色或染成红色。

这种染色方法在细菌学和病原微生物学研究中得到了广泛的应用。

巴氏染色原理的核心是利用染色剂与细菌细胞壁的特定化学成分之间的亲和作用，通过染色剂的作用，使细菌细胞壁吸附染色剂，从而使细菌呈现出特定的颜色。

这种染色方法的原理简单，操作方便，且染色效果稳定，因此被广泛应用于细菌学实验室中。

巴氏染色原理的具体步骤包括，将细菌涂片加热固定，然后用甲苯或其他溶剂
处理，使细菌细胞壁透明，接着用染色剂如甲基蓝或结晶紫染色，最后用水洗去余染色剂，晾干即可观察。

通过这种染色方法，可以清晰地观察到细菌的形态、结构和分布情况。

巴氏染色原理的应用不仅局限于细菌学领域，还广泛应用于医学临床诊断中。

通过染色技术，医生可以观察到患者体液或组织中的细菌、病毒等微生物，从而进行疾病的诊断和治疗。

比如在结核病的诊断中，巴氏染色方法可以帮助医生观察到结核杆菌的存在，从而进行准确的诊断。

总的来说，巴氏染色原理是一种简单而有效的细胞染色方法，通过对细菌细胞
壁的特定化学成分的染色作用，使细菌呈现出特定的颜色，从而方便观察和研究。

这种染色方法在细菌学和医学领域都有着重要的应用，对于微生物学研究和临床诊断都具有重要意义。

巴氏染色巴氏（Papanicolaou）染色法是脱落细胞染色中最好的染色方法。

其适用于上皮细胞及间皮组织的标本。

是阴道脱落细胞检查中最常用的染色方法。

该染色法不但具有显示细胞核结构清晰，分色明显，透明度好，胞浆受色鲜艳等特点，而且所染标本不易脱色，可长久保存。

对如何染好巴氏染色，笔者有以下几点体会，报告如下。

1 EA 36染液pH值的测试EA 36染液的酸碱度对巴氏染色的成功起着关键性作用，EA 36染液由伊红、亮绿、桔黄及俾麦棕等染料配成。

伊红、亮绿、桔黄及俾麦棕等属于酸性染料。

在溶媒中其发色团是负离子部分。

发色团可与蛋白质中带正电的氨基结合，从而使胞浆显蓝色、绿色、桔黄色或红色。

但蛋白质所带正负电荷的多少是随溶液的pH值而改变的。

在偏碱环境中，蛋白质的羧基游离增多（带负电）。

在偏酸环境中蛋白质氨基游离增多（带正电）。

所以必须把染液pH值调至5.2为宜［1］。

EA 36染液pH的调节，可用石蕊试纸法，也可用酸度计测试。

当然用酸度计法最为准确。

但以上方法均比较麻烦，同时还要受到仪器设备的限制，不方便。

本文采用一种简单方便的方法。

即用10%磷钨酸及饱和碳酸锂溶液直接测试。

具体做法是，拿一张滤纸先滴少量染液于纸上，若滴染液处呈紫色，说明染液偏碱，则滴加少量10%磷钨酸。

若显绿色，说明染液偏酸，则滴加少量饱和碳酸锂。

并充分混匀。

直至染液滴在纸上既显绿色又有红色，颜色鲜艳为宜。

用此法测试染液pH同用石蕊试纸法测试一样，同样可获得满意的染色效果。

磷钨酸在染色过程中，不但作为媒染剂可增加染料的着色力。

同时磷钨酸与碳酸锂还是一对弱酸弱碱，实际上是一对缓冲剂。

可中和分色及蓝化时可能留下的少量酸或碱。

保证染色达到理想效果。

2 分色分色或酸化，对染色效果也很重要。

分色目的是去掉胞浆中染上的多余的苏木素，使胞核着色显示特异性。

因此，经分色后的胞浆在镜下观察应无色为佳。

若胞浆中还残留有苏木素染料，会影响EA 36染液的着色。

巴氏染色原理
巴氏染色原理是一种用于细胞核的染色方法，由德国科学家巴氏于1882年首次提出。

该方法通过染色剂与细胞核中的染色质结合，使其显现出不同的颜色，从而帮助科研人员观察和研究细胞核的结构和功能。

巴氏染色原理在生物学、医学和生物技术领域具有重要的应用价值。

巴氏染色原理的基本步骤包括固定、染色和洗涤。

首先是固定，即利用甲醛等化学物质使细胞固定在载玻片上，保持其形态和结构不变。

接着是染色，通过染色剂如甲苯胺蓝、伊红等与细胞核中的染色质结合，使其显现出特定的颜色。

最后是洗涤，将载玻片在适当的溶液中洗涤，去除多余的染色剂，使细胞核清晰可见。

巴氏染色原理的应用范围非常广泛。

在医学领域，巴氏染色原理被用于研究疾病的发病机制和病理变化，如癌症细胞的形态学特征和染色体异常。

在生物技术领域，巴氏染色原理被应用于基因工程和细胞工程中，帮助科研人员观察和分析基因的表达和调控。

在生物学领域，巴氏染色原理被用于研究细胞核的结构和功能，如染色体的形态和数量。

巴氏染色原理的优点在于操作简便、成本低廉、结果清晰可见。

然而，也存在着一些局限性，如染色效果受到固定和染色条件的影响，染色质与其他细胞结构的区分度不高等。

总的来说，巴氏染色原理作为一种重要的细胞核染色方法，在生物学、医学和生物技术领域具有重要的应用价值。

随着科学技术的不断进步，相信巴氏染色原理将会在更多领域得到广泛应用，为人类健康和科学研究做出更大的贡献。

染色是利用细胞中各种结构的生化组成不同，对染料的亲和力不同，而显示不同的颜色，使细胞的形态和结构易于辨认。

常用的染色有HE、巴氏及瑞-姬氏染色，其特点如下。

1.HE染色：此法染色效果也好，只是胞质色彩不丰富，不能用于观察阴道涂片对雌激素水平测定。

优点是操作简易，试剂易配制。

2.巴氏染色：此法染色特点是细胞具有多色性，色彩丰富鲜艳，胞内结构清晰，染色效果好，是细胞病理学检查常用的方法，尤其是观察女性雌激素水平对阴道上皮细胞的影响。

此法的缺点是操作程序复杂。

3.瑞一姬氏染色：此法适用于血片、淋巴穿刺液和胸腹水涂片。

巴氏染色原理
巴氏染色原理是一种常用的细胞染色技术，用来对细胞或组织进行染色。

该原理是基于酚醛固定的原理，通过将细胞或组织固定在玻片上，然后处理它们使得它们能够与染料发生反应。

巴氏染色的步骤如下：
1. 固定：将细胞或组织浸泡在酚醛液中，使其固定在玻片上。

酚醛能够保持细胞或组织的形状和某些结构的完整性。

2. 脱水：通过将样本逐渐浸泡在濃度递增的酒精溶液中，使其逐渐失去水分。

这样做是为了减少细胞或组织内的水分，以便尽可能地提高染料对细胞或组织的亲和力。

3. 渗透：将细胞或组织浸泡在骨胶液中，使其充分浸润。

骨胶液能够渗透到细胞或组织的内部，使得染料更容易地与它们发生反应。

4. 染色：将染料溶液滴在样本上，使其与细胞或组织结合。

染料能够结合到不同的细胞或组织结构中，从而显示出不同的颜色或形态。

5. 清洗：将多余的染料以及其他杂质通过浸泡在去离子水中进行清洗。

这样可以让染色的结果更加清晰。

6. 封片：在玻片上涂上封片剂，以保护样本并固定染料。

这样可以使染色的结果保持较长时间。

通过巴氏染色原理，我们可以对细胞或组织进行染色，并观察它们的结构，从而得到更多关于它们的信息。

这种染色方法在细胞学和组织学研究中广泛应用，为我们研究生物体内部的结构和功能提供了重要的工具。

巴氏染色的原理及临床应用1. 原理介绍巴氏染色是一种常用的组织学和细胞学染色方法，用于将细胞核内的染色质显色出来。

这种染色方法起源于19世纪末的德国，由柏氏提出并得到广泛应用。

巴氏染色的原理是用甲醛固定切片中的细胞核，然后使用甲铋绿染色荧光染料，该染料能够选择性地结合DNA，从而使细胞核显色。

2. 巴氏染色步骤巴氏染色可以分为以下几个步骤：•备制甲铋绿染色溶液：将适量的甲铋绿溶解在染色液中，配制成甲铋绿染色溶液。

•制备切片：将待染色的组织细胞固定在切片上，通常使用甲醛进行固定。

固定后，再进行脱水和清洁等处理，使细胞能够完整地附着在切片上。

•染色处理：倒入甲铋绿染色溶液，对切片进行染色处理。

可以使用扩散法或浸漆法染色。

•清洁固定：用甲醇对切片进行清洁固定，使甲铋绿染色质牢固地附着在细胞核上，不易褪色。

3. 临床应用巴氏染色在临床中有广泛的应用，主要用于以下方面：3.1 组织学研究巴氏染色技术能够显色出细胞核以及核内的染色质，对于细胞结构的观察和研究具有重要意义。

通过巴氏染色，可以观察细胞核的形态、大小、排列以及核内的染色质分布情况，从而提供组织学研究的依据。

3.2 细胞学诊断巴氏染色在细胞学诊断中有着重要的应用价值。

通过观察细胞核的形态、核仁和核内的染色质分布情况，可以帮助医生诊断细胞异常和病变。

例如，在细胞学涂片中，巴氏染色可以帮助诊断宫颈癌、乳腺癌等恶性肿瘤。

3.3 分子生物学研究巴氏染色在分子生物学研究中也有着重要的应用。

通过观察细胞核的染色与分布情况，可以了解DNA的含量、形态和排列方式。

这对于研究遗传物质的结构与功能具有重要意义。

此外，巴氏染色染料甲铋绿还可以选择性地染出核仁，从而帮助研究核仁的结构与功能。

4. 研究进展近年来，随着生物学技术的发展和突破，巴氏染色技术也在不断更新和改进。

一些新型的染色剂和染色方法被提出并得到应用。

例如，用于核糖核酸的新型染色剂mORANGE，可以实现DNA和RNA的同步染色。

快速巴氏染色液注意事项快速巴氏染色液是一种常用的细胞染色方法，具有快速、简单、显色明亮等优点。

然而，在使用快速巴氏染色液时，我们需要注意一些事项，以确保染色效果的准确性和稳定性。

以下是使用快速巴氏染色液的注意事项：1. 样本制备：在进行细胞染色前，样本制备非常关键。

首先，要确保样本的新鲜度，尽量选择新鲜组织或细胞。

其次，样本处理要轻柔，避免引起细胞破裂或变形。

最后，要注意样本固定的时间和方法，固定时间过短或过长都会影响染色效果。

2. 清洗步骤：在染色之前，样本需要进行充分的清洗，以去除可能的干扰物质。

清洗步骤应该重复进行，直到洗涤液不再有颜色残留为止。

同时，要避免使用含有蛋白酶或酸碱性溶液进行清洗，以免影响细胞的形态和染色结果。

3. 染色时间控制：染色时间的控制对于快速巴氏染色液来说非常重要。

染色时间过短会导致染色不均匀或染色效果不明显，而染色时间过长则可能出现过度染色的情况。

因此，在染色之前，要根据样本类型和染色液的浓度进行试验，以确定最佳的染色时间。

4. 染色液的使用：在使用快速巴氏染色液时，要注意染色液的储存和使用。

首先，要避免染色液暴露在阳光下或高温环境中，以免影响染色效果。

其次，要定期检查染色液的有效期，过期的染色液可能会导致染色效果不佳。

最后，要遵循染色液的供应商提供的使用说明，按照正确的比例稀释染色液，避免使用过量或过少的染色液。

5. 染色结果的观察和记录：染色完成后，要仔细观察染色结果，并及时记录。

观察时要注意细胞的形态和染色的均匀性。

如果发现染色结果不理想，可以尝试调整染色时间或染色液的浓度。

同时，要将染色结果进行记录，以备后续分析和比较。

使用快速巴氏染色液时需要注意样本制备、清洗步骤、染色时间控制、染色液的使用和染色结果的观察和记录等方面。

遵循这些注意事项，可以提高染色效果的准确性和稳定性，为后续的细胞分析和研究提供可靠的基础。

巴氏染色液作用安全操作及保养规程巴氏染色液是在生物科学研究和医学诊断中广泛使用的一种染色剂。

就像所有化学试剂一样，正确的使用和保养非常重要。

下面我们将重点介绍巴氏染色液的作用、安全操作和保养规程。

巴氏染色液的作用巴氏染色液是由甲醛和孟德尔水杨酸（也称为苯酚）混合而成的染色剂。

它广泛用于细胞和组织的标本制备，以便观察细胞学的形态、结构和功能。

巴氏染色液可以染色核糖核酸（RNA）、蛋白质和细胞核等有机物。

安全操作规程巴氏染色液是一种刺激性化学物质，在使用时需要保护好自己和实验室同事的健康。

以下是一些巴氏染色液的安全操作规程：1.密封存储巴氏染色液必须密封存储在冷暗处，避免暴露在阳光下或高温地方。

应该将巴氏染色液储存在标有危险物品的储存柜或房间中。

2.戴手套和护目镜在接触巴氏染色液前必须戴上手套和护目镜。

如果不小心触碰到染色液，要迅速将其冲洗掉并咨询专业人员。

3.通风操作巴氏染色液时必须在通风的环境下进行。

这将有助于防止呼吸危害和其他安全问题。

4.遵循正确的操作程序使用巴氏染色液前要阅读和理解安全数据表和物质安全说明书，确保了解正确的操作程序和应急处理方法。

5.避免接触皮肤和呼吸道避免巴氏染色液接触皮肤和呼吸道。

如果染色液不慎接触到皮肤或呼吸道，需要立即清洗或呼吸新鲜空气，并在情况严重时咨询医生。

保养规程保养巴氏染色液可以最大限度地保持其质量和性能，并延长其使用寿命。

下面是一些保养巴氏染色液的规程：1.不要过度稀释巴氏染色液不宜过度稀释。

稀释过量会使其染色效果不佳，使用寿命缩短。

2.避免冻结巴氏染色液不宜冻结，其应储存在常温下的冷暗处。

3.不要照射巴氏染色液不宜长时间暴露在阳光下。

光照下，其中的苯酚会发生氧化反应，降低其稳定性。

4.定期检查定期检查巴氏染色液的颜色和透明度。

如果其发生变化，可能是因为其受到了污染，需要重新制备。

5.避免细菌污染巴氏染色液易受到细菌的污染。

因此，在制备和使用巴氏染色液时需要遵循卫生规程，避免细菌的污染。

HE染⾊和巴⽒染⾊法HE染⾊和巴⽒染⾊法普通染⾊⼜称常规染⾊或HE（Haematoxylin and eosin）染⾊。

它是病理技术中最常⽤的⼀种⽅法，通过它可以做出病理诊断和发现寻求别的辅助⽅法，以达到准确，完整的病理诊断。

⼀、染⾊⽬的病理学的所有切⽚，都必须通过⼀种以上的染料，通过各种不同的⽅法，将切⽚中各种不同的物质，在不同染液的作⽤下，将其显⽰出来，使之在光学显微镜下，能够完全的观看各种结构。

例如，HE染⾊，好质量的切⽚可以清晰地显⽰出许多不同的结构，细胞核着蓝⿊⾊，细胞浆着粉红⾊，软⾻着蓝⾊等。

清晰的结构为诊断提供可靠的依据，因此，染⾊技术也是病理技术中的重要组成部分，必须不断地总结，⽅能提⾼。

如果染⾊不好，切⽚染⾊⼀团糟，红蓝不分，结构不清，层次不明，影响了镜下的观察，直接影响了临床诊断，染⾊结果的好坏直接关系到诊断的准确性。

⼆、染⾊的作⽤1．化学作⽤：所有的染⾊液中，可把它们分为两种类型，⼀种为酸性，另⼀种为碱性。

酸性染料中有染⾊作⽤的为阴离⼦；碱性染料中有染⾊作⽤的为阳离⼦，每个细胞也存在着两种物质，细胞核含的是酸性物质，细胞浆含的是碱性物质。

在染⾊时，细胞核中的酸性物质与苏⽊素染液中的阳离⼦发⽣作⽤，细胞浆中的碱性物质与伊红染液中的阴离⼦发⽣作⽤，由于反应的部位不同，结果着⾊有异。

2．物理作⽤：在染⾊过程中，染液中的⾊素微粒⼦浸⼊到被染组织的粒⼦间隙内，此时，因受分⼦的引⼒作⽤，⾊素微粒⼦被吸附⽽着⾊。

由于各种组织有不同的吸附能⼒和不同的吸附程度，因此就可显出来不同的颜⾊来。

⼀般来说，染⾊的学说还有许多，但说服⼒强的仅有上述两种。

但不管怎么样解释，实际上完成的每⼀种染⾊，都与上述两种学说分不开，它们的作⽤是相辅相成，同时存在的。

三、染⾊⽅法及步骤1．⼈⼯苏⽊素，伊红染⾊法（HE法）(1)切⽚浸⼊⼆甲苯中5-10min；(2)切⽚浸⼊⼆甲苯中5-10min；(3)100%酒精1min。

甲状腺细针穿刺细胞学涂片的巴氏染色分析目的讨论甲状腺细针穿刺细胞学检查（fine needle aspiration cytology，FNAC）的涂片制作及巴氏染色过程，出现的影响涂片质量的因素。

方法对1742例甲状腺FNA涂片，采用巴氏染色法染色后镜下观察结果。

结果镜下可观察到甲状腺滤泡上皮细胞核和胞浆均呈蓝绿色，易区分。

细胞核毛玻璃结构，核沟、核内包涵体等可见。

结论甲状腺FNA涂片涂片后一定要及时固定，否则易肿胀变形，不易诊断。

染色时需准确把握苏木素染色时间，盐酸酒精分化时间，才能使染色后胞核与胞浆着色分明，易区分。

涂片固定时间过久、盐酸酒精浓度过低，穿刺时出血较多、涂片过厚等都会影响红细胞着色。

标签：甲状腺FNA；细胞学涂片；巴氏染色甲状腺FNA，是一种安全、快速的检查手段，对于患者的创伤小，且对甲状腺疾病性质的诊断准确性高[1-2]。

经超声引导下甲状腺细针穿刺（US-FNA），还可对微小结节进行穿刺[3]，有助于病变的早期发现、合理治疗。

而对甲状腺疾病的明确诊断需要依靠病理学，因此，提高甲状腺FNA涂片的质量，对于甲状腺疾病性质的诊断至关重要。

1资料与方法1.1一般资料以2016年本科室甲状腺FNA行细胞学检查的病例为研究对象，共有1742例被纳入本研究。

纳入标准：经B超检查需进行甲状腺FNA病例；患者及家属同意或要求行甲状腺FNA细胞学检查。

男性408例，女性1334例；年龄14～84岁。

1.2 方法1.2.1 甲状腺FNA细针穿刺涂片经B超引导下进行甲状腺结节细针穿刺，对穿刺出的组织进行抹片。

组织尽量涂抹均匀，然后将涂片放入95%酒精中固定30 min。

1.2.2 巴氏染色先将涂片浸入75%的酒精溶液1 s左右，水洗后用苏木素染液染色3～5 min，再放入1.5%的盐酸酒精溶液中5～10 s，经水洗，再依次过75%、95%的酒精溶液约10 s，然后放入EA/OG溶液中3～5 min，染色后依次过95%的酒精溶液和无水酒精，最后浸入二甲苯溶液，湿封后镜检。