新版GMP与快速微生物检测鉴定技术

新版GMP 认证检查缺陷现场检查时企业仅对202202202 批次20%的人血白蛋白进行了持续稳定考察留样，其他制品没有持续稳定考察留样。

企业稍后重新制定了稳定性考察方案，其他批次人血白蛋白及其他制品拟开展持续稳定性考察。

公司对原料、中间品和成品稳定性考察欠规范，如冻干静注人免疫球蛋白(pH4)原液、半成品的储存期确定，企业以三批成品合格为标准，以此来判断所确认原液、半成品在储存期内是否合格；新生产区试生产成品的稳定性留样方案不合理，仅选择性留样部份产品。

依据：第二百三十六条某些情况下，持续稳定性考察中应当额外增加批次数，如重大变更或者生产和包装有重大偏差的药品应当列入稳定性考察。

此外，重新加工、返工或者回收的批次，也应当考虑列入考察，除非已经过验证和稳定性考察。

物料取样间和无菌、微生物限度检查所使用的消毒剂未除菌过滤处理，无菌检查空调系统每次使用后停机，不易保持空气清洁度。

依据：第十二条质量控制的基本要求：(一)应当配备适当的设施、设备、仪器和经过培训的人员，有效、可靠地完成所有质量控制的相关活动；(二)应当有批准的操作规程，用于原辅料、包装材料、中间产品、待包装产品和成品的取样、检查、检验以及产品的稳定性考察，必要时进行环境监测，以确保符合本规范的要求；(三)由经授权的人员按照规定的方法对原辅料、包装材料、中间产品、待包装产品和成品取样；(四)检验方法应当经过验证或者确认；(五)取样、检查、检验应当有记录，偏差应当经过调查并记录；(六)物料、中间产品、待包装产品和成品必须按照质量标准进行检查和检验，并有记录；(七) 物料和最终包装的成品应当有足够的留样，以备必要的检查或者检验；除最终包装容器过大的成品外，成品的留样包装应当与最终包装相同。

轧盖、洗瓶等岗位人员对本岗位的关键控制参数不清晰。

依据：第二十七条与药品生产、质量有关的所有人员都应当经过培训，培训的内容应当与岗位的要求相适应。

除进行本规范理论和实践的培训外，还应当有相关法规、相应岗位的职责、技能的培训，并定期评估培训的实际效果。

新版GMP“确认与验证”条款解读2为确认与产品直接接触设备的清洁操作规程的有效性，新版GMP 要求对清洁方法(即清洁规程)进行验证，明确了清洁方法验证的目的(有效防止污染和交叉污染)、要点和技术要求(见第一百四十三条)。

设备污染和交叉污染主要源于理化污染(如活性物质残留、清洁剂残留、外来物质等)和生物污染(如微生物或内毒素等)。

进行清洁验证前应当合理地确定活性物质残留、清洁剂和生物污染的限度标准，要使用经验证的、足够灵敏的分析方法进行检测。

通过风险评估确定验证的产品以及设备的清洗最差条件，重点确认最难清洁的部位和产品的清洁效果。

基于对待清洁设备较长时间放置后可能加大清洁难度(待清洁物质附着力增加)，以及已清洁设备较长时间放置被生微生物污染的风险增加的考虑，应当通过验证确定已清洁设备保留时间(清洁后至再使用之间的间隔时间)和待清洁设备保留时间(设备使用后至清洁之间的间隔时间)。

清洁验证的运行次数和工艺验证类似，国内外GMP要求并未强制限定为必须进行连续三次。

我国新版GMP《确认与验证》附录明确指出：清洁验证次数应根据风险评估确定，但通常要进行至少连续三次成功的清洁程序并符合制订的可接受标准，方可认定该方法通过了验证。

另外，即使在生产过程中采用了经过验证的操作规程进行设备清洁，必要时，还应当对与物料直接接触的设备表面的残留物进行检测(新版GMP-第一百九十七条-㈥)，对设备的清洁效果进行持续确认。

对于处在研发阶段的药物(如临床试验样品)或不经常生产的产品，可采用每批生产后确认清洁效果的方式替代清洁验证(新修订的欧盟《确认与验证》附录采用了“清洁确证”这样一个新概念)。

对于无法采用清洁验证的方式来评价设备清洁效果，则产品应当采用专用设备生产。

正如美国《清洁工艺验证检查指南》所指出的，围绕着“为什么要做清洗操作?怎么做?清洗的方法是什么?清洗到什么程度?怎么判断已经清洗干净?清洗的检测方法是什么?用什么方法判断已清洗好了?取样位置是什么?什么时间取样?取样的频率和方法?”这几个核心问题开展清洁验证工作，也就把握住了清洁验证的关键。

A BCD高鹃 新版GMP 与快速微生物检测鉴定技术新版GMP 与快速微生物检测鉴定技术3.快速鉴定技术4.法规与药典要求第一部分引言无菌药品生产要求的大幅度提高新版GMP 无菌药品附录以上各级别空气悬浮粒子的标准规定如下表：洁净度级别悬浮粒子最大允许数静态≥0.5μm≥5.0μm A 级(1)352020B 级352029C 级3520002900D 级352000029000洁净级别浮游菌cfu/m 3沉降菌（φ90mm ）cfu /4小时表面微生物接触cfu /碟（φ55m m ）5指手套cfu /手套A 级<1<1<1<1B 级10555C 级1005025－D 级20010050－洁净区微生物监测的动态标准工业工程技术要求隔离装置隔离器Rabs RTP 公用工程水系统空调系统氮气压缩空气真空传送系统动态环境监测系统粒子监测沉降菌浮游菌动态环境监测带来的新课题 １、大量数据的管理和分析 ２、面对细菌培养阳性结果发生争执 是生产管理方面的问题？ 是QC 的OOS ？３、细菌培养阳性结果的后续处理明确what where who how革兰氏染色无法判定无菌药品生产要求的大幅度提高未污染？无菌药品生产要求的大幅度提高无菌药品附录：产品的无菌或其它质量特性绝不能只依赖于任何形式的最终处理或成品检验（包括无菌检查）。

微生物检测技术的飞跃发展快速检测技术（不需进行培养PAT ）快速鉴定技术（属种株）为无菌药品生产和质量管理提供了先进技术手段及时发现污染，追溯污染源 案例：爱吃桔子的员工一直难以去除的革兰氏阳性短棒状菌燃烧麦秸杆与无菌药品生产车间A BC D第二部分快速检测技术电阻抗检测•通过监测电导率或电极表面电荷数量，判定微生物生长情况培养过程中的快速检测技术培养过程中的快速检测技术二氧化碳监测•测定密闭容器中微生物液体培养时产生的二氧化碳含量，判定微生物生长情况生物发光检测技•测定发光量–判断是否存在微生物–找出发光量与实际细胞数的相关性培养过程中的快速检测技术不需培养的快速检测技术通过对细胞染色和/或标记进行微生物检测和定量，不需细胞培养流式细胞仪•被标记的细胞逐一通过流体腔时，细胞经激光束照射，发出荧光和光散射信号，依此计算细胞数•利用荧光染料和特异微生物探针，如抗体、rRNA 、肽核酸（PNA ），实现计数和目标有机物的同时检测不需培养的快速检测技术 流式细胞仪•系统的标记和检测过程能在15分钟内完成•样品量很少，不超过1 mL 分钟内完成活细胞的标在数小时内利用抗体和核酸探针完成特定不需培养的快速检测技术环境动态监测•当空气样品中的粒子通过系统时，粒子计数器将检测并定量记录粒径范围0.5-20µm 的粒子数•紫外激光器横切粒子束，含NADH 和核黄素的微生物会产生荧光，实现微生物的动态监测•能去除太小/太大粒子发荧光的假阳性结果，如烟雾/花粉快速鉴定技术快速鉴定技术 梅里埃API 系统 API 鉴定系统涵盖15个鉴定系列，约有1000种生化反应，目前已可鉴定超过750种的细菌。

gmp微生物检查要点GMP微生物检查要点GMP（Good Manufacturing Practice）是一种符合药品生产质量管理标准的规范，旨在确保药品的质量、安全和有效性。

在药品生产过程中，微生物检查是不可或缺的环节，它可以帮助制药企业及时发现和控制微生物污染，保证药品的质量。

以下是GMP微生物检查的要点。

1. 检测方法选择：根据药品类型和生产工艺的不同，选择适合的检测方法。

常用的微生物检测方法包括传统培养法、快速培养法、分子生物学方法等。

根据具体情况选择合适的方法，并确保该方法符合相关法规和规范的要求。

2. 样品采集：在进行微生物检查前，必须正确采集样品。

样品应该代表性，避免污染和损坏。

采集前应进行充分的准备工作，包括消毒工作台和手套、使用合适的采样容器等。

采集时应注意避免外界环境的污染。

3. 培养基选择：根据待检测的微生物种类选择合适的培养基。

常用的培养基有营养琼脂、选择性培养基和富营养培养基等。

培养基的选择要考虑微生物的生长要求和特性，以确保能够有效地检测到微生物的存在。

4. 培养条件：培养条件的设置是确保微生物能够在培养基上生长和繁殖的关键。

包括温度、湿度、光照等因素的控制。

根据待检测微生物的生长要求，设置合适的培养条件，并严格控制培养过程中的环境因素。

5. 培养时间：培养时间的长短直接影响到微生物检测的结果。

不同的微生物需要不同的培养时间才能够形成可见的菌落。

根据微生物的生长速度和特性，设定合适的培养时间，确保能够准确、可靠地检测到微生物的存在。

6. 微生物限度：微生物限度是指药品中能够接受的微生物污染水平。

根据药品的性质和用途，制定合理的微生物限度，并对待检样品进行定量检测。

同时，还要对不同微生物的限度要求有清晰的认识，确保检测结果符合相关标准和要求。

7. 检测设备和仪器：微生物检测需要使用一系列的设备和仪器，如培养箱、显微镜、菌落计数器等。

这些设备和仪器要在使用前进行校准和验证，确保其准确性和可靠性。

新版GMP验证培训资料2*绿色准用标签：说明本次校准结果符合规定要求，可在至下次校准日期前使用。

*红色禁止使用标签：校准结果有一项以上参数不符合规定或者因故障暂时停用。

*红绿限用标签：说明仪经确认虽有个别量程超出同意差范围，但不影响使用要求，按规定仅可在限定的范围内使用。

*准予使用标签：该仪表只进行安装前一次进行校准，准予使用。

在故障或者损坏使予以更换，更换前执行校准检查。

第九十四条不得使用未经校准、超过校准有效期、失准的衡器、量具、仪表与用于记录与操纵的设备、仪器。

*新增条款*根据计量管理基本原则，强调不得使用失效失准的设备仪器。

第九十五条在生产、包装、仓储过程中使用自动或者电子设备的，应当按照操作规程定期进行校准与检查，确保其操作功能正常。

校准与检查应当有相应的记录。

*新增条款*针对新增的自动或者电子设备提出了有关的管理要求。

-水是最广泛使用的物质/原辅料-用于生产、加工、配制、清洁与质量检验-具有特殊的化学性质-能溶解，汲取，吸附，悬浮各类化合物与污染物-在制药业，务必分级管理与使用-水是一经需要则立即使用*无法在使用前按批检验并放行，因此务必保证在其需要时既符合质量标准。

-关注点*微生物污染（生产、储存、配送）第九十六条制药用水应当适合其用途，并符合《中华人民共与国药典》的质量标准及要求。

制药用水至少应当使用饮用水。

*完善条款*根据98版规范第七十一条的有关内容修订时拆分为第九十六条、第一百条等二个条款进行编写。

*规范制药用水质量标准的基本原则，明确生产用水选择的根据为《中国药典》。

*98版第七十一条根据产品工艺规程选用工艺用水。

工艺用水应符合质量标准，并定期检测、检验有记录。

应根据验证结果，规定检验周期。

第九十七条水处理设备及设备及其输送系统的设计、安装、运行与保护应当确保制药用水达到设定的质量标准。

水处理设备的运行不得超出其设计能力。

*新增条款*将98版规范第三十四条的有关内容修订时拆分为九十七条、九十八条、九十九条、一百零一条等四个条款进行编写。

附件2确认与验证第一章范围第一条本附录适用于在药品生产质量管理过程中涉及的所有确认与验证活动。

第二章原则第二条企业应当确定需要进行的确认或验证工作，以证明有关操作的关键要素能够得到有效控制。

确认和验证的范围和程度应根据风险评估的结果确认。

确认与验证应当贯穿于产品生命周期的全过程。

第三章验证总计划第三条所有的确认与验证活动都应当事先计划。

确认与验证的关键要素都应在验证总计划或同类文件中详细说明。

第四条验证总计划应当至少包含以下信息：（一）确认与验证的基本原则；（二）确认与验证活动的组织机构及职责；（三）待确认或验证项目的概述；（四）确认或验证方案、报告的基本要求；（五）总体计划和日程安排；（六）在确认与验证中偏差处理和变更控制的管理；（七）保持持续验证状态的策略，包括必要的再确认和再验证；（八）所引用的文件、文献。

第五条对于大型和复杂的项目，可制订单独的项目验证总计划。

第四章文件第六条确认与验证方案应当经过审核和批准。

确认与验证方案应当详述关键要素和可接受标准。

第七条供应商或第三方提供验证服务的，企业应当对其提供的确认与验证的方案、数据或报告的适用性和符合性进行审核、批准。

第八条确认或验证活动结束后，应当及时汇总分析获得的数—10—据和结果，撰写确认或验证报告。

企业应当在报告中对确认与验证过程中出现的偏差进行评估，必要时进行彻底调查，并采取相应的纠正措施和预防措施；变更已批准的确认与验证方案，应当进行评估并采取相应的控制措施。

确认或验证报告应当经过书面审核、批准。

第九条当确认或验证分阶段进行时，只有当上一阶段的确认或验证报告得到批准，或者确认或验证活动符合预定目标并经批准后，方可进行下一阶段的确认或验证活动。

上一阶段的确认或验证活动中不能满足某项预先设定标准或偏差处理未完成，经评估对下一阶段的确认或验证活动无重大影响，企业可对上一阶段的确认或验证活动进行有条件的批准。

第十条当验证结果不符合预先设定的可接受标准时，应当进行记录并分析原因。