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超高效液相色谱串联三重四级杆质谱测定蜂蜜中甲硝唑残留作者：马晓年李文廷欧利华梁志坚段海波来源：《食品界》2017年第06期甲硝唑具有广谱抗厌氧菌和抗原虫的作用，主要用于预防和治疗厌氧菌引起的感染。
蜂蜜营养丰富，是人类重要的滋补食品，由于诸多原因，蜂蜜中可能存在甲硝唑的残留，给消费者带来潜在的危害。
目前，国内外采用的检测甲硝唑残留的方法主要有液相色谱法、气相色谱法、气质联用和液质联用。
本方法采用超高效液相色谱串联三重四极杆质谱法对蜂蜜中的甲硝唑残留进行测定，取得满意结果。
实验部分试剂与仪器。
液相色谱-串联质谱仪，配电喷雾离子源和大气压化学源（美国AB公司）；BEH C18柱（Waters公司）；实验用水为二次蒸馏水；甲醇、乙腈、乙酸乙酯为色谱纯，浓氨水、浓盐酸为分析纯；甲硝唑标准物质（Dr.Ehrenstorfer）；甲硝唑-D4同位素内标（Dr.Ehrenstorfer）；蜂蜜（超市）。
分析条件。
色谱柱：Waters BEH C18柱（1.7µm，2.1mm×100mm）；流动相：0.05%氨水：乙腈梯度洗脱；流速0.4mL/min；进样量：20µL。
扫描方式：正离子扫描；检测方式：多反应检测（MRM）；离子化电压：5500V；喷雾器压力：40psi；气帘气压力：35psi；辅助气流速：40µL/min；离子源温度：450℃；去簇电压（DP）：52V。
样品处理。
（1）样品提取。
称取蜂蜜5.00g于50mL离心管中，分别加入100µL 20ng/mL D4-甲硝唑应用液，加水10mL，混匀溶解，再加入10 mL乙酸乙酯，涡旋提取2min，1000rpm离心2min，吸取上层乙酸乙酯相5mL入10mL试管，50℃氮气吹干后，加入0.1mL 甲醇溶解，再加入1.9mL 40mmol/L盐酸溶液，超声溶解1min，转入2mL离心管，12000rpm 离心2min，上清液待净化。
高效液相色谱-串联质谱法同时测定蜂蜜中甲硝唑、二甲硝咪唑和洛硝哒唑残留郭少飞;王鹏;荆涛;林雁飞;罗静;彭彦【期刊名称】《华中科技大学学报（医学版）》【年(卷),期】2008(37)6【摘要】目的采用高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)技术,建立同时检测蜂蜜中甲硝唑(MNZ)、二甲硝咪唑(DMZ)和洛硝哒唑(RNZ)残留量的方法 .方法样品加入水均质后,采用乙腈-氯仿-异丙醇(3:57:40,V/V/V)的混合液提取,亲水/亲油平衡(HLB)固相萃取柱净化.高效液相色谱-串联质谱-电喷雾正离子多反应监测方式(MRM)进行测定.结果 3种药物在检测范围内线性良好,相关系数r均大于0.999.在0.2～100 ng/g范围内,加样回收率在90.78%～101.61%之间,相对标准偏差均小于9.4%.结论此方法具有灵敏、准确、简便、快速等优点,适用于蜂蜜中硝基咪唑类药物残留的同时确证检测.【总页数】4页(P830-833)【作者】郭少飞;王鹏;荆涛;林雁飞;罗静;彭彦【作者单位】湖北省出入境检验检疫局,武汉,430022;湖北省出入境检验检疫局,武汉,430022;华中科技大学同济医学院,公共卫生学院,武汉,430030;湖北省出入境检验检疫局,武汉,430022;湖北省出入境检验检疫局,武汉,430022;华中科技大学同济医学院,药学院,武汉,430030【正文语种】中文【中图分类】R917【相关文献】1.液相色谱-串联质谱法快速同时测定婴幼儿配方乳粉中氯霉素、三聚氰胺、甲硝唑和洛硝达唑 [J], 王浩;杨红梅;郭启雷;刘艳琴;史海良;田艳玲2.超高效液相色谱一串联质谱法测定蜂蜜中氯霉素和甲硝唑残留 [J], 高何刚3.超高效液相色谱-串联质谱法测定鸡肉中羟基甲硝唑和羟甲基甲硝咪唑残留量 [J], 李垚辛4.超高效液相色谱-串联质谱法对蜂蜜中氯霉素和甲硝唑残留的测定分析 [J], 梁明5.超高效液相色谱-串联质谱法对蜂蜜中氯霉素和甲硝唑残留的测定分析 [J], 梁明因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
－ ２７ －超高效液相色谱-串联质谱法测定蜂蜜中克百威及其代谢物残留量何亚斌 施 雅 楼 飞 马颖清 （农业部食品质量监督检验测试中心，上海 ２００４３６）克百威是一种广谱内吸杀虫杀螨杀线虫剂，可用于多种作物防治土壤内及地面上的３００多种害虫和线虫［１，２］。
克百威对胆碱酯酶抑制的不可逆性决定了其对人、畜、禽、鱼等的毒性极高［３～５］。
目前，克百威在种植业中已禁止使用，但在实际生产种植过程中，从业者违规使用克百威的现象还普遍存在。
克百威虽属高毒农药，但对蜜蜂是无毒安全的［２，３］，蜜蜂在传粉过程中沾染、吸附、食入大量克百威，其本身对克百威的免疫造成了克百威在蜜蜂体内高度的富集，从而导致在其主要蜂产品蜂蜜中含有克百威残留［６～８］。
克百威是含氮的氨基甲酸醋类杀虫剂，在酸性环境中稳定， 但在碱性介质下分解较快，在室温２３ ℃以上也能自行分解，可降解为３－羟基克百威、３－酮基克百威，最后分别降解成相应的酚类［９］，故在中毒案件的生物检材中，常在检出原体的同时也检见其分解产物，或在中毒时间较长或送检不及时的生物检材中，检出原体极少或根本未见原体存在，仅检见其分解产物。
因此，测定克百威的残留量，除测定克百威本体外，还需测定其代谢物３－羟基克百威、３－酮基克百威、呋喃酚。
目前报道的关于测定克百威残留量方法很多［２，８，１０～１３］，但关于同时测定蜂蜜中克百威及其多种代谢物的方法较少。
本文采用超高效液相色谱－串联质谱联用（ＵＰＬＣ－ＭＳ－ＭＳ），建立了同时定性定量分析测定蜂蜜中克百威及其代谢物３－羟基克百威、３－酮基克百威、呋喃酚残留量的方法。
１ 材料与方法１．１ 材料与试剂蜂蜜（市场购买）；乙腈、甲酸（均为色谱纯，美国Ｓｉｇｍａ公司）；氯化钠（分析纯，国药集团化学试剂有限公司）；标准品：克百威及其代谢物３－羟基克百威、３－酮基克百威、呋喃酚（德国Ｄｒ． Ｅｈｒｅｎｓｔｏｒｆｅｒ公司）。
Ｏａｓｉｓ ＨＬＢ固相萃取柱（６０ ｍｇ／３ｍＬ，美国沃特世公司）。
QuEChERS-超高效液相串联质谱法同时测定蜂蜜中硝基咪唑类药物残留作者：刘兰霞解迎双寇宗红王波来源：《中国食品》2024年第06期为了治疗和预防孢子虫病在蜜蜂群体间的传播，降低蜜蜂的死亡率，硝基咪唑类药物曾被广泛应用于蜜蜂养殖过程中。
但硝基咪唑类药物的违用、滥用和误用现象导致蜜蜂体内产生药物残留，并以蜂蜜为媒介进入人体，对人体造成致癌、致畸、致突变作用和遗传毒性损害，因此各国已相继禁止硝基咪唑类药物在动物源性食品中的使用。
目前，检测硝基咪唑类药物残留的方法主要有气相色谱质谱法、液相色谱法等。
本研究建立了QuEChERS-超高效液相串联质谱法，以检测蜂蜜中多种硝基咪唑类药物的残留，对维护食品安全、保障消费者身体健康具有重要意义。
一、仪器与方法1.仪器与设备。
高效液相色谱仪，美国沃特世公司；多管涡旋振荡器，深圳逗点生物技术有限公司；低温冷冻高速离心机，德国Sigma公司。
2.试剂与材料。
甲醇、乙腈、甲酸、氨水（色谱纯），德国默克公司；丙基乙二胺（PSA）粉末、十八烷基键合硅胶（C18）粉末、石墨化炭黑（GCB）粉末，美国安捷伦公司；无水硫酸镁、无水氯化钠，国药集团化学试剂有限公司；超纯水，本实验室纯水仪制备；32种硝基咪唑类化合物（纯度＞99%），德国Dr.Ehrenstorfer公司；蜂蜜，购自当地农贸市场或超市，于-20℃冷冻保存，待用。
3.标准溶液配置。
（1）标准储备液（浓度100mg/L）。
精密称取32种硝基咪唑类化合物0.01g，用甲醇溶解后，定容至100mL容量瓶内，配制成质量浓度为100mg/L的单标准储备溶液，置于-20℃冰箱中保存6个月。
（2）混合标准工作液（浓度1mg/L）。
精密量取浓度为100mg/L的上述标准溶液100μL 于100mL容量瓶中，用甲醇-水（8∶2）定容，于4℃保存。
4.样品前处理。
（1）提取。
准确称取5.00g（精确至0.01g）蜂蜜样品于50mL具塞离心管中，加入5mL水，涡旋5min，使其充分混匀。
2010年6月Vol.28No.6June 2010Chinese Journal of Chromatography596~600研究论文DOI:10.3724/SP.J.1123.2010.00596*通讯联系人:刘永明,研究员,主要从事食品检测技术研究.Tel:(0335)5308698,E mail:qhd ciqlym @yaho .基金项目:国家质量监督检验检疫总局国家标准制定项目.收稿日期:2009 12 19液相色谱 串联质谱法快速测定蜂蜜中3种硝基咪唑类药物残留刘永明*, 曹彦忠, 李 金, 吴艳萍, 张进杰, 李学民, 葛 娜(秦皇岛出入境检验检疫局,河北秦皇岛066004)摘要:建立了液相色谱 串联质谱(LC MS/MS)快速测定蜂蜜中甲硝唑、洛硝哒唑和二甲硝咪唑3种硝基咪唑类药物残留的分析方法。
蜂蜜样品用水溶解后,直接上样至O asis HLB 固相萃取柱净化,依次用水和甲醇 水溶液(1 9,v/v)淋洗,用乙酸乙酯洗脱。
洗脱液经浓缩、溶解、过滤后进行LC MS/MS 检测,外标法定量。
在添加水平为0 05~2 0 g/kg 时,平均添加回收率为76 6%~89 7%,相对标准偏差(n =8)为5 2%~9 9%。
甲硝唑的检出限为0 1 g/kg,洛硝哒唑、二甲硝咪唑的检出限均为0 2 g/kg 。
应用所建立的方法对出口蜂蜜样品进行了测定,结果表明该方法操作简单、快速,结果准确、可靠,灵敏度和准确度满足现在日本和欧盟对蜂蜜中3种硝基咪唑类药物残留量的检测要求。
关键词:液相色谱 串联质谱法;甲硝唑;洛硝哒唑;二甲硝咪唑;蜂蜜中图分类号:O 658 文献标识码:A 文章编号:1000 8713(2010)06 0596 05Rapid de te rmination of 3nitromidazole residue s in honeyusing liquid chromatography tandem mass spe ctrome tryLIU Yongming *,CAO Yanzhong,LI Jin,WU Yanping,ZHANG Jinjie,LI Xuemin,GE Na(Qinhu angdao Ent ry Exit In spection and Qua r antine Bu reau ,Qinhuangda o 066004,China )Abstract :A method was developed for the rapid determination of 3nitromidazole residues in hon ey,including metronidazole,ronidazole and dimetridazole,using liquid chromatography tandem mass spectrometry (LC MS/MS).T he honey sample was dissolved in water,and the solution was cleaned up with an O asis HLB cartridge.The cartridge was washed with water and methanol water solution (1 9,v/v)in turn,and eluted with ethyl acetate.The solution was concentrated and then analyzed by LC MS/MS.External calibration was used for quantitative determination.T he recov eries and relative standard deviations (n =8)were from 76 6%to 89 7%and 5 2%to 9 9%,at the spiked levels of 0 05-2 0 g/kg,respectively.The limits of detection were 0 1 g/kg for metronidazole,and 0 2 g/kg for ronidazole and dimetridazole.The method was successfully ap plied for the inspection of exported honey.With simple and fast sample preparation,the method is sensitive and specific for the determination.T he sensitivity and accuracy of the method meet the requirements of the inspection for the 3nitromidazole residues in honey in Japan and European U nion.Ke y words :liquid chromatography tandem mass spectrometry (LC MS/MS);metronidazole;ronidazole;dimetridazole;honey硝基咪唑类药物主要包括甲硝唑(metron idazole,MNZ,CAS:443 48 1)、洛硝哒唑(ronidazole,RNZ,CAS:7681 76 7)和二甲硝咪唑(dimetridazole,DMZ,CAS:551 92 8)。
高效液相色谱-串联质谱联用测定蜂王浆中的三种硝基咪唑类残留丁涛;刘飞;徐锦忠;沈崇钰;蒋原;陈惠兰;吴斌;赵增运;李公海;张婧【期刊名称】《色谱》【年(卷),期】2006(24)4【摘要】建立了高效液相色谱-串联质谱联用测定蜂王浆中甲硝唑(MTZ)、二甲硝唑(DMZ)和洛硝哒唑3(RNZ)种硝基咪唑类残留的方法.使用氢氧化钠溶液溶解样品后,以乙酸乙酯液液萃取提取蜂王浆样品中的硝基咪唑类残留物.该法简便快捷,适合大批量样品处理.采用氘代二甲硝唑作为内标和利用高选择性反应监测(H-RSM)技术,降低了基质干扰,增加了定量的准确性.实验结果表明DMZ检测下限可以达到1.0 μg/kg,MTZ和RNZ检测下限可以达到0.5 μg/kg(S/N大于5);DMZ定量下限可以达到2.0 μg/kg,MTZ和RNZ定量下限可以达到1.0 μg/kg(S/N大于10).线性范围为2.0～200 μg/L,添加回收率为96.6% ～110.6%(内标校正),相对标准偏差(RSD)为2.1% ～7.4% .【总页数】4页(P331-334)【作者】丁涛;刘飞;徐锦忠;沈崇钰;蒋原;陈惠兰;吴斌;赵增运;李公海;张婧【作者单位】江苏出入境检验检疫局动植物与食品检测中心,国家蜂产品基准实验室,南京,210001;热电(上海)公司,上海,201206;江苏出入境检验检疫局动植物与食品检测中心,国家蜂产品基准实验室,南京,210001;江苏出入境检验检疫局动植物与食品检测中心,国家蜂产品基准实验室,南京,210001;江苏出入境检验检疫局动植物与食品检测中心,国家蜂产品基准实验室,南京,210001;江苏出入境检验检疫局动植物与食品检测中心,国家蜂产品基准实验室,南京,210001;江苏出入境检验检疫局动植物与食品检测中心,国家蜂产品基准实验室,南京,210001;江苏出入境检验检疫局动植物与食品检测中心,国家蜂产品基准实验室,南京,210001;江苏出入境检验检疫局动植物与食品检测中心,国家蜂产品基准实验室,南京,210001;江苏出入境检验检疫局动植物与食品检测中心,国家蜂产品基准实验室,南京,210001【正文语种】中文【中图分类】O658【相关文献】1.高效液相色谱-串联质谱法同时测定水产品中硝基呋喃和硝基咪唑类药物残留量[J], 万建春;王文君;占春瑞;郭平2.分散固相萃取净化/高效液相色谱-串联质谱法测定水产品中的5种硝基咪唑类药物残留 [J], 励炯;孙岚;王红青;邱红钰;康健3.高效液相色谱-串联质谱联用测定蜂蜜中3种硝基咪唑类残留 [J], 丁涛;徐锦忠;沈崇钰;蒋原;张婧;陈惠兰;吴斌;赵增运;肖霄;李公海;刘飞4.高效液相色谱-串联质谱联用测定蜂王浆中的四种硝基呋喃类药物的代谢物 [J], 丁涛;徐锦忠;沈崇钰;吴斌;陈惠兰;朱春;赵增运;蒋原;刘飞5.高效液相色谱-串联质谱联用测定蜂王浆中硝基咪唑类药物残留 [J], 周萍;李英华;徐权华;王立华;胡福良因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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图2a 氯霉素的离子对图
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图2b 氟苯尼考的离子对图
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图2c 甲砜霉素的离子对图
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图2d 氯霉素琥珀酸钠的离子对图
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图2e 氯霉素棕榈酸酯的离子对图%
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图2f 氯霉素-D5的离子对图
图2 各单一组分离子对图
2.3 回收率与精密度
选用不含本文5种酰胺醇类药物的阴性蜂蜜样品
个浓度水平的加标回收试验[7]，每个浓度的加标试验做6次平行。
取各药物的加标量、相应的回收率平均值，结果见表3。
表3 阴性蜂蜜样品中酰胺醇类药物的平均回收率和相对标准偏差表（n=6）
0.1 μg·kg-11.0 μg·kg-15.0 μg·kg-1
回收率/（%）RSD/（%）回收率/（%）RSD/（%）回收率/（%）RSD 101.05.199.85.997.6氟苯尼考92.33.791.24.192.0
甲砜霉素90.05.691.36.290.3
氯霉素琥珀酸钠89.85.488.62.487.6
氯霉素棕榈酸酯90.15.686.36.590.3。
蜂蜜中三甲氧苄氨嘧啶残留量的测定（二）5.1 液相色谱-串联四极杆质谱仪：配有电喷雾离子源。
5.2 分析天平：感量0.1mg和0.01g。
5.3 氮气浓缩仪。
5.4 液体混匀器。
5.5 固相萃取装置。
5.6 贮液器：50 mL。
5.7 真空泵：真空度应达到80 kPa。
5.8 pH计。
5.9 吹干管：10 mL。
6 试样的制备与保存6.1 试样的制备对无结晶的试验室样品，将其搅拌匀称。
对有结晶的样品，在密闭状况下，置于不超过60℃的水浴中温热，振荡，待样品所有溶化后搅匀，冷却至室温。
分出0.5kg作为试样。
制备好的试样置于样品瓶中，密封，并做上标志。
6.2 试样保存将试样于常温下保存。
7 测定步骤 7.1 提取称取2g试样，精确至0.01g。
置于150 mL三角瓶中，加入25 mL缓冲溶液(4.1.1)，于液体混匀器(5.4)上迅速混匀1 min，使试样彻低溶解。
7.2 净化将塞有玻璃棉的玻璃贮液器(5.6)连到Oasis HLB固相萃取柱(4.17)上，把样液倒入玻璃贮液器中，调整流速小于3 mL/min，使样液通过Oasis HLB固相萃取柱，待样液彻低流出后，依次用5 mL水和5 mL淋洗液(4.10)洗柱，弃去所有流出液。
减压抽干20 min，然后用5 mL洗脱，收集洗脱液于10 mL吹干管中。
用氮气浓缩仪于50℃吹干。
精确加入1.0 mL流淌相(4.12)溶解残渣，过0.2 um滤膜后，供液相色谱-串联质谱仪测定。
按上述操作步骤，制备用于配制系列基质标准工作溶液的空白样品提取液。
7.3 测定条件 7.3.1 液相色谱参考条件 a)色谱柱：Atlantis C18, 3um, 150 mm×2.1mm(丙径)或相当者； b)流淌相：乙腈-0.1％溶液(7+13); c)流速：0.2mL/min; d)柱温:30℃； e)进样量：20 uL。
7.3.2 质谱参考条件 a)离子源：电喷雾离子源； b)扫描方式：正离子扫描；c)检测方式：多反应监测； d)电喷雾电压：5500 V; e)雾化气压力：0.076 MPa; f)气帘气压力：0.069 MPa; g)辅助气流速：6 L/min; h)离子源温度：450℃； i)定性离子对、定量离子对、碰撞气能量和去簇电压见表1。
