AMAMFSJp0015维生素ADCE 高效液相色谱法 定量
- 格式:doc
- 大小:48.00 KB
- 文档页数:6
维生素测量方法
维生素的测量方法主要包括以下几种:
1. 高效液相色谱法(HPLC):这是一种常用的维生素测量方法,具有高效、快速、灵敏度高、重复性好等优点,适用于多种维生素的测定。
2. 微生物法:根据维生素为细菌生长所必需的原理,以细菌繁殖程度或代谢产物定量该维生素含量,适用于检测多种衍生物的总和。
微生物法灵敏度高,结果准确,但整个实验周期长,批次检测结果重复性差,检测结果误差大。
3. 分光光度法:通过测定维生素在特定波长下的吸光度来测定其含量。
这种方法具有操作简便、快速、成本低等优点,但灵敏度较低,容易受到其他物质的干扰。
4. 荧光法:利用某些维生素在激发光照射下能发出荧光的特性来测定其含量。
这种方法灵敏度高,选择性好,但需要使用昂贵的荧光计。
5. 电化学法:通过测定维生素在电极上的氧化还原电位来测定其含量。
这种方法具有灵敏度高、选择性好等优点,但需要使用专门的电化学仪器。
需要注意的是,不同的维生素测量方法各有优缺点,应根据具体的样品类型、测量要求和实验室条件选择合适的方法。
同时,在进行维生素测量时,还需要注意避免干扰物质的影响,以确保结果的准确性。
液相色谱法测定乳品中维生素A、 D、 E含量吴少明【摘要】A new method was established for determination vitamin A, D, E from dairy products by ultra-high pressure liquid chromatography ( UPLC ) technology. Sample was saponificated under alkaline conditions, and then by liquid-liquid extraction, dehydrated and concentrated to nearly dry, the residue was dissolved in methanol, flitted and analysis. Limit of detection (S/N=3) and limit of quantization of vitamin A, D, E were 0. 2~10 μg/100 g. There was an excellent linear correlation (r2>0. 999) of vitamin A, D, E. When infant formula powder was spiked with vitamin A, D, E at three levels (n=6), the average recoveries were 94. 0% ~99. 1%, and relative standard deviation (RSD) was 2. 1% ~6. 1%, respectively. The established method is simple, fast high sensitivity, good reproducibility. The method can be adapted to detection vitamin A, D, E from dairy products.%采用超高压液相色谱技术,建立了乳品中维生素 A、 D、 E的测定方法。
高效液相色谱法同时测维生素a和维生素d的原理高效液相色谱法(High Performance Liquid Chromatography, HPLC)是一种分离技术,常用于分析和测定复杂的样品中目标化合物的含量。
在测量维生素A和维生素D时,HPLC可以提供高效、准确和灵敏的分析结果。
HPLC的基本原理是将一种混合物分离成为其组成部分。
它涉及到一个流动相(溶剂)和一个固定相(填充物)。
样品在流动相中通过固定相,根据不同化学性质的相互作用以及在两者之间的亲和力选择性地分离出来。
在测量维生素A和维生素D时,下面是HPLC的基本步骤:1.样品制备:对于维生素A和维生素D的测量,样品通常是食品、血液、营养补充剂等。
样品需要进行前处理步骤,如提取、稀释和过滤,以获得可测量的分析样品。
2.色谱条件设置:选择适当的色谱柱和填料,以确保目标化合物的高效分离。
维生素A和维生素D的分子结构不同,因此可能需要使用不同的填料和溶剂体系。
3.流动相选择:选择合适的溶剂系统以实现维生素A和维生素D的分离。
流动相通常是有机溶剂和缓冲溶液的混合物。
溶剂的选择应考虑到色谱柱类型、填料性质和化合物的亲和力。
4.柱温和流速控制:控制色谱柱的温度和流速以优化分析条件。
柱温度可以影响化合物的分离性能,而流速可以影响分析时间和色谱峰形。
5.峰检测:使用适当的检测器检测样品中维生素A和维生素D的峰。
常见的检测器包括紫外-可见吸收光谱仪(UV-VIS)、荧光检测器和质谱仪。
检测器的选择应根据目标化合物的特性和所需的灵敏度进行。
6.标准曲线与定量:根据一系列已知浓度的标准物质制备标准曲线,并根据样品中的峰面积与标准曲线进行定量。
通过比较样品峰的面积和标准曲线上对应峰的面积,可以确定维生素A和维生素D的浓度。
7.数据分析与结果解释:根据定量结果进行数据分析和结果解释。
可以计算样品中维生素A和维生素D的浓度,并进行统计比较或评估。
总结起来,HPLC同时测维生素A和维生素D的原理是通过将样品分离并进行检测来确定目标化合物的含量。
高效液相色谱法测定阿司匹林肠溶片中阿司匹林的含量-药学论文-基础医学论文-医学论文——文章均为WORD文档,下载后可直接编辑使用亦可打印——阿司匹林肠溶片为非甾体类抗炎药,临床可用于抗血栓,也可用于治疗不稳定性心绞痛,是《国家基本药物目录》列入的品种。
本文采用高效液相色谱法测定阿司匹林肠溶片中阿司匹林的含量,该方法简单,快速,重现性好,回收率高,可用于该制剂的质量控制。
1 仪器与试药1.1 仪器:大连依利特P230 型高效液相色谱仪;UV230+紫外可见检测器;手动进样器;超声仪(型号KQ5200E,功率200W,频率40KHz);电子天平(赛多利斯科学仪器有限公司,0.0001g)。
1.2 试药:阿司匹林对照品(中国食品药品检定研究院,批号:100113);阿司匹林肠溶片(亚宝药业太原制药有限公司,批号:131210;石家庄康力药业有限公司,批号:121037;神威药业集团有限公司,批号:1306072),甲醇为色谱纯,水为超纯水,其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果2.1 色谱条件:色谱柱为Hypersil ODS2 柱(250mm4.6mm,5m);流动相:甲醇∶0.5%乙酸溶液(37∶63);流速:0.8mlmin-1;柱温:25∶;检测波长:267nm;理论板数按阿司匹林计不得少于3000。
2.2 溶液的制备:对照品溶液的制备:精密称取一定量阿司匹林对照品,置100ml 量瓶中,加1%醋酸甲醇溶解并定容制成100gml-1的对照品溶液。
供试品溶液的制备:取供试品(石家庄康力药业有限公司,批号:121037)约0.03g,精密称定,置100ml 量瓶中,用1%冰醋酸甲醇溶液溶解并定容,过滤,取续滤液,作为供试品溶液。
阴性样品溶液的制备:按处方比例取辅料制成空白制剂,按供试品溶液制备方法制成阴性样品溶液。
2.3 专属性实验:在2.1色谱条件下,分别吸取供试品溶液、对照品溶液、阴性样品溶液各10L,注入液相色谱仪,记录色谱图。
维生素a含量测定方法维生素A是一种重要的脂溶性维生素,对视力、免疫系统和细胞生长发育具有重要作用。
为了确定食物和补充剂中维生素A的含量,有几种常用的测定方法。
1. 高效液相色谱法(HPLC)高效液相色谱法是最常用的测定维生素A含量的方法之一。
该方法基于维生素A 的特定吸收波长和相对于其他物质的特异性。
首先,将样品经过预处理,如提取和净化,以去除干扰物质。
然后,将样品注入高效液相色谱仪中,并使用特定条件进行分析。
通过比较样品吸收峰的峰面积或峰高与标准曲线的峰面积或峰高,可以确定维生素A的含量。
2. 酶联免疫吸附法(ELISA)酶联免疫吸附法是一种通过酶标记的抗体与维生素A结合来测定其含量的方法。
该方法基于抗体与维生素A之间的特异性结合。
首先,在酶标板上涂布抗体,然后将待测样品加入到酶标板孔中,使样品中的维生素A与抗体结合。
接下来,加入辣根过氧化物酶标记的二抗,使其与样品中的维生素A结合。
最后,通过添加显色底物,观察反应底物的颜色变化,并通过比色计测定维生素A的浓度。
3. 紫外-可见光谱分析法紫外-可见光谱分析法是一种通过测定样品在不同波长下的吸光度来确定维生素A含量的方法。
该方法基于维生素A在特定波长下的吸收特性。
首先,将样品按照一定浓度稀释,并制备样品溶液。
然后,使用紫外-可见光谱仪测定样品在特定波长下的吸光度。
通过与标准曲线的比较,可以确定维生素A的含量。
4. 高效薄层层析法(HPTLC)高效薄层层析法是一种通过分离和定量分析样品中维生素A的含量的方法。
该方法基于维生素A在移动相和静止相之间的分配特性。
首先,将样品经过预处理,如提取和净化。
然后,将样品在预涂层玻璃板上添加,并使用特定的移动相进行分离。
接下来,使用紫外灯照射板检测维生素A在薄层板上的位置。
通过比较维生素A的Rf值(从出发点到样品经过的距离与移动相最前端到出发点的距离的比值)和标准曲线,可以确定维生素A的含量。
综上所述,通过高效液相色谱法、酶联免疫吸附法、紫外-可见光谱分析法和高效薄层层析法等方法,可以测定食物和补充剂中维生素A的含量。
维生素地高效液相色谱法地定量测定.适用范围本方法几乎适用于所有地食品中维生素地测定..原理概要.主要试剂和仪器.主要试剂无醛乙醇:参照维生素地测定中地该项;正己烷:光谱分析用;无水:将无水在℃地温度下加热后,在干燥器中放冷、密封保存;α,β,γ,δ生育酚(维生素):α,β,γ,δ生育酚(维生素)纯品;母育酚:母育酚纯品;生育酚同系物标准溶液:生育酚同系物(α,β,γ,δ生育酚)分别各准确称取,分别以正己烷溶解后,定容.分别各取其用正己烷定容,装入褐色具塞瓶中,用氮气排除其中地空气,密封,保存于冷暗处(可使用一个月);母育酚标准溶液:准确称取母育酚约,加正己烷溶解并定容.取其用正己烷定容,装入褐色具塞瓶中,用氮气排除其中地空气,密封,保存于冷暗处(可使用一个月)..仪器化用地烧瓶等容器:参照维生素地测定中地该项.效液相色谱仪:带有荧光检测器..过程简述.试验溶液地调制称取约含生育酚地试料于碱化烧瓶中,加入乙醇及地邻苯三酚乙醇溶液,再加入()溶液,连接回馏冷却器,在沸腾水浴中加热碱化.碱化后,快速冷却到室温后,加水,将其移至褐色分液漏斗中,分别用水和石油醚清洗碱化烧瓶,将洗液合并到分液漏斗中,振荡萃取,提取石油醚层.水层进一步用石油醚萃取次,合并石油醚层液,依次用水洗一次,再每次用水洗三次,进一步用水洗至酚酞指示液无色为止.在分液漏斗中分离掉水层后,提取石油醚层,加无水脱水,将石油醚层移至褐色烧瓶中.剩余地每次用石油醚清洗次,将洗液并入烧瓶中.将石油醚萃取液在水泵减压下()℃下振动地同时进行蒸馏,残留物用正己烷溶解,作为试验溶液..高效液相色谱条件色谱柱:正项色谱柱(. ×)移动相:正己烷:异丙醇()流速:检出器:荧光检测器(激发,发射).定量:在试验溶液中加入母育酚标准溶液(μ),取其μ注入高效液相色谱柱中分离测定,求出生育酚同系物地峰高(αδ)和母育酚地峰高(). .换算系数分别取生育酚各同系物标准溶液,加入母育酚标准溶液,取其μ注入高效液相色谱柱中按照前述液相色谱条件进行操作,求出生育酚同系物地峰高和母育酚地峰高,再从μ中这些物质地重量(μ)求出生育酚同系物对母育酚地换算系数(重量比峰高比)αδ..结果计算用下式计算试料中生育酚同系物地量(μ).试料为油脂将其作为试料地情况下,试料中生育酚同系物地量(μ)(μ)×(αδ) ×αδ. ×(试料量())从试料将油脂提取出后作为试料地情况下,试料中生育酚同系物地量(μ)(μ)×(αδ) ×αδ. ×(试料量()) ×()—试料中油脂含量地百分数..来源《卫生试验法·注解》版日本药学会编。
维生素高效液相色谱法地定量测定.适用范围本方法对大量地试料都能较简单、准确地进行食品中维生素地定量测定..原理概要.主要试剂和仪器.主要试剂醋酸钠溶液;高峰淀粉酶溶液:高峰淀粉酶用水溶解后,制成地溶液,注入过滤砂管中用通过液将混在高峰淀粉酶中地维生素吸附.使用时调制;盐酸溶液:用地盐酸溶液配制地.若有结晶析出,可加热使之溶解;过滤砂:将地过滤砂放入烧瓶中,加入倍量地热水,搅拌、静置,倒掉上清液.重复次操作直至上清夜通明为止.然后加入倍量地醋酸溶液同前一样操作进行清洗回,进一步用倍量地盐酸溶液在沸水浴中进行地搅拌处理,再用醋酸溶液洗次后,反复用水洗,直至在洗液中加入滴不变白浊为止.如此处理过地过滤砂或放在气密容器中地水中保存,或在℃下干燥后保存;蛋白质分解酶溶液:放线菌或细菌地地磷酸缓冲溶液(,);二苯酰硫胺素标准溶液:准确称取一定量地标准品,加适量地,加热溶解,调制成()μ溶液;盐酸乙醇溶液:中加乙醇后,以水定容至.铁氰化钾地氢氧化钠溶液:溶于水中,然后加入地铁氰化钾溶之.用时调制;维生素标准溶液:用保证纯度地维生素盐酸盐以地三氯醋酸溶解并配制成()溶液.该溶液与醋酸钠及地高峰淀粉酶溶液以地比例混合即为维生素标准溶液..仪器过滤砂管:硬质玻璃制作地吸附管地地底部(图)装有少量地玻璃棉,用水充满该底部.另取过滤砂()加水,轻轻振摇使吸附于过滤砂中气泡除去后,和水一同流入吸附管中.然后打开活栓,水流出后,使地醋酸和水分别以地流速流过吸附管进行调整.使用后将过滤砂地上部留有少量地水放置;效液相色谱仪:带有柱恒温箱,反应液混合用旋管(聚四氟乙烯制地×),混合旋管用恒温箱,送液泵及荧光检测器.1、试验溶液用玻璃匀浆器..过程简述.试验溶液地调制.一般试料:称取试料,放入含有地三氯乙酸地玻璃匀浆器中,进行均化.均化后地试料溶液用地三氯乙酸定容为,倒入高速离心机用地离心管中,进行约分钟地×离心.取其上清液μ于小试管中,加入地醋酸钠溶液μ(使~).再加入高峰淀粉酶溶液μ,充分搅拌后,在℃温度下放置~小时,作为试验溶液..高蛋白质试料:乳制品、肉类、豆制品等含较多,为了高效地提取,有必要用蛋白质分解酵素进行前处理.将干燥地试料进行粉碎至可通过筛孔程度,其他试料用均化器磨碎后准确称取约?,加入倍量地蛋白质分解酵素溶液,充分混合,加入滴甲苯后在℃恒温器内放置一夜.分解后加入和蛋白质分解酵素溶液同样量地地,在水浴上加热,热(?)时用折叠滤纸过滤,滤过地残留物用热水清洗,合并滤液.冷却后用地醋酸钠溶液调后加水定容至一定量,进行下面地酵素分解.酵素分解:将试验溶液加入约地酵素溶液,在(~)℃下保温~小时,或加~滴甲苯后在(~)℃恒温器内放置一夜.然后在沸水浴上温浸,冷却后用水定容至,进行离心或过滤取其上清液.吸附:将上述上清夜()地一定量(越含?μ地液量)慢慢地注入到过滤砂管中,以?地流速使其进行吸附.接着用地淋洗过滤砂管地部.水洗:吸附完了后,为了除去共存地盲荧光物质,将过滤砂管中注入沸水,以(~)地流速(约滴秒)清洗吸附层,直至洗液中无盲荧光物质为止.解吸:水洗完后,将过滤砂管下部地接收器换成容量瓶,,趁过滤砂管热时加入溶液,通过调节活栓以滴秒地流速滴下,接收解吸液.若溶出液达到过滤砂地上层时,再次用沸溶出液?注入之进行同样地操作,最后注入同液使解吸液总量为,关闭活栓.将容量瓶在室温下放置,冷却后用水定容为作为试验溶液..淀粉质试料:对米、小麦及以其为主体地制品进行如下前处理.将粉碎地试料过筛孔,准确称取,加水充分混合,加~滴醋酸调其~后,在沸水浴上边搅拌边加热.冷却后,加入蛋白质分解酵素溶液,充分混合,加入~滴甲苯后在℃恒温器内放置一夜(约小时),加浓度为地混合后,在沸水浴上边搅拌边加热.冷却后加水至,用折叠滤纸过滤,滤液进行同高蛋白质试料)地酵素分解后地操作..难溶性盐类强化试料:难溶性盐类从强化食品中提取出,一般用高浓度地进行加热处理,以盐地形式提取出而得到试验溶液.将粉碎或磨碎地试料称取约(相当于盐μ地量),添加,萘,(或,)二磺酸盐地情况下,还原酞盐地情况下,其他盐类与一般试料)同样,分别加入在沸水浴上加热进行提取.冷却后加入地醋酸钠溶液调进行同高蛋白质试料)地酵素分解后地操作.诱导体强化试料:)二苯酰磺胺素()强化试料地提取:准确称取一定量(通常以下地相当于盐μ地量)于地三角烧瓶中,加入·乙醇溶液充分摇匀,连接回馏冷却器,在℃以下地水浴中进行加温提取.冷却后,将其内容物进行分钟地×(约)离心,取其上清液于容量瓶中.残留物再用地·乙醇溶液加热提取、离心,合并上清液,以·乙醇溶液定容.碱化分解:取上述提取液于具塞试管中,加入溶液摇匀,准确放置(?)分钟后加入溶液,使其恢复为酸性溶液作为试验溶液.标准溶液进行同样地碱化分解后作为基准试液.) 苯酰磺胺二硫化物()强化试料:准确称取一定量(通常以下地相当于盐μ地量)于地三角烧瓶中,加入溶液,在沸水浴加热分钟.冷却后加半胱胺酸盐酸盐,用溶液调后,在℃下保温.再用溶液调,加高峰淀粉酶,在℃下保温小时.保温后以水定容,过滤或×(约)离心,取其上清液作为试验溶液..高效液相色谱条件色谱柱:维生素分离用〔,球状,μ(×)〕移动相:溶液流速:反应液:()·溶液(流速)检出器:荧光检出器(激发:,发射:)定量:试验溶液μ注入色谱柱中,从色谱柱分离溶出地维生素和由反应液送液泵送出地反应液自动混合,变成荧光物质(硫胺荧).测得该荧光物质通过荧光检出器得到地色谱峰高()和μ维生素标准溶液地色谱峰高()..结果计算:试料中维生素地量(μ)用下面公式求得.试料中维生素地量(μ)×() ××() ×(试料取样量())—维生素标准溶液地浓度().来源:《卫生试验法·注解》版日本药学会编。
高效液相色谱法测定药品的维生素A含量发表时间:2018-08-27T09:50:11.280Z 来源:《健康世界》2018年15期作者:陶骥文[导读] 分析高效液相色谱法(HPLC)测定维生素AD滴剂中维生素A含量的效果西安太极药业有限公司 710119摘要:目的分析高效液相色谱法(HPLC)测定维生素AD滴剂中维生素A含量的效果。
方法 HPLC测定维生素AD滴剂中维生素A含量的色谱条件:分析柱为 Kromasil 100-5C18(150mm×43mm,5µm);流动相为甲醇:酒精(80:20);流速为0.5mL/min;柱温30℃,检测器在270nm波长处检测维生素A。
结果维生素AD滴剂中维生素A分离良好,回归方程为A=775.98C+12.97(r=0.9997),线性范围为1.21-2.84mg/mL。
维生素A的平均回收率为99.94%,RSD为1.28%。
维生素A样品在6h内稳定性较好。
维生素A含量为(0.3969±0.05)mg/mL。
结论用HPLC法测定维生素AD滴剂中维生素A的含量方法简便、速度快、灵敏度和精确度高、重复性和稳定性好,值得推广应用。
关键词:维生素A;高效液相色谱法维生素A具有多种生理功能[1]:调节生长发育、提高免疫力、保护视力等,缺乏维生素A会导致发育迟缓、易感性提高、视力下降等疾病。
维生素AD滴剂是临床补充维生素A的常用方法,准确检测其中的维生素A含量对于把握药物的质量和疗效至关重要。
临床测定维生素常用的一种方法是高效液相色谱法(HPLC)[2]。
本研究采用HPLC法测定药品(维生素AD滴剂)中维生素A含量,效果颇佳,现将结果报道如下。
1 资料与方法1.1 仪器及试剂高效液相色谱仪(美国赛默飞公司)、紫外检测器(南京普阳科学仪器研究所);离心机(德国奥豪斯公司);旋涡器(美国SCI公司);维生素A标准品(北京神州科创化工技术研究所);乙醇(分析纯);甲醇(色谱纯);正己烷(分析纯);高纯氮气。
液相色谱法测定保健食品维生素AD片中维生素A和维生素D3的含量探讨摘要:目的:应用反相高效液相色谱法分离和测定保健食品维生素AD片中维生素A和维生素D3的含量。
方法:该供试品经皂化提取和浓缩后,以甲醇定容至10mL,经0.45μm滤过后采用INERTSIL.ODS-SP为色谱柱,甲醇为流动相,流速为1.0mL/min,检测波长分别为325和265nm。
结果:维生素A和维生素D3的线性范围分别为2.40~24.0μg/mL和0.8~4.0μg/mL,并与相应的峰面积呈线性关系,相关系数分别为r=0.9990和r =0.9990;测得维生素A和维生素D3的平均回收率分别为98.51%和98.34%。
结论:该法可快速、灵敏、准确测定维生素A和维生素D3含量,并应用于日常样品维生素AD片的分析。
关键词:反相高效液相法;维生素A;维生素D3引言;维生素A和维生素D3是机体维持正常代谢和机能必需的脂溶性维生素,严重缺乏可致夜盲症、佝偻病等。
脂溶性维生素于体内自身合成较难,即便能合成且供应量也不足,需从食物或其他途径中摄取,但该物质又易蓄积于体内造成过量中毒[1],故此,对物质应严格控制并定量检测。
目前,液相色谱仪法对脂溶性维生素的测定已被广泛的应用。
但在实验中发现其维生素A和维生素D3测定的方法过于繁琐、时间长和效率较慢。
因此,为了能快速、准确地测定保健食品中的维生素A和维生素D3含量,本文建立其分析方法,并应用于日常样品维生素AD 片的分析。
1 仪器与试剂高效液相色谱仪(日本岛津公司,配备LC-10ATVP型二元溶剂输送泵、SPD-10AVP型紫外-可见检测器、CTO-10ASVP型柱温箱、7725i型手动进样器和2010色谱工作站)、紫外分光光度计(型号TU-1810PC型)、全机械加码分析天平(TG328AS)和电子恒温水浴锅(型号HH·S12·Gr4Ⅱ) 。
维生素A标准品(中国食品药品检定研究院提供,批号100368-201502),标准贮备液(300μg/mL)的制备:精密称取维生素A标准品15mg,加甲醇溶解并定容至50mL棕色量瓶,摇匀,备用。
高效液相色谱法测定保健食品中维生素A含量的不确定度评定【摘要】目的:全面地分析高效液相色谱法测定保健食品中维生素A含量的不确定度来源和影响不确定度的因素。
方法:根据检测过程,建立数学模型,分析影响不确定度因素的来源,通过对不确定度进行量化分析,得出扩展不确定度。
结果:高效液相色谱法测定保健食品中维生素A含量的扩展不确定度为1.843%。
结论:高效液相色谱法测定保健食品中维生素A含量的不确定度主要由标准溶液浓度校正、标准溶液的配制和方法总重复性引入。
【关键词】高效液相色谱法;维生素A;数学模型;不确定度【Abstract】Objective:Comprehensive to analyze the sources and influencing factors of content uncertainty of Vitamin A in health food by HPLC.Methods:According to the testing process,a mathematical model was established to analyze the sources and influencing factors in uncertainty,through the quantitative analysis of uncertainty,obtained the expanded uncertainty.Result:The expanded uncertainty of Vitamin A in health food by HPLC was 1.843%.Conclusion:The main sources of uncertainty of Vitamin A in health food by HPLC was regulating the concentration of standard solution,preparation of standard solution and the repeatability of method.【Keywords】HPLC;Vitamin A;Mathematical model;Uncertainty引言维生素A能够调节人体的多种生理机能,增强机体免疫能力,在调节体内各方面的代谢及促进骨骼的生长发育上有着极其重要的作用,同时它也参与视网膜视紫质的合成与再生,维持正常的视觉反应,以降低夜盲症和视力减退的发生[1,2]。
维生素的检测方法
维生素有不同的检测方法,根据不同的维生素种类和检测目的,选择不同的方法。
下面介绍几种常见的维生素检测方法:
1.高效液相色谱法(HPLC)
HPLC是目前最常用的维生素分析方法之一,可以高效、准确地定量维生素,特别适用于复杂样品中的多种维生素的同时测定。
2.气相色谱法(GC)
GC法适用于对脂溶性维生素的分析,如维生素A、D、E、K等,它们在气相色谱柱上的保留时间较长,使其分离效果良好。
3.荧光光谱法
荧光光谱法是一种快速、准确、灵敏的方法,对于生物样品中的维生素测定特别适用。
该方法通过受激态分子辐射和自发荧光光谱衰减分析样品中的维生素含量。
4.高效毛细管电泳法(HPCE)
HPCE法能够有效地分离、测定样品中的多种水溶性维生素,如维生素B族成员,其检测灵敏度高,分析速度快,适用于复杂的生物样品中。
5.生物检测法
生物检测法利用生物感受器(如酵母、细菌、动物组织等)来检测维生素,具有灵敏度高、选择性好、可再现性好等优点,可用于药物残留检测和补充剂中的维生素分析。
AMAMFSJp0015维生素A 高效液相色谱法定量AM-AM-FS-Jp-0015维生素A的高效液相色谱法定量测定1.适用范围本方法几乎适用于所有的食品中维生素A的测定。
2.主要试剂和仪器2.1.主要试剂无醛乙醇:在1L乙醇中加入5mL50%的KOH溶液及5gZn粉进行2h的回流后蒸馏之。
除去初馏液和后馏液各10%;无水Na2SO4:将无水Na2SO4在120℃的温度下加热2h后,在干燥器中放冷、保存;维生素A醇:维生素A乙酸酯碱化后可得维生素A醇。
计算出其国际单位IU(或μg),用时进行调制;维生素A醇标准溶液:用异丙醇制备浓度为5IU/mL、25IU/mL、50 IU/mL的维生素A 醇溶液。
用时进行调制。
2.2.仪器碱化用150mL褐色烧瓶;分液漏斗:(250~300)mL, 褐色;蒸馏用烧瓶:250mL,褐色,梨型;高效液相色谱仪:带有荧光检测器。
3.过程简述3.1.试验溶液的调制准确称取 (20~30)IU(6~9μg) 维生素A于碱化烧瓶中,加入30mL的乙醇和1mL的10%的邻苯三酚乙醇溶液,充分搅拌后,加入3mL90%(W/V?)KOH溶液,连接好回馏冷却器,在沸腾的水浴中进行30min碱化。
快速冷却至室温后,加入30mL的水,移置于褐色的分液漏斗中。
将烧瓶依次用10mL水、30mL石油醚清洗,洗液移置于褐色的分液漏斗中,充分振荡、摇匀、放置后,将水层移置于另一褐色的分液漏斗中,依次用30mL石油醚萃取2次,合并萃取液,用10mL的水清洗一次,再依次用50mL水清洗3次,进一步每次用50mL水清洗至酚酞指示液无色为止。
将分液漏斗中的石油醚层加无水Na2SO4进行脱水后,移至褐色烧瓶中,进一步每次用10mL石油醚清洗残留的Na2SO4两次,洗液移至烧瓶中。
将石油醚醚萃液在(40~45)℃条件下进行减压蒸馏,其残留物中加入异丙醇溶解,取1mL(VmL)作为试验溶液。
3.2.高效液相色谱条件:色谱柱:ODS(4.6mmi.d×250mm)移动相:乙醇:水(95:5)流速:0.5mL/min检测器:荧光检测器(激发波长340nm,发射波长460nm)3.3.定量:将20μL(υμL)的试验溶液注入色谱柱中,取维生素A醇的峰高。
高效液相色谱法测定维生素C的含量【摘要】高效液相色谱法已经成为解决生命科学、医药学发展中各种难题的重要手段,在实验室中也广泛应用于物质的定性定量分析。
本实验中利用高效液相色谱法对维生素C进行定量分析,所采用的定量分析方法为外标法,通过做出标准溶液浓度与峰面积的标准曲线进而对样品中的维生素C进行定量检测。
【关键词】高效液相色谱法、维生素C、含量1、引言维生素 C(Vitamin C, Vc)又叫抗坏血酸,是一种水溶性维生素。
Vc 在体内参与多种反应,如氧化还原过程,在生物氧化和还原作用以及细胞呼吸中起重要作用。
人体内缺乏 Vc 时容易导致坏血病。
同时,由于 Vc 是一种水溶性的强有力抗氧化剂并参与胶原蛋白的合成,它同时还具有防癌、预防动脉硬化、治疗贫血、抗氧化和提高人体免疫力等功效。
Vc 在蔬果中普遍存在,尤其是柑桔类水果中含量较高。
樱桃、番石榴、辣椒、猕猴桃等水果中 Vc 含量在 50-300 mg/100 g。
溶于流动相(mobile phase)中的各组分经过固定相时,由于与固定相(stationary phase)发生作用(吸附、分配、离子吸引、排阻、亲和)的大小、强弱不同,在固定相中滞留时间不同,从而先后从固定相中流出。
高效液相色谱法(High performance Liquid Chromatography,HPLC)是在经典液相色谱法的基础上,于 60 年代后期引入了气相色谱理论而迅速发展起来的。
它与经典液相色谱法的区别是填料颗粒小而均匀,小颗粒具有高柱效,但会引起高阻力,需用高压输送流动相,故又称高压液相色谱法(High Pressure Liquid Chromatography,HPLC)。
HPLC 系统一般由输液泵、进样器、色谱柱、检测器、数据记录及处理装置等组成。
其中输液泵、色谱柱、检测器是关键部件。
有的仪器还有梯度洗脱装置、在线脱气机、自动进样器、预柱或保护柱、柱温控制器等,现代 HPLC 仪还有微机控制系统,进行自动化仪器控制和数据处理。
高效液相色谱法测定牛奶中的维生素C含量_陈治明高效液相色谱法测定牛奶中的维生素C含量陈治明1,洪亮2(1.贵州师范大学化学与材料科学学院,贵州贵阳550001)(2.贵州省山地环境重点实验室,贵州贵阳 550001)摘要:建立了高效液相色谱法测定牛奶中的维生素C的含量的方法。
样品用0.1 mol/L盐酸常温下超声提取,采用高效液相色谱法,维生素C,并与标准系列比较,以保留时间定性,峰面积定量。
结果表明,以0.05 mol/L磷酸二氢钾:甲醇(96:4)为流动相,经C18色谱柱分离,回收率为93%~100%,相对标准偏差为0.6%~1.1%。
本方法灵敏度高,选择性好,操作简便快捷,具有很好的实用价值。
关键词:高效液相色谱法;维生素C;牛奶文章篇号:1673-9078(2011)6-707-709Analysis of Vitamin C Content in Milk by HPLCCHEN Zhi-ming1, HONG Liang2(1.School of Chemistry and Matrial Science, Guizhou Normal University,Guiyang 550001, China)(2.The Key Laboratory of mountain and environment of Guizhou Province, Guiyang 550001, China)Abstract: A rapid method for the determination of vitamin C in milk was developed by high performance liquid chromatography. The sample was extracted by 0.1% hydrochloric acid-ultrasonic extraction at room temperature. Then the samples were analyzed by high-performance liquid chromatography using 0.05 mol/L Potassium dihydrogen phosphate: methanol (96:4) as mobile phase on a C-18 column. Results showed that the sample recovery was 93%~100% and relative standard deviation was of 0.6%~1.1%. This method was sensitive, selective, simple and quick.Key words: high-performance liquid chromatography; vitamin C; milk牛奶的营养成分很高,牛奶是人们日常生活中最喜爱的食物之一。
高效液相色谱法同时测定食用油中维生素A和维生素E的方法杜杰;林春兰;郑绣蒨;刘昌树【期刊名称】《中国粮油学报》【年(卷),期】2022(37)10【摘要】本文建立了高效液相色谱法同时测定食用油中维生素A和4种维生素E 的方法。
利用维生素A醋酸酯和维生素E分别在325 nm和294 nm的波长下的吸收特性。
以液相色谱紫外检测器双波长的方式,考察研究处理方式并开发同时检测食用油中维生素A和维生素E的方法。
通过该方法结果表明:维生素A的精密度RSD为0.84%~1.39%,回收率范围在95.8%~104.4%;维生素E各组分精密度RSD为2.01%~4.14%,回收率范围在96.2%~112%。
本方法也可应用于测定不同食用油中维生素A和维生素E且有效可靠。
测得葵花籽油维生素A含量(735.58±3.86)μg/100 g,维生素E的含量为(54.33±2.92)mg/100 g;玉米油维生素A含量(676.75±2.15)μg/100 g,维生素E的含量为(24.78±1.36)mg/100 g。
通过方法验证,确认液相色谱同时检测维生素A和维生素E的方法用于食用油中有效可靠。
【总页数】6页(P258-263)【作者】杜杰;林春兰;郑绣蒨;刘昌树【作者单位】佳格投资(中国)有限公司【正文语种】中文【中图分类】TS227【相关文献】1.高效液相色谱法同时测定牙膏中的维生素B2、维生素B3和维生素B62.正相高效液相色谱法同时测定奶粉中维生素A醋酸酯、维生素A棕榈酸酯、维生素E醋酸酯及α-生育酚3.高效液相色谱法测定化妆品中维生素A,维生素A醋酸酯,维生素A棕榈酸酯4.高效液相色谱法测定鱼样中的维生素A、维生素D3和维生素E5.高效液相色谱法测定食品中维生素K1和维生素K2的含量因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
AMAMFSJp0015维生素A 高效液相色谱法定量AM-AM-FS-Jp-0015维生素A的高效液相色谱法定量测定1.适用范围本方法几乎适用于所有的食品中维生素A的测定。
2.主要试剂和仪器2.1.主要试剂无醛乙醇:在1L乙醇中加入5mL50%的KOH溶液及5gZn粉进行2h的回流后蒸馏之。
除去初馏液和后馏液各10%;无水Na2SO4:将无水Na2SO4在120℃的温度下加热2h后,在干燥器中放冷、保存;维生素A醇:维生素A乙酸酯碱化后可得维生素A醇。
计算出其国际单位IU(或μg),用时进行调制;维生素A醇标准溶液:用异丙醇制备浓度为5IU/mL、25IU/mL、50 IU/mL 的维生素A醇溶液。
用时进行调制。
2.2.仪器碱化用150mL褐色烧瓶;分液漏斗:(250~300)mL, 褐色;蒸馏用烧瓶:250mL,褐色,梨型;高效液相色谱仪:带有荧光检测器。
3.过程简述3.1.试验溶液的调制准确称取 (20~30)IU(6~9μg) 维生素A于碱化烧瓶中,加入30mL的乙醇和1mL的10%的邻苯三酚乙醇溶液,充分搅拌后,加入3mL90%(W/V?)KOH 溶液,连接好回馏冷却器,在沸腾的水浴中进行30min碱化。
快速冷却至室温后,加入30mL的水,移置于褐色的分液漏斗中。
将烧瓶依次用10mL水、30mL 石油醚清洗,洗液移置于褐色的分液漏斗中,充分振荡、摇匀、放置后,将水层移置于另一褐色的分液漏斗中,依次用30mL石油醚萃取2次,合并萃取液,用10mL的水清洗一次,再依次用50mL水清洗3次,进一步每次用50mL水清洗至酚酞指示液无色为止。
将分液漏斗中的石油醚层加无水Na2SO4进行脱水后,移至褐色烧瓶中,进一步每次用10mL石油醚清洗残留的Na2SO4两次,洗液移至烧瓶中。
将石油醚醚萃液在(40~45)℃条件下进行减压蒸馏,其残留物中加入异丙醇溶解,取1mL(VmL)作为试验溶液。
3.2.高效液相色谱条件:色谱柱:ODS(4.6mmi.d×250mm)移动相:乙醇:水(95:5)流速:0.5mL/min检测器:荧光检测器(激发波长340nm,发射波长460nm)3.3.定量:将20μL(υμL)的试验溶液注入色谱柱中,取维生素A醇的峰高。
3.4.作工作曲线:在同样的色谱条件下,分别取5IU/mL, 25IU/mL, 50IU/mL的维生素A醇标准溶液20μL,注入色谱柱中,以各浓度所对应的峰高作工作曲线。
4.结果计算通过工作曲线求出υμL中维生素A醇的IU单位数(或μg)[S[IU(μg) ]],利用下式计算100g试料中维生素A的IU单位数(或μg)。
试料为油脂的情况下:100g试料中维生素A的量[IU(μg) ]=S[IU(μg) ] ×[V(mL) ×1000/υ(μL) ]×[100/试料取样量(g)]将油脂从试料中提取出的情况下:100g试料中维生素A的量[IU(μg) ]=S[IU(μg) ] ×[V(mL) ×1000/υ(μL) ]×[100/试料取样量(g)] ×X/100X:试料中油脂的百分数5.来源:《卫生试验法·注解》2000版日本药学会编AMAMFSJp0017维生素D 高效液相色谱法定量AM-AM-FS-Jp-0017维生素D的高效液相色谱法定量测定1.适用范围本方法适用于鱼贝类、兽鸟鲸肉类、蛋类、乳类、蘑菇类食品中维生素D的测定。
2.主要试剂和仪器2.1.主要试剂维生素D标准溶液:将结晶的麦角钙化醇(维生素D2)或胆钙化(甾)醇(维生素D3)溶解于无醛乙醇中。
先将该标准品的乙醇溶液在230nm和265nm分别测其吸光度,使A230/A265在0.65以下。
标准溶液的准确浓度值由下式求出:维生素D标准溶液的浓度(μg/ mL)= A265×(M/ε)×1000其中M:维生素D标准品的分子量:D2396.66D3384.65ε:265nm的摩尔吸光系数:D2 19200D318800无醛乙醇:在1L乙醇中加入50%的KOH 5mL、锌粉5g,进行约2小时的回馏,除去初馏液和后馏液各10%左右。
2.2.仪器离心管:50mL褐色具塞离心管烧瓶:50mL褐色具塞烧瓶高效液相色谱仪:两台带有紫外检测器的高效液相色谱仪,一台用于第一阶段,另一台用于第二阶段馏分收集器3.过程简述3.1.试验溶液的调制将试样的可食部切成细丝,混合,取其(50~200)g 用快速粉碎机充分粉碎均匀后,准确地称取(2~3)g于离心管中。
另一离心管中加入含标准维生素D约0.25μg(Sμg)的维生素D标准溶液,和试料进行同样的操作。
在上述离心管中加入1%邻苯三酚乙醇溶液10mL,60%的KOH溶液(2~5)mL,在70℃水浴中进行60min的碱化。
加入1%NaCl溶液19mL和醋酸乙酯:正己烷(1:9)15ml,盖上塞充分振荡混匀后,进行离心[1300×g(约3000rpm),10min],上层的醋酸乙酯正己烷分离到梨型烧瓶中。
水层进一步用醋酸乙酯:正己烷(1:9)15ml萃取2次。
合并萃取液,在35℃下减压蒸馏。
残留物用500μL乙腈:甲醇(9:1)溶解,作为维生素D提取试验溶液。
3.2.第一阶段高效液相色谱色谱柱:ODS(8.0mmi.d. ×300mm)移动相:乙腈:甲醇(9:1)流速:1.5mL/min检出器:紫外检测器(265nm)维生素D提取:用馏分收集器收集标准维生素D的保留时间的前后各45秒之间的馏分(事先将维生素D标准溶液注入高效液相色谱柱中,确认维生素D的出峰时间)。
3.3.阶段高效液相色谱色谱柱:硅胶(4.6mmi.d. ×250mm)移动相:正己烷:异丙醇(99.5:0.5)流速:1.5mL/min检出器:紫外检测器(265nm)定量:将150μL维生素D提取用溶液注入到连有馏分收集器的第一阶段高效液相色谱柱中,收集维生素D部分。
把这部分在35℃下减压蒸馏,残留物用正己烷:异丙醇(99.5:0.5)200μL溶解。
其中100μL注入第二阶段高效液相mm)和试料中的维生素D(Pmm)峰高。
色谱柱中,量取标准维生素D(Pst4.结果计算用下式计算试料中维生素D的量。
) ×(100/试料量(g)) 100g试料中维生素D的量(μg)=S×(P/PstS——标准维生素D的量(μg)P—试料中的维生素D的峰高(mm)—标准维生素D的峰高(mm)Pst5.来源:《卫生试验法·注解》2000版日本药学会编AMAMFSJp0018维生素E 高效液相色谱法定量AM-AM-FS-Jp-0018维生素E的高效液相色谱法的定量测定1.适用范围本方法几乎适用于所有的食品中维生素E的测定。
2.原理概要3.主要试剂和仪器3.1.主要试剂无醛乙醇:参照维生素A的测定中的该项;正己烷:光谱分析用;无水Na2SO4:将无水Na2SO4在120℃的温度下加热2h后,在干燥器中放冷、密封保存;α-,β-,γ-,δ-生育酚(维生素E):d-α-,d-β-,d-γ-,d-δ-生育酚(维生素E)纯品;母育酚:母育酚纯品;生育酚同系物标准溶液:生育酚同系物(α-,β-,γ-,δ-生育酚)分别各准确称取100mg,分别以正己烷溶解后,定容100mL。
分别各取其5.0mL用正己烷定容25.0mL,装入褐色具塞瓶中,用氮气排除其中的空气,密封,保存于冷暗处(可使用一个月);母育酚标准溶液:准确称取母育酚约100mg,加正己烷溶解并定容100mL。
取其5.0mL用正己烷定容25.0mL,装入褐色具塞瓶中,用氮气排除其中的空气,密封,保存于冷暗处(可使用一个月)。
3.仪器化用的烧瓶等容器:参照维生素A的测定中的该项。
效液相色谱仪:带有荧光检测器。
4.过程简述4.1.试验溶液的调制称取约含生育酚0.2mg的试料于碱化烧瓶中,加入30mL乙醇及10%的邻苯三酚乙醇溶液1mL,再加入90%(w/v)KOH溶液3mL,连接回馏冷却器,在沸腾水浴中加热碱化30min。
碱化后,快速冷却到室温后,加30mL水,将其移至褐色分液漏斗中,分别用10mL水和30mL石油醚清洗碱化烧瓶,将洗液合并到分液漏斗中,振荡萃取,提取石油醚层。
水层进一步用石油醚30mL萃取2次,合并石油醚层液,依次用10mL水洗一次,再每次用50mL水洗三次,进一步用50mL水洗至酚酞指示液无色为止。
在分液漏斗中分离掉水层后,提取石油醚层,加无水Na2SO4脱水,将石油醚层移至褐色烧瓶中。
剩余的Na2SO4每次用10mL石油醚清洗2次,将洗液并入烧瓶中。
将石油醚萃取液在水泵减压下(40-45)℃下振动的同时进行蒸馏,残留物用1.0mL正己烷溶解,作为试验溶液。
4.2.高效液相色谱条件色谱柱:正项色谱柱(4.6mmi.d. ×250mm)移动相:正己烷:异丙醇(98:2)流速:0.5mL/min检出器:荧光检测器(激发298nm,发射325nm)4.3.定量:在试验溶液1.0mL中加入母育酚标准溶液1.0mL(Sμg/mL),取其10μL注入高效液相色谱柱中分离测定,求出生育酚同系物的峰高(Bα-δ)和母育酚的峰高(C)。
4.4.换算系数分别取生育酚各同系物标准溶液1.0mL,加入1.0mL母育酚标准溶液,取其10μL注入高效液相色谱柱中按照前述液相色谱条件进行操作,求出生育酚同系物的峰高和母育酚的峰高,再从10μL中这些物质的重量(μg)求出生育酚同系物对母育酚的换算系数(重量比/峰高比)fα-δ.5.结果计算用下式计算100g试料中生育酚同系物的量(μg)。
试料为油脂将其作为试料的情况下,100g试料中生育酚同系物的量(μg)=S(μg)×(Bα-δ/C) ×fα-δ. ×(100/试料量(g))从试料将油脂提取出后作为试料的情况下,100g试料中生育酚同系物的量(μg)= S(μg)×(Bα-δ/C) ×fα-δ. ×(100/试料量(g)) ×(X/100)X—试料中油脂含量的百分数。
6.来源《卫生试验法·注解》2000版日本药学会编AMAMFSJp0024维生素C 高效液相色谱法定量AM-AM-FS-Jp-0024维生素C的高效液相色谱法定量测定(含异抗坏血酸添加剂的试料)1.适用范围本方法适用于含异抗坏血酸添加剂的样品2.原理概要3.主要试剂和仪器3.1.主要试剂10%(w/v)的偏磷酸溶液:同4.2.1.1中1)。
0.5%(w/v)的偏磷酸溶液:用时将10%(w/v)的偏磷酸溶液稀释而得。