自身抗体(网络)

一、抗核抗体抗核抗体（antinuclearantibodies，ANA）泛指抗各种核成分的抗体，是一种广泛存在的自身抗体。

ANA的性质主要是IgG，也有IgM和IgA，甚至IgD和IgE。

ANA可以与不同来源的细胞核起反应，无器官特异性和种属特异性。

ANA主要存在于血清中，也可存在于其他体液如滑膜液、胸水和尿液中。

ANA在SIE患者的滴度较高，但也出现在其他许多自身免疫病中，在许多研究报告中，都将检出ANA作为自身免疫甚至自身免疫病存在的依据。

这种现象的机制尚未明了，有待于进一步研究。

（一）ANA的类型及意义由于细胞核成分的复杂性，不同成分的抗原性也不同；因此就会有多种不同的ANA。

1．抗核蛋白抗体核蛋白抗原（DNP）由DNA和组蛋白组成。

由于DNP抗原存在不溶性和可溶性两个部分，可分别产生相应的抗体。

不溶性DNP抗体通常不完全被DNA和组蛋白所吸收，它是形成狼疮细胞的因子；可溶性抗原存在于各种关节炎病人的滑膜液中，其相应抗体也出现于RA病人的滑膜液中。

2．抗DNA抗体可以分为两大类：①抗天然DNA（nDNA）抗体，或称抗双链DNA（dsDNA）抗体；②抗变性DNA抗体，或称抗单链DNA（ssDNA）抗体。

抗dsDNA抗体对SLE有较高的特异性，70％～90％的活动期SLE病人该抗体阳性，效价较高，并与病情有关。

抗ssDNA抗体可见于多种疾病中，特异性较差。

3．抗ENA抗体可提取性核抗原（ENA）多从动物的胸腺中提取。

先将胸腺匀浆并破碎细胞，分离出细胞核；再经盐水或磷酸盐缓冲液处理后，很容易从胞核中提取出来。

ENA 不含DNA，对核糖核酸酶敏感。

近年来的研究表明，ENA可分为十几种，现仅介绍几种主要的ENA及其相应抗体。

（1）抗PNP抗体：PNA即核糖核蛋白，对核糖核酸酶和胰蛋白酶敏感，加热561h 变性。

抗PNP抗体多见于混合性结缔组织病。

高效价的抗PNP抗体对混合性结缔组织病有诊断意义，而低效价的抗PNP抗体可在SIE患者中发现。

(二)实验操作的标准化滴定平板技术
实验标准化流程为滴加样品、标记抗体至加样板，然后将生物薄片载片盖在加样板表面的凹槽里，这时，载片上的所有生物薄片均与液滴接触，反应同时开始。因为液体被局限在一封闭的空间，不再需要传统“湿盒”，可同时在一致的反应条件孵育大量的标本。下面以间接免疫荧光法为例，介绍滴定平板技术的操作过程：
间接免疫荧光法保留了原基质的完整抗原谱，因而可同时检测大量抗体．获得较高的检测效率。当抗几种不同抗原的抗体需要在一种生物基质上同时检测时(如抗细胞核抗原抗体)，或为每一种实验逐一准备抗原很困难或相当复杂时，就应该选择免疫荧光法。另外，应用免疫荧光法还可检测到一些至今未知的抗体。
在没有荧光显微镜时，可尝试用酶标记的第二抗体代替荧光标记的抗体，但是检测的质量会明显下降。因为在免疫荧光法中，指示剂染色是通过抗体直接结合在细胞抗原上产生的，而免疫酶法，染色则是弥散地围绕在抗原周围的区域。因此免疫酶法并不总是像免疫荧光法那样能区分抗原分布的细小差别。而且应用酶染色时，会导致许多自身抗体不能被区分或根本测不到。仅应用细胞核制备物免疫酶染色的纯光度法评价也是不可取的，因为这不可避免地导致一些自身抗体被漏检。
9．封片加甘油／PBS至盖玻片，每一反应区约10ul。从pBS-Tween缓冲液取出一张载片，用纸擦干背面和四边，注意不要擦拭反应区间鲸。将盖玻片轻轻盖在载片上。
10．结果判断 荧光显微镜下观察荧光。
(三)抗体检测的质量控制及注意事项
l．质量控制 自身抗体检测的质量控制是用多种手段对自身抗体存在与否、浓度的多少进行控制和评价，有利于实验室内部、实验室之间对同一标本获取相同具有可比性的结果，是衡量实验室检测水平的一个重要指标。然而．自身抗体检测的质量控制，并不是一件容易的工作。因为不同实验室所用的抗原基质存在差异、抗原的固定方法有差异或不同，血清的稀释方法不同以及操作者对不同荧光模式的识别能力不同等，均可影响到自身抗体的检酒质量。实验室在进行临床检测时，应同时检测阳性对照、阴性对照，以监测结果的准确性。国内急需成立专门的学术机构，参照国际标准，与国际接轨，建立自己当地的标准，开展自身抗体检测的质量控制。

抗U1-rRNP抗体：高滴度的抗U1-rRNP抗体是混合性结绨组织病（MCTD，夏普综合征）的标志，阳性率95-100%，抗体滴度与疾病活动性相关。

在30-40%的系统性红斑狼疮患者中也可检出抗U1-rRNP抗体，但几乎总伴有抗Sm抗体。

‘抗Sm抗体：系统性红斑狼疮的特异性抗体，与抗dsDNA抗体一起，是系统性红斑狼疮的诊断性指标，但阳性率仅为5-10%。

抗SS-A抗体：与各类自身免疫性疾病相关，最常见于干燥综合征（40-80%）、也见于系统性红斑狼疮（30-40%）和原发性胆汁性肝硬化（20%）中，偶见于慢性活动性肝炎。

此外，在100%的新生儿红斑狼疮中抗SS-A抗体阳性。

该抗体可经胎盘传给胎儿引起炎症反应和新生儿先天性心脏传导阻滞。

抗SS-B抗体：几乎仅见于干燥综合征（40-80%）和系统性红斑狼疮（10-20%）的女性患者中，男女比例为1：29。

在干燥综合征中抗SS-A抗体和抗SS-B抗体常同时出现。

抗Scl-70抗体：见于25-75%的进行性系统性硬化症（弥散型）患者中，因实验方法和疾病活动性而异（Scl=硬化症）。

在局限型硬化症中不出现。

抗PM-Scl抗体：常见于多肌炎与硬化症的重叠综合征中，50%的该抗体阳性患者为肌炎与硬化症的重叠综合征，抗PM-Scl抗体也可见于单独的多肌炎患者中，阳性率为8%，在弥散型硬化症中的阳性率为2-5%。

抗Jo-1抗体：见于多肌炎，阳性率为25-35%。

常与合并肺间质纤维化相关。

抗着丝点抗体：与局限型进行性系统性硬化症（CREST综合征：钙质沉着、Raynaud，s病、食管功能障碍、指硬皮病、远端血管扩张）有关，阳性率为70-90%。

在原发性胆汁性肝硬化患者中也可检测到该抗体（阳性率10-30%）。

还可出现于雷诺氏综合征中。

抗PCNA抗体：PCNA为增殖细胞核抗原，其表达与细胞周期有关。

抗PCNA抗体为系统性红斑狼疮的特异性抗体，但阳性率仅为3%。

有文献报道，抗PCNA抗体可能与系统性红斑狼疮患者发展为弥散性增殖性肾小球肾炎有关。

自身免疫相关检查项目
1. 自身抗体检测，通过检测血液中的自身抗体水平来评估免疫
系统是否产生了针对自身组织的攻击。

常用的自身抗体检测包括抗
核抗体（ANA）、抗双链DNA抗体（dsDNA）、类风湿因子（RF）等。

2. 血清免疫球蛋白测定，血清免疫球蛋白测定可以评估免疫系
统的免疫球蛋白合成功能。

常用的指标包括总免疫球蛋白（IgG、IgM、IgA）和亚类免疫球蛋白（如IgG亚类）。

3. 细胞免疫功能检测，细胞免疫功能检测可以评估免疫系统中
的T细胞、B细胞、自然杀伤细胞等免疫细胞的数量和功能。

例如，淋巴细胞亚群分析可以检测CD4+ T细胞、CD8+ T细胞、CD19+ B细
胞的比例。

4. 炎症指标检测，某些自身免疫性疾病伴随着炎症反应的增加，因此炎症指标的检测也是重要的。

常用的炎症指标包括C-反应蛋白（CRP）、血沉（ESR）等。

5. 免疫组化检测，免疫组化检测可以通过染色或荧光标记来检
测组织中的免疫细胞浸润和自身抗原的表达情况。

这对于一些自身
免疫性疾病的诊断和鉴别诊断有重要意义。

需要注意的是，具体的自身免疫相关检查项目会根据疾病类型和临床需要而有所不同。

因此，在进行任何检查之前，建议咨询医生以获取个性化的建议和解释。