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hiv实验室检测及规范操作课件一、教学内容本节课我们将学习《临床免疫学》教材中第四章“病毒性疾病的免疫学诊断”，特别是关于HIV实验室检测的详细内容。
具体包括HIV检测原理、检测方法、操作流程、结果判读以及生物安全规范。
二、教学目标1. 理解HIV实验室检测的基本原理及常用检测方法。
2. 掌握HIV实验室检测的标准操作流程，能独立进行规范操作。
3. 能够正确解读HIV检测结果，并了解生物安全相关知识。
三、教学难点与重点教学难点：HIV实验室检测的操作细节、结果判读及生物安全规范。
教学重点：HIV实验室检测原理、操作流程及注意事项。
四、教具与学具准备1. 教具：PPT课件、HIV实验室检测操作视频、实验操作手册。
2. 学具：实验服、手套、口罩、消毒剂、HIV检测试剂盒。
五、教学过程1. 实践情景引入（10分钟）：展示HIV实验室检测在临床诊断中的重要性。
举例说明不规范操作可能导致的后果。
2. 理论讲解（20分钟）：介绍HIV实验室检测的原理、方法及操作流程。
强调生物安全意识及规范操作的重要性。
3. 例题讲解（15分钟）：演示HIV实验室检测操作流程，讲解关键步骤。
分析操作过程中可能遇到的问题及解决办法。
4. 随堂练习（15分钟）：学生分组，根据实验操作手册进行模拟操作。
教师巡回指导，解答学生疑问。
5. 结果判读与讨论（15分钟）：模拟实验结果，让学生尝试解读。
针对结果判读进行讨论，纠正错误观念。
6. 生物安全规范讲解（10分钟）：介绍实验室生物安全等级、防护措施及应急预案。
强调实验过程中遵循生物安全规范的重要性。
七、作业设计1. 作业题目：根据所学内容，简述HIV实验室检测原理及常用检测方法。
列出HIV实验室检测操作流程，并说明注意事项。
阐述生物安全规范在HIV实验室检测中的重要性。
2. 答案：（1）HIV实验室检测原理：利用抗原抗体反应，检测患者体内HIV特异性抗原或抗体。
（2）HIV实验室检测操作流程：样本准备：采集患者血液或体液，进行预处理。
科研方法学班级：2008级研3班学号：2008128姓名：段治华艾滋病的实验室诊断方法段治华（山西医科大学，太原030001）摘要:艾滋病是由人类免疫缺陷病毒感染引起的传染病，实验室检测是诊断艾滋病的主要手段，检测项目包括HIV抗原和抗体检测，病毒载量检测，CD4T 淋巴细胞检测，HIV耐药性检测，基因芯片技术的运用，病毒分离等。
近年来，基于分子生物学和免疫学方法的发展，HIV的实验室检测有了较大的进步，为艾滋病的准确诊断提供可靠的方法。
关键词:艾滋病 HIV 实验室诊断艾滋病是获得性免疫缺陷综合征(Acquired Immunodeficiency Syndrome，AIDS) 的英文音译，由人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus，HIV) 感染引起的以免疫功能缺陷为主要特点的传染病[1]。
目前在我国，艾滋病的流行已进入快速增长期，要有效地预防和控制艾滋病的流行，必须有可靠的诊断方法快速准确地诊断艾滋病。
目前，艾滋病的诊断主要依靠实验室检测方法，近年来，基于分子生物学和免疫学方法的发展，HIV的实验室检测有了较大的进步。
现简单叙述目前采用的实验室诊断HIV的方法。
1 HIV结构特点人类免疫缺陷病毒（HIV）外型呈球形或卵形，直径90～130nm，病毒特有的蛋白质附着于一薄层类脂质构成其包膜。
核心含有两条相同拷贝的RNA 链，外周核膜由多种蛋白质形成。
HIV属逆转录病毒，基因组中存在三个大的开放读框，其顺序是gag-pol-env。
Gag基因编码55KD的前体蛋白，在病毒成熟过程中，被pol基因编码的蛋白酶加工，分别产生核心蛋白P17、核壳蛋白P24和核酸结合蛋白P15 。
P24是核壳组成蛋白，构成病毒的核衣壳，它的结构比较稳定，是HIV-1型的特异性蛋白。
在HIV-2与P24对应的是主要核心抗原P32，为HIV-2型病毒感染的特异标志。
Env编码包膜蛋白，由外膜糖蛋白gp120和跨膜糖蛋白gp41组成(在HIV-2型病毒中与之相当的是gp110/ 130和gp36) [1]。
HIV实验室检测方法和步骤HIV，也称为人类免疫缺陷病毒，是一种能导致艾滋病的病毒。
HIV实验室检测方法和步骤被广泛应用于检测感染HIV的个体。
以下是一般情况下使用的实验室检测方法和步骤的详细说明。
1.预处理和登记在进行HIV实验室检测之前，需要对样本进行预处理和登记。
预处理包括标识样本的相关信息，如样本编号和患者信息。
这些信息对于结果记录和跟踪是至关重要的。
此外，还需检查样本的适应性和完整性。
2.血液样本采集3.血清分离采集到的血液样本需要进行血清分离。
这可以通过离心来分离血液的不同成分，例如血红蛋白和血清。
离心速度和时间需要根据实验室设备和协议进行调整。
4.酶联免疫吸附测定法（ELISA）最常用的HIV实验室检测方法是酶联免疫吸附测定法（ELISA）。
这种方法使用特定的抗体来检测血液中特定的抗原。
根据ELISA方法的不同，可检测HIV抗原或抗体。
实验室技术人员将患者血清样本加入到已包含HIV相关抗原或抗体的试剂盘中，然后根据试剂盘的建议操作，包括孵育时间、温度和洗涤步骤。
任何与接触抗原或抗体反应的特异性颜色改变，都可作为阳性结果。
否则，结果被视为阴性。
5.确认试验在进行HIV检测的初步结果后，通常会进行一个或多个确认试验。
确认试验的目的是统一确定检测结果的可靠性。
常用的确认试验包括HIV免疫荧光试验（IFA）和西方印迹法（Western blot）。
这些试验通过检测血清中的HIV特异性抗体，以确保先前的结果的准确性。
6.分子检测有时，为了获得更加可靠和敏感的结果，实验室会使用分子检测方法，例如聚合酶链式反应（PCR）。
PCR可以检测和放大病毒的基因或核酸，以确定HIV感染的存在和病毒的数量。
7.结果解读和记录HIV实验室检测结束后，实验室技术人员需要解读并记录结果。
阳性结果意味着存在HIV感染，而阴性结果则表示未检测到HIV感染。
针对不同的检测方法和样本类型，结果的解释可能有所不同。
因此，在结果解读和记录时，实验室人员需要严密遵循实验室的标准操作规程（SOP）。
艾滋病诊断标准国家标准：GB 16000—19951急性HIV感染1.1流行病学史1.1.1同性恋或异性恋者有多个性伴侣史，或配偶或性伴侣抗HIV抗体阳性。
1.1.2静脉吸毒史。
1.1.3用过进口Ⅶ因子等血液制品。
1.1.4与HIV/AIDS患者有密切接触史。
1.1.5有过梅毒、淋病、非淋菌性尿道炎等性病史。
1.1.6出国史。
1.1.7抗HIV(＋)者所生的子女。
1.1.8输入未经抗HIV检测的血液。
1.2临床表现1.2.1有发热，乏力，咽痛，全身不适等上呼吸道感染症状。
1.2.2个别有头痛、皮疹、脑膜脑炎或急性多发性神经炎。
1.2.3颈、腋及枕部有肿大淋巴结类似传染性单核细胞增多症。
1.2.4肝脾肿大。
1.3实验室检查1.3.1周围血WBC及淋巴细胞总数起病后下降，以后淋巴细胞总数上升可见异型淋巴细胞。
1.3.2CD4/CD8比值大于1。
1.3.3抗HIV抗体由阴性转阳性者，一般经2～3个月才阳转。
最长可达6个月，在感染窗口期抗体阴性。
1.3.4少数病人初期血清P24抗原阳性。
2无症状HIV感染2.1流行病学史同急性HIV感染。
2.2临床表现常无任何症状及体征。
2.3实验室检查2.3.1抗HIV抗体阳性，经确诊试验证实者[见附录A(标准的附录)中A2]。
2.3.2CD4淋巴细胞总数正常，CD4/CD8大于1。
2.3.3血清P24抗原阴性。
3AIDS3.1流行病学史同急性HIV感染。
3.2临床表现3.2.1原因不明的免疫功能低下。
3.2.2持续不规则低热多于1个月。
3.2.3持续原因不明的全身淋巴结肿大(淋巴结直径大于1cm)。
3.2.4慢性腹泻多于4～5次/日，3个月内体重下降大于10％。
3.2.5合并有口腔念珠菌感染、卡氏肺囊虫肺炎、巨细胞病毒(CMV)感染、弓形体病、隐球菌脑膜炎，进展迅速的活动性肺结核、皮肤粘膜的Kaposi肉瘤、淋巴瘤等。
3.2.6中青年患者出现痴呆症。
3.3实验室检查3.3.1抗HIV抗体阳性经确诊试验证实者。
艾滋病如何检测？简介艾滋病是一种由人类免疫缺陷病毒（HIV）引起的慢性病毒性感染，会破坏人体的免疫系统，导致免疫功能低下和容易感染各种疾病。
早期艾滋病患者常没有明显的症状，因此及早进行艾滋病的检测对于预防和控制疾病的传播非常重要。
本文将介绍艾滋病的检测方法，包括常规实验室检测和快速检测。
请注意，本文所介绍的内容仅供参考，具体的检测方案应根据专业医生的指导实施。
常规实验室检测常规实验室检测是目前最常用的艾滋病体外实验室诊断方法之一。
该检测方法包括以下几个步骤：1.抗体检测：常规实验室检测的第一步是检测人体血液中的HIV抗体。
这种检测方法是通过采集静脉血样本，然后在实验室中使用特定的方法检测人体血液中的HIV抗体。
如果检测到HIV抗体，那么表明人体被感染了HIV病毒。
2.抗原/抗体联合检测：如果抗体检测结果阳性，通常需要进行进一步的测试以确认诊断。
抗原/抗体联合检测可以同时检测HIV抗体和HIV抗原（P24抗原）。
这种检测方法可以更早地检测到HIV感染，并进一步确认诊断。
3.Western blot检测：Western blot是一种常用的确认HIV感染的方法。
它是通过把血液中特定的HIV蛋白分子分离出来，然后通过特殊染色技术观察是否存在与HIV相关的蛋白。
如果Westernblot结果阳性，那么可以确认患者感染了HIV病毒。
快速检测除了常规实验室检测外，还有一种被称为快速检测的艾滋病诊断方法。
快速检测是一种便捷、快速和隐私的检测方法，通常可以在医疗机构以外的地方进行，例如社区诊所、卫生所、志愿者机构等。
快速检测的主要特点包括：•快速结果：与常规实验室检测相比，快速检测通常可以在短时间内得出检测结果，有的甚至可以在30分钟内完成。
•简单操作：快速检测一般不需要复杂的仪器和设备，操作简单方便。
•匿名性：快速检测通常可以保证患者的隐私，检测结果可以匿名报告，避免了可能的社会歧视和污名。
快速检测方法主要有以下几种：1.抗体快速检测：抗体快速检测是指通过采集人体口腔黏膜、指尖血样或尿液样本，使用快速检测试纸或仪器进行检测。
HIV实验室诊断
一、HIV病毒是带有包膜的RNA逆转录病毒，在我国流行的是HIV-1。
二、HIV实验室诊断
人体感染HIV后，血液中最先出现HIV抗原，然后很快消失直到疾病后期才重新出现。
几周后出现IgM抗体并很快消失，此后,IgG抗体出现并一直存在。
因此，HIV感染的实验室诊断以抗体检测为主，病毒及相关抗原的检测为辅。
抗体检测分为初筛试验和确证试验两种，初筛试验为阳性的血清必须进一步确证，确证实验为阳性的方可报告为HIV感染阳性。
多聚酶链式反应(PCR)主要用于检测血浆中HIV的RNA含量，目前主要用于预测母亲将HIV传染给胎儿的可能性以及新生儿的HIV感染状况。
此外，尚可用于判断病人的预后及监测抗病毒治疗的效果。
（一）HIV抗体的初筛检测
初筛试验的要求是敏感性高，理论上要求达到100%，尽可能避免漏掉可能阳性的对象，相对来说，对特异性要求不是太严，允许有少量假阳性，这些假阳性可以通过重复试验和确证试验排除。
HIV抗体初筛检测的方法很多，如酶联免疫吸附实验(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)、明胶颗粒凝集实验(gelatine particle agglutination assay, PA)、乳胶凝集实验(latex agglutination assay, LA)、各种快速检测实验(rapid tests)等。
1．酶联免疫吸附实验检测HIV1/2 型抗体，酶联免疫吸附实验（ELISA）是最常见的HIV抗体检测方法，它具有准确性高、价格低廉、判断结果有客观标准、结果便于记录和保存等优点，适合于大批量标本的检测，是献血员筛选和临床诊断最常用的方法。
3．胶体金法检测HIV1/2抗体实验
胶体金法检测HIV抗体是一种不需要任何仪器设备的血清／血浆检测法，它利用免疫层析分析原理来快速检测血清／血浆中是否含有HIV抗体，从而用于判断人体是否受到HIV1型／HIV2型病毒感染。
注意：由于样本中HIV抗体滴度的不同，测试区（T）内的红色条带会显现出不同深浅的颜色。
但是，本试剂盒的测试结果不能做为判定样本中抗体滴度高低的依据。
(二)、初筛试验每一次检测阴性者可报告阴性，若第一次检测阳性，则需进行复测，复测时（最好用不同类型的试剂）可同时测定两孔，判定方法如下：
第一次检测第2次检测结果判定
（-）阴性
（+）（-）（-）阴性
（+）（+）（-）/（+）阳性
初筛阳性的标本不能发报告，必须将血样或血袋送本省（本市）艾滋病监测检验中心确认实验室进一步做确证试验。
确证试验阳性者，由省（市）监测中心给送检单位发出抗-HIV阳性报告，同时上报卫生厅（局）和卫生部疾病控制司备案。
确认试验阳性和可疑的血袋均需送确认实验室妥善处理，绝对不能发出使用
（三）确证（确认）试验
确证（确认）试验主要用蛋白印迹试验(Western Blot, WB)。
也是测抗体。
美国用ELISA法发报告。
三、艾滋病病原学诊断中的几个问题。
1、明确不同实验方法的意义和适应范围：HIV血清学检测分为初筛和确证两类。
初筛实验出现的阳性结果，应再次重复实验，若仍为阳性，则应用确证实验去证实，只有确证实验是阳性的标本方可报告为HIV抗体阳性。
另外，能引起艾滋病的病毒分为两型，即HIV-1和HIV-2，两型病毒间只有少部分抗原有交叉（主要是Gag基因编码的核蛋白）。
因而各型病毒试剂只能有效地检测出同型病毒的抗体。
2、针对HIV感染不同时期选用不同的检测手段。
HIV原发感染后的两周内，用任何方法均无法查到病毒的存在，2周后出现病毒血症，此时可用抗原检测方法、检查病毒抗原或测定病毒逆转录酶活性，而不能用血清学方法，因为抗体要到感染后6-8周才会出现。
此后就只能用抗体检测方法，直到艾滋病的出现，因为在这段时间HIV抗原很难从血清中查到，待发展到艾滋病阶段时才会重新出现。
3、HIV抗体测定的灵敏度、特异度和预测值：
敏感性：是指在有抗体存在的标本中，检出抗体的准确性。
敏感性低的试验将有许多假阴性。
特异性：是指在没有抗体存在的标本中，检测其抗体缺失的准确性。
特异度低的试验将有许多假阳性。
理想的是，一种试验应当具有100%的敏感性和100%的特异性。
但实际上，没有一种生物试验能满足这样的要求。
但在敏感性和特异性最高的试验方法当中现行的HIV检测方法还是可取的，在理想的实验室条件下，许多市售的HIV抗体试验方法的敏感性和特异性都在99%以上。
除非由于检验人员造成人为误差，这种检验方法所固有的特性是不会出现明显改变的。
试剂的敏感性和特异性可以衡量它的优劣，但并不能决定一个测定结果正确与否的可能性大小，后者是由测定的预测值决定的。
一个测定的阳性或阴性预测值，即这个阳性或阴性的结果是真阳性或真阴性的可能性。
同样是阳性，对于一个没有接触
史和吸毒人员意义是不同的。
因而我们在实际检测工作中，对我国普通公民初筛试验结果阴性的预测值是非常高的,即可初步排除HIV感染的可能性，而出现阳性结果，则必需慎之又慎，要严格经蛋白印迹等确定实验证实后方可报告。
相反，对来自疫区的外国人或在疫区长期居住的归国人员可疑阴性结果，则不能轻易放过，以免因漏诊而造成严重的后果。
4、HIV抗体检测反应强度与HIV感染的概率
许多HIV抗体检测方法除了是一种定性实验外，还同时是一种半定量实验。
这可表现于测定不同稀释度的血清的反应性，得出阳性血清的最高稀释度，而ELISA方法则可根据光密度（0D）值的强度直接确定。
反应性越强的血清，含有HIV抗体的可能性也就越大。
