病理学技士专业知识考试大纲知识点

专业知识

病理解剖的意义:收集病理教学机科研资料的一个重要途径，大量病理资料的积累促进了医学的发展与进步.通过解剖尸体观察和发现死者器官、组织的病理变化，找出主要病变，分析判断直接死亡原因的一种重要方法。可以验证临床诊断的正确性及治疗效果，发现临床诊断和治疗上存在的问题，最后通过临床病理讨论会的形式，实现病理和临床的交流与统一。

病理解剖室的清洁与消毒

地面及靠近地面的墙壁用水冲洗干净。紫外线灯进行空气消毒，照射剂量不小于9000Uw—s/cm2。室内温度不低于20度,相对适度不超过50%，照射20~30分钟。必要时喷雾2%过氧乙酸8ml/m2密闭消毒30分钟。

解剖器械的消毒

清水冲洗干净，浸泡在1：1000苯扎溴铵内含0.5％亚硝酸钠溶液中4～6小时、10%甲醛水溶液中2～4小时。

个人防护

戴橡胶手套，外再戴薄质纱手套，戴上口罩、帽子，穿手术衣，外戴塑料围裙。

固定

将组织浸入某些化学试剂,是细胞内的物质尽量接近其生活状态时的形态结构和位置。

意义是保存组织细胞的抗原性，使抗原物质不发生弥散和抗原性丧失。

作用:保持细胞与生活时的形态相似、保持细胞内特殊的成分与生活状态时相仿、便于区别不同组织成分、有利于切片、固定剂的不良影响（影响常规染色、固定造成物质损失、组织皱缩）。

固定剂的选择

细胞内物质与固定剂的关系：组成细胞的主要成分为蛋白质、脂类、糖类，根据研究目的的不同选择不同的固定剂。Masson染色,甲醛升汞、Zenker液、bouin液.嗜铬细胞,含铬的固定液。细胞内糖原，用Carnoy液.

固定液的量（组织块总体积的4~5倍）

穿透力(＜2～3mm/24h或0.5cm的多孔疏松组织）

时间（固定24小时后保存于70%乙醇。一般3～24小时）

特殊固定（制备1um厚的半薄切片，先用戊二醛固定再用饿酸进行二次固定）

固定容器（相对大些，防止组织与容器粘连产生固定不良。瓶底垫一棉絮，使固定液均匀渗入组织块.轻轻搅动，利于渗入。)

单纯固定剂

甲醛（40％甲醛气体水溶液，又称福尔马林。）渗透力强，固定均匀，组织收缩小。固定保存大体标本。

甲醛色素:甲醛氧化产生的蚁酸在组织中与血红蛋白结合形成棕色的甲醛色素。

Ⅰ类：醛类，甲醛，戊二醛，多聚甲醛，丙烯醛，已二醛，丙二醛等。

Ⅱ类:氧化剂类，四氧化锇（奥酸），高锰酸钾，重铬酸钾等.

Ⅲ类：蛋白变性类,甲醇，乙醇,醋酸等。

Ⅳ类：其他，氯化汞，苦味酸等。

重铬酸钾：橘红色结晶，有毒性,1%~3%水溶液。固定高尔基体和线粒体。

苦味酸:黄色结晶体,强酸易燃易爆。沉淀一切蛋白质，穿透慢，组织收缩明显，组织无明显硬化。

升汞：针状结晶。5％~7%饱和水溶液。固定蛋白质。

醋酸：保存染色体。

铬酸：三氧化铬的水溶液。0.5％～1％.线粒体和高尔基体。

饿酸：四氧化饿，淡黄色结晶,1%～2％的水溶液,脂类。

丙酮：酶组织化学的各种酶的固定。

三氯醋酸：无色易潮解的结晶体。蛋白质沉淀.

乙醇：80%~95％，糖原的固定。

(1)B-5固定液 淋巴组织

（2）Bouin氏固定液 外科活检标本、结缔组织染色（三色较佳）

（3）Carnoy氏液 胞质和胞核，染色体固定佳

（4）媒染和硬化神经组织 Miiller氏液

（5)Orth氏液 胚胎组织、神经组织、脂肪组织

（6)PFG液 肽类抗原的固定，免疫电镜研究

（7）PLP液和PLPD液 富含糖类组织的固定

(8）Rosman液 糖原固定好

（9)Zenker液 固定多种组织，使细胞核和细胞质染色较清楚，常用三色染色

（10）4%多聚甲醛—0.1mol /LPB 适用光镜免疫组化

（11）4％多聚甲醛—磷酸二钠/氢氯化钠液 光镜和电镜免疫组化

（12）甲醛—钙液 脂肪组织和组织化学染色

（13）乙醇-甲醛液 皮下组织肥大细胞

（14)乙醚-酒精液 细胞涂片

(15）中性缓冲甲醛液 免疫组化

(16）中性甲醛液 常用（40％甲醛120ml、蒸馏水880ml、磷酸二氢钠4g、磷酸氢二钠13g。）

组织的脱水和脱水剂

脱水：借某些溶媒置换组织内水分的过程.

酒精 脱水能力强,硬化组织,收缩明显，梯度脱水

丙酮 快速脱水或固定兼脱水

异丙醇 乙醇替代品,收缩小，硬化作用弱

正丁醇 脱水后的组织科直接浸蜡和包埋，电镜中的中间脱水剂

透明：组织块中的水分被溶剂取代,其折射指数接近于组织蛋白的折射指数，组织块变得透亮。

二甲苯：常规透明剂，折射指数1.50，对组织的收缩性强，易使组织变硬变脆。

石蜡切片：组织经石蜡包埋制成蜡块，用切片机制成切片的过程。一般厚度4～6um。

蛋白质的着色原理：蛋白质分子中的氨基酸残基含有酸性基团或碱性基团，可以与染料分子以离子键、氢键、配价键结合。

核酸染色原理：核酸包括DNA和RNA。是由单核苷酸连接而成的大分子。在DNA双螺旋结构中,两条核酸链上的磷酸基向外，并电离为负离子，使DNA双螺旋的外侧带负电荷，易和带正电荷的碱性染料以及媒染染料以离子键或氢键相结合。

胞质的主要成分：蛋白质、RNA、脂蛋白等，多为两性化学物。

在PH3。6~4.7之间，胞核带负电荷为碱性染料染色;胞质带正电荷为酸性染料染色。

细胞膜的成分：类脂和蛋白质，形成流动镶嵌脂质双层结构。

在膜表面分布有糖脂、磷脂、蛋白质分子，含有较多的极性基团,负电基团和正点基团。负点基团占优势总结果使细胞膜外表面带负电，易被碱性染料染色。

7。HE染色的原理 （1）细胞核染色原理：细胞核的染色质主要是DNA，DNA的双螺旋结构中，两条链上的磷酸基向外，带负电荷，称酸性,易与带正电荷的苏木精碱性染料以离子键或氢键结合而被染色。

(2)细胞质染色的原理：在染料中加入醋酸,使胞质带正电荷，可被负电荷的染料结合。伊红在水中离解成带负电荷的阴离子，与蛋白质的氨基正电荷结合而使细胞质染色。

二甲苯的作用：脱去切片中的石蜡;透明切片的作用。

（3）乙醇的作用：洗脱用于脱蜡的二甲苯，再使水分进入切片；脱去组织中的水分。

水洗的作用:使水进入切片中,苏木素染液进入细胞核中；洗去未结合的染料；除去为结合的染料和中止分化。

(4）分化的作用：洗去细胞核中结合过多的染料和胞质中吸附的染料。

返蓝的作用：分化后的苏木精在酸性下处于红色离子状态,在碱性条件下处于蓝色离子状态,使苏木精染上的细胞核变成蓝色。

8、石蜡切片和HE染色的质量标准（切片完整，厚度4~6um，厚薄均匀，无褶无刀痕；染色核质分明，红蓝适度，透明洁净，封婊美观。）

十、常用的特殊染色技术

1.结缔组织复合染色法

（1）应用（鉴别梭形细胞软组织肿瘤的来源属于纤维性、肌肉性、神经性）

(2）Mallory三色法结果（胶原和网状纤维呈蓝色，软骨黏液淀粉样变物质呈淡蓝色，神经胶质纤维、肌纤维和酸性颗粒呈红色，髓鞘和红细胞呈橘红色）

（3）Masson三色法结果（胶原纤维呈绿色,肌纤维呈红色，红细胞呈橘红色）

（4）显示胶原、网状和弹力纤维三联染色法结果（胶原纤维呈红色，网状纤维呈绿色,肌肉和红细胞呈淡黄色）

2.胶原纤维染色法

（1）应用（鉴别肿瘤来源于纤维细胞、心肌瘢痕灶、早期肝硬化。及其他组织纤维增加或减少等)

（2）Van Gieson法的缺点（甲乙两液需分瓶存放，甲液配制后数天即可用,不易配制过多，乙液配制后立即使用.

(3）丽春红S染色的结果(胶原纤维呈鲜红色，肌纤维、细胞质、红细胞呈黄色,胞核呈蓝褐色）

（4）天狼星红的染色结果（胶原纤维呈红色，细胞核呈绿色,其他呈黄色)

（5）天狼星红染色在偏光显微镜下的结果

Ⅰ型胶原纤维：排列紧密,显示很强的双折光性，呈黄色或红色的纤维。

Ⅱ型胶原纤维：显示弱的双折光,呈多种色彩的疏松网状分布.

Ⅲ型胶原纤维：显示弱的双折光，呈绿色的细纤维。

Ⅳ型胶原纤维：显示弱的双折光的基膜，呈淡黄色。

3.网状纤维染色法

（1）应用（常区别上皮还是非上皮性来源的肿瘤；肝组织的网状支架塌陷破坏或增生的情况）

（2）银染色的原理(组织蛋白质与银化合物的结合，再经过甲醛还原成为金属银而沉淀于组织内及表面的物质)

(3）Gomori银染色法结果（网状纤维呈黑色，胞核呈红色（核固红复染）,胶原纤维呈黄棕色，细胞质呈淡红色（红夜复染））

（4)James银染色的原理和结果

4.弹力纤维染色法

（1）应用(皮肤组织增生和变化，呼吸道支气管扩张，老年性肺气肿的纤维断裂、变性、萎缩;心内膜弹性纤维异常增生症等）

（2）维多利亚兰和丽春红S染色的结果（弹性纤维呈蓝绿色,胶原纤维呈红色，背景呈淡黄色）

5。肌肉染色法

（1）应用（肿瘤细胞出现横纹肌纤维）

(2）Mallory氏PTAH法结果（胞核、纤维、肌肉、神经胶质纤维、纤维蛋白、横纹肌等均呈蓝色，胶原纤维、网状纤维软骨基质及骨呈黄色或玫瑰红色；粗弹性纤维有时被染成微紫色；有缺血缺氧早期病变的心肌呈紫蓝色或棕黄色.）

(3）早期心肌病变组织染色Nagar-Olsen染色法结果(缺氧心肌、红细胞呈红色，正常心肌呈黄色或黄棕色,细胞核呈蓝色.）

Poley染色法结果(缺氧心肌呈红色，胞核呈紫色，其他组织呈绿色。）

6。糖类染色法

（1）分类（多糖、中性黏液物质、酸性黏液物质） （2）糖原染色的应用（鉴别细胞内的空泡状变性；是被水溶性固定液溶解还是脂肪被脂溶剂溶解)

(3）PAS染色法的原理（过碘酸把多糖的葡萄糖分子中的两个相邻的羟基的—C—C—键打开，而生成醛基再与染色剂结合。碱性复红经亚硫酸和二氧化硫作用下,醌式结构的双键被破坏而消失，成为无色复红,经过氧化后的醛基与无色复红液进行结合呈紫红色)

结果(糖原及其他阳性物呈红色，细胞核呈蓝色）

7。粘多糖染色法

(1）应用（粘液性疾病）

（2）Alcian blue染色和结果（（唾液酸及若硫酸化黏液物质以及一般黏液呈蓝色，各种强酸化黏液物质不着色或淡染，胞核红色）

（3）中性粘多糖的PAS染色结果（）

（4）Mowry染色结果(中性黏多糖物质呈红色，酸性黏多糖物质呈蓝色，混合型黏多糖呈紫红色）

8.色素类染色

(1)色素的种类(外生性色素及沉淀物、人为色素及沉淀物；甲醛色素、黑色素）

（2）黑色素染色的应用（显示异常的黑色素）

（3）Masson Fontana法（黑色素及嗜银细胞颗粒呈黑色，胶原纤维呈红色，背景呈淡蓝色)

(4)Lillie染色法黑色素结果(黑色素呈暗绿色，背景浅绿或不着色。肌纤维和背景呈黄色）

（5)含铁血黄素染色的应用（组织内的铁质以含铁血黄素的方式存在）

（6）含铁血黄染色有哪几种证明方法和原理（

(7）脂褐素染色的应用（观察胆道阻塞和血红蛋白的代谢障碍等疾患所以起的胆汁淤积。病理时，出现在肝细胞、毛细血管、小胆管、库普弗细胞等)

10.淀粉样物质染色

(1）性质(糖蛋白成分）

（2）应用（分为原发性和继发性，肿瘤的诊断与鉴别）

（3)刚果红染色的结果(淀粉样物质呈红色，细胞核呈蓝色）

（4）Jurgens甲紫染色结果（淀粉样物质呈红色或紫红色，细胞核呈蓝色）