各国药典关于HPLC色谱条件允许调整范围

在色谱分析领域中，允许实验室出于提高检测性能与效率的需要，对标准方法或官方方法中规定的仪器操作条件进行调整，但不能超出一定的规定。

超出一定的调整都视为方法变动。

1、HPLC流动相的pH值流动相制备过程中，水溶性缓冲液pH值可在标准规定值的±0.2pH单位范围内调整。

2、HPLC缓冲液中盐的浓度流动相制备过程中，如果pH值变化满足要求，则水溶性缓冲液中盐浓度可在±10%范围内调整。

3、HPLC流动相中各组分的比例流动相中组分的增减可以达到该组分在组成中所占比例的30%以上。

流动相中占较高比例的组分，调整的绝对量应在±10%范围内变动。

流动相中占较低比例的组分，调整的绝对量应在±2%范围内变动。

调整后，任何组分的最终含量都不能被降为零。

4、HPLC紫外-可见光检测器的波长HPLC紫外－可见光检测器的波长不允许偏离方法中的指定值。

但可使用仪器制造商规定的程序或其他验证程序验证检测器的波长，其误差应小于±3nm5、色谱柱柱长GC/HPLC柱长最大可调整值为±70%6、色谱柱内径HPLC色谱柱内径，最大可调整值为±25%;对于GC色谱柱内径，最大可调整值为±50%7、流速GC/HPLC最大可调整值为±25%8、进样量对于GC和HPLC，进样量可减少至精密度和检出限可接受限值。

只要不对诸如基线、峰形、分辨率、线性度和保留时间等因素产生不良影响，进样量可增加至标准指定进样体积的两倍。

9、HPLC粒度最大可调整值为±50%10、HPLC柱温最大可调整值为±10%11、GC柱箱温度最大可调整值为±10%12、GC毛细管壁厚最大可调整范围为－50%～100%13、GC程序升温允许可调整温度为10%。

对于需维持的特定温度或从一个温度改变至另一温度，允许调整的最大限度为±20%以上方偏离的限度的依据，参照：美国FDA《实验室质量管理手册》。

2020版《中国药典》通则0512 HPLC 如何优化色谱方法随着超高效液相技术（小粒径色谱柱的应用）的发展，药典在适应新技术的使用，指导企业如何去优化方法，达到缩短分析时间、节省流动相的目的。

今天，我们一起来分析在保持与现有方法相似的分离效果的前提下，如何选择合适的色谱柱和相应的色谱参数。

一、2020版药典与2015版药典0512参数调整对比表1：2020版药典与2015版药典0512参数调整对比（其余参数，如流动相比例、缓冲盐浓度、柱温、pH等改变，本文不涉及，此处不细说）上表1中A/B/C三项，扩充了色谱柱的选择范围，而D/E/F则针对具体的每一个参数调整提供计算方式。

下面，我们用具体的案例进行推导。

二、案例推导1、改变柱长L和粒径dp假设当前一个色谱方法为：目标：保持分离度R基本不变，缩短分析时间和流动相。

过程：根据公式1：其中，k为保留因子，α为选择因子。

当色谱柱固定相、流动相的组成及比例、柱温不变，则α和k不变。

因此，分离度R仅与理论塔板数N相关。

而N∝L/dp（正比），只要保持L/dp基本不变，则R基本不变。

当前色谱柱Column1的L1/dp1=250/5=50，所以需要从当前市场上常用的色谱柱中选择L/dp≈50的色谱柱，例如柱长为100mm，粒径dp为1.8μm的色谱柱，则L2/dp2=100/1.8=56，与当前色谱柱Column1的L1/dp1基本一致（比Column1的L1/dp1值50变化+12%，在药典规定的-25%~+50%范围内。

有一定程度的增加，但有利于分离度R）。

注：此处粒径1.8μm是全多孔填料，产生的柱压比较高，因此，可选择表面多孔填料，例如2.7μm粒径的表面多孔填料色谱柱，因为其特殊的填料技术，实际的硅胶粒径仍只有约1.8μm（如下图1）。

图1：全多孔填料和表面多孔填料示意图。

各国药典允许调整范围Adjusting Ph. Eur. Methods欧洲药典调整范围1. Mobile phase pH: ± 0.2 units• pH of 7.6 can be adjusted from 7.4 – 7.8流动相pH：0.2单位例如：pH为7.6可以调整为7.4-7.82. Concentration of salts in buffer: ± 10 %• 20 mM Potassium phosphate can be 18 – 22 mM, as long as proper pH is maintained as above2.缓冲盐浓度：正负10%20mM磷酸钾可以调整到18-22mM，pH的可调整范围如上。

3. Ratio of components in mobile phase: ± 30 %The amount(s) of the minor component(s) can be modified by ± 30 % relative or ±2 % absolute. However a change in any component cannot exceed ± 10 % absolute. • 60:40 Acetonitrile/Water could be adjusted to ± 12 % water (= 30 % of 40),but this exceeds the ±10 % maximum absolute change. Therefore the amount of water can range from 30 % to 50 % in this case.3.流动相组分的比率：正负30%较少的组分能改变相对比率正负30%或绝对比率正负2%。

气相色谱参数调整范围在各国药典中通常有明确的规定，以确保分析结果的准确性和重现性。

这些参数包括但不限于：
1. 固定相粒径：对于填充柱，固定相颗粒的最大减小量通常不超过50%，不允许增大。

2. 膜厚：对于毛细管柱，膜厚可以在-50%到+100%的范围内调节，但需确保符合规定的要求。

3. 色谱柱长度：色谱柱长度可以±70%范围内调节，这取决于具体的实验要求和所用仪器的限制。

4. 色谱柱内径：色谱柱内径允许的调整范围没有明确说明，这可能因为不同应用和仪器对内径的要求不同。

5. 流动相pH值和浓度：例如，欧洲药典（EP）中规定，对于使用缓冲盐作为流动相的情况，pH值可在规定范围内的±0.2以内进行微调，且20mM磷酸钾可调整至18-22mM，只要最终pH值符合要求即可。

请注意，以上信息基于我之前记住的知识库内容，具体细节可能会随着各国药典更新而发生变化。