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抗猪附红细胞体药物体内筛选模型的建立与应用李辉;刘聚祥;刘静;王建平;李宏娟;许亚改【摘要】为实现抗猪附红细胞体药物的高通量筛选,拟建立小鼠最优感染模型及应用其进行药物敏感性研究.采用三因素三水平的正交试验法,通过对感染率、菌血症峰期及临床症状考察,确定最佳感染方法、感染途径和接种剂量.而后应用感染模型对土霉素、四环素、贝尼尔、青蒿素、咪唑苯脲等10种抗生素和抗原虫药进行药物敏感性测试.方差分析结果显示,以0.1 mL剂量尾静脉接种猪EH提纯液,能够使处于免疫抑制状态的昆明小鼠在3 d时达到菌血症峰期.药物敏感性测试反映贝尼尔、咪唑苯脲和青蒿素对猪附红细胞体作用最强.因此,用此模型可进行体内抗猪附红细胞体药物的高通量筛选.【期刊名称】《华北农学报》【年(卷),期】2010(025)00z【总页数】5页(P290-294)【关键词】猪附红细胞体;小鼠模型;药物筛选;药效评价【作者】李辉;刘聚祥;刘静;王建平;李宏娟;许亚改【作者单位】河北农业大学,动物科技学院,河北,保定,071001;河北农业大学,动物科技学院,河北,保定,071001;河北农业大学,动物科技学院,河北,保定,071001;河北农业大学,动物科技学院,河北,保定,071001;秦皇岛市畜牧产业发展协会,河北,秦皇岛,066300;河北农业大学,动物科技学院,河北,保定,071001【正文语种】中文【中图分类】S852.62附红细胞体病(Eperythrozoonosis)是由专性血液寄生的附红细胞体(Eperythrozoon，EH)寄生于红细胞表面、血浆及骨髓中而引起的以溶血性贫血、发热、黄疸等为主要症状的人兽共患病[1-3]。
1928年Schilling等首次在啮齿类动物中发现附红体样小体，当时将其命名为球状血红体，随后国内外学者陆续报道了绵羊附红体、牛温氏附红体和猪附红体、人附红体等[4,5]。
附红细胞体病的出现在我国已经有20多年的历史，但近年来猪附红细胞体病有趋于严重的态势，很多猪场因此也损失惨重。
猪附红细胞体病的诊治(doc 5页)猪附红细胞体病的诊治几个月以来，在山东农业大学动物保健医院门诊上常发现以高热、贫血、轻度黄疽、皮肤发红为特征的疾病。
由于大部分猪场猪群己用猪瘟、猪丹毒、猪肺疫、仔猪副伤寒疫苗进行了免疫预防接种，因此很多人怀疑为猪弓形虫病，但用磺胺类等药物治疗，均未见效，并出现死亡。
我们根据临床症状，流行特点结合实验室检查确诊为猪附红细胞体病，并且取得了明显的治疗效果。
1、病原特点在猪体内存在有两种附红细胞体，一种是猪附红细胞体，另一种是小附红细胞体。
后一种对猪不发生致病作用，常引起猪发病的只是前一种，它能使猪发生一种热性病。
猪附红细胞体是这两种原虫中较大的一种，直径平均为0．8微米，最大的可达2，5微米。
通常的形态是环形，也有球形、杆状和发芽状的。
这些原虫通常依附于红细胞上，有时也游离于血浆中。
其增殖是在红细胞内行二分裂萌芽法。
附红细胞体对干燥和化学药品的抵抗力很低，但耐低状出血；全身骨骼肌色泽变淡、稍黄染；肝表面有黄色条纹状坏死，胆囊充满胆汁；肺叶边缘充血、出血；纵隔淋巴结水肿；心包积液，心脏肿胀，心内外膜有点状出血；脾脏肿胀、柔软，切面有稀薄血液。
4、实验室诊断4.1 血液压片取病猪新鲜血液一滴，加等量生理盐水混匀，加盖玻片，油镜暗视野下观察，发现红细胞表面和血浆中有多种形态如球形、椭圆形、环形及杆状的闪光虫体，这些虫体能前后、左右、上下伸展、旋转、翻滚。
由于在红细胞表面的虫体有张力作用，使红细胞的形态发生变化，呈锯齿状、菠萝状等不规则形态，一个红细胞上可附着数个至数十个虫体。
4.2姬姆萨染色镜检取病猪耳静脉血，涂片，姬姆萨染色，在1500倍油镜下，可观察到附在红细胞表面的淡紫色、呈多种形态的附红纲胞体，而以点状、不规则的环形为多，其特点是当调动微动螺旋时，折光性较强，附红细胞体中央发亮，形似空泡。
5、治疗咪唑苯脲20-30mg/kg体重肌肉注射间隔24小时再注射一次。
注射本品前，可先注射地塞米松以防猪只过敏；注射本品后若有猪只出现严重的气喘症状，可以用硫酸阿托品缓解。
猪附红细胞体感染BALB/c小鼠模型的建立及相关指标检测冯会权1，徐昆2，宋立先1，田晶1，贺宝军1，巴彩凤1*（1．辽宁医学院实验动物中心，辽宁锦州121001；2．辽宁医学院附属第一医院，辽宁锦州121000）摘要：通过建立猪附红细胞体感染BALB/c小鼠模型，检测BALB/c小鼠外周血中血细胞的变化特征，同时检测感染小鼠血浆中红细胞表面分子CD35分子（Ⅰ型补体受体），进一步揭示附红细胞体的免疫致病机理。
结果显示小鼠感染猪附红细胞体随感染时间的增加，红细胞数量呈降低趋势，白细胞数量呈升高趋势，且两者呈负相关。
CD35的表达水平显著增高，说明附红细胞体感染可降低机体免疫水平。
关键词：猪附红细胞体；BALB/c小鼠；免疫水平中图分类号：S854文献标识码：B文章编号：0529-5130（2011）01-0063-03附红细胞体是一种亲血性支原体，广泛寄生在人和各种脊椎动物体内，引起一种人兽共患的传染病。
主要致病过程是附着宿主的红细胞，宿主通过自身免疫等机制破坏红细胞，从而导致宿主发热、贫血、黄疸甚至死亡［1－3］。
目前，国内外对附红细胞体病的研究尚不深入，本试验采用体外感染建立附红细胞体感染小鼠动物模型，动态观察感染后小鼠血液中红细胞、白细胞的变化及其之间的关系，检测小鼠游离红细胞表面CD35分子（Ⅰ型补体受体）的表达，探讨血细胞参与免疫反应的机制，为研究附红细胞体的免疫致病机理及机体的免疫反应奠定理论基础。
1材料与方法1.1试验动物清洁级BALB/c小鼠54只，7周龄，雌雄各半，体重20 25g，购自大连医科大学实验动物中心。
猪附红细胞体阳性和阴性血液由辽宁医学院畜牧兽医学院馈赠，猪附红细胞体阳性血经姬姆萨染色镜检附红细胞体阳性率达90%以上。
1.2小鼠模型建立BALB/c小鼠尾静脉采血分别经鲜血压片标本镜检和猪附红细胞体PCR检测，确定小鼠无猪附红细胞体感染后，随机将54只小鼠分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ共3组，每组18只。
猪附红细胞体pcr检测方法的建立和初步应用文章标题：猪附红细胞体PCR检测方法的建立与初步应用在农业领域，猪附红细胞体PCR检测方法的建立和初步应用备受关注。
本文将从建立方法的过程、应用范围和未来发展等方面进行深入探讨，帮助读者全面了解这一重要的技术。
一、建立方法的过程1.1 猪附红细胞体PCR检测方法的原理猪附红细胞体PCR检测方法是一种基于多重PCR的检测技术，主要用于检测猪体内的特定病原体。
1.2 关键步骤和技术要点建立这一检测方法需要充分理解猪体内病原体的生物学特征，同时需要在PCR技术上进行优化，确保灵敏度和特异性。
1.3 方法的验证和实验数据经过大量实验和数据对比，可以确定该方法在猪体内病原体检测方面具有可靠性和准确性。
二、初步应用2.1 在疾病防控中的应用猪附红细胞体PCR检测方法可以用于疾病的早期诊断和监测，为疾病的控制和防治提供重要支持。
2.2 在饲养管理中的作用通过该方法的应用，可以及时检测病原体，避免疾病的传播，保障猪的生长和健康。
2.3 对农业生产的意义猪附红细胞体PCR检测方法的建立和应用，对农业生产具有重要意义，可以提高疾病检测的精准度，保障畜禽健康生产。
三、未来展望3.1 技术的改进和完善在未来，需要不断改进和完善猪附红细胞体PCR检测方法，提高其在现实应用中的效率和稳定性。
3.2 拓展应用领域除了用于猪体内病原体的检测，该技术还可以在其他动物的病原体检测中得到拓展，具有广阔的应用前景。
3.3 国内外研究现状与竞争优势通过了解国内外研究现状，可以为我们提供更多的启发和借鉴，提高我们的研究水平和竞争力。
个人观点和总结通过对猪附红细胞体PCR检测方法的建立和初步应用的深入探讨，我认为这一技术具有巨大的潜力和应用前景。
在未来，随着技术的不断改进和完善，相信它将在农业生产和疾病防控领域发挥更大的作用。
在撰写本文的过程中，我深刻理解了猪附红细胞体PCR检测方法的重要性和价值所在。
猪附红细胞体病PCR诊断方法的建立及应用（作者:___________单位: ___________邮编: ___________）作者：巴彩凤，李久纯，冯会权，赵微【摘要】目的建立一种新型的猪附红细胞体病PCR诊断方法。
方法根据猪附红细胞体部分CDS基因序列（AJ504999）设计引物，建立一种新的猪附红细胞体病PCR诊断方法。
通过实验室染毒实验，建立感染猪附红细胞体病的小鼠模型，并应用研制的PCR 方法进行实验室验证。
应用建立的PCR诊断方法对辽宁5个城市的385个猪样本进行猪附红细胞体病流行病学情况调查，确定猪附红细胞体病的感染率。
结果成功建立猪附红细胞体病PCR诊断方法，通过染毒模型验证了该方法具有快速、特异性强、敏感性高的特点。
并估计出辽宁省猪群中附红细胞体总体感染率95%的可信区间为（82.50%，89.44%）。
结论本研究建立的猪附红细胞体病PCR诊断方法及临床应用，为辽宁地区乃至全国附红细胞体病的防治工作提供了科学理论数据。
【关键词】猪附红细胞体病PCR 动物模型感染率Abstract: Objective To establish a new PCR diagnostic method of mycoplasma suis(M.suis) .Methods The primers were designed based on the partial CDS gene sequences(GenBank nos AJ504999) to establish a new PCR diagnostic method. A mouse model was established through the toxicity test in the lab and the lab test was conducted using the PCR method. The epidemiology situation of M. suis of 385 porcine blood samples in Liaoning Province was investigated using the CPR diagnostic method. Results It showed that the PCR diagnostic method was established successfully and it has been tested that this method was rapid, specific and highly sensitive . In this study, we find that the prevalence rate of M. suis infection varied from 82.50% to 89.44% in province. Conclusions The study showed that the PCR diagnostic method and its clinical application of M. suis provided the scientific theory data for the prevention and cure of M.suis in Liaoning Province even the whole nation.Key words:mycoplasma suis; polymerase chain reaction; animal model; infectionrate附红细胞体是一种专性血液寄生生物，寄生于多种动物和人红细胞表面、血浆及骨髓内，引起一种以溶血性贫血、黄疸、发热等为主要临床症状的人兽共患传染病［1］。
