0922粪便核酸提取试剂盒说明书
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说明书【产品名称】【预期用途】本产品主要原理如下:1.使用裂解液实现细胞裂解、DNA 的释放。
2.磁珠可以特异地吸附DNA ,通过洗涤,去除DNA 以外的杂质。
3.洗脱液解离吸附在磁珠上的DNA ,得到纯度和浓度均很高的DNA 。
【检验原理】100次/盒; 400次/盒【包装规格】核酸提取或纯化试剂版本号:12/2021用于核酸的提取、富集、纯化等步骤。
其处理后的产物用于临床体外检测使用。
核酸提取或纯化试剂【主要组成成分】100次/盒400次/盒试剂名称规格数量规格数量裂解缓冲液24ml/瓶1瓶96ml/瓶1瓶漂洗缓冲液1(浓缩液)80ml/瓶1瓶80ml/瓶4瓶漂洗缓冲液2(浓缩液)50ml/瓶1瓶50ml/瓶4瓶漂洗缓冲液396 ml/瓶1瓶192ml/瓶2瓶洗脱缓冲液30ml/瓶1瓶96ml/瓶1瓶蛋白酶K25mg/支2支180mg/瓶1瓶蛋白酶K保存液 1.25 ml/支2支5ml/支2支磁珠悬浮液1ml/瓶2瓶8ml/瓶1瓶【自备仪器、试剂】1.手动单管提取:1)恒温混匀仪——货号:CW25932)2/15 ml磁力架——货号:CW25943)异丙醇、无水乙醇2.手动96孔深孔板提取:1)恒温混匀仪——货号:CW25932)废液抽吸系统——推荐品牌台湾洛科3)手动连续分液器——推荐品牌Eppendorf4)电动连续分液器——推荐品牌Eppendorf5)手动连续分液器分液管(25 ml)——推荐品牌Eppendorf6)96孔板磁力架——货号:CW25957)异丙醇、无水乙醇3.磁棒法磁珠自动提取系统:1)磁棒法磁珠自动提取系统——建议品牌Thermo Fisher2)异丙醇、无水乙醇【储存条件及有效期】4-30℃保存,有效期12个月。
可在4-37℃运输,运输时间建议不超过7天。
【样本要求】1.适用样本类型:抗凝全血、唾液、细胞。
2.样本处理与保存:新鲜样本应尽快处理或-70℃冻存,避免反复冻融。
粪便基因组DNA提取试剂盒使用说明货号:D2700规格:50T/100T保存:室温(15℃-25℃)干燥保存,复-检期12个月,2℃-8℃保存时间更长。
试剂盒内容:D2700-50T D2700-100T溶液SA25ml50ml溶液SB3ml6ml溶液SC5ml10ml溶液SD10ml20ml漂洗液15ml15ml×2洗脱液15ml30ml吸附柱50个100个收集管50个100个说明书1份1份注:试剂盒开封后溶液SA、SB、SC、SD需在2-8℃保存。
产品简介:粪便基因组DNA提取试剂盒适合于从各种粪便中提取微生物DNA。
对粪便中各种细菌、真菌有很好裂解效果,最大限度的保留了微生物DNA的多态性。
使用本试剂盒提取的DNA产量大、完整性好,可直接用于各种常规操作,包括酶切、PCR、文库构建、Southern杂交等实验。
操作步骤:使用前请先在漂洗液中加入无水乙醇,加入体积请参照瓶体上的标签。
所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。
1、称取粪便样本0.1-0.5g,在液氮中充分研磨成细粉末,加入450ul溶液SA震荡混匀。
*也可直接称取样本0.1-0.5g于离心管(建议使用2ml圆底管),加入450ul溶液SA剧烈震荡混匀1-2min至没有固体块。
使用液氮研磨效果最佳。
2、加入50ul溶液SB充分颠倒混匀(不要剧烈震荡),65℃水浴6min,每2min充分颠倒混匀一次。
3、加入100ul溶液SC充分颠倒混匀(不要剧烈震荡),12000rpm离心10min。
4、将上清转移到新的离心管,12000rpm离心2min。
5、在吸附柱中加入200ul溶液SD,将离心后的上清加入到带有溶液SD的吸附柱中,用移液器吹吸几次混匀,12000rpm离心1min。
6、将收集管中的滤出液混匀后重新吸入吸附柱(必须),12000rpm离心1min。
7、倒掉收集管中的废液,在吸附柱中加入漂洗液500ul,12000rpm离心1min。
核酸提取试剂盒1. 简介核酸提取试剂盒是一种用于提取生物样品中的核酸(DNA 或 RNA)的化学试剂盒。
核酸提取是分子生物学和基因组学研究中的基础步骤,其目的是从细胞或组织中分离出纯净的核酸样品,以进行后续的分析和研究。
核酸提取试剂盒通常包含一系列化学试剂和特定步骤的操作流程,能够有效地提取出高质量的核酸样品。
本文将介绍核酸提取试剂盒的原理、操作流程、其在科研和临床应用中的重要性,并讨论一些相关的注意事项。
2. 原理核酸提取试剂盒的提取原理一般分为以下几个步骤:2.1 细胞破碎和裂解核酸提取的第一步是将细胞或组织完全破碎和裂解,以释放内部的核酸。
这一步可以通过机械方法(如研钵研磨或超声破碎)或化学方法(如细胞裂解酶)来实现。
2.2 蛋白质消化核酸提取试剂盒中通常包含蛋白酶,用于消化细胞中的蛋白质。
蛋白质消化可以使细胞的蛋白质分解,从而使核酸得以保护和纯化。
2.3 核酸沉淀经过细胞破碎和蛋白质消化后,核酸会以溶液的形式存在。
为了使核酸得以沉淀,可以加入酒精等有机溶剂,通过离心将核酸沉淀下来。
2.4 核酸洗提核酸沉淀后,需要进行洗提步骤以去除杂质和残余的试剂。
这一步可以使用酒精洗涤或盐-酒精洗涤方法,以获得高质量的核酸样品。
2.5 核酸溶解和保存最后一步是将沉淀的核酸重新溶解在适当的缓冲溶液中,以使其稳定并便于后续的实验操作。
溶解的核酸样品可以在低温下长期保存。
3. 操作流程以下是通常使用核酸提取试剂盒的操作流程的简要介绍:1.准备样品:收集细胞或组织样品,并将其保存在适当的条件下,以保持核酸的完整性。
2.细胞破碎和裂解:使用试剂盒提供的适当方法,将样品完全破碎和裂解,以释放内部的核酸。
3.蛋白质消化:添加试剂盒中提供的蛋白酶,消化样品中的蛋白质。
4.核酸沉淀:向细胞裂解产物中加入适量的有机溶剂,使核酸沉淀下来。
5.核酸洗提:使用试剂盒提供的洗提方法,去除杂质和残留的试剂。
6.核酸溶解和保存:将沉淀的核酸重新溶解在适当的缓冲溶液中,并在低温下保存。
核酸提取或纯化试剂说明书核酸提取或纯化试剂是生命科学研究中必不可少的试剂之一。
它可以从各种来源的样本中提取纯化DNA或RNA,为后续分子生物学研究提供了基础。
下面介绍核酸提取试剂说明书中的主要内容以及使用技巧。
一、试剂说明书中的主要内容1. 试剂组成:一般会列出试剂中各种成分及其含量,以及每个试剂的作用。
2. 试剂使用注意事项:列举虽然在执行核酸提取时可能遇到的各种问题,以及解决办法。
3. 操作步骤说明:详细介绍从样本前处理到提取、纯化、洗涤、干燥各个步骤的操作方法、时间、温度等,以确保在操作过程中获得高质量的DNA或RNA。
4. 实验结果的分析与说明:可在说明书中列出在提取过程中可能遇到的问题及其解决方案,可能的实验结果以及如何解读和分析。
二、使用技巧1. 样本选择:应根据不同实验要求和分析目的选择不同来源的样品。
需要注意的是,不同来源的样品中的DNA或RNA含量会有很大差异,比如不同器官,不同部位的细胞等,因此需要在样品数量和质量之间取得平衡。
2. 样品前处理:在提取前,应根据具体实验要求进行预处理,如去除杂质、裂解细胞等操作。
有其它可特出强调的前处理方法如分选、筛选、悬液等。
3. 试剂的选择:在不同的试验种类下,应根据实验所需鉴定目的进行不同试剂的选择,不同种类的样本适用于不同类型的试剂,很多公司推出不同的纯化试剂根据不同的试验目的。
4. 重复操作:重复操作是确保提取质量的关键。
一般应对至少两个姐妹样品进行提取,以确保实验结果的可靠性和稳定性。
总体而言,在使用核酸提取或纯化试剂的过程中,需要仔细阅读试剂说明书,掌握操作步骤和注意事项,注意样品选择和前处理,选择合适的试剂,多次重复试验以确保结果的可靠性。
核酸提取试剂盒说明书标题:核酸提取试剂盒说明书一、产品概述本产品是一款适用于各种生物样本的核酸提取试剂盒,能够高效、快速地从各种类型的样本中提取出高质量的DNA/RNA。
广泛应用于基因检测、分子生物学研究、疾病诊断等领域。
二、产品组成1. 核酸提取液A:用于裂解细胞和溶解核酸。
2. 核酸提取液B:用于去除蛋白质等杂质。
3. 洗涤液:用于洗涤核酸。
4. 乙醇溶液:用于沉淀核酸。
5. RNA酶抑制剂:防止RNA降解。
6. DNA/RNA分离柱:用于核酸的吸附和洗脱。
三、操作步骤1. 样本处理:根据样本类型进行相应的前处理。
2. 核酸提取:将处理后的样本加入到核酸提取液A中,涡旋混合后静置,然后加入核酸提取液B,再次涡旋混合并静置。
3. 细胞破碎与核酸释放:将混合液离心,取上清液转移到新的离心管中。
4. 去除杂质:向上述上清液中加入洗涤液,涡旋混合后离心。
5. 核酸吸附:将上清液转移到DNA/RNA分离柱中,离心吸附核酸。
6. 洗涤核酸:使用洗涤液对DNA/RNA分离柱进行洗涤,以去除剩余的杂质。
7. 核酸洗脱:加入适量的无菌水或TE缓冲液到DNA/RNA分离柱中,离心洗脱核酸。
8. 核酸保存:将提取出的核酸立即使用或-20℃保存。
四、注意事项1. 所有操作应严格遵守实验室生物安全规定。
2. 核酸提取过程中应避免产生气溶胶,以防交叉污染。
3. 提取后的核酸应尽快使用,长期保存时要避免反复冻融。
4. 试剂盒中的所有成分都应在室温下回温至室温后再使用。
五、质量保证我们承诺该产品经过严格的质量控制,如有任何质量问题,请联系我们的客户服务部。
六、联系方式感谢您选择我们的产品,如有任何问题或需要进一步的信息,请随时联系我们。
快速核酸提取试剂盒
1、产品介绍
本裂解液具有样本用量少,步骤简单,不需要特殊仪器,而且能够沉淀样本血清中的杂蛋白及其他影响PCR反应的大分子有机物,是目前快速检测中较理想的选择之一。
该技术将标本直接加入到PCR 扩增管,不需振荡、无需开管盖和移液等操作,可采用与标准质控品和标本同步进行处理和扩增,实现全程监控,具有无污染、操作简单、快速、准确等独特优点。
2
3、适用范围
适用于血清,无抗凝的血浆或者全血,病毒培养液,尿液,唾液,咽拭子浸提液等标本。
4、实验步骤
(1)用200ul PCR管加入5ul Buffer1 溶液,再加入5ul样本,轻柔混匀,短离;
(2)新的200ul PCR管中,加入3ul MB裂解液,再加入3ul(1)中的混合液,10000转离心1min;
(3)将加好MB 裂解液的PCR管置于PCR仪(带热盖)中,99℃,10min;(4)取出样本后再室温平衡2-3min,10000转离心1min,PCR管底可见白色沉淀物,说明裂解完全;
(5)直接进行PCR扩增程序;
※注:若样本为血清或者无抗凝血浆,可跳过步骤(1),直接从步骤(2)开始。
其他样本(非组织),需要加Buffer1预混,从步骤(1)开始。
5、注意事项
※尽量避免多次冻融,可置于4℃保存,长期保存于-20℃。
※血浆样品不能含有任何抗凝剂,会影响后续实验。
※MB裂解液使用体积为PCR总体积的1/8。
Q i a G e n粪便D N A提取试剂盒中文说明书(总1页)-CAL-FENGHAI.-(YICAI)-Company One1-CAL-本页仅作为文档封面,使用请直接删除注意:1.准备好70℃水浴锅。
2.所有的离心操作都在室温下(15-25℃),14000转/分钟3.用Buffer AL和InhibitEX Buffer溶解任何沉淀都要加热和混匀。
AW1和Buffer AW2都加乙醇。
5.使用之前混合所有缓冲液。
1.称取200ul样品在2ml的离心管中,离心管放在冰上。
2.每个样品添加1ml InhibitEX Buffer,然后持续旋涡混合1min或者直到样品混合均匀。
3.在70℃加热悬浮液5min(难以溶解的细胞溶解温度可以提高到95℃),然后旋涡混合15s。
4.离心样品1min析出沉淀。
5.另取离心管加15ul Proteinase K。
6.移取200ul步骤4的上清液至含Proteinase K的离心管中。
7.然后添加200ul Buffer AL,旋涡混合15s。
(注意:不要直接添加ProteinaseK到Buffer AL中,样品和Buffer AL必须充分混合成均匀混合液)8.70℃孵育10min。
9.添加200ul乙醇到溶解液中,旋涡混合。
10.小心移取600ul步骤9的裂解液到QIAamp 旋转柱中,盖上盖子,离心1min。
把QIAamp 旋转柱放到一个新的2ml的收集管中,丢掉含有滤液的管。
11.小心打开QIAamp 旋转柱,添加500ul Buffer AW1,离心1min。
把QIAamp旋转柱放到一个新的2ml收集管中,丢掉包含滤液的收集管。
12.小心打开QIAamp 旋转柱,添加500ul Buffer AW2,离心3min,丢掉包含滤液的收集管。
13.把QIAamp 旋转柱放到一个新的2ml的收集管中,丢掉旧的含有滤液的收集管,离心3min。
14.把QIAamp 旋转柱放到一个新的的离心管,直接移取200ul Buffer ATE 到QIAamp薄膜上。
粪便DNA纯化试剂盒说明书粪便DNA纯化试剂盒Cat. No. 5次样品410100550次制备4101050250次制备4101250核酸纯化柱2 ml离心管蛋白酶K贮存液Buffer SBuffer STBuffer SLBuffer WA(浓缩液)Buffer WB(浓缩液)Buffer TE说明书5个5个120 µl4 ml4 ml1.2 ml1.9 ml1.5 ml1.2 ml1份50个50个1.2 ml35 ml35 ml12 ml12 ml10 ml12 ml1份250个250个1.2 ml×5165 ml165 ml60 ml60 ml50 ml60 ml1份产品储存1.蛋白酶K贮存液请置于﹣20℃贮存。
2.其他试剂与物品如果储存于室温(15~25℃),可在两年内保持使用性能无明显变化;如果将产品储存于2~8℃,可延长产品的有效期至两年以上(2~8℃储存的产品使用前应先产品恢复到室温后再使用)。
技术支持杭州新景生物产品介绍本产品适合从150~200 mg新鲜的或者是冷冻贮藏的人或动物粪便中分离总DNA。
被溶解的粪便中的人或动物的基因组DNA、病毒DNA、细菌及寄生虫DNA均可结合到核酸纯化柱上,降解的蛋白与PCR抑制物则被过滤除去,基因组DNA经Buffer WA和Buffer WB 洗涤后,用Buffer TE洗脱,即可用于各种分子生物学实验。
用户需自备的试剂与物品1.无水乙醇2.1.5 ml离心管和2 ml离心管(某些国产2 ml离心管95℃水浴时管盖会爆开,请选择合适的2 ml离心管。
)3.移液器吸头(为避免样品间的污染,请选用含有滤芯的移液器吸头)4.一次性手套及防护用品和纸巾5.台式小量离心机(可配离心1.5 ml离心管和2 ml离心管的转子)6.水浴锅和旋涡震荡器使用前准备1.如果离心机有制冷功能,请将温度设置到25℃。
2.将水浴锅温度设置到70℃和95℃,并将Buffer ST和Buffer TE在70℃温育。
通用型核酸快速提取试剂盒说明书简介:本试剂盒采用异硫氰酸胍及表面活性剂联合裂解细胞技术,添加独特的病毒凝集剂,不需要进行酚氯仿抽提,可从细胞培养物、血浆、血清、分泌液、腹水、拭子等的样本中快速提取痕量的病毒或细胞的核酸(DNA和RNA)。
有效去除酶抑制剂,提取的核酸可用于PCR、RT-PCR、定量PCR、杂交等各种分子生物学实验,对于临床基因诊断尤其适用。
特点:1、经济实惠,使用耗材少,DNA和RNA都能提取;2、快速,不需要进行酚氯仿抽提,有效去除各种酶抑制物,方便后续实验操作;3、提取效率高,痕量病毒或细胞仍能有效提取到核酸。
试剂盒组成(50次):1、抽提A液(1瓶,10ml)2、抽提B液(1瓶,12.5ml)3、抽提C液(1瓶,10ml)4、样本稀释液(1支,1ml)储存及有效期:-20℃储存,开封后可放置于4℃,有效期两年。
操作步骤(以血清、分泌液和腹水为例):1、取待抽提的血清50μl置于微型离心管中,加入200μl抽提A液,颠倒数次充分混匀;(混匀后室温放置5分钟可达到最佳效果)2、加入250μl抽提B液,颠倒数次充分混匀(混匀后室温放置10min可达最佳效果),13000rpm离心10min,倒去上清;3、加入200μl抽提C液,颠倒数次混匀,13000rpm离心5min,吸弃上清(尽量去掉上清);4、室温放置或50℃加热5min晾干,加入25μl样本稀释液混悬沉淀物,短暂离心使液体落于管底部,上清液即为提取得到的核酸。
注:对于分泌物或棉拭子,先用适量无菌生理盐水把拭子上的分泌物洗入离心管中,或者把拭子泡在无菌生理盐水中,捻动使分泌物分散于液体中,然后高速离心5min后,去除大部分上清,余下的样本即应用上述步骤抽提核酸。
注意事项:1、如果抽提的是病毒RNA,最好即提即用,保存请置于-80℃。
2、抽提A液及抽提B液可根据所用的提取物的量等倍加大用量。
3、抽提A液低温保存会有絮状物析出或凝结是正常现象,使用前置于50℃使融化,颠倒混匀,不影响使用。
粪便基因组DNA 快速提取试剂盒 目录号:DN23目录编号包装单位 DN2301 50次❖ 适用范围:适用于快速提取各种粪便DNA❖ 试剂盒组成、储存、稳定性:本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果。
杂质清除剂AB 升级,可以室温存放,使用更方便。
储存事项:试剂盒组成 保存50次 缓冲液ASL 室温70 ml 杂质清除剂AB 室温5 ml 结合液CB 室温11 ml 抑制物去除液IR 室温25 ml 漂洗液WB 室温15 ml 第一次使用前按说明加指定量乙醇 洗脱缓冲液EB 室温15 ml 蛋白酶K 粉(可选) 20mg/ml -20℃20mg 吸附柱AC 室温50个 收集管(2ml ) 室温 50个1.缓冲液ASL或者结合液CB低温时可能出现析出和沉淀,可以在70℃水浴几分钟帮助重新充分溶解,恢复澄清透明后冷却到室温即可使用。
2.为避免降低活性,方便运输,提供蛋白酶K为冻干粉状,收到后,可短暂离心后,加入1毫升灭菌水溶解,因为反复冻融可能会降低酶活性,因此溶解后立即按照每次使用量(20微升)分装冻存,-20℃保存。
3.避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化,各溶液使用后应及时盖紧盖子。
❖产品介绍:常规的DNA纯化方式并不能有效地去除粪便中存在的大量抑制因子而导致下游实验的失败,如PCR不能扩增出所需片段。
该试剂盒采用DNA吸附柱和新型独特的溶液系统,能有效去除动物粪便中各种影响下游实验(如PCR)的抑制因子,并能高效地回收粪便中的基因组DNA。
动物粪便样品经特殊缓冲液ASL重悬后,70℃处理5分钟裂解细菌;离心去除不溶解的杂质,蛋白酶K消化进一步去除蛋白和杂质;然后基因组DNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜,再通过一系列快速的漂洗-离心的步骤,抑制物去除液和漂洗液将细胞代谢物、蛋白等杂质去除,最后低盐的洗脱缓冲液将纯净基因组DNA从硅基质膜上洗脱。
❖产品特点:1.离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口世界著名公司特制吸附膜,柱与柱之间吸附量差异极小,可重复性好。
磁珠法粪便核酸提取试剂盒(常规版)
Faeces DNA Extraction Kit (Regular Version)
【目录号】FDE-5005、FDE-5030
【运输条件】2~25℃;
【保存条件】磁珠分散液、裂解液②2~8℃,其它组分室温;
【试剂盒组成】
【注意事项】
1. 在使用本试剂盒钱,请用户自备80%乙醇;
2. 使用前请检查裂解液①、②是否出现结晶或者沉淀,如有结晶或者沉淀,请将裂解液置
于378℃水浴重新溶解;
3. 本操作指南经本公司反复验证,使用前请仔细阅读,并且按照操作指南的建议操作。
磁珠法·自动化:为生命科学提供自动化磁纳米捕获方案
【产品简介】
本试剂盒采用具有独特分离作用的磁珠和独特的缓冲液系统,从各种固态或液态粪便样品中分离纯化高质量基因组DNA。
特殊技术包埋的磁珠在特定条件下对核酸具有极强的
亲和力,而当条件改变时,磁珠会释放吸附的核酸,从而达到快速分离纯化核酸的目的。
提取的基因组DNA片段打,纯度高,质量稳定可靠,尤其适合高通量工作站的自动化提取,特别是本公司各型号的自动化核酸提取仪。
本试剂盒纯化的DNA可适用于各种常规操作,包括酶切、PCR、荧光定量PCR、文库构建、Sputhem杂交、芯片检测和高通量测序等实验。
【试剂盒说明】
1. 磁珠分散液严禁反复冻融和离心,磁珠使用前务必充分混匀,可涡旋振荡10秒左右;
2. 实验中使用我先混合仪的目的是为使磁珠能够充分吸附核酸、将磁珠表面的杂质充分去
除或核酸从磁珠表面充分洗脱;
3. 使用前检查裂解液①、②是否出现结晶或者沉淀,如有结晶或者沉淀,请将裂解①、②
于37℃水浴重新溶解。
【自备仪器、耗材和试剂】
仪器自动版
涡旋混合仪、高速离心机、水浴锅或金属浴、96孔方孔圆底板、无水乙醇、异丙醇、英芮诚ETP-300核酸提取仪。
手动版
涡旋混合仪、高速离心机、金属浴或水浴锅;EP管、EP管用磁力架、无水乙醇、异丙醇。
【仪器自动版操作步骤】
以英芮诚ETP-300型全自动核酸提取仪为例,可同步完成32个样本的提取工作。
1.上样准备
参照下表用量向96孔板中分别加入相应试剂。
磁珠法粪便核酸提取试剂盒(常规版)
2.上机样品的获得
A.固体样品:称取200mg左右的粪便只EP管中,分别加入1mL的裂解液①、20μL
蛋白酶K,涡旋振荡1min(须将管底的粪便振荡起来)后,58℃温浴30min(每隔5min
颠倒混匀一次)。
B.液态样品:吸取200μL左右的粪便至EP管中,分别加入200μL裂解液①、20μL
蛋白酶K,涡旋振荡1min(须将管底的粪便振荡起来)后,58℃温浴15min(每隔5min
颠倒混匀一次)。
注:如需去除RNA,请额外加入RNase A(100mg/mL)5μL。
1)裂解完毕的样本,室温12000rpm,离心5min,转移400μL上清至新的EP管内。
2)向装有上清的EP管内加入250μL裂解液②,上下颠倒5次,混合均匀,12000rpm,
离心5min,保留上清,待用。
3.上机提取
1)从第2步裂解完毕的样本中吸取450μL上清至准备好的96孔板的第2/8列;
2)将96孔版样品板放入ETP-300型核酸提取仪中,并插入磁棒套;
3)打开仪器操作程序,调用“粪便核酸提取”程序,单击“运行”执行提取程序。
4.核酸转移
程序运行完毕,取下96孔板,将洗脱液转移至干净的EP管或者PCR板中,做好标记,
提取过程完成,此时可以弃去96孔板。
磁珠法·自动化:为生命科学提供自动化磁纳米捕获方案
【手动版操作步骤】
1.准备
真空干燥箱稳定到45℃;
2.样本的裂解
参考仪器操作步骤2进行。
3.结合
向装有上清的EP管内加入分别加入等体积的异丙醇和75μL磁珠悬浮液,颠倒混匀;
将EP管置于涡旋混合仪上高速振荡10min,使磁珠与溶液充分混匀,确保磁珠与核酸完全结合,之后静止2min。
4.磁性分离
将EP管置于磁力架上,静止1min,待磁珠吸附完毕后,弃净澄清液,下同。
5.清洗
将EP管从磁力架上取下,加入600μL清洗液1,置涡旋混合仪高速振荡1min,使磁珠分散均匀,取下EP管并置于磁力架上静止30s,弃净澄清液。
使用700μL80%乙醇,参照上述步骤操作2次。
6.除醇
将除尽上清液后的EP管置于磁力架上,连同磁力架一起放入45℃真空干燥箱中,干燥约8min至无明显乙醇味。
注:若无真空干燥箱,亦可在保持通风橱通风或电风扇的状态下静置约10min,具体时间根据气温变化可能需要适当调整,以磁珠干燥完全为原则。
7.洗脱
取出EP管,加入100μL洗脱液(或去离子水),移液枪吹打使磁珠与洗脱液充分混匀,将EP管于65℃加热洗脱5min,然后涡旋洗脱2min,确保磁珠与核酸洗脱完全。
注:洗脱液要求≥50μL,100~200μL较好,吸入也较少时会影响回收率。
8.核酸转移
将EP管置于磁力架上静置30s至磁珠吸附完全,用移液枪将洗脱液转移至另一干净EP 管中,操作过程完成,此时可以弃去磁珠。
(1702修订版)
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版本:V201702.221。