内参工作流程图
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一、Total RNA的提取:1.取出样本,放入灭过菌的研钵中,倒入液氮,研磨,整个过程要始终保持有液氮,15min左右,研磨充分后加入1.5ml的EP管,加入1ml Trizol,充分匀浆。
(另一种,加入trizol会冻起来,就一直研磨,直到最后化成液体。
)2.室温静置10min,12000g,4度,5min,上清转移到新的1.5ml的EP管中3.加入1/4体积的氯仿,振荡混匀,室温静置15min,12000g,4度,15min,上清转移至新管;4.加入等体积的异丙醇,轻轻摇匀,室温静置10min,12000g,4度,10min5.弃上清,留沉淀,加入1ml的75%乙醇清洗沉淀,7500g,4度,5min,弃上清保留沉淀。
重复三次6.弃上清留沉淀,自然风干(5~10min),加入32ul DEPC处理过的水,测OD260/280的值,根据结果调整至1μg/μl=1000ng/μl,立即进行反转录,剩余的RNA标好号存放在-80℃下。
附:1OD260=40μg/ml用样本跑电泳,确定RNA的完整性,注意在这之前把胶配好。
(可无)可见明显的两条带,并且28S是18S亮度的两倍,还有下边一条不太明显的5SRNA的条带。
证明RNA完整无降解。
二、反转录:说明书:10 μl 反应体系可最大使用500 ng 的Total RNA。
20/1μg(以前用的40,下次用20)20ul的体系:先把buffer和RNase Free dH20和enzyme 配成mix 5×PrimeScript Buffer(for Real Time):4μlPrimeScript RT Enzyme Mix I :1μlOligo dT Primer(50 μM):1μlRandom 6 mers(100 μM):1μl总RNA :1μl(1μg/μl)RNase Free dH2O :12μl反转录反应条件如下:37℃15 min (反转录反应)85℃5 sec(反转录酶的失活反应)4℃-20℃分装保存(尽量不要反复冻融,avoid freeze-thaw cycles)三、内参检测β-actin 50µl体系PCR 反应条件:扩增1 kb 的DNA 片段的PCR 反应条件如下:预变性:95℃,3min98℃10 sec.55℃30 sec.(下次60℃,去掉非特异性)72℃30 s(对于80bp的内参来说是不是可以省去)72℃5min.4℃保存电泳:2%琼脂糖凝胶,125V,15min,注意换成20bp的marker,不要加太多。
市场部工作流程图及具体流程The manuscript was revised on the evening of 2021市场部工作流程一、市场部项目提报工作流程图二、市场部项目拓展工作项目流程图二、市场部研展工作细则(草案)(一)全程策略流程中的位置(二)、市场部研展工作主要内容1.协助市场部开发人员确定某项目是否需要提案2.确定提案后,对项目进行市场调研,为策略部与创意设计部进行策划和创意设计提供市场信息及依据3.进行楼盘普调、区域市场分析、专题研究、消费者调查、开发商实力调查等(三)、项目调研第一阶段:时间:市场部开发人员得到有关项目信息,确定提案前重点:1.协助市场部开发人员了解发展商背景2.根据项目情况,提供是否提案的意见第二阶段:时间:确定提案后,初步市场调研报告出来之前重点:1.了解发展商对于提案在时间和内容上的要求,制定调研工作计划 2.对项目做深入分析,包括地块、景观、交通、周边设施。
其中交通包括:周边主要公交线路、主要交通道路3.项目所在宏观、微观区域市场分析。
包括区域内商品房建设量、销售量、留存量等数据的汇总及分析4.有关房地产政策法规的研究5.相关个案分析。
包括:价格、房型、面积、产品形态、小区环境、卖点、销售情况等 6.消费者分析。
包括:区域、年龄、收入、消费心态等7.SWOT分析。
包括:优势、弱势、机会、威胁8.项目建议。
包括:价位、房型面积、建材、会所、智能化、物业管理等第三阶段:时间:初步市调报告出来后,正式市调报告出来之前重点:1.与策略部、创意设计部人员沟通,听取意见2.对初步报告修正,提交正式报告(四)、给市场开发部信息支持1.发展商的有关信息2.调研时标地获得信息3.从媒体广告中得到信息4.各种房展会上获得有关信息(五)、给策略部的支持1.在提案阶段时,做市场调研,提交市场调研报告2.在项目代理合同签署后(1)做有关专题调研,如纯净水如户、菜单式装修等(2)配合策略部做即时性调研(六)、给创意设计部的支持1.项目运作中各阶段的广告表现整合2.广告表现中专题图片的整合3.前期设计中的资料整合(VI、楼书、专业单位等)三、市场部研展工作细则(一)楼盘调研1.新盘从信息管理员处得到新盘信息,第二天安排负责该新盘所在区域的调研人员进行市调,当天填写完市调分析表,交与研展主管。