实时荧光定量PCR与PCR-ELISA在乙型肝炎病毒DNA定量检测中的应用比较

安徽医药Ａｎｈｕｉ　Ｍｅｄｉｃａｌ　ａｎｄ　Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ　Ｊｏｕｒｎａｌ　２０１６　Ｓｅｐ，２０（９）　・１７２３・　

不同荧光定量ＰＣＲ技术在乙型肝炎病毒检测中的应用评价　

朱明岩，叶英　（安徽医科大学第一附属医院感染病科，安徽合肥２３００２２）　

摘要：目的评价普通荧光定量ＰＣＲ技术与罗氏内标法荧光定量ＰＣＲ技术在乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）检测中的意义。方法采　集ＨＢＶ患者的血清１９０份，分别用两种方法进行检测，通过相关性分析和Ｋａｐｐａ检验评价两种试剂检测结果之间的差异性及　

一致性。结果（１）１９０份标本中，罗氏Ｃｏｂａｓ试剂与国产试剂检测结果呈线性相关（Ｒ　＝０．６７０　７，Ｐ＜０．０５）；（２）分成ＨＢｅＡｇ　（＋）与ＨＢｅＡｇ（一）两组比较，两组中Ｃｏｂａｓ试剂与国产试剂检测均呈线性相关（Ｒ　＝０．５８６　４，Ｐ＜０．０５；Ｒ　＝０．５２２　６，Ｐ＜　０．０５）；（３）根据不同ＨＢｅＡｇ状态和抗病毒要求的ＤＮＡ载量对标本进行一致性分析，ＨＢｅＡｇ（＋）组Ｋａｐｐａ值为０．７５２；ＨＢｅＡｇ　（一）组Ｋａｐｐａ值为０．３８１。结论对于ＨＢｅＡｇ（＋）患者，可以应用国产试剂检测患者的ＨＢＶ．ＤＮＡ水平，而对于ＨＢｅＡｇ（一）　患者，建议应用Ｃｏｂａｓ试剂检测其患者的ＨＢＶ—ＤＮＡ水平。　关键词：乙型肝炎病毒；多重聚合酶链式反应；荧光抗体技术　ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００９—６４６９．２０１６．０９．０３１　

Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ　ｅｖａｌｕａｔｉｏｎｏｆ　ｄｉｆｅｒｅｎｔ　ＰＣＲ　ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ　

ｉｎ　ｄｅｔｅｃｔｉｎｇ　ＨＢＶ－ＤＮＡ　

ＺＨＵ　Ｍｉｎｇｙａｎ，ＹＥ　Ｙｉｎｇ　（ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＥｐｉｄｅｍｉｏｌｏｇｙ，Ｔｈｅ　Ｆｉｒｓｔ　Ａｆｆｉｌｉａｔｅｄ　ＨｏｓｐｉｔａｌｏｆＡｎｈｕｉ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，　

Ｈｅｆｅｉ，Ａｎｈｕｉ　２３００２２，Ｃｈｉｎａ）　

乙肝病毒血清标志物与其DNA检测结果对比分析及临床意义

冯佳

【摘 要】目的：比较乙肝血清不同模式标志物与HBV‐DNA结果进行对比分析，探讨二者之间的关系及临床意义。方法：收集2012年8月－2013年3月乙肝患者标本548例，采用酶联免疫方法和实时荧光定量PCR方法分别检测乙肝病毒血清标记物和病毒 DNA ，比较它们之间的关系。结果：HBsAg 阳性组共514 例，HBV‐DNA 定量小于1×103copies／L（阴性）共244例，HBV‐DNA 定量大于1×103copies／L（阳性）共270例，HBV‐DNA 对数值为（5．31±1.74）；HBsAg、HBeAg、HBcAb阳性组共118例，HBV‐DNA对数值为（7．03±1．01）；HBsAg、HBeAb、HBcAb阳性组共260例，HBV‐DNA定量阳性共111例，其对数值为（4．21±1 ．20），HBV‐DNA定量阴性共149例；HBsAg、HB‐cAb阳性组共116例，HBV‐DNA定量阴性共70例，HBV‐DNA定量阳性共46例，其对数值为（4．90±1．66）；其他标志物模式组共34例，HBV‐DNA定量阴性。HBV‐DNA对数值在HBeAg阳性组与HBeAb阳性组间相比，有显著的统计学差异（P＜0．05）。Real‐time PCR 法和 ELISA 法诊断乙肝的敏感性分别为49．3％和93．8％，符合率为55.5％。结论：Real‐time

PCR法和ELISA法在 HBeAg阳性组有良好的相关性，两种方法分别检测乙肝病毒感染机体不同状态，它们之间能互为补充，不能相互替代。%Objective :To

compare the results of quantitative fluorescent detection of HBV‐DNA with

the HBV serum marker and explore the relationship and clinical

66医学食疗与健康 2022年10月下第20卷第30期·实验研究·

光激电化学发光法检测乙肝两对半与荧光定量PCR法检测

HBV-DNA的结果分析

吴洁莹 胡姗姗

（东莞市横沥医院检验科，广东 东莞　523460）

【摘要】目的：对比分析光激电化学发光法与荧光定量PCR法在检测乙型肝炎病毒（下简称HBV）相关指标

中的应用效果。方法：以光激电化学发光法检测乙肝两对半，指标包括乙肝病毒表面抗原（HBsAg）、乙肝病毒表

面抗体（HBsAb）、乙肝病毒e抗原（HBeAg）、乙肝病毒e抗体（HBeAb）、乙肝病毒核心抗体（HBcAb），筛选出结

果为大三阳（HBsAg、HBeAg、HBcAb）30例；小三阳（HBsAg、HBeAb、HBcAb）30例；HBsAg、HBcAb二项阳性检

测出30例；HBsAb、HBeAb、HBcAb三项阳性检测出30例，单独HBcAb阳性检测出30例。标本共计150例。随后

对该150份样本采用荧光定量PCR法检测血清HBV-DNA载量，分析两种检测方法的检测结果。结果：大三阳组

中，HBV-DNA阳性率为86.67%，平均病毒载量为3.11 E+107 。小三阳组中，HBV-DNA阳性率为53.33%，平均

病毒载量为5.46 E+104。 HBsAg、HBcAb二项阳性组，HBV-DNA阳性率为26.67%，平均病毒载量为1.50 E+104。

HBsAb、HBeAb、HBcAb三项阳性组，HBV-DNA阳性率为0.00%，平均病毒载量为0。HBcAb阳性组，HBV-DNA

阳性率为3.33%，平均病毒载量为6.57 E+103。五组中大三阳组HBV-DNA阳性率及病毒载量最高，与其他四组比

较，数据差异显著（P＜0.05）。结论：光激电化学发光法检测乙肝两对半与荧光定量PCR法检测HBV-DNA结果

有关联性，两者联合检测，对乙肝肝炎的诊疗意义较大。

【关键词】光激电化学发光法；荧光定量PCR；乙肝两队半；乙肝病毒DNA

荧光定量聚合酶链反应检测ＨＢＶ－ＤＮＡ观察

乙型肝炎病毒（HBV）感染的实验诊断主要依据血清学标志（HBV-M）和HBV-DNA的检测。以往运用的普通PCR检测只能定性，其后处理过程易导致假阳性污染，且所用的染色剂溴乙锭是强致癌物。因此，普通PCR的应用和推广受到一定限制。我们采用实时荧光定量聚合酶链反应（Fluorescence

quantitative ,FQ-PCR）克服了常规PCR的不足.［1］，直接检测146份血清标本乙型肝炎病毒核酸的拷贝数，并同时与酶联免疫吸附试验（ELISA）进行对照，现将结果报道如下。

1材料与方法

1.1标本来源

标本来源于新华医院住院部和门诊部146例患者，清晨空腹抽取静脉血2

mL，分离血清置-20℃备用。

1.2仪器和试剂

Washer 430洗板机由ORGANO公司提供，reader 530 酶标仪ORGANO公司提供，HBV-M ELISA试剂盒由上海实业科华生物技术开发有限公司提供，乙型肝炎病毒核酸扩增荧光检测试剂盒由深圳匹基生物技术开发有限公司提供，自动荧光定量PCR仪（LightCycler）为瑞士Roche公司产品。

1.3检测方法

HBV-M测定用酶联免疫吸附试验（ELISA法），按说明书操作。HBV-DNA定量分析采用荧光定量聚合酶链反应，按说明书操作。

1.4定量结果统计

用计算对数平均值的方法来计算HBV-DNA平均拷贝数，阴性结果不参加平均值的统计，采用成组设计的两样本均数比较的t检验。

2结果

对146份血清用ELISA方法进行HBV血清标志物检测，按检测结果分成13组，并用荧光定量聚合酶链反应进行相应HBV-DNA含量测定，两种方法所得结果的关系见表1。血清HBeAg阳性组别（1组）的HBV-DNA含量高于HBeAb阳性组别（2组）及HBcAb阳性组别（4组），P＜0.001；而HBeAb阳性组和HBcAb阳性组中，部分病例HBV-DNA水平也较高。