编辑版word 滤膜法-粪大肠菌群的测定
1、 适用范围
本标准适用于地表水、地下水、及水中粪大肠菌群的测定。用于检验加氯消毒的水样时，在滤膜法之前，先做试验，证实它所得的数据资料与多管发酵试验所得的数据资料具有可比性。
2、 原理
滤膜是一种微孔性薄膜。将水样注入已灭菌的放有滤膜（孔径0.45微米）的滤器中，经过抽滤，细菌即被截留在膜上，然后将滤膜贴于M-FC培养基上，44.5℃温度下进行培养，计数滤膜上生长的此特性的菌落数，计算出每1L水样中含有粪大肠菌群数。
3仪器：
滤膜（孔径0.45微米）、滤器、接液瓶、垫圈、无菌镊子夹
3、培养基和试剂
本标准所用试剂除另有注明外，均为符合国家标准的分析纯化学试剂，实验室用水为新制备的去离子水。
M-FC培养基：
胰胨 10g
蛋白胨 5g
酵母浸膏 3.0g
氯化钠 5.0g
乳糖 12.5g 编辑版word 胆盐三号 1.5g
1%苯胺蓝水溶10ml
1%玫瑰色酸溶液（溶于0.2mol/L氢氧化钠液中）10ml
蒸馏水 1000ml
制法：将上述培养基中的成分（除苯胺蓝和玫瑰色酸外），置于蒸馏水中加热溶解，调节PH为7.4，分装于小烧瓶内，每瓶100ml，于115℃灭菌20min。储存于冰箱中备用，临用前，按上述配比，用灭菌吸管分别加入已煮沸灭菌的1%苯胺蓝溶液1ml及新配制的1%玫瑰色酸溶液（溶于氢氧化钠溶液）1ml，混合均匀。加热溶解前，加入1.2%～1.5%琼脂制成固体培养基。如培养物中杂菌不多，则培养基中不加玫瑰色酸亦可。
4、 步骤
水样的选择：水样量的选择根据细菌受检验的特征和水样中预测的细菌密度而定。理想的水样体积是一片滤膜上生长20～60个粪大肠群菌落，总菌落数不超过200个。
滤膜及滤膜灭菌：将滤膜放入高压蒸汽灭菌锅里在121℃灭菌10min，滤器、接液瓶、垫圈分别用纸包好，在使用前经121℃灭菌20min，滤器也可用点燃的酒精棉球火焰灭菌。
第 1 页 共 2 页 关于粪大肠菌群等检出限及结果报出问题的回复
【实用版】
目录
一、引言
二、粪大肠菌群及总大肠菌群检出限的定义与标准
三、粪大肠菌群及总大肠菌群检出限的测定方法
四、结果报出问题的解决办法
五、结论
正文
一、引言
近期，关于地表水和地下水中粪大肠菌群及总大肠菌群检出限及结果报出的问题引起了广泛关注。针对这一问题，本文将提供一些解答，以期为相关工作者提供参考。
二、粪大肠菌群及总大肠菌群检出限的定义与标准
粪大肠菌群和总大肠菌群是评价水质卫生安全的重要指标。在我国，粪大肠菌群及总大肠菌群的检出限标准如下：
1.地表水：粪大肠菌群检出限为 200 MPN/L，总大肠菌群检出限为100 MPN/L；
2.地下水：粪大肠菌群检出限为 100 MPN/L，总大肠菌群检出限为50 MPN/L。
三、粪大肠菌群及总大肠菌群检出限的测定方法
目前，常用的粪大肠菌群及总大肠菌群检出限测定方法有多管发酵法和滤膜法。其中，多管发酵法的检出限是根据统计学方法计算出来的
MPN(最可能数) 值，而非试验方法直接得出的结果。 第 2 页 共 2 页 四、结果报出问题的解决办法
在实际监测过程中，可能会出现检出限附近的结果。针对此类情况，建议采取以下措施：
1.重复试验：对疑似检出限附近的结果进行重复试验，以确认是否为误差导致的误报；
2.采用多种方法：同时使用多管发酵法和滤膜法等不同方法进行检测，以提高结果的可靠性；
3.参考国家标准：按照国家标准进行检测，确保结果的准确性。
五、结论
粪大肠菌群及总大肠菌群检出限和结果报出问题是水质监测中常见的问题。
方法验证报告
测试方法：HJ 347.2-2018
测试项目：水质 粪大肠菌群
编写： 日期：
审核： 日期：
批准： 日期：
水质 粪大肠菌群的方法验证
1.目的
确认所采用的方法适合于在本实验室进行对水质的粪大肠菌群的测定，照此方法检测和检验条件进行水样的粪大肠菌群检测，能保证检验结果的准确、可靠。
2.原理和范围
2.1原理
将样品加入含乳糖蛋白胨培养基的试管中，37℃初发酵富集培养，大肠菌群在培养基中生长繁殖分解乳糖产酸产气，产生的酸使溴甲酚紫指示剂由紫色变为黄色，产生的气体进入倒管中，指示产气。44℃复发酵培养，培养基中的胆盐三号可抑制革兰氏阳性菌的生长，最后产气的细菌确定为是粪大肠菌群。通过查MPN表，得出粪大肠菌群浓度值。
2.2范围
本法适用于地表水、地下水、生活污水和工业废水中粪大肠菌群的测定。
3.主要仪器
3.1 净化工作台。
3.2 立式高压蒸汽灭菌器。
3.3恒温恒湿培养箱。
3.4电热恒温鼓风干燥箱。
3.5电子天平。
3.6酒精灯、试管架、试管（带塞子）、平皿、小倒管、三角烧瓶（带塞子）、刻度吸管、采样瓶、接种环。
4. 主要试剂
乳糖蛋白胨培养液、EC培养液。
5. 检验步骤
5.1样品稀释与接种
5.1.1 15管法
将样品充分混匀后，在5支装有已灭菌5ml三倍乳糖蛋白胨培养液的大试管中（内有小倒管），按无菌操作要求各加入样品10ml，在5支装有已灭菌的10ml单倍乳糖蛋白胨培养液中（内有小倒管），按无菌操作要求各加入样品1ml，在5支装有已灭菌的10ml单倍乳糖蛋白胨培养液中（内有小倒管），按无菌操作要求各加入样品0.1ml。
对于受到污染的样品，先将样品稀释后再按照上述操作接种，以生活污水为例，先将样品稀释104倍，
然后按照上述操作步骤分别接种10ml、1ml、0.1ml。
方法验证报告
项目名称：粪大肠菌群的测定
方法名称：水质粪大肠菌群的测定滤膜法
报告编写人：
参加人员：
审核人员：
报告日期：
第 1 页 共 4 页 1 实验室基本情况
1.1 人员情况
表1参加验证的人员情况登记表
1.2 检测仪器/设备情况
表2使用仪器情况登记表
设备名称 规格型号 仪器出厂编号 计量/检定状态
隔水式培养箱
单人净化工作台
立式压力蒸汽灭菌器
1.3 检测用试剂情况
表3使用试剂登记表
试剂名称 生产厂家 级别 规格 备注
MFC培养基
HJQC-005粪大肠菌群质控样品
1.4 环境设施和条件情况
实验室具有检定合格的温湿度计，环境可以控制在温度18⁓26℃，湿度45%⁓65%的要求范围内，满足检测环境条件，实验室人员每天对环境条件进行监控。另外实验室配备了洗眼器、喷淋设施、护目镜、灭火器等的安全防护措施，符合实验室安全内务的要求。
2 实验室检测技术能力
2.1适用范围
本标准适用于地表水、地下水 、生活污水和工业废水中粪大肠菌群的的测定。姓名 性别 年龄 职务或职称 所学专业 从事相关专业年限
第 2 页 共 4 页 本方法的检出限为:当接种量为100ml时，检出限为10CFU/L;当接种量为500ml时，检出限为2CFU/L。
2.2 样品保存
采样后应在2h内检测，否则，应10℃以下冷藏但不得超过6h。实验室接样后，不能立即开展检测的，将样品在4℃以下冷藏并在2h内检测。
2.3检测步骤
2.3.1样品过滤
根据样品的种类判断接种量，最小过滤体积为10ml ,如接种量小于10ml时应逐级稀释。先估计出适合在滤膜上计数所使用的体积，然后再取这个体积的1/10和10倍，分别过滤。理想的样品接种量是滤膜上生长的粪大肠菌群菌落数为20-60个，总菌落数不得超过200个。当最小过滤体积为10ml 时，滤膜上菌落密度仍过大时，则应对样品进行稀释。1：10稀释的方法为：吸取10ml样品，注入盛有90ml无菌水的三角瓶中，混匀，制成1：10稀释样品。用灭菌镊子以无菌操作夹取无菌滤膜，贴放在已灭菌的过滤装置上，固定好过滤装置，将样品充分混匀后抽滤，以无菌水冲洗器壁2-3次。样品过滤完成后，再抽气约5秒，关上开关。
