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免疫印迹法检测在自身免疫性疾病 ENA 多肽抗体谱及 临床意义

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临床免疫学：免疫印迹法检测ENA抗体

临床免疫学：免疫印迹法检测ENA抗体

实验步骤
1. 配制工作液：按1：10的比例稀释浓缩液.（10 ml ）； 2. 向每一反应槽孔加入0.5ml工作液和1份测试条，温
育1～2分钟； 3. 向每一反应槽孔加入待测血清10μl，充分混匀，
摇床上反应30分钟； 4. 弃去槽内液体，加入1ml工作液，洗涤1分钟，重
复洗涤4次； 5. 加入0.5ml工作液，酶标二抗20μl，充分混匀，摇床
注意事项
1. 标本溶血、黄疸、高血脂； 2. 试剂盒使用前恢复至室温； 3. 取测试条时防止损坏膜上抗原。
思考题
1. 自身抗体、ANA、ENA、抗ENA抗体的 联系和区别？
免疫印迹法检测ENA抗体
实验目的
掌握免疫印迹方法的基本原理、检测 ENA抗体的基本操作方法；
自身抗体的其它检测方法和相关的临 床意义。
实验原理
酶免疫印迹 抗原SDS-PAGE电泳/转膜 （点膜）
免疫反应（加一抗/二抗）
显色
试剂和器材
1.待测标本； 2.检测用膜载体； 3.浓缩液； 4.酶标二抗； 5.显色底物A/B； 6.终止液。
上反应30分钟； 6. 同第3步洗涤； 7. 加入显色液A/B各0.5ml，室温反应10分钟； 8. 每槽加入终止液0.5 ml，混匀，1分钟后弃去槽内
液体，用蒸馏水洗涤3次； 9. 取出测试条，自然干燥后进行结果判定。
Байду номын сангаас
结果判断
1. 测试条蓝线与标准谱带“0”线对齐； 2. 测试条蓝线下方的第一条区带为质控线； 3. 带型分析。

免疫印迹法检测ENA及其在自身免疫性疾病中的诊断价值分析

免疫印迹法检测ENA及其在自身免疫性疾病中的诊断价值分析
国际检验 医学杂志 ２ １ ００年 ５月第 ３ 卷第 ５期 ｌ
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论 著
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免 疫 印迹 法检 测 ＥＮＡ及 其在 自身免 疫性疾 病 中的诊 断 价值 分析
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免疫印迹技术(Immunoblotting technique)

免疫印迹技术(Immunoblotting technique)

免疫印迹技术(Immunoblotting technique)免疫印迹技术又称蛋白质印迹(Western blotting)是一种借助抗原鉴定特异性抗体的有效方法，该法是在凝胶电泳和固相免疫测定技术基础上发展起来的一种新的免疫生化技术。

本实验以检测可提取性核抗原(ENA)抗体为例。

【实验原理】先将ENA混合抗原经SDS-PAGE电泳，使各种抗原成分根据分子量不同区分开来，再通过电转印将各种抗原成分转印到硝酸纤维素薄膜上，血清中抗ENA抗体与硝酸纤维素薄膜上的ENA抗原成分结合，再与碱性磷酸酶标记的抗人IgG抗体结合，形成抗原抗体酶标抗体复合物，洗涤后加入底物显色，根据有无显色带的出现判断抗ENA抗体的有无，显色带的位置判断抗ENA抗体的类型。

【主要试剂与器材】1.ENA多肽抗体谱检测试剂盒包括印有ENA的硝酸纤维素薄膜、碱性磷酸酶记标的抗人IgG抗体、显色液(BCIP/NBT)、浓缩洗涤液和样品缓冲液、终止液、ENA多肽抗体标准带图谱等，有商品供应。

2.待检血清和阳性质控血清3.小型摇床、恒温箱、反应槽、吸管、微量移液器、滤纸等。

【操作方法】1.将浓缩洗涤液、样品稀释液按说明书用蒸馏水进行稀释。

2.抗原条放入反应槽中，每个槽内加入样品稀释液1.5ml浸泡5min后，弃去槽内液体。

3.用样品稀释液将血清1∶10稀释，吸取1.5ml稀释血清加入槽内，置小型摇床上孵育30min。

4.弃去槽内液体，每个槽内加入1∶10稀释的洗涤液 1.5ml浸泡5min后，弃去槽内液体，用吸水纸吸干。

5.吸取1.5ml用样品稀释液1∶10稀释AP标记的抗人 IgG，加入槽内，置小型摇床上孵育30min。

6. 同4洗涤。

7.每个槽内加入底物液1.5ml，置小型摇床上孵育 20min后，弃去槽内液体，用自来水洗净，加入终止液。

8.与标准显色带比较，判断结果。

【结果判断】将印迹膜上出现的显色区带与标准图谱比较，可判断哪种ENA抗体阳性。

ENA抗体谱的临床意义

ENA抗体谱的临床意义

ENA抗体谱的临床意义
一、背景知识
CRP的全称是C Reactive Protein，能通过血清学定量检测及分析，是一种用来诊断急性炎症状况的重要指标，也是一种有效而直接反映炎症状况的抗原。

由于CRP的积累和血清浓度的增加，可以清楚地反映炎症发生的状况，这也是CRP被广泛用作衡量炎症的重要指标之一
IL-6（白细胞介素-6）是一种炎症抗原，可以反映与免疫反应所发生的各种炎症反应有关的变化。

IL-6可以用来诊断与炎症反应有关的各种疾病，因此也是一种常用的反映炎症状况的抗原。

TNF-α（肿瘤坏死因子-α）是一种多功能的细胞因子，它包括调节免疫反应以及抗炎症的作用，可以参与炎症反应。

由于TNF-α与炎症的发生和维持有关，因此在临床上，TNF-α测定常被用来反映与炎症相关的疾病的严重性。

ENA是Extra-Nuclear Antigens（外核抗原）的简称，是一类重要的抗原，通过ENA抗体水平的检测，能够清楚地显示出患者患其中一种炎症性疾病的程度。

CRP作为炎症抗原在临床上的使用比较广泛，其主要用途是用于诊断急性炎症状况，尤其是用于诊断急性炎症性疾病。

慎重看待ENA多肽抗体的临床意义

慎重看待ENA多肽抗体的临床意义
总之，虽然多肽抗体检测可以测出与某种抗原反应的多肽的分子量，但不等于与该分子量反 应的条带即为某种特异的抗体。实验检测应客观地报告与某种分子量反应的条带，而绝不能 只要有条带出现即报告某种抗体阳性。不论检验人员还是风湿免疫科医师，均应正确看待多肽抗体检测的临床意义。IB法所采用的未经纯化的兔胸腺抗原中有不同的蛋白质，虽然这些蛋白质分子量不同，但由于其带电荷不同，在电场中泳动速度仍可相同，从而使不同分子量的蛋白质出现电泳距离一致的条带。因此分子量相同的条带并不一定显示为抗某种单一蛋白的抗体。另一方面，IB法中的抗原是经过变性的，即使有些抗体可能识别转移膜上的变性抗原决定簇，但并非所有抗体均能与变性抗原决定簇反映，故IB法并非高度敏感。IB法另一个缺点是只能定性，不能定量， 这对要求有高滴度的抗u1RNP才能诊为MCTD不利。至今国际上检测抗ENA抗体主要采用酶联免疫吸附法(ELISA)，但很多医院仍在采用经典的免疫双扩散法和电泳法。ELISA法必须要有高度纯化的抗原，国外已有试验盒出售，但价格高。基因重组抗原虽然纯度高，但也可能因表达细菌的产物，仍会出现非特异性反应；另外重组抗原蛋白可能缺乏表达后修饰，其高级结构与相应天然蛋白质的不同，也可出现假阴性。放射免疫沉淀法由于其复杂性不适合临床常规。我们认为，国内目前普遍采用的IB法检测ENA多肽抗体尚欠可靠，仅凭一条条带即报告某一抗体阳性应非常慎重，有必要结合其他方法，如双扩散、电泳法或ELISA加以验证。不论采用何种方法，临床医师在对实验结果作出正确判断之前，要除外假阳性和假阴性。我们必须面对病人，任何时候不能只抓住一点，不及其余；不能孤立地看待某项异常结果，而要将其置于病情中全面衡量，以免本末倒置，这是临床医疗 中必须时刻遵循的原则。
IB是将可溶性核抗原(ENA)置于电场中，经浓缩分离后，转印在硝酸纤维膜上，然后该膜被 加上病人血清，进行抗原—抗体反应。再经过酶标抗体和底物作用，显示出多肽抗体条带。 与标准分子量比较，可以了解ENA中被特异性抗体所识别的相应抗原决定簇的分子量。这一 方法的优点是能利用某种特定分子量的蛋白质抗原进行特异性抗体的检测。以恒佳公司试剂 盒为例，抗Sm出现抗28 000、29 000和13 500三条带；抗u1RNP为抗73 000、32 00 0和17 500三条带；抗SS-A为抗52 000条带；抗SS-B为抗48 000、47 000和45 00 0三条带；抗Jo-1为抗55 000条带；抗Scl-70为抗86 000和70 000两条带；抗r RNP为抗38 000、16 000和15 500三条带。问题的关键是当出现三条带中的一条带或两条带能否报告为某种特 定抗体。举Sm抗体为例，如果认为29 000、28 000、13 500三条带同时出现即为抗Sm抗 体阳性，那么当仅有29 000和(或)28 000们曾遇到外地转京求治的“SLE”患儿，病初发热，因给予氨苄青霉素而过敏 出现皮疹、关节痛，被疑为“SLE”，当时检测ANA阴性，而多肽抗体中抗13 500阳性，被视 为抗Sm阳性，即用大量激素进行“正规”治疗，导致激素的严重不良反应。家长带患儿辗转 南北，不仅造成了极大的经济损失，而且严重影响了患儿的身心健康。我们对198例抗29 00 0、28 000和13 500三条带均阳性的病人进行临床分析后发现，其中21例不能诊断为SLE ，198例血清再以高特异性的免疫双扩散检测，其中156例抗Sm阳性，两者符合率为92%；对1 48例仅有抗29 000和(或)28 000的病例临床分析后发现，其中83例并不能诊为SLE，再 将这些血清进行双扩散检测，仅4例为抗Sm抗体，而50%则显示为抗u1RNP抗体。这支持抗 29 000、28 000可能与抗u1RNP发生交叉，并非是抗Sm抗体的标记条带；即使有对抗S m抗体诊断较为特异的13 500出现，也并不能100%认为抗Sm抗体阳性。SLE的诊断必须密切结 合临床。我们还对u1RNP抗体中的7种不同排列组合(17 500，32 000，73 000， 32 000和17 500，17 500和73 000，32 000和73 000，73 000、32 000和17 500) 的血清与免疫双扩散对照发现，73 000、32 000和17 500三条带同时出现时与免疫双扩 散的符合率为85%。其他组合与免疫双扩散的符合率均低于50%，尤其仅抗32 000更应慎 报抗u1RNP抗体阳性。大部分抗32 000阳性病人，临床上并非为结缔组织病。再如抗J o-1抗体，被视为P M/DM的标记抗体，在多肽抗体检测中，抗Jo-1抗体显示为抗55 000条带，那么是否抗5 5 000即为抗Jo-1抗体呢?我们分析了20例抗55 000阳性的病人，仅7例临床上符合PM，其余 的13例中，有7例为未分化结缔组织病，6例为非结缔组织病(其中3例为肿瘤)。相反20例免 疫双扩散抗Jo-1抗体阳性的病人，17例为PM/DM，其余3例均为未分化结缔组织病。这表明 免疫双扩散检测出的抗Jo-1对PM/DM诊断特异性远较IB法高。同样仅52 000抗体也并非是抗 SS-A阳性。在130例抗52 000阳性的病例中37%(50/130)为非结缔组织病，而且在正常健康 人中也可有抗52 000阳性。今年5月在上海召开的华夏风湿病大会，上海仁济医院对上 海地区血清交流质控评估后指出：IB法对判断抗Sm有误，仅29 000、28 000不足以判断抗Sm 阳性，而13 500则是判断抗Sm的必要条件；对于52 000应结合对流电泳(CIE)来判断是否为 抗SS-A阳性；抗SS-B(48 000、47 000、45 000)不会单独出现，必伴抗SS-A(52 000)一起出现；抗u1RNP(70 000、32 000、17 500以及29 000/28 000)的不同 组合，应结合CIE综合判断；抗核糖体蛋白中三条多肽带(38 000、16 500、15 000)常 同时出现；对于国际上尚未公认的显色条带不应予以出具检验报告。我们同意这些看法。

ENA抗体谱的临床意义

ENA抗体谱的临床意义

ENA抗体谱临床意义目前，用于体外定性检测人血清或血浆中自身抗体最为广泛的是ENA抗体谱，检测方法为免疫印迹法，其检测项目包括抗nRNP、Sm、SS-A(天然SS-A和Ro-52)、SS-B、Scl-70、PM-Scl、Jo-1、CENP B、PCNA、核小体、核蛋白、核糖体P蛋白和AMA M2共有14种。

临床意义抗nRNP抗体：该抗体主要是别核心蛋白A,C及70kd的u1-nRNP。

高滴度的抗nRNP抗体是混合性结绨组织病（MCTD，夏普综合征）的标志，阳性率95-100%，抗体滴度与疾病活动性相关。

在15-40%的系统性红斑狼疮患者中也可检出抗nRNP抗体，也见于系统性硬化症、多肌炎等。

抗Sm抗体：系统性红斑狼疮的特异性抗体，与抗dsDNA抗体一起，是系统性红斑狼疮的诊断性指标，但阳性率仅为5-10%,几乎总伴有抗nRNP抗体,一般不会单独出现。

抗SS-A抗体：与各类自身免疫性疾病相关，最常见于干燥综合征（40-95%）、也见于系统性红斑狼疮（20-60%）和原发性胆汁性肝硬化（20%）、类风湿性关节炎，偶见于慢性活动性肝炎。

此外，在100%的新生儿红斑狼疮中抗SS-A抗体阳性。

该抗体可经胎盘传给胎儿引起炎症反应和新生儿先天性心脏传导阻滞。

抗Ro-52抗体：SS-A抗原是一种小核糖核蛋白，由一个RNA分子和两种不同的蛋白质（分子量分别为52和60kDa）组成，抗-SS-A 60 kDa蛋白的抗体对于干燥综合症和系统性红斑狼疮的特异性更高，而单独抗SS-A 52 kDa的抗体不具有疾病的特异性，并且容易与其它抗体发生交叉反应。

抗SS-B抗体：几乎仅见于干燥综合征（40-80%）和系统性红斑狼疮（10-20%）的女性患者中，男女比例为1：29。

在干燥综合征中抗SS-A抗体和抗SS-B抗体常同时出现。

抗Scl-70抗体：系统性硬化症分两型：弥散性和局限型。

抗Scl-70抗体见于25-75%的进行性系统性硬化症（弥散型）患者中，因实验方法和疾病活动性而异。

抗ENA抗体及临床意义

什么是抗ENA抗体，有何临床意义ENA（extractable nuclear antigen）的中文名称是可提取的核抗原，它不含组蛋白，可以溶于盐水而被提取，针对ENA的抗体即称抗ENA抗体，它与疾病的严重程度或活动性无明显相关。

（1）抗nRNP (nuclear RNP) 抗体以抗核内的核糖核蛋白而得名，由于其富含尿嘧啶（U），通常又把nRNP称之为U1RNP。

具有抗原性的U1RNP其分子量有70kD、30kD 和22kD。

U1RNP抗体在混合性结缔组织病中几乎均为阳性，且其滴度很高；在其他结缔组织病中阳性率低且滴度低；它是区分结缔组织病和非结缔组织病的有力指标。

抗U1RNP抗体阳性的病人，常有双手肿胀、雷诺氏现象、肌炎和指（趾）端硬化。

有人认为抗U1RNP 抗体阳性，则肾病发生率较低；如果抗dsDNA、抗Sm抗体同时存在，则发生狼疮性肾炎的可能性较大。

（2）抗Sm抗体以病人名字（Smith）命名。

已知Sm是核内小核糖体蛋白（snRNP）。

其抗原决定簇主要在于U1、U2、U4~U6 RNA连接的B和D蛋白多肽上，已知蛋白多肽的分子量B（29kD）、B’（28kD）、D（16kD）。

抗Sm抗体的蛋白多肽有较高特异性的为B和D带。

国际上通常用对流电泳和免疫双扩散法检测抗Sm抗体，其阳性率在SLE中为30％左右，抗Sm抗体对早期、不典型的SLE或经治疗缓解后的SLE回顾性诊断有很大帮助。

从理论上讲，测得抗Sm抗体的同时，多可测得U1RNP，但抗U1RNP抗体阳性，则抗Sm 抗体可为阴性。

抗U1RNP抗体在系统性硬化症伴多发性肌炎的重叠综合征中频率较高。

银屑病及雷诺现象的病人也可呈阳性。

（3）抗SSA／Ro抗体由于该抗体与干燥综合征相关，故取名SSA，也有人取名于最早检测到的病人名字Ro。

SSA与Ro的抗原性、生化特点一致。

SSA／Ro是含有Y－YRNA 的蛋白质，更多存在于胞浆内。

在以鼠肝为底物的ANA检测中，抗SSA抗体常阴性，而以Hep-2细胞为底物，则ANA为阳性。

Western印迹法原理、操作步骤及应用

Western印迹法的原理及应用一、原理免疫印迹法（Western印迹法）是将经过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）分离的蛋白质样品，转移到固相载体（例如硝酸纤维素薄膜）上，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。

以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗体起免疫反应，再与酶或放射性核素标记的第二抗体起反应，经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分。

典型的印迹实验包括三个步骤：①蛋白质的电泳分离；②将电泳后凝胶上的蛋白质转移至固体膜上，用非特异性、非反应活性分子封闭固体膜上未吸附蛋白质区域；③免疫学检测。

免疫印迹法克服了聚丙烯酰胺凝胶电泳后直接在凝胶上进行免疫学分析的弊端，极大地提高了其利用率、分辨率和灵敏度，使其成为使用最广泛的免疫化学方法之一。

二、材料Western印迹法所需材料包括SDS-PAGE试剂，硝酸纤维素薄膜，匀浆缓冲液，转膜缓冲液，膜染色液，显色液，酶标二抗及其底物等。

三、操作步骤（一）样品制备培养细胞及组织样品加匀浆缓冲液，机械或超声波室温匀浆0.5～1分钟。

细菌诱导表达的原核细胞，可通过电泳上样缓冲液直接裂解细胞。

然后4℃，13 000g离心15分钟，取上清液作为样品。

（二）SDS-PAGE聚丙烯酰胺凝胶电泳是目前对蛋白质进行分离、纯度鉴定及分子量测定的主要方法之一。

十二烷基磺酸钠（SDS）是一种阴离子去污剂，可与蛋白质结合，使蛋白质变性并带上大量负电荷。

SDS-PAGE是最常用的凝胶电泳技术。

它通常采用不连续电泳系统，即用上层胶（成层胶）和下层胶（分离胶）两种不同浓度的凝胶灌制凝胶板。

SDS-PAGE通过其电荷效应、浓缩效应和分子筛效应，达到蛋白质高分辨率的分离效果。

抗原等蛋白样品经SDS处理后带负电荷，在聚丙烯酰胺凝胶中从阴极向阳极泳动，分子量越小，泳动速度就越快。

此阶段分离效果肉眼不可见（只有在染色后才显出电泳区带）。

ENA多肽抗体检测及其临床意义

ENA多肽抗体检测及其临床意义1 临床资料1.1 材料与方法:本文按《美国风湿性疾病概要》对各种风湿病的诊断标准[1],诊断为风湿病117例,其中系统性红斑狼疮(SLE) 32例, 混合性结缔组织病(MCTD) 15例,干燥综合征(SS) 10例,进行性系统性硬化症(PSS) 8 例,多发性肌炎(PM)、皮肤炎(DM) 7例,类风湿性关节炎(RA)和强直性脊柱炎(AS) 45 例, 3例RA合并AS, 1例SLE与SS、RA相重叠。

设正常献血员30例作为对照。

受试对象均于晨起空腹采血2ml,采用免疫印迹方法, 应用深圳爱利国公司生产的试剂盒(一种制备好的醋酸纤维薄膜,上有已按分子量排列好的ENA多肽抗原),用受试对象10μl血清,通过与抗体反应的多肽抗原(显色带)的数量与分子量,不仅可识别抗原的表位,并可检测7种自身抗体(抗Sm、抗SSA、抗SSB、抗U1RNP、抗SCL-70、抗JO-1、抗核糖体抗体),以阳、阴性报告结果。

1.2 结果:见附表。

附表风湿病ENA多肽抗体检测阳性例数ENA多肽抗体谱SLE (n=32)(%) MCTD (n=15)(%) SS (n=10)(%) PSS (n=8)(%) PM/DM (n=7)(%) RA+AS (n=45)(%) 正常对照(n=30)(%) 抗Sm 8(25.0) 0(0) 0(0) 0(0) 0(0) 0(0) 0(0) 抗U1RNP 13(40.6) 15(100.0) 0(0) 3(37.5) 2(28.6) 0(0) 0(0) 抗SSA 8(25.0) 3(20.0) 7(70.0) 2(25.0) 1(14.3) 1(14.3) 0(0) 抗SSB 4(12.5) 1(6.7) 6(60.0) 1(12.5) 0(0) 1(2.2) 0(0) 抗SCL-70 0(0) 0(0) 0(0) 3(37.5) 0(0) 0(0) 0(0) 抗JO-1 0(0) 0(0) 0(0) 0(0) 1(14.3) 0(0) 0(0) 抗核糖体4(12.5) 0(0) 0(0) 0(0) 0(0) 0(0) 0(0)2 讨论所谓ENA是指盐水中溶解的一部分核抗原, ENA多肽抗体是风湿病患者血清中产生的针对核内可提取性核抗原的相应的自身抗体。

免疫印迹法检测164例结缔组织病患者抗ENA抗体结果分析

免疫印迹法检测164例结缔组织病患者抗ENA抗体结果分析作者：邢忠海张秀香来源：《健康必读·下旬刊》2011年第10期【中图分类号】R446.62 【文献标识码】A 【文章编号】1672－3783(2011)10－0229－01【摘要】目的了解免疫印迹法检测可提取性核抗原 (ENA)多肽抗体方法在临床诊断中的价值。

方法应用免疫印迹法 (IBT)检测 164例结缔组织病 (CTD)患者和 85例非结缔组织病对照血清ENA多肽抗体。

结果 CTD中用IBT法测抗ENA抗体阳性109例，占66.5%；SLE患者中，抗Sm阳性率为46.7%，而在其他组中均未检出；DM/PM患者中抗Jo-1阳性率为22.2%；PSS患者中抗SCL-70阳性率为62,5%；各组结缔组织病血清中均检出2种或2种以上的自身抗体。

结论 IBT法检测抗ENA抗体具有高特异性、敏感性，对提高结缔组织病自身抗体检出率具有重要价值。

【关键词】免疫印迹法；结缔组织病； ENA抗体ENA 抗体是针对核内可提取核抗原(extractable nuclear antigen，ENA)的一种自身抗体，主要出现在风湿性疾病患者血清中，对于结缔组织疾病的诊断和鉴别诊断很有价值, 在临床实验室已成为常规检测项目。

ENA抗体检测方法有免疫印迹技术（IBT）、对流免疫电泳法（CIE）、酶联免疫测定法（ELISA）和免疫双向扩散法（ID）。

我们应用IBT法对164例SLE等结缔组织病和85例非结缔组织病人的血清标本进行了抗ENA抗体检测，结果报告如下：1 材料与方法1.1 病例来源来自我院2010年1月至12月门诊及住院各种风湿性疾病164例，皆为我院风湿科医生按国际诊断标准确诊的病例，包括SLE 120例、SCLE 23例、DM/PM 9例、 PSS 8例、SS 4例，其中女性141例，男性23例。

同时设85例健康人对照，人群来自高考体检学生。

1.2 标本采集均为上午空腹采血，血清分离后置4℃冰箱保存，一周内完成检测。

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2. 表 2 显示 6 种自身免疫病均存在多种自身抗体 ,SL E 患 者两种以上 (包括两种) 自身抗体 检 出 率 为 17. 8 % ( 8/ 45) 、 MCTD 患者检出率为 40 % (8/ 20) 、SS 患者检出率为 40 % (4/ 10) 、PSS 患者检出率为 16. 7 % (1/ 6) 、PM/ DM 患者检出率为 26. 3 %(5/ 19) 、RA 患者检出率为 10 %(4/ 40) 。
2. 方法 :抗 ENA 多肽抗体谱试剂盒购自广州万孚生物技 术有限公司 ,严格按照说明书操作 ,可一次性同时检测抗 Sm 、 抗 U1 RN P 、抗 SSA 、抗 SSB 、抗 Scl270 、抗 J O21 、抗 rRN P 、抗 DM253 、抗 RA254 、抗 D′E 等 10 种自身抗体 。
阳性例数 自身抗体
MC TD
阳性例数
SS 自身抗体
4
抗 U1 RN P + 抗 D′E
5
2
抗 U 1 RN P + 抗 SSA
2
2
抗 D′E + 抗 SSB
1
14
抗 U1RNP
9
8
抗 D′E
1
抗 SSA + 抗 SSB 抗 SSA
4
阳性例数 4 3
PSS 自身抗体 抗 Scl270 + 抗 SSA + 抗 SSB 抗 Scl270
表 1 各类自身免疫病患者和健康人 ENA 多肽抗体检测结果
SL E ( n = 45) MC TD ( n = 20) SS( n = 10)
PSS( n = 6) PM/ DM( n = 19)
RA ( n = 40)
对照组 ( n = 40)
34
18
7
3
8
10
0
20
0
0
0
0
0
0
12
16
0
0
0
表 2 各类自身免疫病抗 ENA 单项或多项阳性自身抗体分布 (续)
PM/ DM
RA
阳性例数 1 2
自身抗体
抗 J O21 + 抗 SSA 抗 J O21 + 抗 SSA + 抗 SSB
抗 J O21 + 抗 SSB 抗 J O21 抗 DM253
阳性例数 3 1 1 1 2
自身抗体
抗 RA254 + 抗 SSA + 抗 SSB 抗 RA254 + 抗 SSA 抗 SSA + 抗 SSB 抗 RA254 抗 SSA
阳性例数 1 1 2 5 1
3. Sm 抗体被认为是 SL E 的标志抗体 ,且与病程无关 ,对 早期 、不典型的 SL E 或经治疗后回顾性诊断有较大的帮助 ,但 有报道[2] 曾根据膜上 3 个区带 (28 ×103 、29 ×103 、13. 5 ×103 ) 同时出现与否来判断阳性或阴性 ,这样检出率偏低 。刘华平等 报道只要 3 个区带出现任何一条即可判为阳性 ,这样大大提高 了 SL E 的检出率 。
国际检验医学杂志 2006 年 7 月第 27 卷第 7 期 Int J Lab Med ,July 2006 ,Vol. 27 ,No. 7
·669 ·
·经验交流 ·
免疫印迹法检测在自身免疫性疾病 ENA 多肽抗体谱及 临床意义
刘军锋 贾克刚 刘运德
【摘要】 目的 探讨免疫印迹法检测自身免疫性疾病 ENA 多肽抗体谱的临床应用价值 。方法 应用免疫印迹法对系统性红斑狼疮 ( SL E) 、混合性结缔组织病 ( MCTD) 、干燥综合征 ( SS) 、弥漫性硬 皮病 ( PSS) 、多发性肌炎/ 皮肌炎 ( PM/ DM) 、类风湿关节炎 ( RA) 等 140 例自身免疫病患者进行可提 取性核抗原 ( ENA) 多肽抗体谱检测 。一次性同时检测抗 Sm 、抗 U1 RN P 、抗 SSA 、抗 SSB 、抗 Scl270 、 抗 J O21 、抗 rRN P 、抗 DM253 、抗 RA254 、抗 D′E 等 10 种自身抗体 。结果 6 种疾病抗 ENA 谱阳性率 依次为 75. 6 %、90 %、70 %、50 %、42. 1 %、25 % ,除出现单项自身抗体阳性外 ,均出现了两种或两种以 上阳性结果 ,说明患者血清中含有多种自身抗体 , ENA 系列抗体有相应的疾病抗体谱 。结论 免疫 印迹法检测 ENA 自身抗体操作简便 、省时 、特异性好 、重复性好 、用血量少 、不需特殊设备 ,可同时完 成对 10 种自身抗体的识别和过筛 ,对提高自身免疫性疾病的诊断水平有很大的帮助 。
3 许玲玲 ,刘敏 ,俞纯山. 系统性红斑狼疮患者 4 种抗体检测的临床意 义. 江西医学检验 ,1999 ,17 (2) :98299.
(收稿日期 :2006203204)
5. 本组 6 种自身免疫性疾病 ,因发病原因至今未明 ,临床 表现变化多端 ,不易被早期诊断 。而免疫印迹法检测 ENA 自
身抗体操作简便 、省时 、特异性好 、用血量少 、无需特殊设备 、重 复性好 (经多次反复冻融的标本检测结果完全一致) ,可同时完 成对 10 种自身抗体的识别和过筛 ,对提高自身免疫性疾病的 诊断水平有很大的帮助 。
参 考 文 献
1 刘敏 ,冯柏庄 ,俞纯山. 系统性红斑狼疮患者自身抗体检测方法的 应用与评价. 陕西医学检验 ,1997 ,12 (1) :324.
2 林宝顺 ,徐元斌 ,陈之航 ,等. ANA 、抗 ds2DNA 、抗 ENA 谱联合检测 在诊断 SL E 病人中的应用. 陕西医学检验 ,1999 ,14 (4) :627.
讨 论
1. 免疫印迹法是在抗原不同表位 ,从分子水平识别各种抗 体所作用的抗原在蛋白多肽分子量上的差别 、从抗原的蛋白多 肽水平上识别不同抗核抗体的一项新技术[1] 。在抗体检测的 特异性和敏感性上不仅比琼脂双向免疫扩散和对流免疫电泳 方法高 ,而且能在一次检测中 ,可同时完成对多种抗体的识别 和过筛 ,为临床能正确诊断与鉴别多种易混淆的自身免疫性疾 病提供重要的实验室依据 。本组采用广州万孚生物技术公司 生产的免疫印迹法检测 ENA 自身抗体试剂盒可同时筛查 、鉴 别抗 Sm 、抗 U1 RN P 、抗 SSA 、抗 SSB 、抗 Scl270 、抗 J O21 、抗 rRN P 、抗 DM253 、抗 RA254 、抗 D′E 等 10 种自身抗体 。
结 果
140 例病例组患者和 40 例健康对照组 ENA 多肽抗体谱 见表 1 ,抗 ENA 单项或多项阳性自身抗体分布见表 2 。
1. 表 1 显 示 SL E 患 者 , 抗 ENA 谱 阳 性 34 例 , 阳 性 率 75. 6 %(34/ 45) ,其中抗 Sm 阳性率 44. 4 %(20/ 45) 、抗 U1 RN P 阳性率 26. 7 %(12/ 45) 、抗 rRN P 阳性率 8. 9 % (4/ 45) ; MCTD 患者 , 抗 ENA 谱 阳 性 18 例 , 阳 性 率 90 % ( 18/ 20) , 其 中 抗 U1 RN P 阳性率 80 % (16/ 20) 、抗 D′E 阳性率 35 % (7/ 20) ; SS
4. 多数学者建议 ,对一个测定结果的解释要从两方面考 虑 :一是抗体效价 ,二是抗体的型别[3] 。在抗 ENA 检测中出 现单项 SSA 抗体 、SSB 抗体 、U1 RN P 抗体阳性 ,其临床意义广 泛 , SSA 抗 体 、SSB 抗 体 阳 性 可 见 于 SS、SL E、MCTD 、PM/ DM 、RA 、PSS 等患者 ; U1 RN P 抗体阳性可见于 MCTD 、SL E、 PSS、RA 、SS 等患者 ,因此应结合其他自身抗体和临床加以综 合分析 ,得出正确诊断 。
作者单位 :300457 天津泰达国际心血管病医院检验科 (刘军锋 、贾 克刚) ;300070 天津医科大学医学检验学系 (刘运德)
患者 ,抗 ENA 谱阳性 7 例 ,阳性率 70 %(7/ 10) ,其中抗 SSA 阳 性率 70 % ( 7/ 10) 、抗 SSB 阳 性 率 40 % ( 4/ 10) ; PSS 患 者 , 抗 ENA 谱阳性 3 例 ,阳性率 50 % ( 3/ 6) ,其中抗 Scl270 阳性率 50 %(3/ 6) ; PM/ DM 患者 ,抗 ENA 谱阳性 8 例 ,阳性率42. 1 % (8/ 19) ,其中抗 J O21 阳性率 31. 6 % (6/ 19) 、抗 DM253 阳性率 10. 5 %(2/ 19) ; RA 患者 ,抗 ENA 谱阳性 10 例 ,阳性率 25 % (10/ 40) ,其中抗 RA254 阳性率 17. 5 %(7/ 40) 。健康对照组未 检出自身抗体 。
资料与方法
1. 材料 : (1) 病例组 :来自门诊与住院 、经临床确诊的 140 例自身免疫病 (均符合国内或国际各类有关风湿病诊断标准) 患者 ,其中女 100 例 ,男 40 例 ,年龄 16～70 岁 。包括系统性红 斑狼疮 ( systemic lup us eryt hemato sus , SL E) 患者 45 例 ; 混合 型结缔组织病 (mixed co nnective tissue disease ,MCTD) 患者 20 例 ;干燥综合征 (Sfogren’s syndro me , SS) 患者 10 例 ;弥漫性硬 皮病 (penet rated sclero sis ,PSS) 患者 6 例 ;多发性肌炎/ 皮肌炎 (polymyo sitis/ dermatomyo sitis , PM/ DM) 患 者 19 例 ; 类 风 湿 关节炎 (rheumatoid art hritis , RA) 患者 40 例 。(2) 对照组 : 40 例健康体检者 ,其中女 28 例 ,男 12 例 ,年龄 14～68 岁 。