昆虫生长调节剂和绿僵菌对意大利蝗几丁质酶活力的影响

ｔｈｅ ｃｈｉｔｉｎａｓｅ ｏｆ ｔｈｅ ３ｒｄ ｉｎｓｔａｒｓ ｏｆ Ｃａｌｌｉｐｔａｍｕｓ
ｉｔａｌｉｃｕｓ ｗａｓ
ｓｔｕｄｉｅｄ．［Ｍｅｔｈｏｄ］Ｔｈｅ
ｃｏｎｔｅｎｔ
ｔｈｉｒｄ ｉｎｓｔａｒｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｃ．ｉｔａｌｉｃｕｓ ｗｅｒｅ ｔｒｅａｔｅｄ ｂｙ ｔｈｒｅｅ ｐｅｓｔｉｃｉｄｅｓ ａｎｄ
置均为０．４、２、１０、５０ ｍｇ／Ｌ，于喷药后第４天将意大利 蝗进行几丁质酶活力测定。 １．２．４几丁质酶活力测定方法 将单头意大利蝗加１ ｍＬ磷酸氢二钠一柠檬酸缓 冲液，在冰浴条件下进行研磨５ ｍｉｎ。匀浆液在
１０ ０００
绿僵菌１８９孢子粉取自本实验室；灭幼脲 （９５．０９％）由河南安阳瑞泽农药厂提供；氟虫脲
有限公司），用适量水溶解，转移至容量瓶中定容，制 成１ ｍｇ／ｍＬ母液，置于４℃下储存。用蒸馏水将试
或围食膜中几丁质的含量是很好的害虫防治策略。
Ｓｔ．ＬｅｇｅｒＥ７］等人用金龟子绿僵菌在昆虫鞘翅上接 种，１６ ｈ后，随着附着胞的大量出现，酶的活性（主要 是几丁质酶）逐渐增强。金龟子绿僵菌在入侵昆虫 体壁的过程中，能够分泌几丁质酶，并且其活性与入 侵过程中表皮的降解、侵染结构的形成及菌株毒力 等关系密切Ｌ８－引。 本研究在室内选出４种对意大利蝗毒力较强的 药剂：灭幼脲、氟虫脲、苯氧威和绿僵菌１８９菌株。
垂｜
０
曲线计算几丁质酶的比活力。
日龄，ｄ
２结果与分析
２．１
囱１
３龄期意大利蝗几丁质酶活力随日龄的变化曲线
Ｎ－乙酰氨基葡萄糖标准曲线的绘制
２．３苯氧威、氟虫脲、灭幼脲对意大利蝗体内几丁 质酶活力的影响 表１中可以看出不同浓度的３种几丁质合成抑 制剂对３龄第６天意大利蝗的几丁质酶活力均存在 不同程度的抑制作用。其中苯氧威和氟虫脲对意大 利蝗几丁质酶的作用明显高于灭幼脲，但３种药剂 之间不存在显著差异。同样用方差分析处理同种药 剂不同浓度的几丁质酶活力，结果发现不同浓度之 间存在较为明显的差异，其中２ ｍｇ／［。水平的苯氧 威与对照和０．４ ｍｇ／Ｉ．水平之间差异显著，５０
Ｗｕ
Ｌｅｎｉａｎ４， Ｚｈａｎｇ Ｚｅｈｕａｌ Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ，
Ｚｈａｏ Ｚｈｏｎｇｗｅｉｌ”，Ｃａｏ Ｇｕａｎｇｃｈｕｎｌ，Ｘｕ Ｇｕａｎｇｑｉｎｇｓ， （１．Ｋｅｙ
Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙｆｏｒ
Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｏｎｔｒｏｌ
ｏｆＭｉｎｉｓｔｒｙ ｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ，Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆＰｌａｎｔ
ａｎｉｓｏｐｌｉａｅ）也是一种重要的安全无公害生
物农药［５－６］，其以附着胞穿透昆虫体壁侵入寄主，使
害虫的自然种群数量得到有效的控制。几丁质在昆 虫的每个生长发育阶段均维持一定的水平，过量或 缺乏都会影响昆虫的生长，通过药剂干扰昆虫表皮
糖和Ｎ一乙酰氨基葡萄糖ｎ明的机理来绘制标准曲线。
称取１．０
ｇ
Ｎ－乙酰氨基葡萄糖（上海晶纯试剂
１０
１材料和方法
１．１试验材料 １．１．１供试虫源
ｈ。每天将１０头刚蜕皮的３龄蝗蝻挑到养虫框中，
当养虫框中的蝗蝻再次出现蜕皮时，从每个养虫笼中 取出５头大小相似的蝗蝻进行几丁质酶活力测定。
１．２．３
药剂对意大利蝗３龄蝗蝻几丁质酶活力的 测定前处理
２０１０年夏于新疆阿勒泰地区野外捕获２ ０００头
２龄意大利蝗蝗蝻带回试验基地笼罩（长１０ ｍ，宽
１１０１６１，Ｃｈｉｎａ；
Ｏｆｆｉｃｅ ｏｆＬｏｃｕｓｔ
ｏｆＡｎｉｍａｌ Ｈｕｓｂａｎｄｒｙ ｏｆＡｌｅｔａｉ，Ｘｉｎｊｉａｎｇ
８３６５００，Ｃｈｉｎａ；
４．Ｈａｂａｈｅ Ｓｔａｔｉｏｎ ｏｆ Ｆｏｒｅｃａｓｔ ａｎｄ Ｃｏｎｔｒｏｌ ｏｆ Ｌｏｃｕｓｔ ａｎｄ Ｒｏｄｅｎｔｓ，Ｘｉ巧ｉａｎｇ
８３６７００，Ｃｈｉｎａ）
ｔｈｅ ｃｈｉｔｉ—
ｗｅｒｅ ｍｏｒｅ ｔｈａｎ ２００％．１８９ ｓｔｒａｉｎｓ ｏｆ
Ｍ
ａｎｉｓｏｐｌｉａｅ ｈａｄ ｓｏｍｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｅｆｆｅｃｔｓ
ｏｎ
ｃｈｉｔｉｎａｓｅ ｏｆ Ｃ ｉｔａｌｉｃｕｓ．
Ｗｈｅｎ
ｔｈｅ ｓｐｏｒｅｓ ｒｅａｃｈｅｄ ｔｈｅ ｈｉｇｈｅｓｔ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ５×１０７，ｔｈｅ ｃｈｉｔｉｎａｓｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｈａｄ ｏｎｌｙ
ｃａｎ
３．８Ｕ．［Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ］
Ｂｏｔｈ ｉｎｓｅｃｔ ｇｒｏｗｔｈ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｓ ａｎｄ Ｍ．ａｎｉｓｏｐｌｉａｅ Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ Ｃａｌｌｉｐｔａｍｕｓ ｉｔａｌｉｃｕｓ；
ｉｎｈｉｂｉｔｅ ｔｈｅ ｃｈｉｔｉｎａｓｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ Ｃ．ｉｔａｌｉｃｕｓ． ａｎｉｓｏｐｌｉａｅ； ｃｈｉｔｉｎａｓｅ
Ａｂｓｔｒａｃｔ［Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ］Ｔｈｅ
ａｎｄ
ａ
ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｔｈｒｅｅ ｉｎｓｅｃｔ ｇｒｏｗｔｈ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｓ（ｆｅｎｏｘｙｃａｒｂ，ｆｌｕｆｅｎｏｘｕｒｏｎ，ｄｉｆｌｕｂｅｎｚｕｒｏｎ）
ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｐｅｓｔｉｃｉｄｅ（１８９ ｓｔｒａｉｎｓ ｏｆ
Ｍｅｔａｒｈｉｚｉｕｍａｎｉｓｏｐｌｉａｅ）ｏｎ
ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｅｒ．［Ｒｅｓｕｌｔ］Ｔｈｅ
ａｃｔｉｖｉｔｙ．Ｗｈｅｎ
ｏｎ
ｔｈｅ
ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｅａｃｈ ｏｆ ｔｈｅ ｔｈｒｅｅ ｉｎｓｅｃｔ ｇｒｏｗｔｈ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｓ ｒｅａｃｈｅｄ ｔＯ ５０ｍｇ／Ｌ，ｔｈｅｉｒ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｅｆｆｅｃｔｓ
ｎａｓｅｓ
（９５％）由威海韩孚生化药业有限公司提供；苯氧威
（＞９９％）由江阴振博农化提供；几丁质（Ｓｉｇｍａ公 万方数据
ｒ／ｍｉｎ、４。Ｃ条件下离心１０ ｍｉｎ，上清液在
３８卷第２期
１５ ０００ ｒ／ｍｉｎ、ｄ ０．５ ｍＬ
赵忠伟等：昆虫生长调节剂和绿僵菌对意大利蝗几丁质酶活力的影响
・８５・
Ｃ条件下再次离心２０ ｍｉｎ。吸取
１．２．１
而成为一种无公害农药，在害虫的无公害治理中具 有重要的应用价值Ｌ４］。同样，金龟子绿僵菌（Ｍｅｔａｒ—
ｈｉｚｉｕｍ
Ｎ一乙酰氨基葡萄糖标准曲线的绘制方法
几丁质是以Ｎ一乙酰一ｐ胁葡萄糖氨（ＮＡＧ）为单 体，借争１，４糖苷键连接而成的直链多聚物，根据几
丁质酶（ＥＣ３．２．１４）能够催化几丁质水解为几丁寡
管中Ｎ＿乙酰氨基葡萄糖的含量依次为稀释为０、２０、
４０、８０、１００、１２０／ｔｇ／ｍＬ。每个浓度梯度重复４次。
用酶活力测定同样的方法显色，在紫外分光光度计
上测５８５ ｎｍ处的吸光值。以Ｎ一乙酰氨基葡萄糖的
浓度为横坐标，以吸光值Ａ。ｓ。为纵坐标绘制忖乙酰
氨基葡萄糖的标准曲线。
１．２．２
意大利蝗３龄蝗蝻几丁质酶活力测定前处理
和２０００年的意大利蝗数次飞人我国新疆地区，对我 国农牧业生产造成了严重损失［３］。 昆虫生长调节剂因具有生物活性高、杀虫专一、 对人畜等非靶标生物安全、在环境中易降解等优点
萄糖；冰醋酸；浓盐酸；９５％乙醇。
１．１．３试验仪器 Ｓｉｇｍａ摇床、Ｓｉｇｍａ冷冻离心机、宁波海曙赛弗
培养箱、分光光度计。
１．２试验方法
ｄａｅ），星翅蝗属（Ｃａｌｌｉｐｔａｍｕｓ Ｓｅｒｖｉｌｌｅ）。分布于原苏
收稿日期：２０１１—０４—２０ ＊通信作者 修订日期：２０１１～０６一０４
ｍ荒漠、半荒漠草地‘２｜，在
资助琢县：公益性行业（农业）科研专项（２００９０３２１，２０１００３０７９）；农业部现代农业专项（ｎｙｃｙｔｘ一２００９—３７）
妇扬保靠２０１２．３８（２）：８３—８６
Ｐｌａｎｔ Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏ托
昆虫生长调节剂和绿僵菌对意大利 蝗几丁质酶活力的影响
赵忠伟１’２，
曹广春１， 徐光青３， 吴乐年４， 张泽华Ｈ
（１．中国农业科学院植物保护研究所，农业部生物防治重点开放实验室，北京１０００８１； ２．沈阳农业大学植物保护学院，沈阳１１０１６１；３．新疆阿勒泰地区治蝗灭鼠办公室，阿勒泰８３６５００； ４．新疆哈巴河县治蝗办公室，哈巴河８３６７００） 摘要［目的］探明３种昆虫生长调节剂（苯氧威、氟虫脲、灭幼脲）和一种生物农药（绿僵菌１８９菌株）对意大利蝗３ 龄蝗蝻几丁质酶活力的影响。［方法］用药剂处理３龄意大利蝗蝗蝻，用分光光度法测定几丁质酶分解几丁质产物 Ｎ－乙酰氨基葡萄糖的含量。［结果］３种昆虫生长调节剂浓度达到５０ｍｇ／Ｌ时对几丁质酶的抑制作用超过２００％； 绿僵菌１８９菌株对意大利蝗几丁质酶活力也有一定程度的抑制，且抑制作用随着孢子浓度的增加而增大，当孢子浓 度达到５×１０７时，意大利蝗几丁质酶的活力仅为３．８Ｕ。［结论］昆虫生长调节剂和绿僵茵均抑制意大利蝗几丁质 酶活力。 关键词意大利蝗； 中图分类号： 昆虫生长调节剂；绿僵菌； 文献标识码：
Ｍ．ａｎｉｓｏｐｌｉ—
ａｅ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｔｈｅ
ｏｆ Ｎ—ａｃｅｔｙｌ ｇｌｕｃｏｓａｍｉｎｅ ｐｒｏｄｕｃｅｄ ｂｙ ｃｈｉｔｉｎ ｄｅｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｃｈｉｔｉｎａｓｅ ｗａｓ ｔｅｓｔｅｄ ｂｙ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ａｌｌ ｏｆ ｔｈｅ ｆｏｕｒ ｐｅｓｔｉｃｉｄｅｓ ｉｎｈｉｂｉｔｅｄ ｃｈｉｔｉｎａｓｅ
０００
０．９４８ ３ｘ＋０．０４５ ２，Ｒ２＝０．９１４
４，因为意大利蝗自
Ｅ清液，加入０．５ ｍｌ。胶状几丁质，于３７℃ ｒ／ｒａｉｎ的速度离心５ ｒａｉｎ
身几丁质酶活力的改变会对试验结果产生影响，因 此存测定不同药剂对意大利蝗几丁质酶活力影朐
时，尽量选择一致的时间进行测定。
９
下温浴４ ｈ，然后以８
１０００８ １，Ｃｈｉｎａ；
Ｃｈｉｎｅｓｅ Ａｃａｄｅｍｙ ２．Ｃｏｌｌｅｇｅ ３．Ｃｏｎｔｒｏｌ
ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｂｅｉｊｉｎｇ