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肝癌患者血管生成分析

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肝癌患者血管生成分析
作者：李 欣
来源：《中国当代医药》2009年第24期

[摘要]肝癌血供非常丰富，血管生成对肿瘤的生长、侵袭和转移都有决定性的作用，而且
在发病早期就有血管侵犯和肝内转移的倾向，故探讨肝细胞性肝癌(HCC)转移和侵袭相关的分
子生物学机制，寻找新的特异性抗血管生成治疗的靶点成为HCC研究和治疗的关键H。

[关键词]肝癌；血管生成；内皮细胞
[中图分类号]R575
[文献标识码]C
[文章编号]1674-4721(2009)12(b)-146-01

原发性肝癌是世界上最常见的恶性肿瘤之一，其中90％以上是肝细胞性肝癌
(hepatocellular carcinoma,HCC)，在世界范围内占肿瘤发生的第5位。死亡率占第3位。尽管近
年来关于HCC的治疗研究取得了较大进展。新技术和新方法也层出不穷，但是仍缺乏有效的
治疗手段。目前手术切除和肝脏移植是治疗HCC的主要手段，但是疗效不满意，对于手术不
能切除的肝癌以及术后转移复发的预防，抗血管生成是一个新的治疗方向。


1 资料与方法

1.1 临床资料
42例HCC癌组织和癌旁肝组织取自2007年4月～2008年6月在我院外科手术切除的新
鲜组织标本。部分组织经4％多聚甲醛固定，石蜡包埋，部分组织标本取材后经液氮速冻后转
入-80％冰箱保存备用。所有患者均经过手术后病理学诊断证实。在42例HCC病例中，男34
例，女8例，年龄32～74岁，中位年龄53岁，平均59.4岁。


1.2 方法
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虽然手术切除和肝脏移植是治疗HCC的主要手段，但疗效不满意。探讨HCC转移和侵袭
相关的分子生物学机制，寻找新的特异性的抗血管生成治疗的靶点，用荧光实时定量PCR检
测PRL-3、MMP-2、MMP-9和E-cadherin的mRNA表达，成为HCC研究和治疗的关键。


2 结果

癌组织相对癌旁组织mRNA模板平均相对表达量见表1。每组实验均重复三次，癌组织和
癌旁肝组织之间相比，差异有统计学意义。P


3 讨论

Folkman等最初报道肿瘤的生长与血管生成密切相关。血管生成过程及促血管生成因子的
产生在肿瘤的生长、侵袭和转移过程中起着非常关键的作用。新生毛细血管使肿瘤细胞能够获
得足够的氧和营养物质，同时新生血管内皮细胞分泌产生多种促肿瘤细胞生长因子蛋白水解酶
类，降解基质成分并加速肿瘤的侵袭。内皮细胞的扩增还给肿瘤细胞进入循环系统和发生远处
转移提供了更多的机会，新生血管的形成有利于恶性肿瘤的迅速生长并出现侵袭和转移。

在肿瘤生长的最初阶段。并不是所有的瘤细胞都具备血管生成表型，但随着肿瘤细胞不断
分裂增殖，那些伴有癌基因或抑癌基因突变并具备了血管生成表型的肿瘤细胞逐渐增殖形成优
势，它们通过多个途径诱导周围组织新生血管形成。

这些途径可分为以下几种：①肿瘤细胞癌基因的表达或抑癌基因的失活，可使肿瘤细胞获
得血管生成表型。诱导局部新血管形成；②肿瘤细胞产生的各种趋化因子使单个核细胞浸润到
肿瘤组织内，它们释放的促新生血管生长因子和多种蛋白酶有助于新生血管形成；③肿瘤生长
到一定程度其内部处于明显低氧状态，低氧可使肿瘤血管内皮细胞生长因子(VEGF)表达明显
增加，并以旁分泌的方式诱导新生血管生成；④内皮细胞通过自分泌途径加速新生血管的形
成，这一血管生成的启动过程与肝脏再生和慢性肝疾病中的血管生成过程类似。
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内皮细胞的激活、增生和迁移在肿瘤血管生成过程中起着关键的作用，主要包括两个过
程：激活过程和形成过程。在形成过程中，覆盖血管内壁的血管内皮细胞分泌血管源性生长因
子。血管外膜和外周细胞失去稳定性，并伴有局部毛细血管基底膜和细胞外基质(extra cellular
matrix，ECM)的降解；随后血管内皮细胞迁移至ECM中并不断增生形成“血管芽”。在形成过
程中。内皮细胞重新排列形成管状的毛细血管样结构，并逐渐建立血液循环。为肿瘤提供充足
的营养。在恶性肿瘤中，通过血管内皮细胞、肿瘤细胞自分泌和旁分泌各种血管生成因子，血
管生成得以持续发展。

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肝细胞肝癌超声造影与血管生成的关系

肝细胞肝癌超声造影与血管生成的关系

【 ｂ ｔａｔ Ｐ ｒ ｏｅ ｎｏｄｒ ｏ ｓｅｓｔ ｎ ｉ ｅｅｉｏ ｅａ ｃｌ ｌｒ ａｃｎｍ 。 ｈ ｅｋｉｔｎｉ ｏｔ ｓ ｕｔ ｓｎ ｇａｈ ｆｈ Ａ ｓｒｃ］ ｕｐ ｓ ：Ｉ ｒｅ ｓｓ ｈ ａ ｇ ｇｎｓ ｆ ｐｔ ｅ ｕａ ｒｉｏ ａ ｔｅｐａ ｅｓｙｉ ｃｎ ａｔ ｌａｏ ｏｒｐ ｙｏ ｅ ｔａ ｅ ｏ ｓ ｈ ｏ ｌ ｃ ｎ ｔ ｎ ｒ ｒ ｔ
ｌｓｏｃ ｍｐ ｒ ｄ ｗ ｔ ｔ ｎ ｉ ｇ ｆｉ ｓ ｈｈ ｉ ｍｍｕ ｏ ｉｔｃ ｅ ｓ ｙ ｎ ｈ ｓｏ ｈ ｍｉｔ ．Ｍ ａ ｅ ｉｌ ｎ ｅｈ ｄ ：Ｃ ｎ ａ ｔｕ ｔ ｏ ｏ ｒ ｐ ｙ Ｗａ ｎ ｅｔ ｅ ｎ ５ ｒ ｔ ｒａ ｓ ａ ｄ Ｍ ｔ ｏ ｓ ｏ ｔｓ ｌ ａ ｎ ｇ ａ ｈ ｓ ｕ ｄ ｒ ｒ ｒ ｓ ｋ ａ ｎ ｉ Ｏ
【 摘要】 目的 ： 探讨肝 细胞 肝癌超声 造影峰值强度 与血管生成 的相关性 。材料和方法 ： 采用对 比脉 冲序列技术 及 Ａ Ｑ Ｃ 定量分析软件 ， ４ 对 ２例肝细胞肝癌患者共 ５ ０个病灶进行超声造影检查并记 录超声 造影的峰值强度 ； 免疫组织 化学方法 分析肝细胞肝癌组织 中微血 管密度 （ ＸＤ） 比较超声 造影峰值强度与 ＭＶ Ｍ ， Ｄ之 间的相关性 。结果 ： 肝细胞肝癌及癌旁组 织超声造 影峰值强度平 均为 １５ １ ２ ． ６ Ｂ及 ７ ． １ ９ ２ ｄ Ｍ Ｄ值平 均为 ４ ．４±１ ． ２及 ｌ ．４± ． ８ 肝 细 ３ ．９± ８ ｜ｄ ２ ９ ±１． ２ Ｂ； Ｖ ３４ ２２ ７ １ ９１，
ａ ａｙ ｅ ．Ｒｅ ｕ ｔ ：Ｔ ｅ ｍｅ ｅ ｋ ｉ ｔｎ ｉ ｅ ｆＨＣＣ ａ ｄ ｐ ｒ ａ ｃ ｒ ｕ ｉｓ ｅ ｅ ３ １ ｎ ｌｚ ｄ ｓ ｌ ｈ ａ ｐ ａ ｎｅ ｓ ｉｓｏ ｓ ｎ ｔ ｉｎ ｅ ｏ ｓ ｔ ｕ ｓｗ ｒ １ ５． ９±２ １ ｄ ｄ ７ ． １± １ ． ２ Ｂ．ｒ ｓ ｅ ｔ ｅ ｎ ｅ ｃ ｓ ｅ ８ ６ Ｂ ａ ２ ９ ｎ ９２ｄ ｅ ｐ ｃｉ － ｖ
肝细胞肝癌血管形成分子机制的研究进展

肝细胞肝癌血管形成分子机制的研究进展


体免疫杀伤 ， 在机体的其他部位生长 ， 形成肿瘤的转
移灶 。现在肿 瘤 的血 管新 生 已经被 看作 是一 个 预后 指标应 用 于乳 腺癌 的预后 判 断［ 抗血 管生 成治疗 已 ２ １ 。 在其 它肿 瘤 ， 如结肠 癌 、 肺癌 获得成 功［ 人 类肝 细胞 ３ ｊ 。 肝 癌 （ ｅａｏｅｌｌ ａｃｎｍａＨＣ 是 一 种 非 常 常 ｈｐｔｃｌ ａ ｃｒｉｏ ， Ｃ） ｕｒ
肿瘤 就可 能会 迅速 出现生 长 和转移 ［ １ ｊ 。另一 方 面 ， 这 种新 生 的肿 瘤血 管 的管 壁结构 不 完整 ，在 诸 多 因素 的影 响下更 多 的肿瘤 细胞 进人 血 液循 环 ．并逃 脱机
毛细血管样结构 ， 并逐渐建立血液循环 ， 为肿瘤提供 充 足 的营养 。 过血 管 内皮细 胞 、 瘤细 胞 自分泌 和 通 肿
生 长 因子 （ ａｉｆ ｒｂａｔｒｗｈｆｃ ｒｂ Ｇ ， 氧 ｂｓ ｂ ｌｓｇｏ ｔ ｔ ， Ｆ Ｆ）环 ｃｉ ｏ ａｏ
化 酶 一 （ ｙｌ— ｘ ｇｎ ｓ， ｏ 一 ， 及 血 小 板 源 性 ２ ｃｃｏ ｏｙｅ ａｅ Ｃ ｘ ２）以 内皮 细 胞生 长 因子 （ｌｔ ｅ— ｅ ｖ ｄｅ ｄｔｅ Ｍ ｃｌ ｐａｅ ｔｄ ｒ ｅ ｎ ｏ ｌ ｅｌ ｌ ｉ ｈｉ
维普资讯
４８ ５
第１ ３卷３期 ２０ ０ ７年 ９月
天 津 医 科 大 学 学 报
Ｊ ＯＵＲＮＡＬ ＯＦ ⅡＡＮＪＮ Ｉ ＭＥＤＩ ＡＬ ＵＮＩ Ｃ ＶＥ２ ０ ｅ ． ０ ７
以调 节 内皮 细 胞 的分 化 ， Ｅ Ｆ和 ｆ一 Ｖ Ｇ ｉ １的结 合则 可 ｔ 以调节 内皮 细胞 的增 生活性 ［ ｆ一 和 ｆ 一／ Ｄ ４ｉ １ ｉ １ Ｒ受 】ｔ 。 ｋ Ｋ 体的激活导致内皮细胞分泌纤维蛋 白溶酶原激活物 （Ｐ ｕ Ａ和 ｔＡ）血 纤 维蛋 白溶 酶和 胶原 酶 ， 后造 成 Ｐ ， 最 基底 膜 和 内皮 细胞 下 细胞外 基 质 的降解 ．最 终 导致 血管 内皮 细胞 的 出芽 浸 润和迁 移 。 １９ ９６年 ， ｓ ［ 过 Ｎ ｒ ｅｎｂｏ、 疫 组 化 Ｍｉ ｅ等 ５ １ 通 ｏｔ ｒ ｌｔ免 ｈ 等方 法 首 先证 明 了 Ｖ Ｇ Ｅ Ｆ在肝 癌 组 织 中表达 增 加 。 另外 一项 研 究表 明人肝 细 胞肝 癌 细胞 表 达 的 Ｖ ＧＦ Ｅ ｍＲ Ａ水 平 升 高 ．有 研 究 报 道 Ｖ Ｇ Ｎ Ｅ Ｆ表 达 直 接 同
原发性肝癌肿瘤血管生成的研究进展

原发性肝癌肿瘤血管生成的研究进展

完整 、 Ｐ 水 平 及 病 理 分 级 均 无 明 显 相 关 ， 示 ＡＦ 提
１ ＨＣ Ｃ肿 瘤血 管生成促 进 因子
１ １ 血管 内皮 细 胞 生 长 因 子（ Ｇ ） 目前 已知 ． ＶＥ Ｆ 是 在 Ｈ Ｃ肿瘤血 管 ｌ 成 中作 用最 强的 血 管 生成 诱 导 Ｃ 牛
因 子 。 由 于 ＶＥ Ｆ Ｇ ｍＲＮ 的 剪 切 方 式 的 不 同 、 生 Ａ 产
内试 验 已经 证 实 它 能 刺 激 血 管 内皮 细 胞 增 生 与趋 化， 与肿瘤血 管 形 成密 切 相关 国 内周 俭等 ｌ 利 用 ４
ＨＣ Ｃ手术 标 本 所 做 的 一 项 研 究 发 现 ， Ｄ Ｆ Ｐ Ｇ ｍＲＮ Ａ
在 ＨＣ Ｃ中表 达率 达 ６ ． ％ ， 著 高 于在 癌 周 肝 组 ７９ 显 织 中的 表 达 率 ３ ％ 。同 时 还 发 现 ， Ｄ Ｆ Ｎ ５７ Ｐ Ｇ ｍＲ Ａ 表 达水平 与 ＨＣ Ｃ大小 、 合并 肝 硬 化程 度 、 膜是 否 包
而 对 ＨＣ Ｃ肿 瘤 血 管 生 成 分 子 机 制 的 研 究 则 方 兴 未
成 。ＶＥ ＧＦ的表达调 节较 为复 杂。有人 指 出缺 氧应 是上 调 ＶＥ Ｆ表 达的 主要 原 因 ， 机 制可 能 与缺 氧 Ｇ 其 引起红 细 胞 增 多 的机 制 相 似。 Ｍａｓｈｌ等 ｌ 认 为 ｒ ａ ｃ ｌ ｌ ｊ 缺 氧确 使 ＶＥ Ｆ基 因表 达上 调 ， 刺 激 ＨＣ Ｇ 是 Ｃ血 管 生成 的关 键因素 。其 具体机 制为缺 氧激 活 ｒ ＶＥ Ｆ Ｇ
氧上 调 Ｖ Ｆ转 录中 ， ＥＧ 缺氧诱 导因子 一１ ＨＩ （ Ｆ一１ ， ）
一
种 异一聚体 碱 性 蛋 白 ， 能 在 其 中发挥 了重 要作 可
(完整word)血管生成实验步骤-实验方法完善版

(完整word)血管生成实验步骤-实验方法完善版

无论原发性肿瘤还是继发性肿瘤，一旦生长直径超过1～2 mm，都会有血管生成。

这是由于肿瘤细胞自身可分泌多种生长因子,诱导血管生成.多数恶性肿瘤的血管生成密集且生长迅速。

因此，血管生成在肿瘤的发展转移过程中起到重要作用,抑制这一过程将能明显阻止肿瘤组织的发展和扩散转移。

于是体外的血管生成实验就能很好的模拟肿瘤的血管发生过程，并且适合研究药物对这一过程的影响实验.图一血管生成镜检图一。

实验材料和实验方法1。

实验材料2。

实验方法：2。

1实验流程介绍图二实验流程图(提前将Matrigel融化,铺于ibidi血管生成载玻片的下孔中,待胶凝后,将细胞悬液加入血管生成载玻片上孔中,成管后使用显微镜观察。

）2。

2耗材结构介绍图三血管生成载玻片纵截面示意图（Matrigel铺在下孔，细胞铺在Matrigel上，上孔充满培养基）2.3数据分析流程介绍图四实验结果收集和分析流程图（在特定的时间点采集图片,并且进行图像分析（Wimasis全自动分析）测量小管长度，成环数，细胞覆盖面积和结点。

之后在对测量结果进行统计分析以说明实验结果。

)一.实验步骤1、准备基质胶1。

实验前一天将Matrigel置于冰盒中，放入4.C冰箱，使胶能过夜缓慢融化.（注意：同样要准备一些4。

C预冷的枪头用于吸取Matrigel）2.开始实验前，将Matrigel始终保持放在冰盒中。

3.打开灭菌包装，取出ibidi血管生成载玻片。

4。

每孔中加入10μl Matrigel。

注意枪头要垂直于内孔的正上方加入Matrigel，防止有Matrigel流经上孔而留下残留胶。

由于Matrigel流动性不强，并且有可能移液枪不准确，有可能打入10μl的胶,却不能填满血管生成载玻片的下孔——这样，必然会影响到实验的成像结果。

如何判断是否加入了合适体积的Matrigel：我们只需用一张格子纸就能知道自己的移液枪调整到多少能正好把下孔填满.如上图所示,垂直透过每个孔看下面的格子纸,如果格子被缩小了，那么就说明胶没加满,格子被放大了,那么胶就加多了，格子没发生什么变形,这才是刚刚加满下孔的状态。