松针提取原花青素可研报告书

吸 光 度
吸 光 度
提 取 时 间 (min)
图 3 提取时间与吸光度的关系曲线
料 液 比 (g/ml)
图 5 料液比与吸光度的关系曲线
3.2 正交试验 在单因素试验的基础上，选取乙醇浓度、提取
·34·
黄山学院学报
2010 年
时间、提取温度以及料液比为考察因素，以原花青
素 的 提 取 率 为 指 标 ，采 用 L9（34）进 行 正 交 试 验 ，因
责任编辑：胡德明
Extraction of Procyanidins from Pine Bark
Qi Zhaopeng, Zhuo Dinghong, Zhou Qing (Department of Chemistry, Huangshan University, Huangshan 245041, China) Abstract: By referring to the extraction technique of procyanidins, the extraction technique of procyanidins from pine bark is investigated. Based on single factor and orthogonal experiments, optimum extraction conditions are obtained: extraction temperature at 65 ° C, ethanol concentration of 60% , solid -liquid ratio of 1:40, and extraction time of 50min. Key words: pine bark; procyanidins; orthogonal experiment; extraction

赤松松针原花青素的抗氧化分析摘要：本文利用DPPH（1,1-二苯基-2-三硝基苯肼）法分析松针高温水提物、乙醇提取物、己烷提取物、高温正己烷（HWH）提取物、高温乙醇（HWE）提取物的抗氧化活性。

与其他提取物相比，松针高温水提取物具有较强的抗氧化能力。

对于MC3TW-E1细胞活性氧（ROS）的产生，高温水提物也表现明显较强的抑制能力，细胞内ROS含量最低。

各种提取物经过高效液相色谱法（HPLC）分析的结果显示，松针高温水提物中原花青素的含量最高，经过Sephadex LH-20 的纯化，测定了松针高温水提物的抗氧化活性。

结果表明第7组分和第12组分含有的原花青素和儿茶素的含量最高，抗氧化能力最强。

这些结果表明松针高温水提物的抗氧化能力与其所含有的高聚原花青素和单体儿茶素的含量成正相关。

此外，松针高温水提物的抗氧化能力与常见的抗氧化剂，如维生素C类似，这表明，松针含有的原花青素和儿茶素可能用作另一种抗氧化剂。

关键词：DPPH；ROS；HPLC分析；原花青素；松针1 前言自由基和其他活性氧物质是机体在某些外源性化学物质入侵或内源性代谢过程中产生的。

活性氧（ROS），包括超氧自由基（O2-）、羟自由基（OH-）、过氧化氢（H2O2），能与DNA、脂质和蛋白质迅速反应，造成细胞损伤。

有研究表明，一些酶具有清除H2O2，保护细胞免受活性氧伤害的作用[1]，这些酶包括超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、谷胱甘肽过氧化物酶[2]。

酚类化合物能提供氢原子自由基，因此具有抗氧化能力。

许多酚类化合物，特别是黄酮类化合物，具有广泛的生物学效应，包括抑菌、抗病毒、抗炎、抗过敏、抗血栓、舒张血管等[3]。

多酚是一种次生代谢产物，广泛存在在整个植物界。

为了抑制ROS产生，为了生存，植物产生各种抗氧化的化合物。

几乎所有可以食用的植物中都含有多酚类化合物。

植物多酚是著名的天然抗氧化剂。

据最近的研究报道称，食物中的茶多酚可以在老年疾病和预防癌症起到重要作用。

３ ． ２流 动 相 的选 择
Ｂ
日
１ 口
笔 者选 用甲醇 一水 ， 甲醇 一醋酸 ， 甲醇 一醋酸 一三乙胺 （ ｐ Ｈ ＝７ ． ５～ ７ ． ８ ） ， 甲醇 一乙酸铵 ， 四种流动相 【 ２ 】 ， 认 为后 两者 出现
图 １： 空 白血 浆
的峰形坚锐 ， 分离 度好 。而两者 对高 中低 浓度峰面积 并无显 著 差异（ Ｐ＞ ０ ． ５ ） ， 而 乙酸铵作为 流动相更 稳定 、 简便且经济 ， 因此
【 摘要 】 本研究在模拟人体 ｐ Ｈ值 的环境下 ， 利用紫外 一动力学法 、 圆二色谱法研究 了从松针 中提取 的松针原 花青素对 Ⅱ 一 葡萄糖 苷酶的抑制作
用， 以揭 示其降血糖 的机 理 。结果表 明， 松 针原花青素是 一种可逆 的非 竞争型 ｕ 一葡萄糖苷酶 抑制剂 ， 其半抑 制率 Ｉ ｃ ， 。 为 １ ． ０ ２ ｍ ｇ ／ ｍ Ｌ ， 抑制常数 Ｋ ｉ
选 用 甲 醇 一乙酸 铵 更 好 。 ３ ． ３方 法 评 价
本 实验 方 法 样 本 处 理 简单 ， 回收 率 高 ， 日内 日间 变 异 小 （ Ｒ Ｓ Ｄ＜ ３ ％）； 且灵敏 、 简 便、 能 满足 临床 测定要 求 。本实 验在
初 始 阶段考察 了血样 沉淀剂 的浓 度 ［ １ － ６ １发现 ２ ０ ％ 高 氯酸沉 淀
为６ ４ ． ２ ２ｌ ａ ｇ ／ ｍＬ 。
【 关键词 】 ａ 一葡萄糖苷酶 ； 松针原花青素 ； 抑制作用 ； 降血糖
０ 【 一葡 萄糖 苷酶 （ Ｅ Ｃ ３ ． ２ ． １ ． ２ ０ ， ａ — ｇ ｌ ｕ ｃ ｏ ｓ ｉ ｄ ａ ｓ ｅ ） 种类繁 多， 性质 母 中得到 （ 上海 Ｔ Ｃ Ｉ 公 司） ； 对 硝基 苯 基 一 ０ ｌ — Ｄ 一吡 喃葡 萄糖 苷 各异 ， 广泛的分布在生物体 内， 它可以从低聚糖类 的非还原末端 （ ｐ Ｎ Ｐ Ｇ， Ｓ ｉ ｇ ｍ ａ 公 司） 标准储备溶液用 ｐ Ｈ ６ ． ８的磷 酸盐 缓冲溶液 切开 ａ 一 １ ， ４糖苷键 ， 释放出葡萄糖 】 ， 在 人类 的正常糖类代谢 和 进行 配制； 阿卡波糖 （ Ｓ ｉ ｇ ｍａ 公 司）； 其 它试剂 均为分析纯 。实验

第46卷第13期2018年7月广　州　化　工Guangzhou Chemical IndustryVol.46No.13Jul.2018松针有效成分提取及药理活性研究进展*刘康柯,曹小燕(陕西理工大学化学与环境科学学院,陕西　汉中　723000)摘　要:综述了近年来松针提取的常用方法如水蒸气蒸馏法㊁超声波辅助法㊁超临界CO 2萃取法㊁微波辅助法和酶法;又介绍了松针中所含的挥发油㊁黄酮㊁多糖㊁木脂素㊁多酚㊁莽草酸等多种活性成分以及所具有的药理活性如抗氧化㊁抗癌㊁降糖㊁降血脂和护肝等功效㊂综合分析了目前对松针主要活性成分的提取和分析的方法,为松针资源的进一步研究开发提供一定的理论依据㊂关键词:松针;提取物;化学和药理作用　中图分类号:O629 　文献标志码:A文章编号:1001-9677(2018)13-0006-03*基金项目:陕西理工大学2017年大学生创新创业训练计划项目(No:2017101)㊂作者简介:刘康柯(1997-),男,本科生,从事天然产物提取和研究㊂曹小燕(1982-),女,讲师,主要从事药物合成及天然生物研究与开发㊂Research Progress on Extraction and Pharmacological Activity ofActive Constituents from Pine Needles *LIU Kang -ke ,CAO Xiao -yan(School of Chemical &Environmental Science,Shaanxi University of Technology,Shaanxi Hanzhong 723000,China)Abstract :The commonly used methods for extracting pine needles in recent years were systematically introduced from the methods of steam distillation,ultrasonic assisted method,supercritical CO 2extraction,microwave assisted methods and enzymatic method.Volatile oils,flavonoids,polysaccharides,lignans and polyphenols were described.The pine needles with a variety of pharmacological activities such as anti -oxidation,anti -cancer,hypoglycemic,hypolipidemic and liver protection were also described.The extraction and analysis methods of the main active components in pine needles were analyzed,all of these provided an important theoretical basis for the further research and development of the pine needles.Key words :pine needles;extraction;chemical and pharmacological effects松树是裸子植物门松科属植物,全身可入药㊂松针作为松科植物的针状叶,多用于食品加工[1],松针也被用于饲料生产和医药行业,其含有丰富的松针黄酮,多糖㊁挥发油㊁木脂素㊁多酚㊁莽草酸等成分,其活性成分的多样性使其具有抗氧化㊁抑菌防腐㊁降糖降血脂㊁抗癌和护肝的功效㊂松针的广泛应用促使其受到了广泛的关注㊂本论文综述了松针的各类活性成分及提取方法,并对其药理活性进行概述,旨在为松针资源的研究开发提供参考㊂1　松针有效成分的提取方法1.1　水蒸气蒸馏水蒸气蒸馏[2]多用于天然产物挥发油的提取,通常将植物原料粉碎加入烧瓶,通过水蒸气蒸馏得到油水混合物,在进行萃取分离㊂其操作简便,广泛用于天然产物挥发油的提取㊂谢济运等[3]采用水蒸汽蒸馏法提取了湿地松松针中的挥发油和莽草酸,在最佳工艺条件下莽草酸的得率为1.32%㊂王得道等[4]利用水蒸气法提取了黑皮油松松针的挥发油并分析其有效成分,得到挥发油中含有23种化合物㊂1.2　超声波辅助法超声波辅助法是利用超声波的高速㊁强烈的空化效应和机械作用,破坏植物的细胞壁,使溶剂渗透到植物细胞中缩短提取时间,提高提取率㊂超声波辅助法应用较广,常用来提取黄酮㊁多酚㊁多糖㊁鞣质等物质,且效果显著㊂张霞等[5]借助于超声波辅助法提取了油松松针的黄酮,并利用单因素和响应面法优化其提取工艺,得到的提取率可达3.66%㊂荀二娜等[6]与传统醇提法相比,超声作用可以使提取时间缩短3h,提取质量比达到了52.97mg /g㊂1.3　超临界CO 2萃取法超临界流体是一种新型高效的分离技术㊂超临界流体是介于气体和液体之间的流体,超临界流体具有良好的溶解能力,且超临界流体可以在较低的温度中操作,高效,对热敏性物质无影响,超临界流体很容易渗透到样品内部,大大缩短提取时第46卷第13期刘康柯,等:松针有效成分提取及药理活性研究进展7间㊂程满环等[7]利用超临界CO2萃取法和水蒸气法分别从松针中提取了几十种提取物,其中水蒸气分离鉴定得到了68种,占其挥发油总量的91.33%;超临界提取法分离鉴定得到了65种,占其挥发油总量的72.81%,两者共有成分29种,且最高的均为β-石竹烯㊂潘炘等[8]研究了不同提取工艺对马尾松松针提取物的抗氧化活性,分析了普通醇提法㊁外置超声辅助法㊁内置超声辅助法㊁超临界CO2萃取法四种提取方法制备马尾松松针提取物(EEP㊁OUEP㊁IUEP㊁SCDEP)中总酚和总黄酮的差异,同时研究了四中提取物的抗氧化活性,得出马尾松松针提取物中总酚及总黄酮含量与抗氧化性均具有明显的量效关系㊂1.4　微波辅助法微波辅助提取技术是利用微波来提取天然产物成分,能克服传统提取方法的不足,提取效率高,节省时间,同时微波提取不会引起产物结构的改变㊂谢清若等[9]采用微波辅助提取了松针多糖,在单因素实验的基础上采用3因素3水平的响应面分析,优化其提取工艺,得到松针多糖的提取率为6.258%㊂战英等[10]采用微波辅助法提取了红松总黄酮,通过正交实验得到其最佳工艺条件为乙醇浓度80%㊁提取温度80℃㊁提取时间2h㊁料液比1︓20(g/mL)㊁微波功率600W㊁时间5min,得出总黄酮产率为3.37%㊂1.5　酶辅助法酶是以蛋白质形式存在的一类特殊的生物催化剂㊂可以在常温㊁常压和温和的酸碱条件下,将植物细胞壁水解或降解,减小细胞壁㊁细胞间质等物质对提取物的阻力,较大幅度提高天然植物中有效成分的提取率㊂张福维等[11]用纤维素酶提前预处理或未加酶对照,可提高挥发油的出油率达48%㊂刘晓庚等[12]报道了微波辅助离子液体酶法提取松针精油㊂微波辅助离子液体酶法的精油得率高达0.493%~0.530%,比水蒸气蒸馏法提高了48%~67%,比单用酶法提高了12.3%以上,离子液的回收率为98.5%~100%㊂2　松针的活性成分2.1　挥发油挥发油又称精油,是存在于植物中的一类具有芳香气味㊁可随水蒸气蒸馏的挥发性油状成分的总称,在常温下为无色或微黄色的透明液体,其组分较为复杂㊂挥发油富含萜类㊁芳香族和脂肪族及其含氧衍生物等活性成分㊂高治平[13]等以挥发油的得率为指标,通过L9(34)正交实验优化其提取工艺,在最优工艺条件下挥发油的得率为0.27%㊂王委等[14]在单因素实验的基础上结合正交实验得到挥发油得率为0.3608%㊂2.2　黄　酮黄酮化合物也称黄碱素,是一类植物中分布广泛的多酚类天然产物,具有抗氧化㊁清除自由基㊁降血脂等功能㊂迄今为止发现的黄酮类化合物总数超过9000个,它们在植物体内以游离态或糖苷的形式存在,黄酮类化合物对植物的生长发育,开花结果以及抵御异物入侵都起着重要作用㊂向福等[15]以总黄酮得率为响应值设计响应面优化试验优化了大别山野生松针中黄酮的提取工艺㊂在最优工艺条件下总黄酮得率可达3.01%,其中料液比对总黄酮得率的影响最为显著㊂刘东彦等[16]采用柱色谱法对醋酸乙酯萃取部位中黄酮类化学成分进行了分离和纯化,得到了五种黄酮类化合物,并发现了一类新的化合物雪松酮A㊂ 2.3　多　糖多糖广泛存在于自然界中的一类天然高分子化合物,具有抗氧化㊁抗肿瘤㊁抗菌㊁免疫调节㊁抗炎症等生物活性㊂近20年来多糖的研究发展迅速,研究范围涉及多糖结构的分离纯化㊁生物学活性㊁药理活性㊁临床应用等㊂徐丽珊等[17]比较了水㊁醇两种溶剂对3种松针多糖提取率的影响㊂结果表明在最佳工艺条件下,湿地松松针多糖得率为(4.024±0.017)%㊂葛霞[18]等利用正交法考察了提取时间㊁料液比㊁温度㊁pH对雪松多糖提取率的影响,得到雪松多糖的最优得率为4.907%㊂2.4　木脂素木脂素是一类由苯丙素双分子聚合而成的天然产物,通常为二聚物少数为三聚物或四聚物,广泛存在于植物的木质部或开始析出时成树脂状,故称木脂素㊂冯卫生等[19]研究了马尾松松针水煎液中的化学成分㊂从正丁醇萃取部位分离得到3个木脂素类化合物㊂雷艳萍等[20]采用普通醇提法提取了雪松中总木脂素,得到了总木脂素含量为99.2mg/g,与理论值100.49mg/g 接近,相对偏差为0.65%㊂2.5　多　酚植物多酚又称植物单宁,广泛存在于植物的皮㊁根㊁叶㊁果中的多元酚化合物,是植物的次生代谢产物,含量可达20%㊂多酚类化合物是一类优良的氢或电子的给予体㊂宁红霞等[21]优化了超声辅助提取雪松松针中总多酚的最佳工艺,得到总多酚提取率为5.460%㊂2.6　莽草酸莽草酸又名3,4,5-三羟-1-环己烯甲酸㊂广泛存在于裸子植物的细胞液中及乔木的叶和芽中㊂是合成芳香族氨基酸㊁香豆素和某些多酚化合物的前体,在芳香族化合物合成代谢中十分重要㊂丁雷涛等[22]考察了微波温度㊁料液比㊁微波功率㊁乙醇浓度和微波时间等因素对莽草酸提取率的影响,并通过正交试验优化其提取工艺,得到莽草酸的提取率可达11.31mg/g㊂刘东彦等[23]以雪松中莽草酸和多糖的含量为指标,以溶剂用量㊁提取时间和提取次数为考察因素优化了雪松松针中莽草酸和多糖的提取工艺㊂得到的最佳工艺为第一次加入13倍量的水,第二次加入10倍量的水,回流提取,每次2h,得到莽草酸的含量为41.225mg/g,多糖的含量为39.220mg/g㊂3　松针提取物的活性研究3.1　抗氧化人体与外界的持续接触,包括呼吸(氧化反应)㊁外界污染㊁放射线照射等因素不断的在人体体内产生自由基㊂科学研究表明,癌症㊁衰老或其它疾病大都与过量自由基的产生有关联㊂研究抗氧化可以有效克服其所带来的危害,因此广泛应用于食品㊁保健品㊁化妆品等行业㊂许小向等[24]在单因素实验基础上结合正交实验优化其提取工艺,得到松针多糖的提取率为2.1698%,松针多糖对DPPH㊁㊃OH㊁ABTS+㊃的半抑制浓度(IC50)分别为0.291㊁1.793㊁0.617mg/mL㊂王昕等[25]测定了松针黄酮对超氧阴离子自由基㊁过氧化氢㊁羟基自由基㊁烷氧基㊁氮氧自由基等清除能力,其总体自由基清除活性良好㊂8　广　州　化　工2018年7月3.2　抑菌防腐常见的抑菌剂多数是一些合成的化学物质,我国常见的防腐剂有苯甲酸及其盐类或山梨酸及其盐类等,长期食用会对人体造成一定的伤害㊂天然防腐剂的研究㊁开发和利用将成为食品科学研究及应用的热点㊂曾维才等[26]通过平板抑菌试验,比较水提物和醇提物㊁老叶提取物和幼叶提取物以及混合提取物的抑菌作用,分析pH 值对提取物抑菌作用的影响,并比较了提取物与常用食品防腐剂抑菌作用的差异㊂得出松针水提物比醇提物的抑菌效果明显,幼叶比老叶提取物的抑菌活性强,对食品中常见腐败细菌的抑制活性较好,对真菌和酵母的抑制活性较弱;松针提取物得抑菌效果优于山梨酸钾和苯甲酸钠,证明了松针提取物具有良好的抑菌活性㊂楼英彪等[27]研究了雪松松针不同溶剂提取物的抑菌效果和抑菌稳定性,得到50%乙醇提取物的抑菌活性最佳,为雪松松针资源在天然食品防腐剂等方面的开发提供参考㊂3.3　抗　癌汤红琴等[28]利用实体瘤小鼠模型,检测肿瘤组织中凋亡相关蛋白Bax,Bcl-2的表达,考察松针石油醚提取物的体内抗肿瘤作用机制㊂得出松针石油醚提取物具有一定的抗肿瘤活性,诱导凋亡是其抗癌活性机制之一㊂3.4　降糖降血脂王春梅等[29]通过给小鼠连续灌胃松针提取物,观察其对正常小鼠血糖以及对肾上腺素和四氧嘧啶引起的高血糖小鼠血糖的影响,松针提取物(200㊁400㊁800mg/kg)对正常小鼠的血糖水平无明显影响,但均可降低由肾上腺素和四氧嘧啶引起的高血糖小鼠的血糖,且呈现良好的剂量依赖性㊂刘红煜等[30]研究发现松针总黄酮可以使大鼠抗氧化酶(SOD㊁GSH-Px㊁CAT)活性上升,MDA含量下降,抑制脂质过氧化反应和自由基的产生,并能调节血脂代谢,对糖尿病㊁高血压㊁动脉硬化等一系列并发症具有较好的防治作用㊂3.5　护　肝李丽芬等[31]以四氯化碳和醋氨酚造成小鼠急性肝损伤模型,用赖氏法测定了小鼠血清SALT活力并观察醋氨酚中毒对小鼠生存率的影响㊂得到了松针提取液能降低小白鼠SALT水平并显著提高醋氨酚中毒的小鼠生存率㊂综上所述,松针具有较高的生理学研究价值,近年来许多科研工作者对松针的提取方法和活性产物做了较为系统的研究,方法也越来也成熟,可是对松针保健资源的应用研究还有待提高,为松针保健品和动能性食品的开发与利用提供参考㊂参考文献[1]　钱江,陈思,黄佳銮,等.松针抗氧化功能饮料的配方及加工工艺优化[J].湖北农业科学,2012,51(22):5155-5157.[2]　李炳奇,马彦梅.天然产物化学[M].北京:化学工业出版社,2010:3.[3]　谢济运,陈小鹏,李志荣,等.水蒸汽蒸馏法提取湿地松松针中挥发油和莽草酸的研究[J].高校化学工程学报,2011,25(5):897-902.[4]　王得道,朱玉,刘洪章.水蒸气法提取黑皮油松松针挥发油及GC/MS分析[J].黑龙江农业科学,2013(5):96-98.[5]　张霞.油松松针黄酮的分离提纯及其抗氧化活性研究[D].北京:北京林业大学,2010:1-54.[6]　荀二娜,张春利,谢晓娜,等.超声波法辅助提取松针多酚[J].吉林大学学报(理学版),2012,50(1):147-152.[7]　程满环,兰艳素.超临界CO2流体萃取法与水蒸气蒸馏法提取黄山松松针挥发油及其GC-MS分析[J].中药材,2016,39(10):2256-2259.[8]　潘炘,陈顺伟,庄晓伟.不同提取工艺马尾松松针提取物抗氧化性能的研究[J].生物质化学工程,2009,4(3):21-24.[9]　谢清若,郑立文,凌新龙,等.响应面法优化微波辅助提取松针多糖工艺研究[J].食品科技,2010,35(12):201-205. 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松针有效成分的分析与鉴定的开题报告一、研究背景及意义松针作为一种常见的天然草药，被广泛应用于中药制剂、保健品和食品等领域。

松针的有效成分不仅具有镇痛、消炎、抗病毒等多种药理作用，而且其香气可以缓解压力、提升免疫力、消除疲劳。

因此，对松针有效成分的研究与鉴定具有重要意义。

二、研究内容与目的本文旨在对松针中的有效成分进行分析与鉴定，探究其药理作用，为松针的开发利用提供一定的科学依据。

研究内容包括以下方面：1. 松针中化学成分的提取与分离2. 松针中有效成分的检测与定量分析3. 松针有效成分的药理作用研究三、研究方法与步骤1. 根据文献资料和实验室设备，确定合适的提取方法和分离条件。

2. 通过高效液相色谱、气相色谱-质谱等技术检测松针中的有效成分。

3. 利用体外实验模型，研究松针有效成分的药理作用。

四、预期结果1. 成功提取松针有效成分。

2. 确定松针有效成分的组成与含量。

3. 揭示松针有效成分的药理作用，如镇痛、消炎、抗病毒等作用。

五、研究意义1. 为了更好地发现和利用自然资源，本研究将为药品、保健品和食品行业提供更多的资源和选择。

2. 进一步研究松针有效成分的药理作用，可以为临床医学提供新的治疗方法和手段。

3. 本研究还可以为松针产业的发展提供新的科学依据，推动行业的进一步发展和壮大。

六、论文结构安排第一章绪论1.1 研究背景1.2 研究意义1.3 研究目的与内容1.4 研究方法与步骤1.5 预期结果第二章相关理论和研究进展2.1 松针化学成分的研究进展2.2 松针有效成分的药理作用研究第三章实验材料与方法3.1 材料3.2 方法第四章结果与分析4.1 松针中有效成分的提取与分离4.2 松针有效成分的检测与定量分析4.3 松针有效成分的药理作用研究结果分析第五章结论与展望5.1 结论5.2 展望参考文献。

第33卷第5期肇庆学院学报Vol．33，No．5 2012年9月JOURNAL OF ZHAOQING UNIVERSITY Sep．2012HPLC法测定松针中原花青素的含量严子军，韦寿莲，汪洪武，邓清华（肇庆学院化学化工学院，广东肇庆526061）摘要：采用高效液相色谱法（HPLC）测定了松针中原花青素的含量．色谱柱为Zorbax Eclipse XDB(标准色谱柱)－C18(4．6mm×150mm,5μm)，流动相为甲醇:乙腈:水（75:20:5），流速为0．6mL蛐min，检测波长为280nm．在优选色谱条件下，原花青素获得良好的分离．原花青素的浓度在0．01～0．20mg蛐mL范围内呈现良好的线性关系，线性方程为y＝6398．1x－5．4922(R2＝0．9975)．该方法成功应用于松针中原花青素的测定，回收率大于96％，RSD≤3．5％．关键词：松针;原花青素;HPLC中图分类号：O657．7文献标志码：A文章编号：1009－8445（2012）05－0026－03松针(pine needles)是松科(Pinaceae)松属(Pinus)植物的叶，又名松叶、松毛等．全世界共有10个属230余种，我国松树有10个属120余种，可供药用和饲用的有13种[1]．松针性温，味苦、涩，入心、脾经[2]，其主要功效为驱风活血、明目、安神、解毒、燥湿止痒．可治疗风湿性关节炎、跌打肿痛、夜盲症、高血压、神经衰弱、浮肿、湿疮疥癣等，并能防治流行性感冒、流行性脑炎、钩虫病等[3]．松针中含有挥发油类、粗蛋白、氨基酸、色素、维生素、多元酚类等多种化合物[4]．原花青素是植物界中广泛存在的一大类多酚类化合物，其基本组成为黄烷－3－醇和黄烷－3,4－二醇．原花青素是清除自由基很强的抗氧化剂，其抗氧化、清除自由基的能力是维生素E的50倍、维生素C的20倍．目前，原花青素已广泛应用于食品、药品、化妆品等领域．采用高效液相色谱法测定爬山虎、葡萄籽和玫瑰花提取物中原花青素含量的研究已有报道．而国内对松针提取物中原花青素含量测定方面的研究报道极少，更未见采用高效液相色谱法测定松针中原花青素含量的相关报道．1实验部分1．1实验材料和试剂实验所用材料和试剂如下：松针（采自肇庆北岭山）；AB－8弱极性大孔吸附树脂（上海润捷化学试剂有限公司）；质量分数为95％的乙醇（A．R．，天津市广成化学试剂有限公司）；石油醚（A．R．，天津市广成化学试剂有限公司）；浓盐酸、氢氧化钠（A．R．，汕头市西陇化工厂有限公司）；甲醇、乙腈(色谱纯，天津四友精细化学品有限公司)；原花青素对照品（贵州迪大科技有限责任公司，纯度≥99％）．1．2实验仪器实验所用仪器如下：高效液相色谱仪Agilent1200；G1314B VWD紫外检测仪；色谱柱为Zorbax Eclipse XDB－C18(4．6mm×150mm，5μm)；GKC210R4型可控恒温水浴锅（上海锦屏仪器仪表有限公司）；RE52CS旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂）；800型低速离心沉淀机（深圳市沙头角南国华仪器厂）．1．3松针中原花青素的提取将干燥松针剪切后用粉碎机粉碎，过筛(孔径为1．25mm，粒径≤1．5mm)，采用石油醚脱脂[5]，晾干备收稿日期：2012－02－20基金项目：广东省科学技术计划基金资助项目(2011B020*******)作者简介：严子军(1966－),男,广东新兴人,肇庆学院化学化工学院高级实验师．第5期严子军等：HPLC 法测定松针中原花青素的含量用．称取20．00g 脱脂松针粉进行超声波辅助提取．提取液是质量分数为60％的乙醇(料液比1:10)，温度为40℃，pH 值为4，提取时间为45min．连续提取3次，合并提取液并过滤，将温度控制在45℃下旋转蒸发浓缩，备用．大孔吸附树脂预处理：按文献[6]的方法预处理、平衡树脂柱．上样：树脂柱平衡后，将松针提取液以1mL蛐min 的流速上样．淋洗：用20mL 蒸馏水以1mL蛐min 的流速冲洗去除未被吸附的原花青素及小分子杂质．洗脱：用质量分数为75％的乙醇以1．5mL蛐min 的流速洗脱，收集洗脱液80mL ，备用．1．4供试溶液制备精密量取纯化后的松针提取液1mL 置于10mL 容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀后再稀释10倍，备用．1．5对照品贮备液精密称取原花青素对照品5．0mg ，置于5mL 的容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制成1．0mg蛐mL 的溶液，备用．1．6实验方法色谱柱为Zorbax Eclipse XDB－C18(4．6mm×150mm ，5μm)；流动相为甲醇－乙腈－水＝75:20:5；流速为0．6mL蛐min ；检测波长为280nm ；进样量为20μL．2结果与讨论2．1流动相的选择天然产物提取物中含有复杂的成分，采用HPLC 分析时要对其流动相进行优化．尝试以甲醇:水(V :V ＝90:10)为流动相分离松针提取液，发现色谱峰重叠并伴随拖尾现象．以甲醇:乙腈(V :V ＝70:30)为流动相分离松针提取液，色谱峰没有拖尾现象，但未能达到完全分离．实验发现在流动相中加入少量的水有助于提高分离度，以甲醇:乙腈:水(V :V :V ＝75:20:5)为流动相分离松针提取液，所得的色谱峰尖锐，分离效率高(见图1)．色谱峰经加标确认，3．105min 所对应的色谱峰为原花青素．图1对照品（A ）和松针提取液（B ）的HPLC 色谱图2．2线性范围精密量取对照品贮备液1mL ，置于5mL 容量瓶，定容至刻度，再依次稀释成不同浓度，分别进行色谱分离分析．以浓度（mg蛐mL ）作为横坐标，对应的峰面积为纵坐标，绘制标准曲线．原花青素的线性回归方程为y ＝6398．1x －5．4922，R 2＝0．9975，原花青素在0．01～0．20mg蛐mL 内呈现良好的线性关系．2．3重现性实验取3份供试品溶液，按1．6所示实验方法连续测定6次，测定原花青素的峰面积和保留时间．结果发现原花青素的峰面积和保留时间的RSD 分别为2．0％和0．12％，说明峰面积和保留时间的精密度和重现性良好．27肇庆学院学报第33卷2．4稳定性实验取同一份供试品溶液分别在配制后0、4、6、8、12h 进样测定，松针提取液中原花青素的峰面积的RSD＝1．6％，说明松针提取物中原花青素供试液在配制12h 内稳定性良好．2．5松针中原花青素含量的测定取供试液6份，其中3份分别加入适量原花青素对照品溶液，按1．6所示实验方法测定，每份平行测定3次，结果见表1．由表1发现，该方法的平均回收率大于96％，RSD ≤3．5％，说明该方法准确、可靠，用其测得松针中原花青素的含量达3．2mg蛐g．表1松针中原花青素的测定结果及回收率(n ＝3)3结论笔者采用高效液相色谱法对松针中的原花青素进行了鉴定和含量测定．实验结果表明，松针中原花青素的含量达到3．2mg蛐g ，实验方法的平均回收率大于96％，RSD ≤3．5％．参考文献：［１］刘晓庚，陈梅梅．我国松针的开发利用研究及进展［Ｊ］．林产化工通讯，２００３（４）：２９－３０．［２］黄顺东．松针临床应用及药理研究概况［Ｊ］．实用中医药杂志，２００５（８）：５１４－５１５．［３］李萍，刘友平．松针研究进展［Ｊ］．成都中医药大学学报，２００１（３）：４９－５０．［４］程扶玖，邹运鼎．松属植物松针化学成分的研究［Ｊ］．西北植物学报，１９９０，１０（３）：２３２－２３６．［５］徐晓云．沙棘原花青素的分离、结构鉴定及生物活性研究［Ｄ］．武汉：华中农业大学，２００７．［６］张泽生，赵春艳，曹力心，等．大孔吸附树脂分离纯化山楂果中原花青素的研究［Ｊ］．现代食品科技，２００６（２）：１７．Determination of Proanthocyanidins Content in Pine needlesby High Performance Liquid ChromatographyＹＡＮＺｉｊｕｎ，ＷＥＩＳｈｏｕｌｉａｎ，ＷＡＮＧＨｏｎｇｗｕ，ＤｅｎｇＱｉｎｇｈｕａ（ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＣｈｅｍｉｓｔｒｙａｎｄＣｈｅｍｉｃａｌＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，ＺｈａｏｑｉｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｚｈａｏｑｉｎｇ，Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ５２６０６１，Ｃｈｉｎａ）Abstract:Ａｓｉｍｐｌｅｍｅｔｈｏｄｗａｓｄｅｖｅｌｏｐｅｄｔｏｄｅｔｅｒｍｉｎｅｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｏｆｐｒｏａｎｔｈｏｃｙａｎｉｄｉｎｓｉｎｐｉｎｅｎｅｅｄｌｅｓｂｙｈｉｇｈｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅｌｉｑｕｉｄｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ（ＨＰＬＣ）．ＴｈｅｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｉｃｃｏｌｕｍｎｗａｓａＺｏｒｂａｘＥｃｌｉｐｓｅＸＤＢ－Ｃ１８ｃｏｌｕｍｎ（４．６ｍｍ×１５０ｍｍ，５μｍ）ａｎｄｔｈｅｍｏｂｉｌｅｐｈａｓｅｗａｓｍｅｔｈａｎｏｌ：ａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ：ｗａｔｅｒ（７５：２０：５）．Ｔｈｅｆｌｏｗｒａｔｅｗａｓ０．６ｍＬ／ｍｉｎａｎｄｔｈｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｗａｖｅｌｅｎｇｔｈｗａｓ２８０ｎｍ．Ｉｎｏｐｔｉｍａｌｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｉｃｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ，ｔｈｅｐｒｏａｎｔｈｏｃｙａｎｉｄｉｎｓｃｏｕｌｄｂｅｗｅｌｌｓｅｐａｒａｔｅｄ．Ｔｈｅｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｏｆｐｒｏａｎｔｈｏｃｙａｎｉｄｉｎｓｉｎ０．０１～０．２０ｍｇ／ｍＬｒａｎｇｅｐｒｅｓｅｎｔｅｄａｎｅｘｃｅｌｌｅｎｔｌｉｎｅａｒｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ，ｔｈｅｌｉｎｅａｒｅｑｕａｔｉｏｎy ＝６３９８．１x －５．４９２２（R ２＝０．９９７５）．Ｔｈｅｍｅｔｈｏｄｈａｓｂｅｅｎｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｌｙａｐｐｌｉｅｄｔｏｔｈｅｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｐｒｏａｎｔｈｏｃｙａｎｉｄｉｎｓｉｎｐｉｎｅｎｅｅｄｌｅｓ，ｒｅｃｏｖｅｒｙｗａｓｍｏｒｅｔｈａｎ９６％，ＲＳＤ≤３．５％．Key words:ｐｉｎｅｎｅｅｄｌｅｓ；ｐｒｏａｎｔｈｏｃｙａｎｉｄｉｎｓ；ＨＰＬＣ(责任编辑：陈静)28。

松针提取物抗氧化活性研究进展作者：刘真韩祖成乔树真惠振亮袁捷来源：《特别健康·下半月》2013年第11期【摘要】本草纲目言：治中风，松叶一斤，细切，以酒一斗煮至三升顿服，汗出立愈。

据科研证实，松针提取物的抗自由基能力为目前所发现植物中最强的。

此项结果为脑动脉硬化，脑梗死、痴呆等脑血管疾病的防治带来了福音。

本文综述了近5年松树提取物抗氧化特性的研究进展，旨在阐明其抗自由基能力在脑血管相关疾病中的应用前景。

【关键词】松针抗氧化活性自由基多酚类黄酮类动脉硬化脂质过氧化【中图分类号】R47 【文献标识码】A 【文章编号】1003-8183（2013）11-0086-02前言：松针（pine needle）为松科（Pinaceae）松属（Pinus）植物的叶，别名猪鬃松叶、松毛、山松须，主要来源为油松、马尾松、云南松、西伯利亚红松等。

其作用范围极广范，能降低血液的粘稠度、血管紧张度、硬化度并能双重调节血压等功效。

松针提取物含多种水溶性黄酮，包括在人体内活性极强、生物利用度极高的前花青素（procyanidins， PCA），儿茶素（catechin）及多种不饱和脂肪酸。

据中国老年学学会老年医学委员会常委吉玲教授在研究中发现，高血压、冠心病和中风等心脑血管病，在饮用松针制剂后，病情有一定程度的改善。

其中，脑动脉硬化症（AS）为当今医学界尚未攻破的疑难顽症，同时也是诸多脑血管病的发病基础。

自由基与脂质过氧化是AS发生发展的重要因素。

本文就松针的抗氧化自由基功能详加论述，为松针提取物应用于AS的防治提供科研依据，以推动松针在临床医学方面的应用。

1 松树提取物药理作用1.1.抗自由基、过氧化的主要药理作用1.1.1增强SOD抗氧化活性与抑制脂质过氧化自由基可导致脂质过氧化反应使生物膜损伤并引发多种细胞结构及功能破坏，与AS的发生及进展密切相关。

因此，超氧化物歧化酶（SOD）在体内自由基损伤过程中的显得极为重要。

松树现代药用研究一、前花青素科学家研究表明：松皮是目前世界上用于提取作用最强的天然抗氧化剂——前花青素的主要原料。

松针的前花青素又称低聚原花青素、低聚花色素原、原花色素低聚物，前花青素是广泛存在于植物界的属于双黄酮衍生物的天然多酚化合物，在营养学上，被归为生物类黄酮的家族。

通常将前花青素二至四聚体称为低聚原花青素,其中又以二聚体研究最多, 氧化性最强。

低聚原花青素在水、乙醇、甲醇、异丙醇中是完全溶解的，不溶于乙醚、氯仿、苯等。

前花青素有涩味，在酸性溶液中加热可降解和氧化形成花色素。

它具有极强的抗氧化特性，一般存在于水果的果皮、种子及植物的木实部，其主要作用是保护植物中易氧化的成分。

前花青素在人体内不能自行合成，烹调过程中容易流失，被人摄取的量几乎没有。

前花青素的最主要功能是其抗氧化的能力，能稳定蛋白质的胶原质，维持蛋白质的弹力素。

它与组织间的连接、血管和肌肉关系密切，从而避免皮肤变薄、塌陷而出现皱纹，可使人看来更漂亮，并进一步预防皮肤老化。

虽然西方科学家在试验室里完成了前花青素抗基因突变的试验，但目前为止，还在初期的试验阶段。

1986年，美国食品医药管理局检测报告：前花青素的抗自由基能力是维生素C的20倍，是维生素E的50倍。

前花青素在欧美等国已应用几十年，口碑很好，被誉为“生命常青素”、“口服化妆品”、“皮肤维生素”；日本人专门成立了吃松叶协会，将松叶泡茶饮，打成粉末做成糕点或制成松叶酒饮用；法国人将前花青素用作血管增强剂；美国FDA将前花青素作为癌症病人首选的辅助治疗功能食品。

前花青素主要用于改善心血管系统功能、抗炎、治疗静脉曲张和预防癌症，已作为医药原料、食品添加剂、化妆品原料和辅助营养性食品材料等使用。

但目前西方国家主要将其应用在保健食品上。

前花青素是迄今为止所发现的最强效的自由基清除剂，具有非常强的体内活性。

实验证明，其抗自由基氧化能力是维生素E的50倍，维生素C的20倍。

并且吸收迅速完全，口服20分钟即可达最高血液浓度，代谢半衰期达7小时之久。

赤松松针原花青素的抗氧化分析摘要：本文利用DPPH（1,1-二苯基-2-三硝基苯肼）法分析松针高温水提物、乙醇提取物、己烷提取物、高温正己烷（HWH）提取物、高温乙醇（HWE）提取物的抗氧化活性。

与其他提取物相比，松针高温水提取物具有较强的抗氧化能力。

对于MC3TW-E1细胞活性氧（ROS）的产生，高温水提物也表现明显较强的抑制能力，细胞内ROS含量最低。

各种提取物经过高效液相色谱法（HPLC）分析的结果显示，松针高温水提物中原花青素的含量最高，经过Sephadex LH-20 的纯化，测定了松针高温水提物的抗氧化活性。

结果表明第7组分和第12组分含有的原花青素和儿茶素的含量最高，抗氧化能力最强。

这些结果表明松针高温水提物的抗氧化能力与其所含有的高聚原花青素和单体儿茶素的含量成正相关。

此外，松针高温水提物的抗氧化能力与常见的抗氧化剂，如维生素C类似，这表明，松针含有的原花青素和儿茶素可能用作另一种抗氧化剂。

关键词：DPPH；ROS；HPLC分析；原花青素；松针1 前言自由基和其他活性氧物质是机体在某些外源性化学物质入侵或内源性代谢过程中产生的。

活性氧（ROS），包括超氧自由基（O2-）、羟自由基（OH-）、过氧化氢（H2O2），能与DNA、脂质和蛋白质迅速反应，造成细胞损伤。

有研究表明，一些酶具有清除H2O2，保护细胞免受活性氧伤害的作用[1]，这些酶包括超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、谷胱甘肽过氧化物酶[2]。

酚类化合物能提供氢原子自由基，因此具有抗氧化能力。

许多酚类化合物，特别是黄酮类化合物，具有广泛的生物学效应，包括抑菌、抗病毒、抗炎、抗过敏、抗血栓、舒张血管等[3]。

多酚是一种次生代谢产物，广泛存在在整个植物界。

为了抑制ROS产生，为了生存，植物产生各种抗氧化的化合物。

几乎所有可以食用的植物中都含有多酚类化合物。

植物多酚是著名的天然抗氧化剂。

据最近的研究报道称，食物中的茶多酚可以在老年疾病和预防癌症起到重要作用。

松针化学成分研究的进展1挥发油松针精油是其香气的主要成分,此中主含成分为萜烯类的具有(C10H16 )n 化学通式的一系列不饱和碳氢化合物及其衍生物。

如α-蒎烯 , β-蒎烯 , β-水芹烯 ,月桂烯罗勒烯等 [4] 。

挥发油组分及含量因树种以及生长环境的不一样而有较大差别。

如丁靖凯等用气相色谱质谱计算机联用仪 ,对滇南到滇中水平散布及低到高垂直散布的八个云南松和九个思茅松进行了定性、定量剖析 ,共判定化合物 26 个。

结果表示 : 不一样地域的云南松、思茅松针油都含有大概同样的化学成分。

从精油成分上看 ,云南松和思茅松没有显然差别 ,松节油和松针油成分也十分邻近 , 而α-蒎烯、β-蒎烯的含量随产地不一样变化较大[5]。

郝强等用气相色谱 - 质谱法对南方马尾松松针挥发油组分进行了剖析 [6], 其主要成分为单萜 (单萜化合物 7 种 ,占挥发油总量的 25.23%) 和倍半萜 (倍半萜化合物 8 种,占挥发油总量的47.54%) 。

邢有权等的研究表示 :黑龙江红松松针油的主要成分按含量高低挨次是乙酸龙脑乙酯、 1,2-环氧 -2-甲基 -5-异丙基 -环己烷、异龙脑等 [7] 。

佟立君等也对黑龙江红松松针挥发油组分进行了剖析,结果表示 :在红松挥发油中,以α-蒎烯和莰烯的含量为最多。

湿地松松针精油中主要成分是α-蒎烯、β-蒎烯等 ,此中含量最多的是β-蒎烯,占含量1/3以上[8][9] 。

油松松针精油主要成分为反-石竹烯 (30.64%) 、乙酸冰片酯 (24.00%) 、α-葎草烯 (11.62%)、δ-杜松烯 (4.734%) 、α-香橙烯 (2.70%) 、α-衣兰油烯 (2.07%) 等 [10] 。

安徽马尾松松、针油的主要化学成分按含量高低挨次是β-石竹烯、β-芹子烯和β-橙椒烯。

厦门马尾松松针精油中β-石竹烯的含量最多 (在14.42%~24.88% 之间 ),而α-蒎烯、β-蒎烯的含量都较小 [11] 。

毕业设计(论文)课题名称松针原花青素的提取关键技术研究学生姓名史华梅学号0840921027系、年级专业生物与化学工程系08级食品质量与安全（食品科学与工程方向）指导教师黄大川职称副教授2012年5月10 日松针原花青素的提取关键技术研究史华梅邵阳学院生物与化学工程系08级食品质量与安全(食品科学与工程方向)湖南邵阳 422000指导老师:黄大川摘要本文主要研究了微波辅助提取松针中原花青素的工艺。

通过比较3种不同处理方式的松针的吸光度，选定新鲜马尾松松针作为提取工艺研究的原材料。

微波辅助提取原花青素具有省时、高效、节能等优点, 且提取物更易于分离纯化。

微波水提法的最佳条件：功率500W，时间15min，料液比1：9。

用可见光分光光度法对原花青素的含量进行判定，其依据是在其最大吸收波长550nm处，吸光度与原花青素的含量成正相关。

通过单因素实验和正交实验，确定微波水提法从松针中提取原花青素的最佳工艺条件：提取温度为100℃, 提取时间为150 m in, pH 为4. 0, 料液比为1：14, 该条件下原花青素的吸光度为10.566。

关键词：松针；原花青素；微波辅助水浸提法；Study on optimum process for extraction ofproanthocyanidin from pine needlesBy：SHI HuameiDepartment of Biology and Chemistry Engineering,ShaoyangUniversity,Shaoyang Hunan 422000,ChinaDirected by:HUANG DachuanABSTRACTThis paper is a study on the optimum process for extraction of Proanthocyanidins from pine neddles.By comparing the absorbance of three different pine neddles which are dealt with three different ways, we finally choose the fresh pine neeles as the raw materials to study the extraction process of Proanthocyanidins. Microwave-assisted extraction of Proanthocyanidins from pine neddles is time-saving, efficient and energy-saving. The optimum conditions of extraction are the rate of solution to solid 9: 1, the power 500W, extraction time 15 ing spectrophotometry to determine the content of Proanthocyanidins from pine neddles in the extracts on the basis of the absorbance Proportional to the content of Proanthocyanidins under the maximum absorption wavelength 550nm.By single factor and orthogonal experiment the best extraction process conditions was confirmed: extraction temperature of 100℃, extracting time for 150min, pH = 4.0, the ratio of solid to liquid is 1 : 14.The absorbance is 10.566 under such conditions. Key words: pine neddles; Proanthocyanidins; Microwave-assisted extraction目录摘要 (I)ABSTRACT (II)1 绪论 (1)1.1 松针的利用现状 (1)1.2 原花青素的研究进展 (2)1.3 本研究的目的和意义 (4)1.4 研究的主要内容 (4)2 材料与方法 (5)2.1 试验材料 (5)2.2 仪器和设备 (5)2.3 试验方法 (5)3结果与分析 (7)3.1 单因素试验结果和分析 (7)3.2 正交试验结果与分析 (9)3.3 验证试验结果与分析 (10)4 结论与展望 (11)参考文献 (11)致谢 (13)1 绪论1.1 松针的利用现状松针是松树类植物的主要副产物之一,是一种再生速度快、一年四季均可采收、分布广泛、天然蓄积量大、可持续利用的天然再生资源。

原花青素提取项目可行性研究报告立项申请报告模板【项目名称】原花青素提取项目可行性研究【立项申请报告】一、项目背景原花青素是一种天然的有机化合物，被广泛应用于食品、保健品、药物等领域。

随着对健康意识的提高和人们对天然健康产品的需求增加，原花青素市场潜力巨大。

然而，目前市场上的原花青素产品大多来自于合成或人工模仿，品质参差不齐。

因此，开展原花青素提取项目的可行性研究，对项目的经济效益和市场竞争力的评估具有重要意义。

二、项目目标本项目旨在开展原花青素提取项目的可行性研究，具体目标如下：1.确定最适宜的原花青素提取方法；2.研究提取工艺参数对原花青素产率的影响；3.评估原花青素产品的市场需求和竞争状况；4.进行经济效益分析，评估项目的可行性。

三、研究内容与方法1.研究内容：(1)原花青素提取方法研究：比较传统溶剂提取法、超声波辅助提取法等方法的提取效果和成本，确定最适合的提取方法。

(2)工艺参数优化：通过实验设计方法，研究提取过程中温度、压力、溶剂浓度等工艺参数对原花青素产率的影响，找出最佳工艺条件。

(3)市场调研：通过问卷调查和相关数据收集，了解原花青素产品在市场上的需求量、市场规模及竞争情况。

(4)经济效益分析：对项目的投资、生产成本、销售收入进行全面分析，评估项目的经济效益和可行性。

2.研究方法：(1)实验室实验：采用小试和中试方法，进行原花青素提取的实验研究，收集实验数据。

(2)文献调研：查阅相关文献资料，了解已有的原花青素提取方法和成果，为本项目提供参考和借鉴。

(3)问卷调查：采用问卷调查法，调查消费者对原花青素产品的认知和需求，以及对不同品牌原花青素产品的偏好程度。

四、预期成果1.确定最适宜的原花青素提取方法，并提供详细的提取工艺参数；2.分析市场需求和竞争状况，为原花青素产品的开发和推广提供依据；3.进行经济效益分析，评估项目的投资回报率和可行性。

五、项目实施计划1.第一年：进行原花青素提取方法研究和工艺参数优化实验，同时进行市场调研。

松树皮原花青素分离纯化及功能特性研究的开题报告
一、研究背景
现代医学已经证实，天然生物活性物质对疾病的防治起到了极大的作用，因此成为了近年来医学研究的重点。

松树皮原花青素是一种天然的生物活性物质，已经被证
实其具有多种生物活性，如抗氧化、抗菌、抗炎、抗突变等。

因此，对该物质的分离
纯化及功能特性研究具有重要的意义。

二、研究目的
本研究旨在通过松树皮原花青素的分离纯化及功能特性研究，探究其在医学上的应用。

三、研究内容
1. 松树皮原花青素的分离纯化：采用色谱技术、层析技术等方法，对松树皮原花青素进行分离纯化。

2. 松树皮原花青素的结构分析：采用波谱分析技术（如核磁共振波谱、红外光谱）进行结构分析。

3. 松树皮原花青素的生物活性研究：通过体外实验，探究松树皮原花青素在抗氧化、抗菌、抗炎、抗突变等方面的生物活性。

四、研究方法和步骤
1. 松树皮原花青素的制备：采用超声波辅助萃取工艺进行松树皮原花青素的制备。

2. 松树皮原花青素的分离纯化：采用色谱技术、层析技术等方法，对松树皮原花青素进行分离纯化。

3. 松树皮原花青素的结构分析：采用核磁共振波谱、红外光谱等波谱分析技术进行结构分析。

4. 松树皮原花青素的生物活性研究：通过体外实验，对松树皮原花青素在抗氧化、抗菌、抗炎、抗突变等方面的生物活性进行研究。

五、研究意义
通过本次研究，可以对松树皮原花青素的功能特性进行深入研究，探究其在医学上的应用，为新药研发提供理论依据。

此外，本研究还可以为松树皮的开发利用提供
参考，推动林果产业的发展。

云南松松针中原花青素的含量测定研究刘嘉;肖培云;刘光明;杨永寿【期刊名称】《大理学院学报》【年(卷),期】2016(001)008【摘要】目的：建立云南松松针中原花青素的含量测定方法，并研究不同月份云南松松针中原花青素的动态变化。

方法：通过单因素试验和正交试验考察提取溶剂，溶剂pH值，提取温度，提取时间等因素对原花青素提取的影响；并以儿茶素为对照，采用紫外-可见分光光度法，在500 nm处测定原花青素的含量。

结果：云南松松针中原花青素的最佳提取工艺为：采用pH 4.0的50%乙醇沸水浴回流3.0 h。

结论：该法操作简便、结果准确，可用于云南松松针中原花青素的含量测定。

%〔Abstract〕Objective: To establish a method for determining proanthocyanidins in Yunnan pine needles and comparing their dynamic changes in different months. Methods: The influence of the extraction solvent, the pH of solvent, the temperature and the duration for the extraction proanthocyanidins were studied through single factor and orthogonal experiment. Taking catechin as controls, proanthocyanidins was determined on 500 nm by Ultraviolet-Visible Spectrophotometry. Results:The optimal parameters for the extraction of proanthocyanidins from Yunnan pine needles were 50%ethanol of pH 4.0 in the boiling water with reflux extraction, and each extraction time duration was 3.0 h. Conclusions:The method was simple and accurate, which could be used to measure the content of proanthocyanidins in Yunnan pine needles.【总页数】5页(P24-28)【作者】刘嘉;肖培云;刘光明;杨永寿【作者单位】大理大学药学与化学学院，云南大理 671000;大理大学药学与化学学院，云南大理 671000;大理大学药学与化学学院，云南大理 671000;云南省昆虫生物医药研发重点实验室，云南大理 671000【正文语种】中文【中图分类】R284【相关文献】1.云南特色豆类中原花青素的提取工艺优化及含量测定 [J], 放茂良;和霁恬;邵志凌2.武当地区马尾松松针中原花青素含量测定研究 [J], 李聪;郑芳;朱雪松;周玉涛;郭贤明3.HPLC法测定松针中原花青素的含量 [J], 严子军;韦寿莲;汪洪武;邓清华4.松针中原花青素的提取工艺研究 [J], 徐丽珊;黄启亮;吴振珍5.云南松松针中原花青素的含量测定研究 [J], 刘嘉;肖培云;刘光明;杨永寿;因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。