全柱成像毛细管等电聚焦电泳测定艾塞那肽等电点

醋酸艾塞那肽项目介绍一）艾塞那肽（Exendin-4）介绍：艾塞那肽是从墨西哥巨蜥蜴毒液中分离出来的一种含有39个氨基酸的多肽序列，与GLP-1（胰高血糖素样肽，氨基酸序列：HDEFERHAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKTRG-OH）具有53%的同源性。

可促进胰岛素分泌，具有半衰期长的优点，主要应用在Ⅱ型糖尿病治疗方面。

商品名为百泌达（Bydureon），2011年欧盟获批，2012年FDA批准上市。

艾塞那肽序列：单字母表示：HGEGTFTSDL SKQMEEEAVR LFIEWLKNGG PSSGAPPPS –NH2三字母表示：H-His - Gly - Glu - Gly - Thr - Phe - Thr - Ser - Asp - Leu - Ser - Lys - Gln - Met - Glu - Glu - Glu - Ala - Val - Arg - Leu - Phe - Ile - Glu - Trp - Leu - Lys - Asn - Gly - Gly - Pro - Ser - Ser - Gly - Ala - Pro - Pro - Pro - Ser –NH2分子式：C184H282N50O60S1CAS NO：141758-74-9残基数：39分子量：4186.63 g/mol等电点：pH 4.86溶解性预测：较好的水溶性图1 艾塞那肽亲水性分析注：1）上边是亲水性，下边是疏水性2）颜色表示: Acidic酸性Aromatic芳香性Basic碱性Aliphatic脂肪族Polar极性Cysteine半胱氨酸二）醋酸艾塞那肽（exenatide acetate）分子式：C184H282N50O60S.C2H4O2分子量：4262.67CAS NO：141732-76-5三）艾塞那肽合成：合成方法：固相合成合成树脂：Rink Amide MBHA Resin（loading: 0.3mmol/g）溶剂：DMF脱保护试剂：20% PIP切割试剂：TFA/ED T/ Thioanisole / 2-Mercaptoethanol图2 艾塞那肽合成流程图四）HPLC 纯化（TFA盐艾塞那肽）1）色谱填料选择。

生物检定全柱成像毛细管等电聚焦电泳法测定4种生物制品等电点周朝明，张高峡（上海博唯生物科技有限公司，上海201321）摘要　目的：采用全柱成像毛细管等电聚焦电泳法（WCID-CIEF），测定多肽样品、胰岛素、融合蛋白疫苗和HPV病毒样颗粒的等电点。

方法：采用50 mm×100 μm石英涂层毛细管。

聚焦方法设置：1.5 kV聚焦1 min，3 kV聚焦4 min/8 min；检测波长：280 nm。

结果：多肽样品、激素样品胰岛素和融合蛋白疫苗的等电点分别为10.98、5.87和5.86；病毒样颗粒样品HPV 31L1、HPV 33L1、HPV 45L1、HPV 52L1和HPV 58L1的实测等电点分别为8.17、7.86、7.77、7.91和7.69，并且实测等电点与理论等电点基本一致。

全柱成像毛细管等电聚焦法测定生物制品专属性和精密度均符合验证要求。

结论：该方法可用于生物制品的等电点分析。

关键词：全柱成像毛细管等电聚焦；WCID-CIEF；等电点；多肽；激素；融合蛋白疫苗；病毒样颗粒；胰岛素；重组人乳头瘤病毒中图分类号：R 917 文献标识码：A 文章编号：0254-1793（2017）04-0718-06doi：10.16155/j.0254-1793.2017.04.25Determination of isoelectric point of 4 kinds of biological products by whole column imaging detection capillary isoelectric focusingZHOU Chao-ming，ZHANG Gao-xia（Shanghai Bovax Biotechnology Co.，Ltd，Shanghai 201321，China）Abstract　Objective：To determine the isoelectric points of polypeptide，insulin，fusion protein vaccine and HPV virus-like particle（VLPs）by whole column imaging detection-capillary isoelectric focusing（WCID-CIEF）．Methods：Cartridges of 50 mm×100 μm i．d．internally fluorocarbon-coated fused-silica capillary was used with the following settings：pre-focusing for 1 min under 1．5 kV，followed by focusing at 3 kV for 4 min or 8 min；detection wavelength：280 nm．Results：The isoelectric points（p I）of the polypeptide，the hormone sample （insulin）and the fusion protein vaccine were 10．98，5．87 and 5．86，respectively．The five virus-like particles displayed p I values of 8．17（HPV 31L1），7．86（HPV 33L1），7．77（HPV 45L1），7．91（HPV 52L1）and 7．69（HPV 58L1）．The obtained p I values were substantially consistent with the theoretical p I values．The specificity and precision of WCID-CIEF were validated．Conclusion：The method can be used for determing the isoelectric point of biological products．Keywords：whole column imaging detection-capillary isoelectric focusing；WCID-CIEF；isoelectric point；polypeptide；hormone；fusion protein vaccine；virus-like particles；insulin；recombinant human papillomavirus *　第一作者　Tel：（021）68036087；E-mail：zhouchaoming@全柱成像毛细管等电聚焦电泳（whole column imaging detection - capillary isoelectric focusing，WCID-CIEF）是1992年发展起来的一项检测技术，具有分析速度快，重复性好，测定准确等特点，是生物制药分析强有力的工具［1-3］。