sanger测序培训PPT最终精讲
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sanger测序结果解读sanger测序是一种经典的测序技术,被广泛应用于DNA测序领域。
它以其高可靠性和较低的成本而闻名,是许多基因研究项目的首选测序方法。
在本文中,我们将以“sanger测序结果解读”为主题,详细介绍sanger 测序的原理、步骤以及如何解读测序结果。
一、Sanger测序原理sanger测序是基于DNA链延伸原理的一种测序方法。
它利用了DNA合成时的一种特性,即位置固定的链终止。
当DNA合成反应中加入了一种特殊的二进制链终止剂(即dideoxynucleotide),DNA合成过程会被阻止。
在sanger测序中,使用一小部分含有4种不同的二进制链终止剂的反应混合物,其中每种终止剂对应一个特定的碱基(A、T、C、G)。
通过测定反应混合物中各个碱基的浓度,可以确定DNA序列中每个位置上的碱基。
二、Sanger测序步骤1. DNA模板制备:首先,需要从目标DNA样本中提取DNA,并对其进行纯化和扩增,以获得足够的DNA模板用于测序。
2. 反应混合物制备:将DNA模板与引物(即反向和正向引物)以及核苷酸(dNTPs)和dideoxynucleotide(ddNTPs)混合。
其中ddNTPs对应着A、T、C和G中的每一个,只是与相应碱基缺失了3'-OH基团,从而阻止相应碱基的链延伸。
3. PCR扩增:反应混合物经过PCR(聚合酶链反应)扩增,使得DNA模板在冷却和加热循环中得以复制。
4. 电泳分离:扩增后的DNA片段通过聚丙烯酰胺凝胶电泳进行分离。
电泳的原理是根据DNA分子大小,让DNA片段按照大小排列形成“梯度”。
5. 测序反应:将电泳分离后的DNA片段放入4个不同反应管中,每个管中添加一个ddNTP,并在每个管中使用DNA聚合酶进行扩增。
6. 电泳分析:使用高分辨率聚丙烯酰胺凝胶电泳将反应产物进行分离,并根据分子量和颜色的大小排列顺序,读取出测序长度。
三、解读sanger测序结果在sanger测序过程中,通过对反应产物进行电泳分析,可以获得一系列不同长度的DNA片段。
sanger测序原理
Sanger测序是一种DNA测序方法,它基于DNA的合成与断
裂原理。
该方法是1985年由Frederick Sanger及其团队开发的,因此得名为Sanger测序。
在Sanger测序中,首先需要通过PCR或其他方法得到待测DNA的模板序列。
然后,将该模板序列分为多个小片段。
接着,对每个小片段进行DNA合成反应。
DNA合成反应中会加入少量的dideoxynucleotide(ddNTPs),与普通的deoxynucleotide(dNTPs)不同的是,ddNTPs具有
辨识碱基A、T、C、G的能力,但在加入到DNA链中后,无
法再进行链延伸。
合成反应产生的dNTPs和ddNTPs的比例是经过精心调节的,使得在某个时间点,每个小片段的链延伸会停止。
这样,反应结束后,就生成了具有不同长度的DNA片段。
接下来,通过电泳将这些DNA片段分离,根据其长度的不同,可以将DNA分离成一系列的带电DNA片段。
最后,通过一种特殊的染料或放射性示踪剂,检测每个带电DNA片段的长度。
根据这些DNA片段的长度,就可以逆推出原始DNA模板的序列。
Sanger测序是一种经典而常用的测序方法,尽管其速度相对较
慢,但仍然广泛应用于一些较小规模的测序项目和基因组研究中。
sanger测序技术原理小伙伴们!今天咱们来聊一聊超酷的Sanger测序技术原理呀。
Sanger测序技术就像是一个超级侦探,专门去探寻DNA序列这个神秘世界的真相。
你想啊,DNA那可是生命的密码本,里面藏着无数关于我们从哪儿来,为啥长这样之类的超级秘密呢。
Sanger测序技术的核心是一种很有趣的化学反应哦。
它利用了DNA聚合酶这个小助手。
这个DNA聚合酶就像是一个勤劳的建筑工人,它的工作就是把一个个核苷酸按照模板DNA的样子,一个一个地搭建起来,形成新的DNA链。
不过呢,这里面有个小把戏。
我们会给这个建筑工人一些特别的“建筑材料”,也就是双脱氧核苷酸(ddNTP)。
正常的核苷酸(dNTP)就像是完整的砖头,可以让这个链子一直延伸下去。
但是双脱氧核苷酸(ddNTP)就像是缺了一块的砖头,一旦它被DNA聚合酶用了,这个新的DNA链就不能再继续延长啦,就像盖房子盖到一半,没材料了一样。
那这个双脱氧核苷酸(ddNTP)是怎么标记的呢?这可就更有趣啦。
我们会给不同的ddNTP标记上不同的颜色,就像给不同的小砖头涂上不同的颜色一样。
比如说,给ddATP标记上一种颜色,给ddTTP标记上另一种颜色,这样我们就能区分它们啦。
然后呢,我们把模板DNA、DNA聚合酶、正常的核苷酸(dNTP)还有那些特别的双脱氧核苷酸(ddNTP)都放在一起,就像开一个大派对一样。
在这个派对里,DNA聚合酶就开始工作啦。
它会随机地把正常的核苷酸或者双脱氧核苷酸接到新的DNA链上。
因为双脱氧核苷酸会让链停止生长,所以最后就会形成好多长短不一的DNA片段。
这些DNA片段可都是宝贝呢。
我们把它们放在一个特殊的凝胶里,这个凝胶就像是一个大迷宫。
然后给这个迷宫加上电,那些带负电的DNA片段就会开始在迷宫里跑起来啦。
小的片段跑得就快,大的片段跑得就慢。
就像一群小动物在赛跑,小老鼠跑得比大象快多啦。
当这些片段在凝胶里跑了一段距离之后呢,因为我们之前给双脱氧核苷酸标记了颜色,所以我们就能看到不同颜色的条带啦。