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实验报告课程名称： 生物化学实验（丙） 指导老师： 成绩： 实验名称： 氨基移换反应及其产物的鉴定 实验类型： 定量实验 同组学生姓名： 一、实验目的和要求（必填） 二、实验内容和原理（必填） 三、主要仪器设备（必填） 四、操作方法和实验步骤 五、实验数据记录和处理 六、实验结果与分析（必填） 七、讨论、心得一、 实验目的和要求1、学习鉴定氨基移换反应的简便方法及其原理；2、学习纸层析的原理和操作技术；二、 实验内容和原理1、氨基移换反应：氨基移换反应是在氨基移换酶（转氨酶)的催化下，氨基酸的α-氨基和α-酮酸的α-酮基之间发生的互换反应。
任何一种氨基酸进行转氨作用时都由其专一的转氨酶催化，转氨酶的最适pH 接近7.4，在各种转氨酶中，谷丙转氨酶（glutamic pyruvic transaminase, GPT ）和谷草转氨酶（glutamic oxalacetic transaminase,GOT ）的活性最强。
转氨作用主要发生在肝脏中。
转氨酶广泛存在于机体的各种组织中。
在肝、心、肾等组织中谷丙转氨酶（GPT ）、谷草转氨酶（GOT ）活性较高。
2、GPT 催化下的转氨作用装订线L －谷氨酸脱氢酶在体内特别是在肝细胞内含量丰富，活性高，催化L －谷氨酸氧化脱－NH 2，加碘乙酸能抑制其活性，从而可以保护氨基移换反应的产物L －谷氨酸。
3、纸层析原理本实验用纸层析法，检查由丙氨酸和α—酮戊二酸在肝细胞谷丙转氨酶（GPT) 的作用下所生成的谷氨酸，证明组织内的氨基移换作用。
滤纸层析是以滤纸作为惰性支持物的分配层析，是利用不同物质在两个互不相溶的溶剂中分配情况（溶解度）的不同来分离混合物的一种技术。
层析溶剂是由有机溶剂和水组成。
由于滤纸纤维上羟基具有亲水性，因此吸附一层水作为固定相，而通常把有机溶剂作为流动相。
在进行分离时，由于被分离物质的组分在两相中的分布不同，随着流动相的移动，物质将在两相间进行连续的、动态的不断分配，从而造成不同组分移动的速度也不相同。
实验报告课程名称： 生物化学实验（丙） 指导老师： 方祥年 成绩：__________________ 实验名称： 蔗糖酶蛋白含量的测定、蔗糖酶活力测定及其分离纯化效果的评价同组学生姓名： 金宇尊、鲍其琛、袁平、朱耀仁、蔡玉林 一、实验目的和要求（必填） 二、实验内容和原理（必填）三、实验材料与试剂（必填） 四、实验器材与仪器（必填） 五、操作方法和实验步骤（必填） 六、实验数据记录和处理 七、实验结果与分析（必填） 八、讨论、心得一、实验目的和要求1、蔗糖酶蛋白含量的测定——Folin-酚法①学习Folin-酚法测定蛋白质含量的原理和方法；②掌握分光光度法制作标准曲线，准确测定未知样品的蛋白质含量； ③掌握分光光度计的使用方法。
2、蔗糖酶活力测定——3.5－二硝基水杨酸法 ①掌握酶活力测定的基本原理和方法； ②学习酶的比活力的计算。
二、实验内容和原理1、Folin-酚测定法Folin-酚试剂是由甲、乙两种试剂组成的。
甲试剂由碳酸钠、氢氧化钠、硫酸铜和酒石酸钾钠组成，在碱性条件下蛋白质中的肽键与酒石酸钾钠铜盐起作用，生成紫红色络合物；乙试剂是由磷钼酸和磷钨酸、硫酸、溴等组成，在碱性条件下，铜-蛋白质络合物以及蛋白质中的酪氨酸残基（酚基）和色氨酸还原磷钼酸-磷钨酸试剂（乙试剂）产生深蓝色（钼蓝和钨蓝的混合物），其色泽深浅与蛋白质含量成正比。
可用500nm 波长比色测定，适于测定蛋白质含量0.05～0.5g/L 。
优点： 简单、迅速、灵敏度高；反应较稳定。
缺点： 该反应受多种因素的干扰。
2、蔗糖酶活力测定蔗糖酶（β-D-呋喃型果糖苷-果糖水解酶EC 3.2.1.26），是一种水解酶。
它能催化非还原性双糖（蔗糖）的1,2－糖苷键裂解，将蔗糖水解为等量的葡萄糖和果糖（还原糖）。
因此，每水解1mol 蔗糖，就能生成2mol 还原糖。
还原糖的测定有多种方法，例如：纳尔逊－索模吉试剂比色法，斐林试剂法等。
一、实训背景随着生物科学的快速发展，生物化学作为一门重要的基础学科，在生物技术、医药、食品等领域具有广泛的应用。
为了提高我们的实践能力，培养我们的综合素质，我们学院组织了一次生物化学实训活动。
本次实训旨在让我们深入了解生物化学的基本理论、实验技能和实际应用，提高我们的科研素养。
二、实训目的1. 熟悉生物化学的基本理论，了解生物化学在生物科学领域的应用。
2. 掌握生物化学实验的基本操作，提高实验技能。
3. 培养团队合作精神，提高沟通与协作能力。
4. 增强科研素养，为今后从事科研工作打下基础。
三、实训内容1. 生物化学基本理论实训期间，我们学习了生物化学的基本理论，包括生物大分子的组成、结构、功能及其相互作用。
通过学习，我们对生物化学有了更深入的了解，为后续实验操作奠定了理论基础。
2. 生物化学实验（1）蛋白质的分离与鉴定本次实训中，我们学习了蛋白质的分离与鉴定实验。
通过实验，我们掌握了SDS-PAGE电泳、考马斯亮蓝G250染色、Western blot等蛋白质分离与鉴定技术。
（2）核酸的提取与鉴定我们学习了核酸的提取与鉴定实验，掌握了CTAB法提取DNA、琼脂糖凝胶电泳、EB染色等核酸提取与鉴定技术。
（3）酶活性测定在酶活性测定实验中，我们学习了酶的催化反应原理、底物与产物检测方法等，掌握了酶活性测定的实验操作。
3. 生物化学应用实训期间，我们还学习了生物化学在生物技术、医药、食品等领域的应用。
通过学习，我们了解到生物化学在实际生产、科研中的重要作用。
四、实训过程1. 实训准备在实训开始前，我们进行了充分的准备，包括查阅相关资料、熟悉实验操作流程、了解实验原理等。
2. 实验操作在实验过程中，我们严格按照实验操作规程进行操作，注意实验安全，确保实验顺利进行。
3. 实验数据记录与分析在实验过程中，我们认真记录实验数据，对实验结果进行分析，总结实验现象。
4. 实训总结实训结束后，我们进行了总结，对实验中遇到的问题进行反思，并提出改进措施。
. .. . 实验报告课程名称： 生物化学实验（丙） 指导老师： 方祥年 实验名称： 离子交换柱层析分离纯化蔗糖酶 同组学生： 金宇尊、鲍其琛 一、实验目的和要求（必填） 二、实验容和原理（必填） 三、实验材料与试剂（必填） 四、实验器材与仪器（必填） 五、操作方法和实验步骤（必填） 六、实验数据记录和处理 七、实验结果与分析（必填） 八、讨论、心得一、实验目的和要求1、学习离子交换层析的基本原理；2、学习离子交换层析分离蛋白质的基本方法和技术；3、学习蔗糖酶活性检测的基本原理和方法。
二、实验容和原理（1）实验原理 1、离子交换层析：以离子交换剂为固定相，液体为流动相进行。
离子交换剂与水溶液中离子或离子化合物的反应主要以离子交换方式进行，或者借助离子交换剂上电荷基团对溶液中离子或离子化合物的吸附作用进行。
这些过程都是可逆的。
在某一pH 值的溶液中，不同的蛋白质所带的电荷存在差异，因而与离子交换剂的亲和力就有区别。
当洗脱液的pH 改变或者盐的离子强度逐渐提高时，使某一种蛋白质的电荷被中和，与离子交换剂的亲和力降低，不同的蛋白质按所带电荷的强弱逐一被洗脱下来，达到分离的目的。
离子交换剂是由基质、电荷基团（或功能基团）和反离子构成。
基质 电荷基团 反离子 电荷基团反离子电荷基团反离子基质基质—＋—＋＋可逆交换可逆交换＋＋溶液中的离子（交联纤维素、交联葡聚糖、交联琼脂糖)— ——阳离阴离子交专业： 农业资源与环境姓名： 李佳怡学号： 3130100246 日期： 2015.5.19地点： 生物实验中心310 装订线由于蔗糖酶的pI偏酸性,所以在pH7.3 缓冲液的环境中，粗分离纯化样品蔗糖酶带负电荷，因此我们用阴离子交换剂达到分离蔗糖酶的目的。
2、酶活力检测(定性检测）蔗糖酶（β-D-呋喃型果糖苷-果糖水解酶EC 3.2.1.26），能催化非还原性双糖（蔗糖）裂解，将蔗糖水解为等量的葡萄糖和果糖。
本实验采用3.5－二硝基水酸法，其原理是3.5－二硝基水酸与还原糖共热（100℃）被还原成棕红色的氨基化合物，在一定围还原糖的量和反应液的颜色深度成正比，由此来确定并收集蔗糖酶纯化样品。
. . . . 实验报告课程名称： 生物化学实验（丙） 指导老师： 方祥年 成绩：实验名称： 离子交换柱层析分离纯化蔗糖酶 同组学生： 金宇尊、鲍其琛 一、实验目的和要求（必填） 二、实验容和原理（必填） 三、实验材料与试剂（必填） 四、实验器材与仪器（必填） 五、操作方法和实验步骤（必填） 六、实验数据记录和处理 七、实验结果与分析（必填） 八、讨论、心得一、实验目的和要求1、学习离子交换层析的基本原理；2、学习离子交换层析分离蛋白质的基本方法和技术；3、学习蔗糖酶活性检测的基本原理和方法。
二、实验容和原理（1）实验原理 1、离子交换层析：以离子交换剂为固定相，液体为流动相进行。
离子交换剂与水溶液中离子或离子化合物的反应主要以离子交换方式进行，或者借助离子交换剂上电荷基团对溶液中离子或离子化合物的吸附作用进行。
这些过程都是可逆的。
在某一pH 值的溶液中，不同的蛋白质所带的电荷存在差异，因而与离子交换剂的亲和力就有区别。
当洗脱液的pH 改变或者盐的离子强度逐渐提高时，使某一种蛋白质的电荷被中和，与离子交换剂的亲和力降低，不同的蛋白质按所带电荷的强弱逐一被洗脱下来，达到分离的目的。
离子交换剂是由基质、电荷基团（或功能基团）和反离子构成。
基质 电荷基团 反离子 电荷基团反离子电荷基团反离子基质基质—＋—＋＋可逆交换可逆交换＋＋溶液中的离子（交联纤维素、交联葡聚糖、交联琼脂糖)— ——阳离子交阴离子交换剂专业： 农业资源与环境姓名： 李佳怡学号： 3130100246 日期： 2015.5.19地点： 生物实验中心310装订线由于蔗糖酶的pI偏酸性,所以在pH7.3 缓冲液的环境中，粗分离纯化样品蔗糖酶带负电荷，因此我们用阴离子交换剂达到分离蔗糖酶的目的。
2、酶活力检测(定性检测）蔗糖酶（β-D-呋喃型果糖苷-果糖水解酶EC 3.2.1.26），能催化非还原性双糖（蔗糖）裂解，将蔗糖水解为等量的葡萄糖和果糖。
浙江大学生化实验报告1.引言1.1 概述概述部分：本实验旨在对浙江大学生化实验进行系统的记录与分析，通过实验结果展现实验的过程和成果，并对实验的意义和未来的发展进行展望。
该实验采用了一系列生化实验方法，旨在研究生物体内生化反应的机制和规律，为生物医学领域的研究和发展提供有力支持。
通过对实验背景、方法和结果的详细描述，本报告旨在为读者提供全面的实验信息，让读者更加深入地了解实验的过程和意义。
1.2 文章结构文章结构部分的内容应该包括对整篇文章的章节安排和内容概要的介绍。
可以简要描述每个章节的主题和重点，以便读者可以更好地理解整篇文章的结构和内容安排。
例如："文章结构部分将主要介绍本篇文章的整体结构和各个章节的主要内容，以便读者可以更好地理解全文的脉络。
引言部分将从概述、文章结构和目的三个方面介绍本篇文章的主题和写作目的。
正文部分将包括实验背景、实验方法和实验结果三个部分，分别介绍了实验的背景知识、实验的具体操作步骤以及实验结果的分析和讨论。
结论部分将对实验结果进行深入分析和总结，并展望未来可能的研究方向和发展趋势。
通过整体的文章结构，读者将更清晰地了解本篇文章的内容安排和逻辑脉络。
"1.3 目的：本次实验旨在探究特定生化反应的机理和影响因素，通过实验的进行，旨在深入了解该生化反应的特性和规律，从而为相关领域的研究和应用提供理论和实验基础。
同时，通过实验的设计和操作，培养学生的实验操作能力和科学思维，提高他们的实践能力和动手能力。
通过实验结果的分析和总结，使学生们对生化实验有一个更深入的理解和认识，为未来的学习和研究打下坚实的基础。
2.正文2.1 实验背景本次实验旨在探究生化领域相关的实验内容，通过对生物组织、酶活性、代谢途径等方面进行深入研究，加深对生化学原理的理解和掌握。
生化实验既是理论知识的延伸，也是对知识的实践检验，对于培养学生的实验操作能力和科学研究能力具有重要意义。
实验背景包括对常见的生化实验技术和实验原理的介绍，例如酶活性检测方法、代谢途径的测定方法等。
实验报告
课程名称： 生物化学实验（丙） 指导老师： 方祥年 成绩：__________________
实验名称： 蔗糖酶的提取 同组学生姓名： 金宇尊、鲍其琛
一、实验目的和要求（必填） 二、实验内容和原理（必填）
三、实验材料与试剂（必填） 四、实验器材与仪器（必填）
五、操作方法和实验步骤（必填） 六、实验数据记录和处理
七、实验结果与分析（必填） 八、讨论、心得
一、实验目的和要求
1、学习掌握蔗糖酶的提取、分离纯化的基本原理和方法；
2、巩固理论知识，学会学以致用并发现新问题。
二、实验内容和原理
1、实验内容：
蔗糖酶的提取、分离纯化
2、实验原理：
①酵母细胞破碎
细胞破碎的常用方法
液体剪切法固体剪切法压力和研磨
物理法、化学渗透法、酶溶
本实验采用研磨的方法。
通过固体剪切法（研磨）将酵母细胞破碎，把蔗糖酶从酵母细胞中提取出来。
②蔗糖酶的初步分离纯化
蛋白酶常用的初步分离纯化方法有：盐析、选择性变性、有机溶剂沉淀等。
本实验采用选择性变性（加热）、有机溶剂（乙醇）沉淀等方法对蔗糖酶进行初步的提纯以及收集样品。
由于一般酶蛋白在常温下分离纯化过程中易变性失活，为了能获得尽可能高的产率和纯度，在提纯
操作中要始终保持酶的活性，如在低温下操作等，这样才能得到较好地分离提纯效果。
三、实验材料与试剂
1、实验材料
市售干酵母粉10g/组(3～4人）
2、实验试剂
石英砂，95%乙醇(-20℃），20mmol/L Tris-HCl pH7.3 缓冲液。
四、实验器材与仪器
电子天平（称量干酵母粉）；研砵（每组一套）；50ml高速离心管（4支/组、4孔50ml离心管架一个/组）；托盘天平（离心管平衡用）；高速冷冻离心机；恒温水浴箱（50℃）；量筒（50ml）、微量移液枪（1000ul)及枪头或移液管（1ml)、玻棒、滴管等;1.5ml离心管（留样品Ⅰ、Ⅱ用）及离心管架；制冰机；－20℃冰箱。
五、操作方法和实验步骤
1、酵母细胞破粹（干磨法）
①称量：称取市售干酵母粉10g+约3-5 g石英砂放入研钵
②研磨(干磨)：至尽可能成细粉末状（约15min）
③加液+研磨：量取总体积40 ml的20mmol/L Tris-HCl pH7.3 缓冲液，分2次加研磨10min，
使呈糊状液体；
④离心：将糊状液体转移到2支50ml离心管中，两支离心管平衡后(托盘天平上)，离心10min
（条件：4℃、12000r/min）
⑤收集+测量：收集上清液并量出体积V1（样品I），另留1ml上清液（样品I ）放置－20℃冰箱保存用于蔗糖酶蛋白含量测定、蔗糖酶活力测定和SDS-PAGE分析
2、热处理
①水浴热处理：将上步抽提液（样品I），迅速放入50℃恒温水浴，保温30min，
并每隔5min用玻璃棒温和搅拌提取液。
②冰浴冷却：保温后迅速用冰浴冷却5min
③离心：将热处理后的样品I转移至两支50ml离心管中，平衡后，离心10min。
（条件：4℃，12000r/min）
④收集+测量：收集上清液并量出体积V2（样品Ⅱ），另留1ml上清液（样品Ⅱ）放置－20℃冰箱保存（用于蔗糖酶蛋白含量测定、测定蔗糖酶活力和SDS-PAGE分析。
3、有机溶剂（乙醇）沉淀
①冰浴：将热处理后的上清液加入相同体积的－20℃的95%乙醇，冰浴中温和搅动混匀，
放置约20min；
②离心：转移至两支50 ml离心管中，平衡后，离心10min；
（条件：4℃，12000r/min）
③收集保存：弃去上清液，用7 mL的20mmol/L Tris-HCl pH7.3 缓冲液溶解沉淀
留出1mL溶液，并将余下溶液转移入7 mL塑料离心管，－20℃冰箱保存。
（用于实验2离子交换柱层析分离纯化蔗糖酶）
六、实验数据记录和处理
1、实验数据记录
石英砂：5.00g；
干酵母粉：10.00g；
Tris-HCl提取离心后上清液体积（样品Ⅰ）V1：31.5mL；
样品Ⅰ热处理离心后上层清液体积（样品Ⅱ）V2：27.0mL。
2、实验现象：
研磨过程：干酵母颜色变浅，散发出一股难闻的气味；
第一次离心后：上清液澄清颜色土黄色；下部沉淀分层，上层酵母细胞碎片等呈棕褐色，下层石英砂呈白色；
第二次离心后：上清液更加澄清橙黄色；沉淀为米白色，较第一次变浅；
第三次离心前：上清液柠檬黄，沉淀为米白色。
七、实验结果分析讨论
1、实验结果：
①经过研磨破碎的酵母提取液样品Ⅰ（1mL）；
②将样品Ⅰ经过热处理的样品Ⅱ（1mL）；
③经过选择性变形和有机溶剂沉淀处理过的样品Ⅱ，用 Tris-HCl pH7.3 缓冲液溶解保存在一只7mL 和一只1mL的离心管中（样品Ⅲ、Ⅳ）。
注意：所有收集样品均需在管壁外用油性记号笔做好标记，先放在一次性PE手套中，并放入-20 ℃冰箱中保存，用于后续实验。
2、结果分析：
①最后得到的两管沉淀，其中一管为米白色沉淀，另一管夹杂部分黄色沉淀，疑为杂质蛋白,或是由于在加入乙醇时体积比例没有调整好而造成，具体结果有待进一步检测。
②误差分析：
a：称量天平精确度不高，可能会对石英砂和干酵母的称量结果造成误差；
b:在研磨过程中，有少部分粉末洒出，存在操作误差；
c：在平衡过程中，为了保持平衡用胶头滴管在两支离心管之间进行调节，有部分溶液残留在胶头滴管里。
可以将所有的材料放进一支离心管，另外一支离心管加入水，通过改变水的含量达到平衡的效果，以此来减少误差。
八、讨论、心得
1、实验原理探析
①石英砂的作用：加入石英砂是为了在研磨过程中增大摩擦力，将酵母细胞充分研磨破裂，提取蔗糖酶；
②高温水浴：利用了蔗糖酶的耐热性（最受温度为45-50℃），可以在50℃的水浴热处理下将不耐热的杂蛋白去除；
③有机沉淀：乙醇提供疏水的环境，破除蛋白质外层的水膜，从而使提取的蔗糖酶聚集在一起沉淀分离；
④冰浴作用：使分子运动速度下降，再加以搅拌使之快速沉降。
⑤低温操作：防止操作过程温度升高引起有效成分变性。
2、思考题：本实验在从干酵母中提取和分离纯化蔗糖酶的过程中具体运用了哪些方法？你认为还有哪些方法可以运用？说说你的设想。
答：①在本次试验中采用机械法中固体剪切法的研磨法；分离纯化过程用了选择性变性（加热）、有机溶剂（乙醇）沉淀的方法，后通过离心达到真正分离纯化的目的。
②其他常用细胞破碎方法：液体剪切法中的超声波法、机械搅拌法、高压匀浆法以及固体剪切法中的压力法和非机械法中的溶胀和自溶、化学渗透和生物酶降解等。
由于蔗糖酶存在于细胞内部，所以需要将细胞破碎以获取蔗糖酶。
另外，浓缩方法有沉淀法、吸附法、超过滤法、透析法、减压蒸馏法、冰冻干燥法等。
不同的方法都各有优势和缺点，我们要根据不同的实验条件和要求、目的来选择较为适宜的方法。
（《生物化学技术原理及应用》赵永芳第四版）
3、实验感想
第一次做生化实验，感觉还是很新鲜。
在实验开始研磨的过程中，就有点被一股难闻的味道恶心到了。
之后在实验具体操作过程中，发现实验本身比较简单，所以即使第一次实验没有预习，还是能够很快的理解实验的内容。
但是之后的实验应该还是比较复杂的，所以需要我们好好预习，并进行一定的思考，以便在下次实验课上能充分的将理论课上所学知识应用到实验中去。
