浙江大学生物化学丙实验报告1

实验报告课程名称： 生物化学实验（丙） 指导老师： 成绩： 实验名称： 氨基移换反应及其产物的鉴定 实验类型： 定量实验 同组学生姓名： 一、实验目的和要求（必填） 二、实验内容和原理（必填） 三、主要仪器设备（必填） 四、操作方法和实验步骤 五、实验数据记录和处理 六、实验结果与分析（必填） 七、讨论、心得一、 实验目的和要求1、学习鉴定氨基移换反应的简便方法及其原理；2、学习纸层析的原理和操作技术；二、 实验内容和原理1、氨基移换反应：氨基移换反应是在氨基移换酶（转氨酶)的催化下，氨基酸的α-氨基和α-酮酸的α-酮基之间发生的互换反应。

任何一种氨基酸进行转氨作用时都由其专一的转氨酶催化，转氨酶的最适pH 接近7.4，在各种转氨酶中，谷丙转氨酶（glutamic pyruvic transaminase, GPT ）和谷草转氨酶（glutamic oxalacetic transaminase,GOT ）的活性最强。

转氨作用主要发生在肝脏中。

转氨酶广泛存在于机体的各种组织中。

在肝、心、肾等组织中谷丙转氨酶（GPT ）、谷草转氨酶（GOT ）活性较高。

2、GPT 催化下的转氨作用装订线L －谷氨酸脱氢酶在体内特别是在肝细胞内含量丰富，活性高，催化L －谷氨酸氧化脱－NH 2，加碘乙酸能抑制其活性，从而可以保护氨基移换反应的产物L －谷氨酸。

3、纸层析原理本实验用纸层析法，检查由丙氨酸和α—酮戊二酸在肝细胞谷丙转氨酶（GPT) 的作用下所生成的谷氨酸，证明组织内的氨基移换作用。

滤纸层析是以滤纸作为惰性支持物的分配层析，是利用不同物质在两个互不相溶的溶剂中分配情况（溶解度）的不同来分离混合物的一种技术。

层析溶剂是由有机溶剂和水组成。

由于滤纸纤维上羟基具有亲水性，因此吸附一层水作为固定相，而通常把有机溶剂作为流动相。

在进行分离时，由于被分离物质的组分在两相中的分布不同，随着流动相的移动，物质将在两相间进行连续的、动态的不断分配，从而造成不同组分移动的速度也不相同。

实验报告课程名称： 生物化学实验（丙） 指导老师： 方祥年 成绩：__________________ 实验名称： 蔗糖酶蛋白含量的测定、蔗糖酶活力测定及其分离纯化效果的评价同组学生姓名： 金宇尊、鲍其琛、袁平、朱耀仁、蔡玉林 一、实验目的和要求（必填） 二、实验内容和原理（必填）三、实验材料与试剂（必填） 四、实验器材与仪器（必填） 五、操作方法和实验步骤（必填） 六、实验数据记录和处理 七、实验结果与分析（必填） 八、讨论、心得一、实验目的和要求1、蔗糖酶蛋白含量的测定——Folin-酚法①学习Folin-酚法测定蛋白质含量的原理和方法；②掌握分光光度法制作标准曲线，准确测定未知样品的蛋白质含量； ③掌握分光光度计的使用方法。

2、蔗糖酶活力测定——3.5－二硝基水杨酸法 ①掌握酶活力测定的基本原理和方法； ②学习酶的比活力的计算。

二、实验内容和原理1、Folin-酚测定法Folin-酚试剂是由甲、乙两种试剂组成的。

甲试剂由碳酸钠、氢氧化钠、硫酸铜和酒石酸钾钠组成，在碱性条件下蛋白质中的肽键与酒石酸钾钠铜盐起作用，生成紫红色络合物；乙试剂是由磷钼酸和磷钨酸、硫酸、溴等组成，在碱性条件下，铜-蛋白质络合物以及蛋白质中的酪氨酸残基（酚基）和色氨酸还原磷钼酸-磷钨酸试剂（乙试剂）产生深蓝色（钼蓝和钨蓝的混合物），其色泽深浅与蛋白质含量成正比。

可用500nm 波长比色测定，适于测定蛋白质含量0.05～0.5g/L 。

优点： 简单、迅速、灵敏度高；反应较稳定。

缺点： 该反应受多种因素的干扰。

2、蔗糖酶活力测定蔗糖酶（β-D-呋喃型果糖苷-果糖水解酶EC 3.2.1.26），是一种水解酶。

它能催化非还原性双糖（蔗糖）的1,2－糖苷键裂解，将蔗糖水解为等量的葡萄糖和果糖（还原糖）。

因此，每水解1mol 蔗糖，就能生成2mol 还原糖。

还原糖的测定有多种方法，例如：纳尔逊－索模吉试剂比色法，斐林试剂法等。

一、实训背景随着生物科学的快速发展，生物化学作为一门重要的基础学科，在生物技术、医药、食品等领域具有广泛的应用。

为了提高我们的实践能力，培养我们的综合素质，我们学院组织了一次生物化学实训活动。

本次实训旨在让我们深入了解生物化学的基本理论、实验技能和实际应用，提高我们的科研素养。

二、实训目的1. 熟悉生物化学的基本理论，了解生物化学在生物科学领域的应用。

2. 掌握生物化学实验的基本操作，提高实验技能。

3. 培养团队合作精神，提高沟通与协作能力。

4. 增强科研素养，为今后从事科研工作打下基础。

三、实训内容1. 生物化学基本理论实训期间，我们学习了生物化学的基本理论，包括生物大分子的组成、结构、功能及其相互作用。

通过学习，我们对生物化学有了更深入的了解，为后续实验操作奠定了理论基础。

2. 生物化学实验（1）蛋白质的分离与鉴定本次实训中，我们学习了蛋白质的分离与鉴定实验。

通过实验，我们掌握了SDS-PAGE电泳、考马斯亮蓝G250染色、Western blot等蛋白质分离与鉴定技术。

（2）核酸的提取与鉴定我们学习了核酸的提取与鉴定实验，掌握了CTAB法提取DNA、琼脂糖凝胶电泳、EB染色等核酸提取与鉴定技术。

（3）酶活性测定在酶活性测定实验中，我们学习了酶的催化反应原理、底物与产物检测方法等，掌握了酶活性测定的实验操作。

3. 生物化学应用实训期间，我们还学习了生物化学在生物技术、医药、食品等领域的应用。

通过学习，我们了解到生物化学在实际生产、科研中的重要作用。

四、实训过程1. 实训准备在实训开始前，我们进行了充分的准备，包括查阅相关资料、熟悉实验操作流程、了解实验原理等。

2. 实验操作在实验过程中，我们严格按照实验操作规程进行操作，注意实验安全，确保实验顺利进行。

3. 实验数据记录与分析在实验过程中，我们认真记录实验数据，对实验结果进行分析，总结实验现象。

4. 实训总结实训结束后，我们进行了总结，对实验中遇到的问题进行反思，并提出改进措施。

. .. . 实验报告课程名称： 生物化学实验（丙） 指导老师： 方祥年 实验名称： 离子交换柱层析分离纯化蔗糖酶 同组学生： 金宇尊、鲍其琛 一、实验目的和要求（必填） 二、实验容和原理（必填） 三、实验材料与试剂（必填） 四、实验器材与仪器（必填） 五、操作方法和实验步骤（必填） 六、实验数据记录和处理 七、实验结果与分析（必填） 八、讨论、心得一、实验目的和要求1、学习离子交换层析的基本原理；2、学习离子交换层析分离蛋白质的基本方法和技术；3、学习蔗糖酶活性检测的基本原理和方法。

二、实验容和原理（1）实验原理 1、离子交换层析：以离子交换剂为固定相，液体为流动相进行。

离子交换剂与水溶液中离子或离子化合物的反应主要以离子交换方式进行，或者借助离子交换剂上电荷基团对溶液中离子或离子化合物的吸附作用进行。

这些过程都是可逆的。

在某一pH 值的溶液中，不同的蛋白质所带的电荷存在差异，因而与离子交换剂的亲和力就有区别。

当洗脱液的pH 改变或者盐的离子强度逐渐提高时，使某一种蛋白质的电荷被中和，与离子交换剂的亲和力降低，不同的蛋白质按所带电荷的强弱逐一被洗脱下来，达到分离的目的。

离子交换剂是由基质、电荷基团（或功能基团）和反离子构成。

基质 电荷基团 反离子 电荷基团反离子电荷基团反离子基质基质—＋—＋＋可逆交换可逆交换＋＋溶液中的离子（交联纤维素、交联葡聚糖、交联琼脂糖)— ——阳离阴离子交专业： 农业资源与环境姓名： 李佳怡学号： 3130100246 日期： 2015.5.19地点： 生物实验中心310 装订线由于蔗糖酶的pI偏酸性,所以在pH7.3 缓冲液的环境中，粗分离纯化样品蔗糖酶带负电荷，因此我们用阴离子交换剂达到分离蔗糖酶的目的。

2、酶活力检测(定性检测）蔗糖酶（β-D-呋喃型果糖苷-果糖水解酶EC 3.2.1.26），能催化非还原性双糖（蔗糖）裂解，将蔗糖水解为等量的葡萄糖和果糖。

本实验采用3.5－二硝基水酸法，其原理是3.5－二硝基水酸与还原糖共热（100℃）被还原成棕红色的氨基化合物，在一定围还原糖的量和反应液的颜色深度成正比，由此来确定并收集蔗糖酶纯化样品。

. . . . 实验报告课程名称： 生物化学实验（丙） 指导老师： 方祥年 成绩：实验名称： 离子交换柱层析分离纯化蔗糖酶 同组学生： 金宇尊、鲍其琛 一、实验目的和要求（必填） 二、实验容和原理（必填） 三、实验材料与试剂（必填） 四、实验器材与仪器（必填） 五、操作方法和实验步骤（必填） 六、实验数据记录和处理 七、实验结果与分析（必填） 八、讨论、心得一、实验目的和要求1、学习离子交换层析的基本原理；2、学习离子交换层析分离蛋白质的基本方法和技术；3、学习蔗糖酶活性检测的基本原理和方法。

二、实验容和原理（1）实验原理 1、离子交换层析：以离子交换剂为固定相，液体为流动相进行。

离子交换剂与水溶液中离子或离子化合物的反应主要以离子交换方式进行，或者借助离子交换剂上电荷基团对溶液中离子或离子化合物的吸附作用进行。

这些过程都是可逆的。

在某一pH 值的溶液中，不同的蛋白质所带的电荷存在差异，因而与离子交换剂的亲和力就有区别。

当洗脱液的pH 改变或者盐的离子强度逐渐提高时，使某一种蛋白质的电荷被中和，与离子交换剂的亲和力降低，不同的蛋白质按所带电荷的强弱逐一被洗脱下来，达到分离的目的。

离子交换剂是由基质、电荷基团（或功能基团）和反离子构成。

基质 电荷基团 反离子 电荷基团反离子电荷基团反离子基质基质—＋—＋＋可逆交换可逆交换＋＋溶液中的离子（交联纤维素、交联葡聚糖、交联琼脂糖)— ——阳离子交阴离子交换剂专业： 农业资源与环境姓名： 李佳怡学号： 3130100246 日期： 2015.5.19地点： 生物实验中心310装订线由于蔗糖酶的pI偏酸性,所以在pH7.3 缓冲液的环境中，粗分离纯化样品蔗糖酶带负电荷，因此我们用阴离子交换剂达到分离蔗糖酶的目的。

2、酶活力检测(定性检测）蔗糖酶（β-D-呋喃型果糖苷-果糖水解酶EC 3.2.1.26），能催化非还原性双糖（蔗糖）裂解，将蔗糖水解为等量的葡萄糖和果糖。

浙江大学生化实验报告1.引言1.1 概述概述部分：本实验旨在对浙江大学生化实验进行系统的记录与分析，通过实验结果展现实验的过程和成果，并对实验的意义和未来的发展进行展望。

该实验采用了一系列生化实验方法，旨在研究生物体内生化反应的机制和规律，为生物医学领域的研究和发展提供有力支持。

通过对实验背景、方法和结果的详细描述，本报告旨在为读者提供全面的实验信息，让读者更加深入地了解实验的过程和意义。

1.2 文章结构文章结构部分的内容应该包括对整篇文章的章节安排和内容概要的介绍。

可以简要描述每个章节的主题和重点，以便读者可以更好地理解整篇文章的结构和内容安排。

例如："文章结构部分将主要介绍本篇文章的整体结构和各个章节的主要内容，以便读者可以更好地理解全文的脉络。

引言部分将从概述、文章结构和目的三个方面介绍本篇文章的主题和写作目的。

正文部分将包括实验背景、实验方法和实验结果三个部分，分别介绍了实验的背景知识、实验的具体操作步骤以及实验结果的分析和讨论。

结论部分将对实验结果进行深入分析和总结，并展望未来可能的研究方向和发展趋势。

通过整体的文章结构，读者将更清晰地了解本篇文章的内容安排和逻辑脉络。

"1.3 目的：本次实验旨在探究特定生化反应的机理和影响因素，通过实验的进行，旨在深入了解该生化反应的特性和规律，从而为相关领域的研究和应用提供理论和实验基础。

同时，通过实验的设计和操作，培养学生的实验操作能力和科学思维，提高他们的实践能力和动手能力。

通过实验结果的分析和总结，使学生们对生化实验有一个更深入的理解和认识，为未来的学习和研究打下坚实的基础。

2.正文2.1 实验背景本次实验旨在探究生化领域相关的实验内容，通过对生物组织、酶活性、代谢途径等方面进行深入研究，加深对生化学原理的理解和掌握。

生化实验既是理论知识的延伸，也是对知识的实践检验，对于培养学生的实验操作能力和科学研究能力具有重要意义。

实验背景包括对常见的生化实验技术和实验原理的介绍，例如酶活性检测方法、代谢途径的测定方法等。

实验名称：蛋白质等电点测定、血糖浓度测定、酶的作用及竞争性抑制、谷丙转氨酶的测定实验日期：2023年10月25日实验地点：生物化学实验室一、实验目的1. 学习蛋白质等电点的测定方法，了解蛋白质在不同pH值下的溶解度变化。

2. 掌握血糖浓度测定的原理和方法，分析血糖水平对生物体的影响。

3. 研究酶的作用及其竞争性抑制现象，加深对酶活性调控机制的理解。

4. 测定谷丙转氨酶（ALT）活性，探讨ALT在肝脏疾病诊断中的应用。

二、实验原理1. 蛋白质等电点测定：蛋白质在特定pH值下带有正电荷或负电荷，此时称为等电点。

通过测定蛋白质在等电点时的溶解度，可以确定其等电点位置。

2. 血糖浓度测定：血糖浓度是反映机体能量代谢状况的重要指标。

常用的血糖测定方法包括葡萄糖氧化酶法、己糖激酶法等。

本实验采用葡萄糖氧化酶法测定血糖浓度。

3. 酶的作用及竞争性抑制：酶是生物体内重要的催化剂，能够加速化学反应。

竞争性抑制是指抑制剂的化学结构与底物结构相似，与酶结合形成复合物，从而降低酶的活性。

4. 谷丙转氨酶（ALT）测定：ALT主要存在于肝脏细胞内，其活性在肝脏疾病时升高。

本实验采用比色法测定ALT活性。

三、实验材料1. 蛋白质等电点测定：牛血清蛋白、不同pH值的缓冲液、电导率仪、pH计。

2. 血糖浓度测定：葡萄糖标准品、葡萄糖氧化酶试剂盒、蒸馏水、微量滴定板。

3. 酶的作用及竞争性抑制：过氧化氢酶、竞争性抑制剂、底物溶液。

4. 谷丙转氨酶（ALT）测定：ALT标准品、ALT试剂盒、蒸馏水、微量滴定板。

四、实验步骤1. 蛋白质等电点测定：- 配制不同pH值的缓冲液。

- 将牛血清蛋白溶液分别加入不同pH值的缓冲液中，测定其溶解度。

- 记录不同pH值下牛血清蛋白的溶解度。

- 分析数据，确定牛血清蛋白的等电点。

2. 血糖浓度测定：- 按照试剂盒说明书配制工作液。

- 将待测样品加入工作液中，加入葡萄糖氧化酶试剂。

- 在微量滴定板上加入显色剂，测定吸光度。

. . . . 实验报告课程名称： 生物化学实验（丙） 指导老师： 方祥年 成绩：实验名称： 质粒DNA 的微量制备及电泳检测 同组学生： 金宇尊、鲍其琛一、实验目的和要求（必填） 二、实验容和原理（必填）三、实验材料与试剂（必填） 四、实验器材与仪器（必填）五、操作方法和实验步骤（必填） 六、实验数据记录和处理七、实验结果与分析（必填） 八、讨论、心得 一、实验目的和要求1、学习并掌握质粒DNA 的提取原理和方法；2、了解琼脂糖凝胶电泳检测核酸的原理和操作；3、学习并掌握对电泳检测结果的初步分析。

二、实验容和原理 1、实验容①质粒DNA 的提取②DNA 的琼脂糖凝胶电泳鉴定2、实验原理①质粒：质粒是一种染色体（核质体）外的寄生性的自主复制子，存在于细菌等细胞中，为双链闭环的DNA分子，大小在1-200kb 之间，具有自主复制和转录功能, 能表达例如抗性、菌毒素等细胞非必需的遗传信息，但其复制和转录必须要利用依赖宿主细胞（细菌）基因组DNA 编码的一些酶和蛋白质。

质粒能够自发的或人为的在细胞间转移，因此是基因工程技术中将外源基因导入受体细胞的重要载体。

②从细菌细胞中抽提质粒DNA 的步骤：a 细菌培养使质粒大量扩增；b 收集和裂解细胞,并去掉细菌碎片和核质体DNA ；c 进一步除去蛋白、脂类、RNA 等杂质，分离和纯化质粒DNA 。

③碱裂解法来分离纯化质粒DNA ：在EDTA 存在下，经过SDS 处理使细胞膜裂解，从而使菌体充分裂解，利用在碱性条件下（NaOH ），使核质体DNA 与质粒DNA 的变性；加入乙酸钾，在中性条件下，核质体DNA 与质粒DNA 又存在复性的差异，质粒DNA 很快得以复性，而细菌核质体DNA 分子难以复性，核质体DNA 会缠绕附着在细胞膜专业： 农业资源与环境姓名： 李佳怡学号： 3130100246 日期： 2015.6.9地点： 生物实验中心310 装订线碎片上通过离心被沉淀下来，质粒DNA则留在上清液；上清液中还含有可溶性蛋白质、核糖核蛋白和少量核质体DNA以及脂质类杂质等，可通过碱性酚-氯仿-异戊醇混合液的抽提去除；含有质粒DNA的上清液用无水乙醇或异戊醇沉淀，这是由于当加入无水乙醇时，其会夺去核酸周围的水分子，使其失水而易于聚合。

1 / 1 实验报告 课程名称： 指导老师： 成绩：
实验名称： 实验类型： 同组学生姓名：
一、实验目地和要求（必填） 三、主要仪器设备（必填） 五、实验数据记录和处理 七、讨论、心得
二、实验内容和原理（必填）
四、操作方法和实验步骤
六、实验结果与分析（必填）
一、实验目地和要求
二、实验内容和原理
三、主要仪器设备
实验名称： 姓名：
学号： 文档收集自网络，仅用于个人学习四、操作方法和实验步骤
实验名称： 姓名：
学号： 文档收集自网络，仅用于个人学习实验名称： 姓名：
学号： 文档收集自网络，仅用于个人学习四、操作方法和实验步骤
实验名称： 姓名：
学号： 文档收集自网络，仅用于个人学习四、操作方法和实验步骤。

高校生物化学实验报告范文及模板实验目的：研究酶在体内消化食物的作用及其适宜环境。

实验原理：酶是一种生物催化剂，它可以降低活化能，加速生物体内的化学反应。

本实验以淀粉分解酶为研究对象，通过测定不同温度和pH值对淀粉分解的影响，探究酶的最适环境条件。

实验材料与仪器：1. 淀粉溶液2. 淀粉分解酶溶液3. 碘液4. 不同温度的水浴器5. pH值测定仪器6. 试管实验步骤：1. 准备不同温度的水浴器，分别设定为30℃、40℃、50℃、60℃和70℃。

2. 准备含有不同pH值的溶液，分别调整为pH4、pH6、pH8、pH10和pH12。

3. 取5个试管，分别加入适量的淀粉溶液。

4. 将试管1放入30℃的水浴器中，试管2放入40℃的水浴器中，以此类推，每个水浴器只放一个试管。

5. 在试管中加入适量的淀粉分解酶溶液，同时启动计时器，计时10分钟。

6. 在10分钟后，取出试管，加入适量的碘液进行观察。

根据颜色的变化，判断淀粉是否分解。

7. 重复步骤5和6，记录并比较不同温度条件下淀粉的分解情况。

8. 重复步骤5和6，记录并比较不同pH值条件下淀粉的分解情况。

实验结果：根据实验观察和记录，得到以下结果：1. 不同温度对淀粉分解的影响：- 在低温（30℃和40℃）条件下，淀粉几乎未被分解，添加碘液后仍呈现蓝色。

- 在适中温度（50℃和60℃）条件下，淀粉有部分被分解，添加碘液后呈现棕色至深棕色。

- 在高温（70℃）条件下，淀粉完全被分解，添加碘液后呈现黄色至无色。

2. 不同pH值对淀粉分解的影响：- 在酸性条件（pH4）下，淀粉几乎未被分解，添加碘液后仍呈现蓝色。

- 在中性条件（pH6和pH8）下，淀粉有部分被分解，添加碘液后呈现棕色至深棕色。

- 在碱性条件（pH10和pH12）下，淀粉完全被分解，添加碘液后呈现黄色至无色。

实验讨论：根据实验结果，可以得出以下结论：1. 酶在体内消化食物的作用受温度的影响。

在适宜的温度范围内（50℃至60℃），酶活性最高，能够有效地分解淀粉。

实验报告课程名称： 生物化学实验（丙） 指导老师： 方祥年 成绩：__________________实验名称：蔗糖酶分离纯化产物的SDS －PAGE 检测分析及蛋白质相对分子质量测定 同组学生姓名： 金宇尊、鲍其琛 一、实验目的和要求（必填） 二、实验内容和原理（必填） 三、实验材料与试剂（必填） 四、实验器材与仪器（必填） 五、操作方法和实验步骤（必填） 六、实验数据记录和处理 七、实验结果与分析（必填） 八、讨论、心得一、实验目的和要求1、学习SDS －聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE)的基本原理和操作方法2、蔗糖酶分离纯化产物的SDS －PAGE 检测分析3、学习测定蛋白质相对分子质量(Mr)的方法二、实验内容和原理（1）实验内容1、SDS －PAGE 凝胶制作；2、蔗糖酶分离纯化产物的SDS －PAGE 电泳分离；3、洗脱测定并计算相对分子质量。

（2）实验原理 1、电泳是带电颗粒在电场作用下，作定向运动即向着与其电荷相反的电极移动的现象。

2、电泳法分离、检测蛋白质混合样品主要是根据各蛋白质组分的分子大小和形状以及所带净电荷多少等因素所产生的电泳迁移率的差别。

3、区带电泳是样品物质在一惰性支持物上进行电泳,因电泳后，样品不同组分形成带状区间，故称区带电泳。

4、聚丙烯酰胺凝胶（PAG)由丙烯酰胺和交联试剂N,N ’-甲叉双丙烯酰胺(Bis)在有催化剂（如过硫酸铵或核黄素）和增速剂（如N,N,N ’,N ’-四甲基乙二胺，TEMED ）的情况下聚合而成的。

5、聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)是在恒定的、非解离的缓冲系统中来分离蛋白质，这主要是由蛋白质样品所带的电荷和分子质量的差异性进行分离；在电泳过程中仍保持蛋白质的天然构象、亚基之间的相互作用及其生物活性。

6、聚丙烯酰胺凝胶电泳可分为⑴连续系统凝胶缓冲液的pH值及凝胶浓度不变。

该电泳系统具有电荷效应、分子筛效应；⑵不连续系统凝胶缓冲离子成分、pH值、凝胶浓度、电位梯度不连续，由浓缩胶和分离胶组成。

实验名称：蔗糖酶蛋白含量的测定、蔗糖酶活力测定及其分离纯化效果的评价一、实验目的和要求1. 学习Folin-酚法测定蛋白质含量的原理和方法；2. 掌握分光光度法制作标准曲线，准确测定未知样品的蛋白质含量；3. 掌握分光光度计的使用方法；4. 掌握酶活力测定的基本原理和方法；5. 学习酶的比活力计算；6. 了解蔗糖酶分离纯化的原理和操作方法。

二、实验内容和原理1. Folin-酚测定法Folin-酚试剂由甲、乙两种试剂组成。

甲试剂由碳酸钠、氢氧化钠、硫酸铜和酒石酸钾钠组成，在碱性条件下蛋白质中的肽键与酒石酸钾钠铜盐起作用，生成紫红色络合物；乙试剂由磷钼酸和磷钨酸、硫酸、溴等组成，在碱性条件下，铜-蛋白质络合物以及蛋白质中的酪氨酸残基（酚基）和色氨酸还原磷钼酸-磷钨酸试剂（乙试剂）产生深蓝色（钼蓝和钨蓝）。

2. 蔗糖酶活力测定3.5二硝基水杨酸法（DNS法）是测定酶活力的一种常用方法。

DNS试剂在碱性条件下与还原糖反应生成橙黄色物质，其颜色深浅与还原糖的浓度成正比。

通过测定DNS反应液的颜色深浅，可以计算出酶活力。

3. 蔗糖酶分离纯化蔗糖酶分离纯化常用的方法有：凝胶过滤、离子交换、亲和层析等。

本实验采用凝胶过滤法进行蔗糖酶的分离纯化。

三、实验材料与试剂1. 实验材料：蔗糖酶、牛血清白蛋白、标准蛋白质溶液、蔗糖溶液、葡萄糖溶液、DNS试剂、Folin-酚试剂等。

2. 试剂：碳酸钠、氢氧化钠、硫酸铜、酒石酸钾钠、磷钼酸、磷钨酸、硫酸、溴、苯酚、浓盐酸、无水乙醇等。

四、实验器材与仪器1. 仪器：分光光度计、恒温水浴锅、离心机、电子天平、移液器、试管、试管架、烧杯、滴定管、比色皿等。

2. 器材：凝胶过滤柱、离子交换柱、亲和层析柱等。

五、操作方法和实验步骤1. 蔗糖酶蛋白含量的测定（1）制备标准曲线：将标准蛋白质溶液分别稀释成不同浓度，取一定量加入Folin-酚试剂，按照实验原理进行显色反应，在540 nm波长下测定吸光度，绘制标准曲线。