TALEN基因编辑技术
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基因工程比较TALEN技术与ZFN技术基因工程:比较TALEN技术与ZFN技术引言:基因工程是一门利用生物学技术对生物体的基因进行修改和调控的学科。
在基因工程领域,TALEN(转录活性效应核酸酶)技术和ZFN(锌指核酸酶)技术是两种常见的基因编辑工具。
本文将详细比较这两种技术的原理、应用、优势和局限性,以帮助读者更好地理解和选择适合自己研究需求的基因编辑技术。
一、TALEN技术1. 原理:TALEN技术是一种利用人工合成的转录活性效应核酸酶(TALEN)靶向特定DNA序列进行基因编辑的方法。
TALEN由两个功能域组成:DNA结合域和转录活性效应域。
DNA结合域通过识别特定DNA序列,而转录活性效应域则通过结合与DNA结合域靶向的DNA序列相邻的DNA酶切酶,实现DNA的切割和修复。
2. 应用:TALEN技术在基因工程领域具有广泛的应用。
它可以用于基因敲除、基因敲入、基因修饰等多种基因编辑操作。
例如,科研人员可以利用TALEN技术研究特定基因的功能,或者通过敲入外源基因来实现特定基因的表达。
3. 优势:TALEN技术相比其他基因编辑技术具有以下优势:- 高度特异性:TALEN可以精确识别和结合特定的DNA序列,从而实现精确的基因编辑。
- 高效性:TALEN技术可以在较短的时间内实现基因编辑,提高实验效率。
- 灵活性:TALEN技术可以用于不同生物体的基因编辑,包括人类细胞、动物和植物细胞等。
4. 局限性:虽然TALEN技术具有许多优势,但也存在一些局限性:- 设计复杂:TALEN的设计需要合成两个相应的DNA结合域,这增加了实验的复杂性。
- 成本较高:合成TALEN所需的材料和技术较为昂贵,限制了其在一些实验室的应用。
- 潜在的细胞毒性:TALEN技术可能对细胞产生毒性作用,限制了其在体内的应用。
二、ZFN技术1. 原理:ZFN技术是一种利用人工合成的锌指蛋白(ZFP)靶向特定DNA序列进行基因编辑的方法。
基因组编辑技术中的TALEN技术在当今科技飞速发展中,基因组编辑技术的出现给我们带来了巨大的科学价值和应用前景。
而其中的TALEN技术,正是一种强大、灵活且高效的基因组编辑技术,具有很高的研究和应用价值。
一、什么是TALEN技术TALEN,全称为TAL effector nucleases,是一种人工合成的核酸酶,是一种基因组编辑工具。
TALEN技术通过改造大肠杆菌的TAL效应子和FokⅠ核酸酶来实现特定的DNA序列特异性切割。
TALENs是一种人工合成的核酸酶,可以定向剪切DNA,切割和修剪基因。
这个技术可以帮助研究人员在大肠杆菌或细胞表面上针对位点进行DNA编辑。
二、TALEN技术的优势TALEN技术相对于传统的RNAi、CRISPR/Cas等基因组编辑技术,其编辑效率高、特异性高、无需设计RNA、不形成不必要的突变等特点,使得TALEN技术在应用中有很高的研究和应用价值。
TALEN技术独特的优势在于它可以精确定位到一个DNA序列上进行切割,且其切割效率很高,在大多数研究当中,TALEN技术的基因编辑概率达到了100%,并且不会遗传下一代。
而且TALEN技术具备较高的特异性和选择性,能够避免人工合成造成的RNA干扰,从而增加其编辑效果。
此外,TALEN技术在编辑过程中是一次性作用,不会与目标DNA形成结合,不会对细胞造成不必要的影响。
TALEN技术还具有一定的灵活性,因为它可以调整设计的时候,来改变它特异性的范围,从基因组上足迹级别的,到基因组表观修饰级别的,都可以在不同条件下进行调整。
三、TALEN技术的应用TALEN技术可以应用于多种领域,如药物筛选、基因治疗、疾病诊断等。
(1)药物筛选。
TALEN技术可以用于开发针对基因缺陷的药物,通过基因的编辑和修饰来寻找可能的治疗方法和药物。
同时,TALEN技术可以帮助筛选新药物中的毒副作用,以此保证药品的安全性和有效性。
(2)基因治疗。
TALEN技术具有在人类基因组中定向编辑遗传序列的能力,从而可以用于基因治疗。
talen基因编辑原理Talen基因编辑原理随着生物技术的迅猛发展,基因编辑技术逐渐成为研究人员在生物学领域中进行基因操作的重要工具。
其中,Talen (Transcription Activator-Like Effector Nuclease) 基因编辑技术因其高效、精准和灵活的特点而备受关注。
本文将详细介绍Talen基因编辑原理,帮助读者更好地了解这一技术的工作原理和应用。
Talen基因编辑技术是一种利用人工合成的转录激活因子样转录激活因子核酸酶(TALEN)进行基因组定点突变的技术。
TALEN由转录激活因子样结构域和核酸酶结构域组成。
转录激活因子样结构域与DNA特定序列结合,核酸酶结构域具有切割DNA的酶活性。
Talen基因编辑的关键步骤是设计和构建Talen蛋白。
首先,需要设计一对T alen蛋白,每个Talen蛋白由约20个转录激活因子样结构域和一个核酸酶结构域组成。
转录激活因子样结构域的序列由靶基因的目标DNA序列决定,确保Talen能够特异性地结合到目标位点。
而核酸酶结构域则负责切割DNA链。
设计好Talen蛋白的结构后,接下来是构建Talen蛋白。
构建Talen 蛋白通常使用基因工程技术,将转录激活因子样结构域和核酸酶结构域的编码序列通过重组DNA技术连接在一起。
构建好的Talen 蛋白可以通过基因重组技术在细胞中进行表达。
Talen蛋白表达后,它会通过转录激活因子样结构域与目标DNA特异性结合,形成Talen-DNA复合物。
随后,核酸酶结构域会切割目标DNA链,导致DNA双链断裂。
细胞为了修复这些断裂,会调动内源性修复机制,如非同源末端连接(NHEJ)或同源重组(HR)。
在NHEJ修复过程中,会出现插入或缺失的突变,从而导致目标基因的功能改变。
而通过提供外源DNA模板,在HR修复过程中则可以实现特定基因的修饰或替换。
Talen基因编辑技术具有多个优势。
首先,Talen蛋白的结构可以根据需要进行设计,使其能够特异性地结合到目标位点,降低了非特异性切割的风险。
前言转录激活样效应因子核酸酶(transcription activator-like effector nuclease, TALEN)技术与锌指核酸酶(Zinc-finger nuclease, ZFN)技术组成了一大类强有力的基因组编辑工具,这一大类技术的发展重新划定了生物学研究的边界。
这些嵌合核酸酶由两部分组成——一个可编码的序列特异性DNA结合模块与一个非特异性的DNA切割结构域。
通过诱导DNA双链断裂(DNAdouble-strand break)来刺激容易出错的非同源末端连接或在特定基因所在的位置进行的同源定向修复,TALEN和ZFN能够完成一系列遗传学编辑修饰操作。
成簇规律间隔短回文重复(clustered regulatoryinterspaced short palindromic repeat, CRISPR)技术是最新出现的一种基因组编辑工具,它能够完成RNA导向的DNA识别及编辑。
与其它基因组编辑工具相比,CRISPR技术更易于操作,具有更强的可扩展性。
本文将以上述三种技术为例,介绍并探讨新一代位点特异性基因组工程技术的生物学原理、未来发展趋势,及其在遗传学研究领域的作用和潜在的医学应用前景。
一、TALEN技术TAL效应因子(TAL effector, TALE)最初是在一种名为黄单胞菌(Xanthomonas sp.)的植物病原体中作为一种细菌感染植物的侵袭策略而被发现的。
这些TALE 通过细菌 III类分泌系统(bacterial type III secretion system)被注入植物细胞中,通过靶定效应因子特异性的基因启动子来调节转录,来促进细菌的集落形成。
由于TALE具有序列特异性结合能力,研究者通过将FokI核酸酶与一段人造TALE连接起来,形成了一类具有特异性基因组编辑功能的强大工具,即TALEN。
近年来, TALEN已广泛应用于酵母、动植物细胞等细胞水平基因组改造,以及拟南芥、果蝇、斑马鱼及小鼠等各类模式研究系统。
基因工程比较TALEN技术与ZFN技术基因工程是一项重要的生物技术,它涉及对生物体的基因进行修改和调控,以实现特定目的。
在基因工程领域,TALEN技术和ZFN技术是常用的基因编辑工具。
本文将分别介绍TALEN技术和ZFN技术,并比较它们在基因工程中的应用。
一、TALEN技术TALEN(Transcription Activator-Like Effector Nucleases)技术是一种基因编辑工具,它利用转录激活样效应子(TALE)蛋白与核酸序列的特异性结合能力,实现对基因组的精确编辑。
TALEN技术的主要步骤包括设计和构建TALEN蛋白,以及利用TALEN蛋白诱导DNA双链断裂并引起细胞的修复机制。
1. TALEN蛋白的设计与构建TALEN蛋白由一系列重复单元构成,每一个单元与DNA上的一个碱基对应。
通过设计和合成不同的单元序列,可以构建出特异性识别目标DNA序列的TALEN蛋白。
普通来说,TALEN蛋白由两个TALE结构域组成,每一个结构域负责识别目标DNA序列的一部份。
2. TALEN诱导的DNA双链断裂TALEN蛋白与目标DNA序列结合后,通过其核酸酶活性诱导DNA双链断裂。
这种断裂会激活细胞的DNA修复机制,包括非同源末端连接(NHEJ)和同源重组(HR)两种途径。
3. DNA修复机制与基因编辑在细胞的DNA修复过程中,NHEJ途径往往导致插入或者缺失的突变,从而实现基因的敲除或者插入。
而HR途径则可以利用外源DNA模板实现精确的基因修复或者插入。
二、ZFN技术ZFN(Zinc Finger Nucleases)技术也是一种常用的基因编辑工具,它利用锌指蛋白(ZFP)结构域与DNA的特异性结合能力,实现对基因组的精确编辑。
ZFN 技术的主要步骤包括设计和构建ZFN蛋白,以及利用ZFN蛋白诱导DNA双链断裂并引起细胞的修复机制。
1. ZFN蛋白的设计与构建ZFN蛋白由锌指结构域和核酸酶结构域组成。
基因工程比较TALEN技术与ZFN技术基因工程是一门前沿科技,通过对生物体基因进行改造,实现对生物体性状的调控和改良。
在基因工程领域,TALEN技术和ZFN技术是两种常用的基因编辑技术。
本文将对TALEN技术和ZFN技术进行比较分析,以便更好地了解它们各自的特点和应用。
一、TALEN技术1.1 TALEN技术原理TALEN(Transcription Activator-Like Effector Nuclease)技术是一种基因编辑技术,利用转录激活因子样效应核酸酶(TALEN)来切割DNA,实现基因组的编辑和修饰。
1.2 TALEN技术优点- TALEN技术具有高度的特异性,可以精准地切割目标基因,减少对非靶基因的影响。
- TALEN技术操作简单,不需要复杂的设备和技术,适合于各种生物体的基因编辑。
- TALEN技术可以实现大片段DNA的插入和删除,对基因组的编辑范围广泛。
二、ZFN技术2.1 ZFN技术原理ZFN(Zinc Finger Nuclease)技术是一种基因编辑技术,利用锌指核酸酶(ZFN)来切割DNA,实现基因组的编辑和修饰。
2.2 ZFN技术优点- ZFN技术具有高度的特异性,可以精准地切割目标基因,减少对非靶基因的影响。
- ZFN技术操作简单,不需要复杂的设备和技术,适合于各种生物体的基因编辑。
- ZFN技术可以实现大片段DNA的插入和删除,对基因组的编辑范围广泛。
三、TALEN技术与ZFN技术的比较3.1 技术原理比较TALEN技术和ZFN技术在原理上都是利用核酸酶来切割DNA,但TALEN技术利用转录激活因子样效应核酸酶,而ZFN技术利用锌指核酸酶。
3.2 技术优点比较TALEN技术和ZFN技术在特异性、操作简便性和编辑范围上都有相似之处,但在具体应用中可能会有一些差异。
3.3 应用领域比较TALEN技术和ZFN技术在不同生物体的基因编辑中都有广泛的应用,但在具体应用领域上可能会有差异,需要根据具体情况选择合适的技术。
基因工程比较TALEN技术与ZFN技术基因工程是一门利用生物技术手段对生物体进行基因改造的学科,其中TALEN技术与ZFN技术是两种常用的基因编辑技术。
本文将比较这两种技术的优缺点,以匡助读者更好地了解它们。
一、TALEN技术1.1 TALEN技术原理:TALEN是转录激活样蛋白效应器结构域的缩写,利用一种特殊的DNA结合蛋白与核酸序列结合,从而实现基因编辑。
1.2 TALEN技术优点:具有高度的特异性,可以精确地识别和编辑目标基因;编辑效率高,能够实现快速、高效地基因改造;操作简单,不需要复杂的设备和技术。
1.3 TALEN技术缺点:设计和构建TALEN蛋白需要耗费大量时间和精力;存在一定的毒性,可能对细胞产生不良影响;编辑效率受到细胞类型和环境因素的影响。
二、ZFN技术2.1 ZFN技术原理:ZFN是锌指核酸酶的缩写,利用锌指蛋白结合DNA序列,并结合核酸酶实现基因编辑。
2.2 ZFN技术优点:具有高度的特异性,可以精确识别和编辑目标基因;编辑效率高,能够实现快速、高效地基因改造;在多种细胞类型中都可以应用。
2.3 ZFN技术缺点:设计和构建ZFN蛋白需要较高的技术水平和经验;存在一定的毒性,可能对细胞产生不良影响;编辑效率受到细胞类型和环境因素的影响。
三、比较3.1 特异性:TALEN技术和ZFN技术在特异性方面表现相似,都具有较高的特异性,可以精确识别和编辑目标基因。
3.2 操作简易性:相对而言,TALEN技术的操作较为简单,不需要复杂的技术和设备,适合初学者使用;而ZFN技术需要较高的技术水平和经验才干操作。
3.3 应用范围:ZFN技术在多种细胞类型中都可以应用,具有更广泛的应用范围;而TALEN技术在一定程度上受到细胞类型和环境因素的影响。
四、发展趋势4.1 TALEN技术:随着技术的不断改进和发展,TALEN技术的设计和构建过程将更加简化和高效,编辑效率将进一步提高。
4.2 ZFN技术:ZFN技术在基因工程领域仍然占领重要地位,未来可能会结合其他技术手段进行进一步的改进和应用。
基因工程比较TALEN技术与ZFN技术引言概述:基因工程是一门重要的生物技术领域,它通过改变生物体的基因组来实现对其性状的调控。
在基因工程中,TALEN技术和ZFN技术是两种常用的基因编辑工具。
本文将比较这两种技术的原理、应用和优缺点,以帮助读者更好地理解和选择适合的基因编辑方法。
一、TALEN技术1.1 原理:TALEN(Transcription Activator-Like Effector Nucleases)技术是一种基于转录激活样效应子核酸酶的基因编辑技术。
它利用由细菌产生的转录激活样效应子蛋白与DNA序列的特异性结合来实现基因组的定点切割。
1.2 应用:TALEN技术在基因工程中广泛应用于基因敲除、基因突变和基因插入等方面。
它可以精确地切割目标DNA序列,并通过非同源末端连接或同源重组来实现基因组的修复或改变。
1.3 优缺点:TALEN技术的优点包括高度的特异性、较低的脱靶效应和可定制性强。
然而,TALEN技术的制备较为复杂,需要合成大量的TALEN蛋白,且需要针对每个特定的靶标进行设计和构建。
二、ZFN技术2.1 原理:ZFN(Zinc Finger Nucleases)技术是一种利用锌指蛋白结构域与DNA序列的特异性结合来实现基因组的定点切割的基因编辑技术。
它通过将锌指蛋白结构域与核酸酶结构域融合,实现对特定DNA序列的切割。
2.2 应用:ZFN技术在基因工程中主要用于基因敲除、基因修复和基因插入等方面。
它可以通过定点切割DNA序列,诱导细胞自身的修复机制来实现基因组的改变。
2.3 优缺点:ZFN技术的优点包括高度的特异性、较低的脱靶效应和广泛的应用范围。
然而,ZFN技术的设计和构建较为复杂,需要进行大量的实验验证和优化。
三、比较TALEN技术与ZFN技术3.1 特异性:TALEN技术和ZFN技术在特异性方面表现相似,都能够精确地切割目标DNA序列。
3.2 脱靶效应:相比之下,TALEN技术的脱靶效应较低,而ZFN技术的脱靶效应相对较高。
基因工程比较TALEN技术与ZFN技术基因工程是一门利用生物技术手段对生物体的基因进行修改和调控的学科。
在基因工程的研究领域中,TALEN技术(转录激活样效应核酸酶)和ZFN技术(锌指核酸酶)是两种常用的基因编辑工具。
本文将分别介绍和比较这两种技术的原理、应用和优缺点。
一、TALEN技术1.1 原理:TALEN技术是一种基于转录激活样效应核酸酶的基因编辑技术。
它利用人工设计的核酸酶靶向特定的基因序列,并通过DNA切割和修复机制来实现基因编辑。
1.2 应用:TALEN技术在基因工程领域有广泛的应用,包括基因敲除、基因敲入和基因突变等。
它可以用于研究基因功能、治疗遗传性疾病以及改良农作物等方面。
1.3 优缺点:TALEN技术具有高效、精确的特点,能够实现特定基因的精确编辑。
然而,TALEN技术的设计和构建较为复杂,成本较高,且对目标序列有一定的限制。
二、ZFN技术2.1 原理:ZFN技术是一种利用锌指蛋白和DNA切割酶的复合物来实现基因编辑的技术。
锌指蛋白可以通过蛋白结构域与特定的DNA序列结合,将DNA切割酶引导到目标位点进行基因编辑。
2.2 应用:ZFN技术在基因工程研究中也有广泛的应用,包括基因敲除、基因敲入和基因修饰等。
它可以用于研究基因功能、治疗遗传性疾病以及改良生物生产工艺等方面。
2.3 优缺点:ZFN技术具有较高的特异性和准确性,能够实现对特定基因的精确编辑。
然而,ZFN技术的设计和构建也比较复杂,且存在一定的设计限制和潜在的细胞毒性。
三、TALEN技术与ZFN技术的比较3.1 原理比较:TALEN技术和ZFN技术都是通过引导DNA切割酶来实现基因编辑,但TALEN技术利用的是转录激活样效应核酸酶,而ZFN技术则利用的是锌指蛋白。
3.2 应用比较:TALEN技术和ZFN技术在基因工程研究中的应用领域和范围相似,但具体应用时需要考虑到各自的优势和限制。
3.3 优缺点比较:TALEN技术和ZFN技术在特异性、准确性和效率等方面都具有一定优势,但在设计和构建的复杂性、成本以及对目标序列的限制等方面存在一定的差异。
基因编辑技术中的TALENs技术介绍TALENs技术是一种先进的基因组编辑技术,全称为转录激活因子样效应物核酸酶技术(Transcription Activator-Like Effector Nucleases)。
TALENs技术利用一种由植物细菌分泌的天然蛋白——TAL效应子,来识别和结合特异性DNA碱基对。
通过将TAL效应子与核酸酶结合,TALENs技术可以实现对特定DNA序列的定向剪切,从而达到基因组编辑的目的。
TALENs技术的应用非常广泛,它可以用于治疗遗传性疾病、改良作物、病毒抵抗等多个领域。
在医学领域,TALENs技术可以用于治疗一些遗传性疾病,例如囊性纤维化、血友病和杜氏肌营养不良症等。
通过修改患者体内导致疾病的基因,TALENs技术可以治愈这些疾病。
此外,TALENs技术还可以用于癌症治疗、病毒抵抗等领域。
相比其他基因组编辑技术,TALENs技术具有更高的特异性和精准度,能够实现高效、精确的基因组编辑。
同时,TALENs技术的设计原理相对简单,能够广泛应用于不同领域的研究中。
然而,TALENs技术也存在一些挑战和风险。
首先,TALENs技术的操作过程比较复杂,需要设计和构建大量的TALEN质粒,这使得其实施成本较高。
其次,TALENs技术仍然存在脱靶效应和免疫反应等风险,需要进一步研究和改进。
总的来说,TALENs技术是一种非常有前途的基因组编辑技术,具有广泛的应用前景和潜力。
虽然存在一些挑战和风险,但随着技术的不断进步和应用领域的拓展,相信这些问题也将逐渐得到解决。
同时,我们也需要认真思考和解决基因编辑技术所涉及的伦理和社会问题,以确保其合理和负责任的应用和发展。
TALEN基因编辑系统的使用方法基因编辑技术在生物研究领域具有革命性的意义。
TALEN(transcription activator-like effector nuclease)基因编辑系统是一种常用的基因组编辑技术,它可以精确地编辑DNA序列。
本文将详细介绍TALEN基因编辑系统的使用方法,帮助读者更好地了解和应用该技术。
一、TALEN基因编辑系统的组成TALEN基因编辑系统由TALEN核酸酶和注射载体构成。
TALEN核酸酶由DNA结合结构域和核酸内切酶结构域组成,可以特异性地结合到目标DNA序列上。
注射载体则用于传递TALEN核酸酶到目标细胞中。
二、设计TALEN核酸酶序列要使用TALEN基因编辑系统,首先需要设计目标基因的TALEN核酸酶序列。
设计过程中需要注意以下几点:1.选择目标基因区域:根据研究需求,选择待编辑的目标基因区域。
通常选择外显子区域,因为对外显子的编辑可以直接影响基因表达。
2.设计DNA结合结构域:TALEN核酸酶的DNA结合结构域是由一系列的重复单元组成的,每个单元可以特异性地识别和结合到目标DNA的碱基对上。
根据目标DNA的序列,设计相应的DNA结合结构域。
3.设计核酸内切酶结构域:核酸内切酶结构域是用于切割目标DNA的活性结构域。
根据设计的DNA结合结构域,选择合适的核酸内切酶结构域。
三、构建TALEN核酸酶构建TALEN核酸酶的主要步骤包括以下几个方面:1.合成DNA序列:根据设计的TALEN核酸酶序列,采用合成生物学方法合成DNA序列。
2.克隆到注射载体:将合成的TALEN核酸酶序列克隆到注射载体中。
选择合适的限制性内切酶进行酶切和连接。
3.验证TALEN核酸酶:通过测序等方法验证克隆得到的TALEN核酸酶是否正确。
四、应用TALEN基因编辑系统使用TALEN基因编辑系统进行基因组编辑的主要步骤如下:1.细胞培养:将目标细胞培养至适当的细胞密度和状态。
不同类型的细胞需要采用不同的培养条件和培养时间。
基因工程比较TALEN技术与ZFN技术基因工程:比较TALEN技术与ZFN技术引言概述:基因工程是一门利用生物技术改变生物体遗传信息的学科,它在医学、农业和环境领域具有广泛的应用。
在基因工程中,TALEN(转基因活性核酸酶)技术和ZFN(锌指核酸酶)技术是两种常用的基因编辑工具。
本文将比较这两种技术的原理、应用和优缺点。
一、TALEN技术1.1 原理:TALEN技术利用转基因活性核酸酶(TALEN)与DNA特定序列结合,并通过核酸酶活性切割DNA。
TALEN由两个结构域组成,一个是核酸酶结构域,另一个是DNA结合结构域。
DNA结合结构域能够识别并与目标DNA序列结合,而核酸酶结构域则负责切割DNA。
1.2 应用:TALEN技术在基因编辑中被广泛应用。
它可以用于研究基因功能、治疗遗传疾病以及改良农作物品种等。
通过设计特定的TALEN,科学家可以精确地编辑目标基因,实现基因的添加、删除或修饰。
1.3 优缺点:TALEN技术具有高度的特异性和灵活性,可以实现精确的基因编辑。
然而,TALEN的设计和构建相对复杂,需要合成大量的DNA序列,成本较高。
此外,TALEN技术对于不同目标基因的设计和优化也存在一定的挑战。
二、ZFN技术2.1 原理:ZFN技术利用锌指蛋白(ZFP)与DNA特定序列结合,并通过核酸酶活性切割DNA。
ZFN由两个部分组成,一个是锌指蛋白结构域,另一个是核酸酶结构域。
锌指蛋白结构域能够识别并与目标DNA序列结合,而核酸酶结构域则负责切割DNA。
2.2 应用:ZFN技术在基因工程中也有广泛的应用。
与TALEN技术类似,ZFN 技术可以用于基因功能研究、遗传疾病治疗和农作物改良等领域。
通过设计特定的ZFN,科学家可以实现对目标基因的精确编辑。
2.3 优缺点:ZFN技术具有高度的特异性和效率,可以实现精确的基因编辑。
与TALEN技术相比,ZFN技术的设计和构建相对简单,合成成本也较低。
然而,ZFN技术对于不同目标基因的设计和优化也存在一定的挑战。
基因工程比较TALEN技术与ZFN技术基因工程是一门利用生物技术手段对生物体进行基因组改造的学科,其中TALEN技术和ZFN技术是常用的基因编辑技术之一。
本文将从技术原理、应用范围、优缺点、发展前景和伦理道德等方面对TALEN技术和ZFN技术进行比较。
一、技术原理1.1 TALEN技术:TALEN是转录激活样蛋白效应子核酸酶的缩写,其原理是将转录激活样蛋白与核酸酶结合,形成一种可识别和切割特定DNA序列的蛋白质复合物。
1.2 ZFN技术:ZFN是锌指核酸酶的缩写,其原理是利用锌指结构域与DNA 结合,通过设计特定的锌指蛋白结合序列来实现对目标基因的精准编辑。
二、应用范围2.1 TALEN技术:TALEN技术在动植物基因组编辑、疾病治疗、农业生产等领域有着广泛的应用。
2.2 ZFN技术:ZFN技术也被广泛应用于基因组编辑、疾病治疗、生物学研究等领域。
三、优缺点3.1 TALEN技术:TALEN技术具有高度的靶向性和编辑效率,但是设计和构建成本较高。
3.2 ZFN技术:ZFN技术具有较高的编辑效率和可控性,但是对于不同基因的设计需要更多的经验和技术支持。
四、发展前景4.1 TALEN技术:随着技术的不断改进和成熟,TALEN技术在基因编辑领域的应用前景广阔。
4.2 ZFN技术:ZFN技术在基因工程领域也有着巨大的发展潜力,特别在疾病治疗和生物学研究方面。
五、伦理道德5.1 TALEN技术:TALEN技术在基因编辑过程中需要严格遵守伦理规范,避免对生物多样性和人类健康造成不可逆的影响。
5.2 ZFN技术:ZFN技术同样需要在应用过程中考虑伦理道德问题,确保基因编辑的安全和合法性。
综上所述,TALEN技术和ZFN技术在基因工程领域都有着独特的优势和应用价值,未来随着技术的不断进步和完善,它们将在基因编辑和生物工程领域发挥越来越重要的作用。
同时,我们也需要认真思量和探讨基因编辑技术在伦理和道德层面的问题,确保其应用符合科学伦理和社会道德的要求。
基因工程比较TALEN技术与ZFN技术基因工程中的基因编辑技术是一项重要的研究领域,它可以用于改变生物体的基因组,以实现特定的目标。
在基因编辑技术中,TALEN(转录活性核酸酶)和ZFN(锌指核酸酶)是两种常用的工具。
本文将比较这两种技术的原理、应用和优缺点。
1. TALEN技术TALEN技术是一种基于转录活性核酸酶的基因编辑技术。
它利用一种特殊的DNA结合蛋白质,即转录活性核酸酶,来识别和结合特定的DNA序列。
TALEN 由两个主要组成部份组成:DNA结合结构域和转录活性结构域。
DNA结合结构域可以根据目标DNA序列的要求进行设计,而转录活性结构域则可以促进DNA的切割和修复。
TALEN技术的应用非常广泛。
它可以用于研究基因功能、治疗遗传疾病、改良农作物和生产药物等方面。
例如,科学家可以利用TALEN技术在实验室中摹拟人类遗传疾病,并研究其发病机制。
此外,TALEN还可以用于改良农作物的抗病性和耐逆性,从而提高农作物的产量和品质。
然而,TALEN技术也存在一些局限性。
首先,设计和构建TALEN需要较高的技术水平和时间成本。
其次,TALEN技术在某些情况下可能会导致非特异性的DNA切割,从而引起不必要的基因突变。
此外,TALEN技术在应用于体内基因编辑时,可能会面临一些安全性和伦理性问题。
2. ZFN技术ZFN技术是一种基于锌指核酸酶的基因编辑技术。
锌指核酸酶是一种可以识别和结合特定DNA序列的蛋白质。
通过将多个锌指结构域组合在一起,可以构建具有高度特异性的DNA结合蛋白质。
与TALEN类似,ZFN也由两个主要组成部份组成:DNA结合结构域和核酸酶结构域。
DNA结合结构域可以根据目标DNA序列的要求进行设计,而核酸酶结构域可以切割和修复DNA。
ZFN技术的应用也非常广泛。
它可以用于研究基因功能、治疗遗传疾病、改良农作物和生产药物等方面。
与TALEN相比,ZFN技术在某些情况下可能更容易设计和构建,因为锌指结构域的设计和选择比较成熟。
基因工程比较TALEN技术与ZFN技术1. 引言基因工程是一种通过改变生物体的基因组来改变其性状的技术。
在基因工程领域,TALEN(转录激活样效应核酸酶)技术和ZFN(锌指核酸酶)技术是两种常用的基因编辑工具。
本文将比较这两种技术的原理、应用和优缺点。
2. TALEN技术2.1 原理TALEN技术是一种基于蛋白质-DNA相互作用的基因编辑技术。
它利用转录激活样效应核酸酶(TALEs)与核酸酶结合,形成一种能够识别和切割特定DNA序列的蛋白质。
TALENs由重复的20-30个氨基酸单元组成,每个单元与特定的碱基配对。
通过设计合适的TALENs,可以实现对目标基因的精确编辑。
2.2 应用TALEN技术在基因工程领域有广泛的应用。
它可以用于基因敲除、基因敲入和基因修饰等方面。
例如,科学家们利用TALEN技术成功地敲除了小鼠胚胎中的特定基因,并观察到了相关的表型变化。
此外,TALEN还可以用于治疗遗传性疾病,例如通过修复患者体细胞中的突变基因来治疗单基因疾病。
2.3 优缺点TALEN技术具有以下优点:- 高度特异性:TALENs可以精确识别和切割目标DNA序列,减少了非特异性剪切的可能性。
- 灵活性:通过设计不同的TALENs,可以实现对不同基因的编辑,具有较高的灵活性。
- 高效性:TALENs可以在细胞中实现高效的基因编辑,提高了编辑的成功率。
然而,TALEN技术也存在一些局限性:- 设计复杂:设计合适的TALENs需要对目标基因序列进行详细的分析和设计,较为复杂。
- 成本较高:TALEN技术相对于其他基因编辑技术而言,成本较高,限制了其在大规模应用中的使用。
3. ZFN技术3.1 原理ZFN技术是一种利用锌指蛋白与DNA结合的基因编辑技术。
锌指蛋白是一种能够特异性结合DNA的蛋白质,通过设计合适的锌指蛋白,可以实现对目标基因的精确编辑。
每个锌指蛋白通常与3个碱基对应,通过组合多个锌指蛋白,可以实现对目标DNA序列的特异性识别和切割。
基因工程比较TALEN技术与ZFN技术基因工程是一门应用于生物学和医学领域的前沿科技,它通过修改和调控生物体的基因组来实现对生物体性状的改变和控制。
在基因工程领域,TALEN技术和ZFN技术是两种常用的基因编辑工具。
本文将详细比较这两种技术的原理、应用、优缺点等方面的内容。
一、TALEN技术TALEN是“转录活化因子效应器核酸酶”(Transcription Activator-Like Effector Nucleases)的缩写。
它是一种基于人工设计的核酸酶,能够精切当割DNA双链,实现基因组的定点编辑。
TALEN技术的主要原理是通过融合转录活化因子(TALE)结构域和核酸酶结构域来实现对DNA的切割。
1. 原理:TALEN技术的核心是TALE结构域,它来源于一种细菌(Xanthomonas),能够与特定的DNA序列结合。
TALE结构域由一系列重复单元组成,每一个单元与特定的碱基配对。
通过改变重复单元中的氨基酸残基,可以实现对不同碱基的识别。
将TALE结构域与核酸酶结构域融合后,形成TALEN蛋白。
TALEN蛋白能够与目标DNA序列结合,并切割DNA双链,引起DNA修复机制,从而实现基因组的编辑。
2. 应用:TALEN技术在基因工程领域有广泛的应用。
它可以用于基因敲除、基因修饰、基因添加等方面。
通过设计特定的TALEN蛋白,可以实现对特定基因的靶向编辑。
例如,科学家可以设计TALEN蛋白来敲除某个致病基因,从而治疗相关疾病。
此外,TALEN技术还可以用于研究基因功能、构建转基因生物等方面。
3. 优缺点:TALEN技术相比传统的基因编辑技术具有以下优点:(1)高度特异性:TALEN蛋白能够与特定的DNA序列结合,实现对特定基因的靶向编辑,具有较高的特异性。
(2)较低的非特异性效应:相比较其他基因编辑技术,TALEN技术在非目标位点引起的突变较少。
(3)较高的编辑效率:TALEN技术能够实现高效的基因组编辑,编辑效率通常在50%以上。
基因工程比较TALEN技术与ZFN技术基因工程是一项重要的生物技术,它涉及对生物体基因组的修改和重组,以改变其性状或产生新的特性。
在基因工程中,TALEN技术和ZFN技术是两种常用的基因编辑工具。
本文将详细介绍这两种技术的原理、应用领域和优缺点。
一、TALEN技术1. 原理:TALEN(Transcription Activator-Like Effector Nucleases)是一种基因编辑工具,它由转录激活因子样效应子核酸酶(TALE)和核酸酶结构域(nuclease domain)组成。
TALE是一种来源于植物致病菌Xanthomonas的DNA结合蛋白,它通过与特定DNA序列结合,指导核酸酶结构域对目标DNA进行切割。
2. 应用领域:TALEN技术在基因工程领域具有广泛的应用。
例如,通过使用TALEN技术可以实现以下目标:- 基因敲除:通过引入双链断裂诱导细胞自身修复机制,实现目标基因的敲除。
- 基因敲入:将外源DNA序列导入目标基因组中的特定位点,实现基因的敲入。
- 基因修饰:通过引入特定的突变,改变基因的功能或表达水平。
3. 优缺点:TALEN技术相对于其他基因编辑技术具有以下优点:- 高效性:TALEN技术可以实现高效的基因编辑,特别是在哺乳动物细胞中的编辑效率较高。
- 精确性:TALEN技术可以针对目标基因组中的特定位点进行编辑,具有较高的精确性。
- 灵活性:TALEN技术可以根据需要设计不同的TALEN序列,以实现对不同基因组的编辑。
然而,TALEN技术也存在一些局限性:- 设计复杂:设计和构建TALEN需要耗费较多的时间和精力。
- 潜在的脱靶效应:TALEN技术在目标位点以外的地方也可能发生剪切作用,导致不可预测的脱靶效应。
二、ZFN技术1. 原理:ZFN(Zinc Finger Nucleases)是另一种常用的基因编辑工具,它由锌指结构域(zinc finger domain)和核酸酶结构域组成。
TALEN技术在基因编辑中的应用基因编辑技术是一项革命性的生物技术,它能够改变生物体的基因组成,为人类带来了许多前所未有的机会和挑战。
随着科技的不断发展,新一代的基因编辑技术TALEN(转录激活样效应核酸酶)逐渐成为热门研究领域。
TALEN技术具有高效、精确和可编程的特点,使得基因编辑工作更加可行和可控制。
本文将探讨TALEN技术在基因编辑中的应用。
首先,TALEN技术可以用于基因修饰。
通过设计和合成特定的TALEN蛋白质,研究人员可以实现对目标基因的修饰,如基因敲除、插入或替换等。
TALEN技术相对于传统的基因编辑方法具有更高的准确性和效率,它可以将改变后的基因组正确无误地导入到生物体中,实现对基因功能的精准研究。
其次,TALEN技术还可以应用于基因治疗。
基因治疗是一种潜在的治疗方法,可以通过改变患者的基因组来治疗一些难以根治的遗传性疾病。
利用TALEN技术,研究人员可以修复或替换患者的异常基因,恢复正常的基因功能,从而达到治疗疾病的目的。
这种个性化治疗的方法有望为不同患者提供定制的治疗方案,并在未来对一些无法根治的疾病产生深远影响。
此外,TALEN技术在农业领域也有广泛的应用价值。
农作物的改良一直是人类所追求的目标之一,因为它可以提高农作物的产量、抵抗病虫害等。
通过运用TALEN技术,研究人员可以精确地编辑农作物基因组,改变其性状和特点。
例如,可以增加植物的抗病性和耐逆性,提高农作物的产量和质量。
这将有助于满足日益增长的全球粮食需求,改善农作物的抗逆能力,减少对化学农药和农药的依赖。
此外,TALEN技术还可以应用于疾病模型的构建。
许多疾病的机制尚不完全清楚,研究人员需要建立相应的疾病模型来深入研究。
利用TALEN技术,可以精确地编辑动物模型的基因组,模拟人类疾病的特征和表现。
这些模型有助于了解疾病的发病机制,从而为新药的研发提供有效的平台。
最后,TALEN技术还可以帮助我们了解生物进化和基因调控的机制。
基因工程比较TALEN技术与ZFN技术基因工程是一门利用技术手段对生物基因进行修改和调控的学科,它在农业、医学和生物学研究等领域具有广泛的应用前景。
在基因工程中,TALEN技术和ZFN技术是两种常用的基因编辑工具,它们可以实现对基因组的精确编辑和修饰。
下面将分别介绍TALEN技术和ZFN技术的原理、应用以及比较。
一、TALEN技术1. 原理:TALEN(Transcription Activator-Like Effector Nucleases)技术是一种基于转录激活样效应子核酸酶(TALEs)的基因编辑技术。
TALEs是一类来自于植物病原菌的蛋白质,它们具有高度保守的结构和序列特征。
通过改变TALEs中的重复单元,可以使其与特定的DNA序列发生特异性结合。
将TALEs与核酸酶结合,形成TALENs,可以实现对目标DNA序列的切割和编辑。
2. 应用:TALEN技术在基因工程中的应用非常广泛。
通过设计合适的TALENs,可以实现基因敲除、基因敲入、点突变等多种基因编辑操作。
在农业领域,TALEN技术可以用于改良作物的抗病性、耐逆性和产量等性状。
在医学领域,TALEN技术可以用于治疗遗传性疾病、癌症等疾病的基因治疗。
3. 优势和局限性:TALEN技术相比其他基因编辑技术具有一定的优势。
首先,TALEN技术具有较高的编辑效率和特异性,可以实现精确的基因编辑。
其次,TALEN技术的设计和构建相对简单,不需要依赖外源性的DNA修复模板。
然而,TALEN技术也存在一些局限性,例如设计和构建TALENs的成本较高,需要进行大量的实验优化。
此外,TALEN技术对目标序列有一定的限制,需要具备一定的序列特征。
二、ZFN技术1. 原理:ZFN(Zinc Finger Nucleases)技术是一种基于锌指蛋白核酸酶(ZFPs)的基因编辑技术。
ZFPs是一类具有特异性DNA结合能力的蛋白质,它们可以通过改变其锌指结构中的氨基酸残基,实现与特定DNA序列的结合。
基因工程比较TALEN技术与ZFN技术基因工程:比较TALEN技术与ZFN技术1. 引言基因工程是一门利用生物技术手段对生物体的基因进行操作和改变的学科。
在基因工程领域中,TALEN(转录激活样效应核酸酶)技术和ZFN(锌指核酸酶)技术是两种常用的基因编辑工具。
本文将详细比较这两种技术的原理、应用和优缺点。
2. TALEN技术2.1 原理TALEN技术利用转录激活样效应核酸酶(TALE)与特定DNA序列结合,通过DNA切割酶的活性,实现对基因组的定点编辑。
TALE由一系列重复单元组成,每一个重复单元通过其特定的氨基酸序列与DNA碱基配对,从而识别目标DNA序列。
2.2 应用TALEN技术在基因工程领域中具有广泛的应用。
例如,通过设计特定的TALEN序列,可以实现对人类基因组的编辑,用于研究基因功能和疾病机制。
此外,TALEN技术还可以用于农业领域,例如改良作物的抗病性和耐逆性。
2.3 优缺点TALEN技术的优点包括高度可定制性、高效性和特异性。
它可以实现对基因组的精确编辑,并且可以同时编辑多个基因。
然而,TALEN技术的缺点是设计和构建TALEN序列相对复杂,需要较长的时间和较高的成本。
3. ZFN技术3.1 原理ZFN技术利用锌指蛋白与特定DNA序列结合,形成DNA切割酶复合物,从而实现对基因组的定点编辑。
锌指蛋白是一类具有DNA结合能力的蛋白质,通过改变其结构可以使其与特定的DNA序列结合。
3.2 应用ZFN技术在基因工程领域中也有广泛的应用。
类似于TALEN技术,ZFN技术可以用于编辑人类基因组,研究基因功能和疾病机制。
此外,ZFN技术还可以用于动物模型的构建,用于研究人类疾病。
3.3 优缺点ZFN技术的优点包括高度可定制性、高效性和特异性。
它可以实现对基因组的精确编辑,并且可以同时编辑多个基因。
然而,与TALEN技术相比,ZFN技术的设计和构建过程更加复杂,需要更长的时间和更高的成本。
4. 比较分析4.1 原理比较TALEN技术和ZFN技术的原理类似,都是通过特定蛋白质与DNA序列结合,形成DNA切割酶复合物,实现对基因组的定点编辑。
前言转录激活样效应因子核酸酶(transcription activator-like effector nuclease, TALEN)技术与锌指核酸酶(Zinc-finger nuclease, ZFN)技术组成了一大类强有力的基因组编辑工具,这一大类技术的发展重新划定了生物学研究的边界。
这些嵌合核酸酶由两部分组成——一个可编码的序列特异性DNA结合模块与一个非特异性的DNA切割结构域。
通过诱导DNA双链断裂(DNAdouble-strand break)来刺激容易出错的非同源末端连接或在特定基因所在的位置进行的同源定向修复,TALEN和ZFN能够完成一系列遗传学编辑修饰操作。
成簇规律间隔短回文重复(clustered regulatoryinterspaced short palindromic repeat, CRISPR)技术是最新出现的一种基因组编辑工具,它能够完成RNA导向的DNA识别及编辑。
与其它基因组编辑工具相比,CRISPR技术更易于操作,具有更强的可扩展性。
本文将以上述三种技术为例,介绍并探讨新一代位点特异性基因组工程技术的生物学原理、未来发展趋势,及其在遗传学研究领域的作用和潜在的医学应用前景。
一、TALEN技术TAL效应因子(TAL effector, TALE)最初是在一种名为黄单胞菌(Xanthomonas sp.)的植物病原体中作为一种细菌感染植物的侵袭策略而被发现的。
这些TALE 通过细菌 III类分泌系统(bacterial type III secretion system)被注入植物细胞中,通过靶定效应因子特异性的基因启动子来调节转录,来促进细菌的集落形成。
由于TALE具有序列特异性结合能力,研究者通过将FokI核酸酶与一段人造TALE连接起来,形成了一类具有特异性基因组编辑功能的强大工具,即TALEN。
近年来, TALEN已广泛应用于酵母、动植物细胞等细胞水平基因组改造,以及拟南芥、果蝇、斑马鱼及小鼠等各类模式研究系统。
2011年《自然·方法》(Nature Methods)将其列为年度技术,而2012年的《科学》(Science)则将TALEN技术列入了年度十大科技突破,针对该文的评论更是给予它基因组的巡航导弹技术的美誉。
1. TALEN结构及技术原理1.1 TALEN的典型结构如前文所述,典型的 TALEN由一个包含核定位信号(Nuclear localization signal, NLS)的N端结构域、一个包含可识别特定 DNA序列的典型串联TALE 重复序列的中央结构域,以及一个具有FokI核酸内切酶功能的C端结构域组成。
不同类型的TALEN元件识别的特异性DNA 序列长度有很大区别。
一般来说,天然的TALEN元件识别的特异性DNA序列长度一般为17-18bp;而人工TALEN元件识别的特异性DNA序列长度则一般为14-20bp。
图1 TALEN的结构。
(A)与靶点DNA(灰色显示,PDB ID:3UGM)结合的TALE蛋白。
每一个独立的TALE重复序列元件包含33到35个氨基酸残基,这些TALE重复序列元件能够通过两个高变异度的残基(即重复可变双残基,RVD,棍状显示)来识别一个单一的碱基对。
(B)TALE核酸酶(TALEN)形成二聚体结合DNA的动画演示。
TALEN目标位点由两个TALE结合位点组成,这两个位点间通过不同长度的间隔区序列(12-20bp)分开。
TALE可以被设计成仅仅识别左半侧位点或右半侧位点。
图片来源:Thomas Gaj, Charles A. Gersbach, and Carlos F. Barbas III. (2013) ZFN, TALEN, andCRISPR/Cas-based methods for genome engineering. Trends in Biotechnology, 31(7): 397-405.1.2 TALEN技术的原理与步骤TALEN技术的原理并不复杂,即通过 DNA识别模块将TALEN元件靶向特异性的DNA位点并结合,然后在FokI核酸酶的作用下完成特定位点的剪切,并借助于细胞内固有的同源定向修复(HDR)或非同源末端连接途径(NHEJ)修复过程完成特定序列的插入(或倒置)、删失及基因融合(图2)。
图2 TALEN进行基因组编辑的原理。
利用位点特异性核酸酶可以进行基因组编辑,而核酸酶诱导的DNA双链断裂(DSB)可由同源定向修复(HDR)或非同源末端连接途径(NHEJ)来修复。
(A)在供体质粒(donor plasmid)暴露出延长的同源臂(homology arm)的情况下,HDR可能导致插入的单个或多个转基因发生改变或取代原有的基因。
(B)在缺失供体质粒的情况下,NHEJ介导的修复会产生小的插入或删失突变,并可能导致目标基因被破坏;在有双链寡核苷酸或线状供体质粒存在的情况下,这些DNA片段可能通过NHEJ介导的连接反应插入;同时诱导两个DSB的产生则会引起删失、插入和易位突变。
图片来源:Thomas Gaj, Charles A. Gersbach, and Carlos F. Barbas III. (2013) ZFN, TALEN, and CRISPR/Cas-based methods for genome engineering. Trends in Biotechnology, 31(7): 397-405.TALEN技术的核心原理就是在同一个蛋白(TALEN)上有序地实现引导进入细胞核、靶位点DNA的特异性识别和靶位点DNA的切割这三个不同的功能,这一点在上述TALEN典型结构一节中已作了较为详细的描述。
在具体操作中,例如在实验室条件下,实现TALEN的关键就在于完成DNA的特异性识别功能,一般说来分为两个步骤。
图3与图4分别以“铂金门”TALEN构建系统(Platinum Gate TALEN construction system)和商业化的easyT体系为例,展示了实验操作中TALEN元件的构建。
图3 “铂金门”TALEN构建系统TALEN元件构建操作示意图。
步骤一,四个或更少的组件被连接到阵列质粒(array plasmid)上;步骤二,构建好的阵列随后被连接到哺乳动物表达载体中;白色和粉色的长方形分别表示在BsaI和Esp3I限制性内切酶切割后留下的粘性末端;蓝色字母代表RVD,红色字母代表non-RVD变化,黄色长方形代表后一半重复。
图片来源:Tetsushi Sakuma, Hiroshi Ochiai, Takehito Kaneko, Tomoji Mashimo, Daisuke Tokumasu, et al. (2014) Repeating pattern of non-RVD variations in DNA-binding modules enhances TALEN activity. Science Report, 3(3379): 1-8.图4 “easyT”TALEN构建系统TALEN元件构建操作示意图。
(A)包含一个长度为18.5个组件的TALE重复元件的TALEN体系示意图。
该TALE重复元件由20个单体单位(monomer unit)组装而成。
单体单位的边界在组装过程中发生了移位。
(B)TALEN克隆示意图。
第一步,由四个单体通过连接反应组装成4聚体;第二步,4聚体(4-mers)进行PCR扩增,琼脂糖凝胶电泳,胶回收并浓缩;最后,在第二次连接反应中,4聚体被组装到TALEN骨架质粒(backbone plasmid)上;黄色和蓝色箭头分别表示4聚体扩增时的正向引物与反向引物。
图片来源:Tomonori Katsuyama, Arslan Akmammedov, Makiko Seimiya, Samuel C. Hess, Cem Sievers and Renato Par. (2013) An efficient strategy for TALEN-mediated genome engineering in Drosophila. Nucleic Acids Research, 41(17): e163-171.1.2.1构建TAL靶点识别模块TAL的DNA特异性识别单位是间隔32个恒定氨基酸残基的二联氨基酸。
二联氨基酸与AGCT这4个核苷酸碱基有一一对应的关系:腺嘌呤(A)由NI识别、胸腺嘧啶(T)由NG识别、鸟嘌呤(G)由NN识别,而胞嘧啶(C)则由HD识别。
实验操作中,我们通过靶位点的DNA序列可以反推能特异性识别这一序列的二联氨基酸序列,从而构建TAL靶点识别模块。
1.2.2 TAL靶点识别模块的克隆与表达根据之前对TALEN结构的介绍,我们需要将上一步骤中根据目标DNA序列构建好的一对TAL靶点识别模块与N端的核定位序列、C端的FokI酶连接起来,才能得到一个完整的TALEN元件。
一般来说,我们可以采用专门用于构建TALEN的真核表达载体体系,将一对特异性的TAL靶点识别模块克隆进该载体中,再通过转染等方式导入细胞内。
这种体系一般由供体质粒(donor plasmid,提供单基、二联及三联等类型的TAL模块)和骨架质粒(backbone plasmid,用于构建TALEN 并表达构建好的TALEN)两类质粒构成,常用的TALEN体系有RCIscript-GoldyTALEN和pC- GoldyTALEN、TAL5-BB和pTAL6-BB及pCS2TAL3-DD 和pCS2TALE-RR等。
2. TALEN技术的应用及近期发展虽然 TALEN技术的基本原理并不难理解,但其发现过程却较为曲折。
从1989年首次发现TAL起,研究者前后历时近21年才研究清楚TAL的工作原理。
自2010年正式发明 TALEN技术以来,全球范围内多个研究小组利用体外培养细胞、酵母、拟南芥、水稻、果蝇及斑马鱼等多个动植物体系验证了TALEN的特异性切割活性。
2.1 TALEN技术的应用2011年北京大学(Peking University)的 Zhang等人首次使用TALEN技术在斑马鱼中成功实现了定向突变和基因编辑;而爱荷华州立大学(Iowa State University)的Wang等人则在2012年,也以斑马鱼为模式动物,并首次使用TALEN技术在活体内完成了特定 DNA的删除、人工DNA插入等较为复杂的操作。
随后TALEN技术在植物、大小鼠的基因组改造等方面的应用也顺利完成。
而2013年 Zhang使用TALEN诱导了DNA双链断裂,提高同源定向修复效率,在斑马鱼中实现了同源重组基因打靶。