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细胞实验中常见问题
一、细胞培养问题
1.1 细胞生长缓慢或停止生长：可能原因是营养物质不足、血清质量不佳、培养箱温度不稳定或CO2浓度不正确等。
1.2 细胞形态异常：可能是由于培养基问题、营养不足、感染或污染等原因。
1.3 细胞结块：可能是由于细胞密度过大或血清用量过多等原因。
二、细胞活性检测问题
2.1 实验结果不一致或不准确：可能是由于试剂问题、操作误差或实验条件不稳定等原因。
2.2 假阳性或假阴性结果：可能是由于抗体交叉反应、实验操作不当或细胞状态不佳等原因。
三、细胞转染问题
3.1 转染效率低：可能是由于转染方法不正确、转染试剂选择不当或细胞状态不佳等原因。
3.2 细胞毒性：可能是由于转染试剂用量过多或转染条件不适应等原因。
四、细胞计数与消化问题
4.1 细胞黏附性强，不易消化：可能是由于细胞类型或状态不适应于消化方法等原因
4.2 细胞碎片多，影响计数：可能是由于消化过度或消化不充分等原因。
五、细胞标记与染色问题
5.1 染色不均匀或不显色：可能是由于染色时间过短或过长、抗体浓度不当或细胞状态不佳等原因。
5.2 非特异性染色问题：可能是由于抗体交叉反应或抗体纯度不佳等原因。
六、细胞分型与鉴定问题
6.1 分型结果不准确：可能是由于抗体选择不当、操作误差或细胞状态不稳定等原因。
6.2 鉴别困难：可能是由于细胞分化程度高、抗原表达量低或鉴别方法不敏感等原因。
七、细胞感染与病毒问题
7.1 细菌污染：可能是由于培养基或细胞株本身带菌等原因。
7.2 支原体污染：可能是由于培养环境不洁净、操作过程中污染等原因。
细胞因子检测试剂盒的原理及操作流程解析细胞因子检测试剂盒是一种用于检测细胞因子水平的重要工具，它可以帮助科研人员了解细胞因子在生物体内的表达水平和功能。
本文将为您解析细胞因子检测试剂盒的原理和操作流程，以帮助您更好地理解和应用该检测方法。
一、细胞因子检测试剂盒的原理细胞因子是细胞间相互作用的信号分子，它们在生物体内起着重要的调节和传递功能。
细胞因子的异常表达与多种疾病的发生和进展密切相关，因此检测细胞因子的水平对于研究疾病的机制和评估治疗的疗效具有重要意义。
细胞因子检测试剂盒一般基于酶联免疫吸附测定法（ELISA）或流式细胞术（FACS）原理进行检测。
以ELISA为例，其原理如下：1. 抗原夹心法：将目标细胞因子捕获抗体固定在微孔板上，样品中的细胞因子与固相抗体发生特异性结合。
经过洗涤去除非特异性结合的物质。
2. 二抗法：加入与目标细胞因子结合的二抗，例如HRP（辣根过氧化物酶）标记的兔抗小鼠IgG。
3. 三抗法：加入HRP底物，例如TMB（3,3',5,5'-四甲基联苯胺），与HRP酶发生反应，生成蓝色物质。
4. 加入终止剂：添加硫酸或其他酸性溶液终止反应，产生黄色终止产物。
基于这一原理，通过测定产生的蓝色或黄色产物的光吸光度或荧光信号，可以间接测定细胞因子的含量。
二、细胞因子检测试剂盒的操作流程操作细胞因子检测试剂盒需要按照特定的步骤进行，下面将介绍一般的操作流程：1. 准备样品：根据检测需要，准备待测样品，可以是细胞培养上清液、血清、血浆等。
样品的收集、保存等步骤要符合规范和实验要求。
2. 样品处理：根据检测要求，对样品进行必要的处理，如离心、稀释等。
注意避免样品的冻融循环，以免影响检测结果。
3. 制备标准品：根据检测试剂盒的要求，制备一系列已知浓度的标准品，用于绘制标准曲线。
4. 实验操作：将标准品、样品和空白对照依次加入已经被固定抗体的微孔板中，充分混合后覆盖反应盖板，进行孵育。
细胞因子检测试剂盒的原理与应用细胞因子是一类可溶性蛋白质分子，能够调节和调控细胞间的通讯，参与调节免疫反应和炎症反应等生理过程。
细胞因子在细胞生物学研究和临床试验中具有重要作用。
细胞因子检测试剂盒是一种常用的实验工具，用于检测和量化细胞因子的含量和活性。
下面将从原理和应用两个方面介绍细胞因子检测试剂盒。
一、细胞因子检测试剂盒的原理细胞因子检测试剂盒的原理主要分为几个步骤：细胞培养、处理样本、荧光标记以及检测。
首先，细胞培养是细胞因子检测试剂盒的基础，可以使用细胞培养技术获得大量的细胞。
不同的细胞因子需要不同的细胞系进行检测。
其次，在处理样本的过程中，需要对样本进行预处理，以提取细胞因子并去除杂质。
对于细胞培养上清液或组织样本，可以通过离心等操作去除细胞和细胞碎片。
对于血液样本，可以通过离心或其他方法去除红细胞和凝块。
然后，荧光标记是细胞因子检测试剂盒中非常重要的一步。
荧光标记可以使用特异性的抗体或荧光染料。
抗体可以与细胞因子发生特异性结合，并用荧光染料进行标记。
荧光标记后的细胞因子可用于检测和定量。
最后，检测是细胞因子检测试剂盒的最后一步。
常用的检测方法有酶联免疫吸附实验（ELISA）、流式细胞术以及生物成像等。
ELISA是一种将细胞因子与特异性抗体结合测定的方法，具有灵敏度高、特异性好等特点。
流式细胞术可用于分析单个细胞的细胞因子含量和产生细胞因子的细胞类型。
生物成像可以通过引入荧光染料或放射性示踪剂进行成像，实现对细胞因子的可视化定量。
二、细胞因子检测试剂盒的应用细胞因子检测试剂盒在许多生物领域有广泛的应用，包括免疫学、癌症研究、炎症反应、药物开发等。
在免疫学研究中，细胞因子检测试剂盒可用于定量分析和表征不同细胞因子的生物学功能。
通过测定细胞因子的含量和活性，可以了解免疫细胞之间的相互作用和调节机制。
同时，在疫苗研究和免疫治疗中，细胞因子检测试剂盒也起到了重要的作用。
通过定量细胞因子的表达水平和作用机制，可以评估和优化免疫治疗的效果。
细胞培养常见问题及其解决1、如何选用特殊细胞系培养基？培养某一类型细胞没有固定的培养条件。
在MEM中培养的细胞，很可能在DMEM或M199中同样很容易生长。
总之，首选MEM做粘附细胞培养、RPMI-1640做悬浮细胞培养是一个好的开始。
2、何时须更换培养基？视细胞生长密度而定，或遵照细胞株基本数据上之更换时间，按时更换培养基即可。
3、可否使用与原先培养条件不同之培养基？不能。
每一细胞株均有其特定使用且已适应之细胞培养基，若骤然使用和原先提供之培养条件不同之培养基，细胞大都无法立即适应，造成细胞无法存活。
4、可否使用与原先培养条件不同之血清种类？不能。
血清是细胞培养上一个极为重要的营养来源，所以血清的种类和品质对于细胞的生长会产生极大的影响。
来自不同物种的血清，在一些物质或分子的量或内容物上都有所不同，血清使用错误常会造成细胞无法存活。
5、何谓FBS, FCS, CS, HS ?FBS (fetal bovine serum) 和FCS (fetal calf serum) 是相同的意思，两者都是指胎牛血清， FCS 乃错误的使用字眼，请不要再使用。
CS (calf serum) 则是指小牛血清。
HS (horseserum) 则是指马血清。
6、培养细胞时应使用5 % 或10% CO2？或根本没有影响？一般培养基中大都使用HCO3-/CO32-/H+ 作为pH 的缓冲系统，而培养基中NaHCO3 的含量将决定细胞培养时应使用的CO2 浓度。
当培养基中NaHCO3 含量为每公升3.7 g 时，细胞培养时应使用10 % CO2；当培养基中NaHCO3 为每公升1.5 g 时，则应使用5 % CO2 培养细胞。
7、Hank's 平衡盐溶液(HBS)要在空气中使用，不需要CO2培养箱。
原因是什么？Hank's 平衡盐溶液(HBS)和Earle's平衡盐溶液(EBS)有什么本质的功能差别？HBS和 EBS 的主要差别在于碳酸氢钠的水平,在Eagles (2.2g/L)中比在Hanks (0.35g/L) 中高。
联科生物技术有限公司 全国免费电话：800 8571 184第四章细胞因子ELISA 试剂盒简介：美国Peprotech公司作为知名的重组细胞因子生产商，开发出了50余种细胞因子的ELISA检测试剂盒，试剂盒的检测灵敏度高，检测范围宽，为您的科研提供了又一有力的工具。
试剂盒组分及重悬方法：包被抗体--100ug 经抗原亲和纯化的包被抗体，冻干粉重悬--用1ml无菌蒸馏水重悬成100ug/ml的贮存液保存--4-8℃，保存两个月；-20℃分装冻存可贮存6个月检测抗体--100ug 经抗原亲和纯化的生物素标记的检测抗体，冻干粉重悬--用1ml无菌蒸馏水重悬成100ug/ml的贮存液保存--4-8℃，保存两个月；-20℃分装冻存可贮存6个月标准品--准确计量的重组细胞因子冻干粉，具体含量见说明书重悬--按说明书1ml无菌蒸馏水重悬成适当浓度的贮存液保存--4-8℃，保存1周；-20℃分装冻存可贮存2个月亲合素偶联的过氧化物酶--60ul/瓶，液体分装--分装到10只小瓶中，每瓶6ul保存---20℃分装冻存可贮存2年实验所需的材料：ELISA酶标板：推荐Nunc maxisorp，产品编号：442404Tween-20：推荐Sigma，产品编号：P-7949BSA(牛血清白蛋白)：推荐Sigma，产品编号：A-7030ABTS底物溶液：推荐Sigma，产品编号：A-3219Dulbecco's PBS(10X)：推荐Gibco BRL，产品编号：14200-075相关溶液配制：PBS：用无菌蒸馏水将10X PBS稀释为1X PBS洗涤液：含0.05% Tween-20的PBS封闭液：含1% BSA的PBS，过滤除菌，4℃保存1周稀释液：含0.05% Tween-20和0.1% BSA的PBS，过滤除菌，4℃保存1周注：以上所有试剂在使用前必须复温至室温。
包板：1) 用PBS将包被抗体稀释成1ug/ml，立即加到酶标板中，每孔100ul；2) 密封酶标板，室温孵育过夜；3) 吸除孔中的液体，并用300ul洗涤液洗孔4次；4) 最后一次洗涤后，将酶标板倒置除去残留的液体，并倒扣在吸水纸吸干孔沿上的液体；5) 每孔加300ul封闭液，室温孵育至少1小时；6) 吸除孔中的液体，并洗孔4次。
细胞培养中的常见问题及解决方法细胞培养是现代生命科学研究中常用的实验技术之一，可以用于细胞增殖、分化、转染等研究。
然而，细胞培养过程中常常会出现一些问题，如细胞污染、细胞凋亡和细胞失活等。
本文将讨论细胞培养中的这些常见问题，并提出相应的解决方法。
1. 细胞污染细胞污染是细胞培养中的一大难题。
它可以由细菌、真菌或其他细胞类型的污染引起。
细胞污染会影响实验结果的准确性，并可能导致细胞系的丢失。
为了解决这个问题，我们可以采取以下措施：（1）经常检查细胞培养器具和培养基，确保其无菌；（2）使用抗生素或抗黴剂对培养基进行预处理，以减少污染的风险；（3）定期进行污染检测，例如细胞培养液和工作区的表面。
2. 细胞凋亡细胞凋亡是正常细胞生命周期的一部分，但在细胞培养中，过多的细胞凋亡会导致实验结果的误差。
为了减少细胞凋亡的发生，我们可以考虑以下措施：（1）优化培养条件，包括温度、CO2浓度和培养基配方等；（2）定期检查细胞形态和健康状况，及时处理出现凋亡现象的细胞；（3）使用细胞凋亡检测工具，如Annexin V-FITC/PI染色法，来评估细胞凋亡水平。
3. 细胞失活细胞失活现象在细胞培养中常常发生，可能是由于细胞老化、无营养补充或培养条件不佳等原因引起。
为了避免细胞失活的发生，我们可以尝试以下方法：（1）及时更换培养基，确保细胞获得充足的营养物质；（2）避免过度培养，及时传代细胞；（3）定期鉴定细胞的纯度和活力，并确保培养条件适当；（4）尝试使用细胞增殖激素或生长因子来促进细胞的增殖和存活。
细胞培养中的常见问题并不局限于上述三个，还有其他一些问题，例如细胞出现突变、细胞凝固等。
针对这些问题，我们可以进一步深入研究并寻找解决方法。
同时，注意维持实验室的清洁和规范操作也是解决这些问题的关键。
细胞培养在生命科学研究中发挥着重要作用。
了解并解决细胞培养中的常见问题，有助于提高实验结果的准确性和可重复性。
通过合理的实验设计、严谨的操作和科学的方法选择，我们可以克服这些问题，为细胞培养研究的进展做出贡献。
流式细胞术实验中的常见问题及其解决方法一、细胞无法标记1．确保所有的抗体都按照厂商的说明书正确存储。
2．确保商品化抗体没有超过有效期。
3．确保已正确加入足量的抗体。
4．确保抗体已连接荧光素。
如果未连接荧光素，需加入连接有荧光素的二抗。
5．确保二抗是好的，也就是说二抗曾经能与另外的一抗成功结合。
6．确保使用了正确的二抗，就是说二抗能够识别你的一抗。
如果使用的是PE或APC荧光素的抗体，确保该抗体未被冰冻过。
你要检测的组织上是否表达该抗原？可查看相关文献了解该抗原的表达情况，或者同时做一个阳性对照。
抗体是否能识别检测物种的抗原位点？可检查抗体的交叉反应列表，看看抗体是否适用于你要检测的物种标本。
不是所有的抗体都能够检测所有物种相应抗原。
7．确保使用正确的激光来激发荧光素，并使用了正确的通道来检测该荧光。
二、PE抗体无法标记，而FITC抗体的结果却很好1．PE荧光素可能冰冻过。
如果冰冻过，建议另外买一管新的抗体。
2．多聚甲醛（PFA）可能会导致此问题。
PFA降解后可释放出甲醇，从而影响染色。
所以切记PFA尽可能新鲜配制，或者细胞尽可能不要固定，染完色就立即检测。
三、非特异性染色1．非特异性染色可能是由于自发荧光。
解决方法：用一管只加细胞不加抗体的空白管，查看细胞自发荧光水平。
某些细胞可表达低亲和力的Fc受体CD16/CD32，这种受体可通过Fc片段结合大多数抗体。
对于小鼠细胞，可使用SeroBlock FcR阻断该位点。
2．非特异性染色也可能是由于二抗引起，建议选择一种只与一抗反应、却不会与检测组织发生交叉反应的二抗。
确保洗涤充分。
3．小心滴定抗体。
降低抗体浓度可减少非特异性染色。
四、荧光强度弱1．荧光弱可能是由于抗体过度稀释。
因此使用前通过正确滴定抗体，以确保抗体浓度适当。
2．直标时，荧光弱也可能是由于前带现象引起（概念见表格后解释），因此，小心正确滴定抗体很有必要。
3．荧光弱可能由于细胞数量过多。
细胞因子溶解方法
PeproTech细胞因子中不含载体蛋白（Carrier Protein）或其他添加剂（如BSA、HAS或蔗糖等），并且通常以最少量的盐来进行冻干处理，因此微量的细胞因子在冻干过程中会沉积于管内，形成很薄或不可见的蛋白层。
所以我们建议在收到产品后，务必在开盖前先离心，使粘在管盖或管壁上的蛋白聚集于管底（此时能否见到白色沉淀均属正常现象）。
1．离心：高速离心 (10, 000 rpm) 20-30 秒，或低速离心 (2, 000 rpm) 5 分钟。
2．溶解（Reconstitution）：用去离子水或其它缓冲液（根据说明书要求进行选择）溶解至说明书要求的浓度 (一般为 0.1-1.0 mg/mL，如10ug的产品，需用10uL-100uL的去离子水或缓冲液溶解)。
溶解时不可振荡，避免因化学键的断裂造成蛋白失活，可加入适当的溶剂轻摇并静置一段时间，待细胞因子完全溶解后使用。
溶剂的选择：
1）要求用去离子水溶解的产品，务必不可用盐溶液，避免过高的盐浓度造成蛋白不可逆的析出；
2) 要求用盐溶液溶解的产品，请依照说明书上的浓度，同样也是为了避免过高的盐浓度。
3．分装和贮存（Aliquot and Storage）：蛋白溶解后可根据自己的实验需要进一步稀释成工作液，稀释可用RPMI 1640、DMEM或PBS等溶液，其中最好含有5-10%的FCS （小牛或胎牛血清）或0.5 %的BSA（牛血清白蛋白）来稳定蛋白。
工作液在4℃可保存1周，如需长期保存，则需分装冻存于-20℃ （注意：不可冻存于-80℃）。
分装时每管中工作液的体积最好是一次实验的用量，以实现每次实验用完一只工作液，避免反复冻融引起蛋白活性的降低。
我们知道，PeproTech的所有细胞因子和蛋白均为冻干粉，这使得运输非常便捷，只要常温即可。
而且，细胞因子和蛋白冻干粉非常稳定，在-20o C或-80o C条件下可保存数年。
冻干粉在使用前需进行溶解，然后以液体形式加到培养体系或注射入动物体内。
溶解步骤非常关键，因溶解不好会导致细胞因子或蛋白的失活，这也是很多用户在实际使用中经常遇到的问题。
那么，应该如何进行正确的溶解呢？下面我们以Recombinant Human IL-4 （重组人IL-4，产品编号：200-04）的说明书为例，对细胞因子或蛋白的溶解方法进行详细的阐述。
拿到重组人IL-4的说明书后，您会发现有一段关于Reconstitution（重悬）的叙述，这段内容含有溶解相关的所有信息。
1. Centrifuge the vial prior to opening第1步：开盖前离心试剂管PeproT ech的细胞因子或蛋白冻干粉装盛在塑料管中，为无菌包装。
冻干粉在运输过程中可能会因颠簸而漂散并粘贴于管壁或管盖上，所以在打开塑料瓶盖前，需将冻干粉通过离心收集到管底，以便用很小体积的液体即可将冻干粉完全溶解。
有很多用户会问一个问题，即应该用多少转速、多长时间离心试剂管，才能达到良好的收集效果？答：有些小型高速离心机（多为进口品牌）的面板上有一个Spin键，按了此键后，离心机会自动快速上升到其最大速度（10000rpm或12000rpm），上升到最高点后速度即刻下降，直至停止旋转，整个过程大约30s。
这个Spin键足以很好的将细胞因子或蛋白收集到管底。
但有些实验室没有这样的高速离心机，只有最高转速为4000-4500rpm的离心机。
这种情况下，需3000-3500rpm离心5min，也能达到类似的效果。
2. Reconstitute in water to a concentration of 0.1-1.0 mg/ml. Do not vortex.第2步：用无菌水重悬至0.1-1.0 mg/ml，不可振荡。
细胞因子检测试剂盒的优势与局限性分析细胞因子是生物体内参与细胞间信号传递的重要蛋白质分子，它们在细胞增殖、分化、免疫调节以及炎症等许多生物过程中发挥着关键的作用。
为了检测和分析细胞因子的水平和功能，科研工作者们开发了各种细胞因子检测试剂盒。
本文将重点讨论细胞因子检测试剂盒的优势与局限性，旨在全面了解这一技术的应用前景和限制。
细胞因子检测试剂盒的优势：1. 批量分析能力：细胞因子检测试剂盒能够一次性检测多个细胞因子，大大提高了工作效率。
相比传统的单个分析方法如ELISA，细胞因子检测试剂盒将多个指标结合在一个试剂盒中，可以同时检测多个细胞因子的水平。
这种批量分析能力可以大大缩短实验时间，并且能够在较短的时间内提供更全面的数据信息。
2. 精确度高：细胞因子检测试剂盒采用高灵敏度的检测方法，能够准确地测量细胞因子的浓度。
这些方法包括免疫层析、荧光素酶标记方法等，能够检测到非常低浓度的细胞因子，提高了实验结果的可靠性和准确性。
3. 多样性：目前市场上有各种各样的细胞因子检测试剂盒可供选择，覆盖了大部分常见的细胞因子。
无论是免疫调节因子、炎症因子还是生长因子等，细胞因子检测试剂盒都能提供全面的测量。
4. 便携性：一些细胞因子检测试剂盒已经实现了便携化，方便在实验室之外使用。
这种便携化的设计让研究人员能够在野外、动物实验中等需要移动的场合进行细胞因子检测。
细胞因子检测试剂盒的局限性：1. 样品处理要求严格：细胞因子检测试剂盒通常要求样品的预处理，包括离心、过滤等操作，这可能会增加实验的复杂性和操作的技术要求。
样品处理不当可能会对实验结果产生影响，因此需要研究人员具备一定的实验经验。
2. 有些细胞因子难以检测：虽然现在的细胞因子检测试剂盒已经能够检测许多常见的细胞因子，但仍有一些特定的细胞因子难以检测。
这些细胞因子可能具有低浓度、结构复杂或者其他困难的特点，需要更高水平的技术和更敏感的检测方法才能进行分析。
3. 费用较高：由于细胞因子检测试剂盒的设计和技术较为复杂，因此价格通常较高。
Peprotech重组细胞因子和蛋白-常见问题解答(FAQ)1．PeproTech细胞因子和蛋白产品的稳定性如何？答：除非在产品说明书中特别注明，PeproTech的所有产品均为冻干粉，它们在室温条件下非常稳定(至少1个月)。
尽管如此，我们还是建议您在收到我们的产品后保存于-20oC，以确保蛋白100%的活性。
对于大多数蛋白，重悬后在4oC仅能短期保存(约1周)。
如想长期保存，请先配制成稀释液(其中必须含有载体蛋白，如0.1% BSA，5%HSA，或10% FBS)，然后分装冻存于-20oC或-80oC。
一定要避免反复冻融，因每次冻融均会引起蛋白的部分失活。
2．为什么有时在管中看不到细胞因子或蛋白的冻干粉？答：与市场上的许多蛋白产品不同，PeproTech的产品中均不含载体蛋白或其它添加物(如牛血清白蛋白(BSA)，人血清白蛋白(HSA)和蔗糖等，并且是以最低含盐量的溶液进行冻干的，因此冻干后常常不能形成白色网架结构，而是微量的蛋白在冻干过程中沉积在管内，形成很薄或肉眼不可见的透明蛋白层。
打开管盖前，我们建议您在小离心机中快速离心20-30秒，使附着在管盖或管壁上的蛋白聚集于管底。
我们的质控步骤保证每管中所含的蛋白量准确无误，虽然有时您无法看到蛋白粉末，但管中的蛋白含量仍是非常精确的。
3．ED50和units/mg之间有何关联？答： ED50为半数有效浓度，其定义是可诱导50%最大反应的细胞因子浓度，这种活性表示法仅适用于剂量反应曲线呈S形的细胞因子。
其实，可以将ED50的值接理解为1unit。
如某种细胞因子或蛋白的ED50为1ng/ml，那么1ng/ml即可看作是1unit。
那么我们也不难理解，1mg(1x106ng) 该细胞因子或蛋白中应含1x106/1= 106units. ED50(ng/ml)转化为units/mg的公式如下：4．如何确定细胞因子的种属交叉活性？答：1) 除少数例外，大多数人类细胞因子对小鼠细胞均有活性。
2) 许多小鼠细胞因子也可作用于人类细胞，但比活性可能低于对应的人类细胞因子。
3) IL-7等为数不多的人类细胞因子作用于小鼠细胞时比对应的小鼠细胞因子活性更强。
4) 干扰素，GM-CSF, IL-3和IL-4等细胞因子种属特异，对非同源细胞几乎没有活性。
5) 相反，成纤维细胞生长因子(FGFs)和神经营养素(neurotrophins)高度保守，在不同动物种属细胞上均具有很好的活性。
当然，仅凭以上规律无法判断许多其它细胞因子的交叉反应活性。
如您在这方面存在疑问，请与PeproTech中国代表处联系，电话：*************，Email：***********************，我们会给您准确的答复。
5．到底什么是无动物成分(Animal-Free)的重组蛋白？答：诚然，PeproTech生产的重组蛋白均是人或小鼠和大鼠的，又怎么说成是Animal-Free，即无动物成分的呢？真正的原因是：这里的Animal-Free是指在表达人、小鼠或大鼠的重组蛋白的过程中未使用任何动物来源的材料，而不是指被表达的重组蛋白是Animal-Free的。
我们知道，重组蛋白通常是用大肠杆菌表达的，而大肠杆菌的培养基中需要添加胰蛋白胨(Trypton)等动物来源的组分，这些组分不可避免的在随后表达出来的重组蛋白中掺入诸多不明的动物成分。
虽然最后纯化出来的重组蛋白的纯度可达98%或99%，但另外1%中很可能含有来自胰蛋白胨的其它动物成分，这些动物成分虽然含量极微，但可能在重组蛋白应用于人体或动物时，将其中所含动物病原体(如疯牛病病毒及其它未知病原体)传染给人和动物。
而且，这些动物成分中的异源蛋白也会引起人和动物的异体排斥或过敏反应。
因此，当重组蛋白在应用过程中可能接触到人体或动物体时(如细胞治疗和动物体内实验等)，请尽量选用Animal-Free的重组蛋白。
PeproTech的无动物成分重组蛋白是在独立的完全无动物成分的生产车间中生产出来的，同时生产过程中不会使用到胰蛋白胨等任何含动物成分的培养基或试剂，因此可保证最终的重组蛋白中不含任何动物成分，非常适合于临床前试验和动物研究。
PeproTech的无动物成分产品的产品编号均以AF为前缀。
PeproTech现已有44种无动物成分的人、小鼠和大鼠重组蛋白，并在不断快速增加。
而且有些常用的细胞因子，如人EGF(表皮生长因子)已经完全采用无动物成分的生产方式，即不再提供含动物成分的人EGF。
PeproTech细胞因子和重组蛋白溶解必读（一）我们知道，PeproTech的所有细胞因子和蛋白均为冻干粉，这使得运输非常便捷，只要常温即可。
而且，细胞因子和蛋白冻干粉非常稳定，在-20o C或-80o C条件下可保存数年。
冻干粉在使用前需进行溶解，然后以液体形式加到培养体系或注射入动物体内。
溶解步骤非常关键，因溶解不好会导致细胞因子或蛋白的失活，这也是很多用户在实际使用中经常遇到的问题。
那么，应该如何进行正确的溶解呢？下面我们以Recombinant Human IL-4 (重组人IL-4，产品编号：200-04)的说明书为例，对细胞因子或蛋白的溶解方法进行详细的阐述。
拿到重组人IL-4的说明书后，您会发现有一段关于Reconstitution(重悬)的叙述，这段内容含有溶解相关的所有信息。
1. Centrifuge the vial prior to opening第1步：开盖前离心试剂管PeproTech的细胞因子或蛋白冻干粉装盛在塑料管中，为无菌包装。
冻干粉在运输过程中可能会因颠簸而漂散并粘贴于管壁或管盖上，所以在打开塑料瓶盖前，需将冻干粉通过离心收集到管底，以便用很小体积的液体即可将冻干粉完全溶解。
有很多用户会问一个问题，即应该用多少转速、多长时间离心试剂管，才能达到良好的收集效果？答：有些小型高速离心机(多为进口品牌)的面板上有一个Spin键，按了此键后，离心机会自动快速上升到其最大速度(10000rpm或12000rpm)，上升到最高点后速度即刻下降，直至停止旋转，整个过程大约30s。
这个Spin键足以很好的将细胞因子或蛋白收集到管底。
但有些实验室没有这样的高速离心机，只有最高转速为4000-4500rpm的离心机。
这种情况下，需3000-3500rpm离心5min，也能达到类似的效果。
2. Reconstitute in water to a concentration of 0.1-1.0 mg/ml. Do notvortex.第2步：用无菌水重悬至0.1-1.0 mg/ml，不可振荡。
这个步骤即为溶解步骤，非常重要。
1) 一定要用推荐的溶液重悬(或溶解)冻干粉用于溶解细胞因子或蛋白的溶液千差万别。
此例中的重组人IL-4需用水溶解，而重组人IL-2 (产品编号：200-02)则需用100mM Acetic Acid (醋酸)溶解，重组人TGF-beta1(产品编号：100-21)需用10mMCitric Acid (柠檬酸)，pH3.0溶解，重组人FGF-basic(产品编号：100-18B)需用5mMTris，pH7.6溶解，重组人FGF-10(产品编号：100-26)需用5mMSodium Phosphate(磷酸钠)，pH7.4溶解，重组IL-13(产品编号：200-13)需用20mMMHCl溶解。
(注：即使同一重组细胞因子或蛋白，不同批次的溶解方法也可能有所不同，因此上面的叙述仅供参考。
具体应该如何溶解应以相应批次的官方说明书为准)。
后续的文章中将对各种溶解液的配制方法进行详细的阐述，望继续关注。
经常有用户会问，为什么会有这么多种溶解方法？答：我们知道，蛋白的溶解性与很多因素有关，其中比较重要的是pH值和离子强度。
PeproTech的细胞因子或重组蛋白在出厂前均经严格测试，说明上所标明的溶解液是能够将该细胞因子或重组蛋白完全溶解的液体。
如果您所用的溶解液的pH值和离子强度与说明书中所标明的不符，很多时候会造成细胞因子或重组蛋白不能完全溶解或者根本无法溶解，这样所配得的细胞因子或重组蛋白必然活性不够或丧失。
有不少用户没注意说明书上的描述，而是根据习惯，直接用PBS或培养液(1640或DMEM等)等溶解细胞因子或蛋白的冻干粉。
这样做可以吗？答：有时可以，要看具体情况。
PeproTech的大多数细胞因子或蛋白冻干粉的溶解液不是PBS，此时千万不能用PBS或培养液直接来溶解，具体原因在上面已经叙述过。
而有部分细胞因子，如重组人KGF(产品编号：100-19)和重组人FGF-23(产品编号：100-52)等，说明书上的溶解液即为1x PBS，此时用PBS溶解完全没问题，那么用培养液溶解也是可以的，不过最好还是用先用PBS溶解，然后再用培养液稀释。
2) 一定要溶解到指定的浓度。
蛋白在一定的浓度范围内可以保持良好的稳定性，这个范围就是说明书上所标明的浓度范围，该例为0.1-1.0mg/ml。
这个浓度范围对于不同的细胞因子或重组蛋白是不同的。
如重组人FGF-6(产品编号：100-30)为0.5-1.0mg/ml，而重组人ActivinB(产品编号：120-15)则一定要是0.5mg/ml。
高于或低于该浓度范围会有什么问题呢？答：首先，细胞因子或蛋白会不稳定，即很容易出现活性下降的现象。
其次，高于这个浓度范围，可能会超过该蛋白的最大溶解浓度，即蛋白无法完全溶解。
再者，高于或低于该浓度范围，蛋白可能会出现聚集(aggregation)，最终结果还是部分蛋白未溶解，导致蛋白活性的减弱。
3) 一定不能振荡(vortex)。
这里所说的振荡是指用涡旋仪进行快速振荡。
有用户会问，若想保证溶解液与冻干粉充分混匀，以实现细胞因子或重组蛋白的完全溶解，该怎么办呢？答：多数细胞因子或重组蛋白的冻干粉是非常容易溶解的，一般我们用移液枪的枪头轻吹几下，即可使细胞因子或重组蛋白完全溶解。
对于不易溶解的细胞因子或蛋白，PeproTech会在说明书中进行备注(Note)。
如在重组人IL-13(产品编号：200-13)的说明书中您会看到：Slow todissolve (缓慢溶解)，在重组人IL-11(产品编号：200-11)的说明中会看到： Thissolution is slow to dissolve.(该溶液溶解缓慢)。
这种情况下，您最好能将要溶解的细胞因子或重组蛋白放在水平摇床(shaker)上低速摇一段时间，促使细胞因子或重组蛋白完全溶解。
有些蛋白，如重组人IL-13 Variant (产品编号：200-13A)虽然难溶，但却不需用摇床来加速溶解。
其说明书上的备注为：Allowthe reconstituted vial to sit at 4oC for at > 2 hours before use. (将重悬液在4oC静置2小时以上)3. This solution can be stored at 2-8o C for up to 1week.第3步：该重悬液在2-8o C最长可保存1周。
