Imageproplus使用指南.

分析测量图象软件Imagepro-Plus教程一、入门Imageproplus（IPP）的主要用途是分析测量图象。

本人使用该程序进行生物图象分析有一段时间，写此帖的主要目的还是与大家交流使用心得，并总结一下使用方法。

如果你是刚接触IPP，最好先从本帖看起，并同时打开你电脑上的IPP程序照着操作。

学会一个软件需要花一段时间的，两分钟不可能学会。

两小时也太短。

但我相信，照着我这几个帖子作下来，至少是可以用IPP干一点事情了。

打开IPP后的界面是这样的，该从何处下手呢？既然是处理图片，当然是先要打开一张要处理的图片嘛这张照片中的黄色部分是免疫组化染色的阳性表达成分。

处理目标是通过测量图片中黄色部分的"黄"度来反映相应蛋白表达的的“量”。

对该图片进行观察，可以看到图片中主要有三种主要颜色，一是染成蓝色的细胞核，二是呈现出黄色的胞浆，三是细胞间的空隙区域，所以首先要把图片中呈现黄色的区域给挑选出来，这部分区域是我们最感兴趣的地方，叫作AOI（area of interest）。

AOI是IPP中最有用最重要的概念。

如何能够准确地选取AOI就是使用IPP的关键操作。

一旦准确地选取了AOI，下面的测量分析就好办了。

对不同的图片，需灵活地使用各种适当的AOI工具，就这张图片来说，AOI是黄色区域，因此用颜色分类的AOI工具是最有效的。

点击measure---count/size,弹出分类测量窗口在窗口中选中manual，再点击select color，弹出颜色选择窗口segmentation，这个工具是IPP最有特色的颜色选取工具之一。

用好这个工具是使用IPP的要点。

对于目标颜色鲜明的图片，用吸管工具是最简单的。

点一下吸管图标，在目标区域点一下，就可以选中该点的颜色，当然一下是不可能完全选中所需要指定的全部区域，可以在未选中的地方接着再点，这样多次选取，直到把想选中的区域全部选中为止。

在这张示例图中，选中的蓝色细胞核部分被标上了红色。

Image pro plus 教程 1.打开图片:i.i 打开软件 双击图标，弹出窗口进入软件，会弹出:Macro PlayerMacros ：S ar o chr on e &出CiuiitSmillJZslls MeasureSt&in 三CountAndClassifyM«&siur»Ir cnPh 陌全 EThraughfocusS e queue eM ®管Au t or a. di * graphSpr a cJc» tC ountD em oD^zciri pti (D«monstrati.Qn (naciras'L QPP旨Jv* Stop for ii£电厂 rsspo0 Shew g St ur tuj^Shftw Ovsrvi 旦吨 "■*■ ■■■■! ■■■■ ■■■■ ■■ ■■ ■*■ ■ ■■■«■■■■ IKI■■■■：■■Er^wss... F 如直接叉掉。

1.2打开图片点击工具栏第一的图标" ope n docume nt点击0K 就行了。

L —a-」选择图片:i£-n F S S-2.设置标尺2.1设置标尺点击” Measure'。

Calibration（标度）f Spatial ,弹出设置标尺的对话框（如下图）Spatial Calibrati on 。

2.2给标尺命名点击对话框右下角"From resolution ”，见上图，将标尺命名为所选图片的名称，也可以点击“Name”右边的下拉箭头（见上图），选择已有的标尺（加入你的SEM图是5W倍的，而你之前处理过5W倍的图片，建立过5W倍的标尺，那么你就可以在下拉菜单里直接找出那个标尺）Sp刖id O卜疝阳,■汀if2.3设置标尺长度点击"Image”，出现一个白色的标尺，见下图，和" Scali ng”对话框，在"Scali ng"对话框内输入1 （对应图片的标尺是1um，如果你的图片标尺是100nm的话，此处应输入100）sJEr■■LG . DkV IiE*10/11/201511311:20LO.orv LBD鼠标右键点击，将标尺拖到图片标尺的位置， 见下图。

Image pro plus 教程1. 打开图片：打开软件双击图标，弹出窗口点击OK就行了。

进入软件，会弹出：直接叉掉。

打开图片点击工具栏第一的图标“open document”选择图片：界面变成这样：↓2. 设置标尺设置标尺点击”Measure”→Calibration(标度)→Spatial，弹出设置标尺的对话框（如下图）Spatial Calibration。

给标尺命名点击对话框右下角“From resolution”，见上图，将标尺命名为所选图片的名称，也可以点击“Name”右边的下拉箭头（见上图），选择已有的标尺（加入你的SEM图是5W倍的，而你之前处理过5W倍的图片，建立过5W倍的标尺，那么你就可以在下拉菜单里直接找出那个标尺）设置标尺长度点击“Image”，出现一个白色的标尺，见下图，和“Scaling”对话框，在“Scaling”对话框内输入1（对应图片的标尺是1um，如果你的图片标尺是100nm的话，此处应输入100）鼠标右键点击，将标尺拖到图片标尺的位置，见下图。

并调整标尺大小，使之与图片标尺一样大小。

在“Scaling”对话框内点击“OK”。

回到“Spatial Calibration”对话框。

设置标尺单位下面要设置标尺的单位。

因为我们选择的图片标尺是1um，这里我们要选择um为单位。

点击“Spatial Calibration”对话框里的“Unit”下拉箭头，出现很多单位，其中um和nm是我们常用的。

如果你的标尺单位是nm，这里就要选择nm。

如下图所示：将标尺应用到图片上以上，我们设置好了标尺的长度和标尺单位，下面我们将标尺应用到我们的图片上面：在“Spatial Calibration”对话框点击“Apply”，再点击“Mark”，出现“Spatial Calibration Marker”对话框。

如下图：Style：表示标尺样式，我一般用第一个。

Marker length：标尺长度，因为图片标尺是1um，刚才我们设置的标尺长度也是1um，所以这里标尺长度为1。

用Image-Pro Plus数细胞，自己总结的。

方法一：手工标点计数。

Measure/measurements，点measurements面板features工具第一列第二个create point feature，在图片窗口点选即可。

点软件主菜单下快捷工具按纽第二行那个像照相机的按纽（snap picture of image with measurement overlays）可以将标记了的图片以快照方式另存。

方法二：逐一定义AOI（area of interest）法。

点快捷工具按纽第一行13个（irregular AOI），弹出Magic ward或Trace，两者可互相切换。

Magic ward下，鼠标在图片窗口变成魔术棒，点击可大致沿细胞边缘选中。

再点快捷工具按纽第一行14个（Multiple AOI），选Add，再用魔术棒点下一个细胞，再Add，依次重复。

Measure/count/size，弹出的count/size面板，菜单栏点edit/convert AOIs to Objects，即在count/size面板上total count显示计数，图片同时显示计数标记。

这种方法的好处是选中的细胞可以用来测量，测量结果可以输出到excel作统计。

方法三：定义class，自动计数法。

Measure/count/size，弹出count/size面板，Intensity range selection区域内有三个选择：automatic bright objects和automatic dark objects分别定义灰度在128-255和0-128的对象，选中后点count即自动计数。

这多用于荧光照片。

点delete恢复到计数前。

更常用的是第一种选择：Manual，点select colors，弹出segmentation面板，选color cube based页，用吸管工具选取细胞色彩，相近色彩的细胞即自动被选中。

用Image-Pro Plus数细胞,自己总结的。

方法一:手工标点计数。

Measure/measurements,点measurements面板features工具第一列第二个create point feature,在图片窗口点选即可。

点软件主菜单下快捷工具按纽第二行那个像照相机的按纽(snap picture of image with measurement overlays)可以将标记了的图片以快照方式另存。

方法二:逐一定义AOI(area of interest)法。

点快捷工具按纽第一行13个(irregular AOI),弹出Magic ward或Trace,两者可互相切换。

Magic ward下,鼠标在图片窗口变成魔术棒,点击可大致沿细胞边缘选中。

再点快捷工具按纽第一行14个(Multiple AOI),选Add,再用魔术棒点下一个细胞,再Add,依次重复。

Measure/count/size,弹出的count/size面板,菜单栏点edit/convert AOIs to Objects,即在count/size面板上total count显示计数,图片同时显示计数标记。

这种方法的好处是选中的细胞可以用来测量,测量结果可以输出到excel作统计。

方法三:定义class,自动计数法。

Measure/count/size,弹出count/size面板,Intensity range selection区域内有三个选择:automatic bright objects和automatic dark objects分别定义灰度在128-255和0-128的对象,选中后点count即自动计数。

这多用于荧光照片。

点delete恢复到计数前。

更常用的是第一种选择: Manual,点select colors,弹出segmentation面板,选color cube based页,用吸管工具选取细胞色彩,相近色彩的细胞即自动被选中。

Image pro plus 教程1. 打开图片：1.1 打开软件双击图标，弹出窗口点击OK就行了。

进入软件，会弹出：直接叉掉。

1.2 打开图片点击工具栏第一的图标“open document”选择图片：界面变成这样：↓2. 设置标尺2.1 设置标尺点击”Measure”→Calibration(标度)→Spatial，弹出设置标尺的对话框（如下图）Spatial Calibration。

2.2 给标尺命名点击对话框右下角“From resolution”，见上图，将标尺命名为所选图片的名称，也可以点击“Name”右边的下拉箭头（见上图），选择已有的标尺（加入你的SEM图是5W倍的，而你之前处理过5W倍的图片，建立过5W倍的标尺，那么你就可以在下拉菜单里直接找出那个标尺）2.3 设置标尺长度点击“Image”，出现一个白色的标尺，见下图，和“Scaling”对话框，在“Scaling”对话框输入1（对应图片的标尺是1um，如果你的图片标尺是100nm的话，此处应输入100）鼠标右键点击，将标尺拖到图片标尺的位置，见下图。

并调整标尺大小，使之与图片标尺一样大小。

在“Scaling”对话框点击“OK”。

回到“Spatial Calibration”对话框。

2.4 设置标尺单位下面要设置标尺的单位。

因为我们选择的图片标尺是1um，这里我们要选择um为单位。

点击“Spatial Calibration”对话框里的“Unit”下拉箭头，出现很多单位，其中um和nm 是我们常用的。

如果你的标尺单位是nm，这里就要选择nm。

如下图所示：2.5 将标尺应用到图片上以上，我们设置好了标尺的长度和标尺单位，下面我们将标尺应用到我们的图片上面：在“Spatial Calibration”对话框点击“Apply”，再点击“Mark”，出现“Spatial Calibration Marker”对话框。

如下图：Style：表示标尺样式，我一般用第一个。

Image pro plus 教程1. 打开图片：1.1 打开软件双击图标，弹出窗口点击OK就行了。

进入软件，会弹出：直接叉掉。

1.2 打开图片点击工具栏第一的图标“open document”选择图片：界面变成这样：↓2. 设置标尺2.1 设置标尺点击”Measure”→Calibration(标度)→Spatial，弹出设置标尺的对话框（如下图）SpatialCalibration。

2.2 给标尺命名点击对话框右下角“From resolution”，见上图，将标尺命名为所选图片的名称，也可以点击“Name”右边的下拉箭头（见上图），选择已有的标尺（加入你的SEM图是5W倍的，而你之前处理过5W倍的图片，建立过5W倍的标尺，那么你就可以在下拉菜单里直接找出那个标尺）2.3 设置标尺长度点击“Image”，出现一个白色的标尺，见下图，和“Scaling”对话框，在“Scaling”对话框内输入1（对应图片的标尺是1um，如果你的图片标尺是100nm的话，此处应输入100）鼠标右键点击，将标尺拖到图片标尺的位置，见下图。

并调整标尺大小，使之与图片标尺一样大小。

在“Scaling”对话框内点击“OK”。

回到“Spatial Calibration”对话框。

2.4 设置标尺单位下面要设置标尺的单位。

因为我们选择的图片标尺是1um，这里我们要选择um为单位。

点击“Spatial Calibration”对话框里的“Unit”下拉箭头，出现很多单位，其中um和nm 是我们常用的。

如果你的标尺单位是nm，这里就要选择nm。

如下图所示：2.5 将标尺应用到图片上以上，我们设置好了标尺的长度和标尺单位，下面我们将标尺应用到我们的图片上面：在“Spatial Calibration”对话框点击“Apply”，再点击“Mark”，出现“Spatial Calibration Marker”对话框。

如下图：Style：表示标尺样式，我一般用第一个。

ImageProPlus（IPP）软件教学
1.教学解决方向关键词：
金相组织、气孔率分析
2.具体教学：
2.1软件打开：
软件图标：
双击后，选择compelete，点击OK。

然后出现下图这个界面，点击Done，（这个没什么用，不用在意）
点击file选择自己的金相图片，如下图所示：
选择自己想统计的范围：
要了解一个这个软件的术语就是AOI（Area of interesting），即你感兴趣的地方。

如下图所示，我通常使用圆形，或者正方形。

规划好自己想统计的范围以后，点击下图所示按钮，count，即计算。

出现count/size 表格。

点击select colors
点击钢笔，选择气孔位置。

（由于是粗糙选择，可以放大以后精细的选一下）
随后点击close，关闭当前页面，回到count页面，点击count 按钮进行计算。

进行组织图片被识别：
点击Measure、select measerements
选择per Area，点击Measure
点击count界面中的View、Statistics
观察数据即可。