下载文档原格式
2015版药典无菌检查概述默克生命科学2016/04/28中国药典与国外药典的差别ChP2010USP38EP8.0ChP2015检验条件总体10000级、局部100级应在无菌条件下进行应在无菌条件下进行应在无菌条件下进行（B级背景下的A 级单向流洁净区域或隔离器）人员具备微生物专业知识，并经过无菌技术的培训经培训和认可经培训和认可具备微生物专业知识，并经过无菌技术的培训培养基培养条件与时间硫乙醇酸盐流体培养基30-35℃（20-25 ℃）改良马丁培养基23-28 ℃均培养14天接种后细菌培养2天、真菌培养3天硫乙醇酸盐流体培养基30-35℃胰酪大豆胨液体培养基20-25 ℃均培养不少于14天接种后培养均不少于4天硫乙醇酸盐流体培养基30-35℃胰酪大豆胨液体培养基20-25 ℃均培养不少于14天接种后培养均不少于7天硫乙醇酸盐流体培养基30-35℃胰酪大豆胨液体培养基20-25 ℃均培养不少于14天接种后培养均不少于7天培养基灵敏度检查与方法验证用菌株CMCC ATCC ATCC CMCC检验方法只要性状允许，应采用薄膜过滤法只要性状允许，应采用薄膜过滤法只要性状允许，应采用薄膜过滤法只要性状允许，应采用薄膜过滤法稀释剂与冲洗液1、0.1%蛋白胨水溶液2、pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液3、其他经验证过的溶液A. 0.1%蛋白胨水溶液D. A+1ml吐温80K.动物组织消化液+牛肉浸膏+吐温801、0.1%蛋白胨水溶液2、0.1%蛋白胨水溶液+0.1%（聚乙氧基乙醇、0.1%吐温80）3、十四烷酸异丙酯1、0.1%蛋白胨水溶液2、pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液3、其他经验证过的溶液结果判断与复试一次检出结果为准（设备及环境不符合要求、实验过程有可能引起污染的因素、阴性对照有菌生长、分离微生物可明确归因于无菌实验过程中所用的材料或技术错误造成的。
单倍量重试）2015版药典无菌检查法修订概况逐版发展提高的主要部分实验环境、设备的无菌保证；培养基品种及其适用性检查要求；检验数量、检验量的增加；检验方法和仪器发展；验证试验要求；培养时间保证受损微生物的生长；结果判断规定；取消复试、及重试的规定。
中国药典2015版无菌检查法与美、欧、日药典的差异分析与讨论潘友文（罗氏/基因泰克，美国南旧金山，94080）2016年07月29日摘要目的：分析中国药典2015版无菌检查法与美、欧、日药典无菌检查法的之间的差异性，为评价不同药典中无菌检查法的等效性提供参考。
方法：对无菌检查法的主要实验步骤和参数进行一对一比较，对有差异的步骤和参数进行科学论证和评价。
结果：中国药典2015版无菌检查法与美、欧、日药典无菌检查法的主要参数和步骤是一致的，但中国药典无菌检查法还需要做阳性对照和厌氧需氧菌的额外培养。
并且，中国药典用大肠埃希菌代替美、欧、日药典中的铜绿假单胞菌参与无菌检查法的适用性试验。
结论：各药典的无菌检查法是等效的。
在不影响方法等效性的前提下，中国药典2015版无菌检查法在阳性对照和培养方法上还可以进一步简化。
关键词:无菌检查法；中国药典；美国药典；欧洲药典；日本药典Gap Assessment and Discussion on Sterility Tests in Chinese Pharmacopoeia 2015, United States Pharmacopoeia, European Pharmacopoeia, and Japanese PharmacopoeiaYouwen Pan (Genentech, a Member of Roche, South San Francisco, USA 94080)Abstract Objective：Gap assessment and discussion on the sterility test methods in Chinese Pharmacopoeia 2015 edition (CP2015), United States Pharmacopoeia (USP), European Pharmacopoeia (EP), and Japanese Pharmacopoeia (JP). Method：The test procedures and key parameters in the sterility test methods in different pharmacopoeia were compared step by step and the differences were identified. The identified differences are scientifically evaluated for their impact to the equivalence of the methods. Result：The sterility test method in CP2015 is largely harmonized with that in USP, EP and JP except for a few differences. Positive control and extra incubation bacteria are required in CP2015 only, and Escherichia coli is used in method suitability test in CP2015 while Pseudomonas aeruginosa is used in USP/EP/JP. Conclusion：The Sterility Test Methods in CP2015, USP, EP, and JP are equivalent. The method in CP2015 could be simplified more without compromising the validity, accuracy and reliability of the method.Key words：sterility test；Chinese Pharmacopoeia 2015；United States Pharmacopoeia；European Pharmacopoeia； Japanese Pharmacopoeia无菌检查法是用于检查药典规定的无菌物品是否被微生物污染的检测方法。
四川乐至贵均卫生材料有限公司医疗器械产品无菌检测方法1.目的建立无菌检测标准规程，对灭菌后的医疗器械产品进行无菌检测，以确定灭菌的有效性。
2.范围本规程适用于本公司对医疗器械产品的无菌检测。
3.依据《中国药典》2015版4.设备、器皿、药品的准备4.1 设备的准备电子天平、干热灭菌箱、高压灭菌箱、洁净工作台、放大镜、移液枪、电热培养箱、霉菌培养箱、冰箱、斜口钳、接种环、酒精灯4.2 器皿的准备锥心瓶（500ml）、烧杯（1000ml）、试剂瓶（60ml）、量筒（50ml、1000ml）、培养皿（Ф90mm ×15mm）、斜口钳、玻璃棒。
4.3 药品的准备硫乙醇酸盐流体培养基、胰酪大豆胨液体培养基、纯化水、pH7.0 无菌氯化钠溶液。
5.器皿的清洗将所需的锥形瓶、烧杯、试剂瓶、培养皿、玻璃棒放入超声波清洗机中用纯化水清洗两次，每次15分钟，将清洗完的器皿在180℃条件下进行干热灭菌2小时。
6.取样按灭菌批次或者生产批次进行取样，随机抽取同一型号的产品4件作无菌检测样品7.培养基的制备7.1 硫乙醇酸盐流体培养基的制备取15g硫乙醇酸盐流体培养基和1000ml纯化水于烧杯中混合，加热至微沸（注意加热过程中要不断地搅拌，使其混合均匀）用棉花塞塞紧复用无尘布和绳子绑好后转移至高压灭菌锅内灭菌，灭菌温度为121℃，灭菌时间30分钟。
灭菌后摇均，冷却至45℃待用。
7.2 胰酪大豆胨液体培养基的制备取15g胰酪大豆胨和1000ml纯化水于烧杯中混合，操作方法同6.1。
8. 培养基灵敏度检查8.1 菌种的要求培养基灵敏度检查所用的菌株（金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌）传代次数不得超过5代。
8.2 菌液的制备接种金黄色葡萄球菌的新鲜培养物至硫乙醇酸盐流体培养基上，30-35℃培养24小时；接种枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至胰酪大豆胨液体培养基上，20-25℃培养24小时。
将上述经24小时培养后的培养物用0.9﹪无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数小于100cfu(菌落形成单位)的菌悬液。
中国药典(2015年版)无菌检查法是用于检查药典要求无菌的药品、医疗器具、原料、辅料及其他品种是否无菌的一种方法。
如果供试品符合无菌检查法的规定，仅表明了供试品在该检验条件下未发现微生物污染。
无菌检查法包括薄膜过滤法和直接接种法。
只要供试品性质允许，应采用薄膜过滤法。
薄膜过滤法一般应采用封闭式薄膜过滤器，无菌检查用的滤膜孔径应不大于0.45微米，直径约为50mm。
根据供试品及其溶剂的特性选择滤膜材质，使用时，应保证滤膜在过滤前后的完整性。
直接接种法适用于无法用薄膜过滤法进行无菌检查的供试品，即取规定量供试品分别等量接种至硫乙醇酸盐流体培养基和胰酪大豆胨液体培养基中。
1无菌试验操作规程-2015版中国药典1.目的：制定无菌检验标准操作规程，确保检验操作正确。
2.范围：本标准适用于本公司成品无菌检验操作。
3.职责：生产部负责提供待检验产品，质量部负责检验，出具检验报告。
4.内容：4.1.标准依据：《中国药典》2015年版通则（1101）无菌检查法。
4.2.简述：无菌检查方法系用于检查无菌医疗器械是否无菌的一种方法。
若供试品符合无菌检查法的规定，仅表明了供试品在该检验条件下未发现微生物污染。
4.3.环境要求：该项检查应在无菌条件下进行。
其全过程必须严格遵守无菌操作。
防止微生物污染，但所采取的措施不得影响供试品中微生物的检出。
操作前环境洁净度应经验证。
日常检验需对试验环境进行监控。
4.4.方法验证：进行该项检查前应进行方法适用性试验。
4.5.人员要求：无菌检查人员必须具备微生物专业知识，并经过无菌技术培训。
4.6.检验数量及检验量：4.6.1.接种每种培养基所需的最少检验数量 (表1)供试品批产量N(个）接种每种培养基的最少检验数量医疗器具≤100100<N≤500>500 10%或4件（取较多者）10件2%或20件（取较少者）4.6.2.检验量（表3）供试品供试品装量每支供试品接入每种培养基的最少量医疗器具外科用敷料棉花及纱布缝合线、一次性医用材料带导管的一次性医疗器具其他医疗器具取100mg或1cm×3cm整个材料二分之一内表面整个器具（切碎或拆散开）4.7.仪器用具：垂直层流超净工作台、生化培养箱、电热恒温水浴箱、显微镜、手提灭菌器、离心机、双碟、试管、三角瓶、刻度离心管、注射器（针头）、剪刀、镊子、注射器盒、75％酒精棉球、紫外光灯365nm、真空泵、一次性使用集菌培养器。
4.8.消毒剂配制：75％乙醇溶液（配制酒精棉球用）。
0.2％新洁尔灭溶液（配制消毒棉球用）。
2％来苏尔溶液（配制消毒棉球用）。
4.9.试剂及培养基的配制：4.9.1.0.1％蛋白胨水溶液：取蛋白胨1.0g，加水1000ml,微温使溶解，滤清，调节PH值至7.1±0.2，分装，灭菌。
无菌检查法-2015版中国药典无菌检查法系用于检查药典要求无菌的药品、生物制品、医疗器具、原料、辅料、及其他品种是否无菌的一种方法。
若供试品符合无菌检查法的规定,仅表明了供试品在该检验条件下未发现微生物污染。
无菌检查应在环境洁净度B 级背景下的局部A 级洁净度的单向流空气区域内或隔离系统中进行，其全过程应严格遵守无菌操作，防止微生物污染，防止污染的措施不得影响供试品中微生物的检出。
单向流空气区、工作台面及环境应定期按《医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法》的现行国家标准进行洁净度确认。
隔离系统应定期按相关的要求进行验证，其内部环境的洁净度须符合无菌检查的要求。
日常检验还需对试验环境进行监控。
无菌检查人员必须具备微生物专业知识，并经过无菌技术的培训。
培养基硫乙醇酸盐流体培养基主要用于厌氧菌的培养，也可用于需气菌培养；胰酪大豆胨液体培养基适用于真菌和需气菌的培养。
培养基的制备及培养条件培养基可按以下处方制备，亦可使用按该处方生产的符合规定的脱水培养基。
配制后应采用验证合格的灭菌程序灭菌。
制备好的培养基应保存在2～25℃、避光的环境，若保存于非密闭容器中，一般在3周内使用；若保存于密闭容器中，一般可在一年内使用。
1. 硫乙醇酸盐流体培养基酪胨 (胰酶水解) 15.0g 酵母浸出粉 5.0g葡萄糖 5.0g 氯化钠 2.5gL-胱氨酸 0.5g 新配制的 0.1% 刃天青溶液 1.0ml硫乙醇酸钠 0.5g 琼脂 0.75g(或硫乙醇酸) （ 0.3 ml) 纯化水 1000ml除葡萄糖和刃天青溶液外，取上述成分混合，微温溶解，调节pH 为弱碱性，煮沸，滤清，加入葡萄糖和刃天青溶液，摇匀，调节pH 值使灭菌后为7.1±0.2。
分装至适宜的容器中，其装量与容器高度的比例应符合培养结束后培2养基氧化层（粉红色）不超过培养基深度的1/2。
灭菌。
在供试品接种前，培养基氧化层的高度不得超过培养基深度的1/5，否则，须经100℃水浴加热至粉红色消失（不超过20 分钟），迅速冷却，只限加热一次，并防止被污染。
无菌检查操作规程1.目的建立无菌检查标准操作规程，确保检查结果准确、可靠。
2.使用范围本公司无菌产品的无菌检查3.职责质量部QC4.依据2015版《中国药典》通则1101GB/T 19973.2—2005(ISO11737—2：1998）《疗器械的灭菌微生物学方法第2部分:确认灭菌过程的无菌试验》GB/T 14233。
2-2005 《医用输液、输血、注射器具检验方法第2部分：生物学试验方法》5.内容5.1.无菌检查环境保障5.1.1.无菌检査的所有操作均需在严格控制微生物污染的环境下进行，即无菌检査应在环境洁净度10000级下的局部洁净度100级的单向流空气区域内或隔离系统中进行。
5.1.2.操作环境的无菌保障程度将直接影响无菌检查结果，为了保证无菌检查用洁净室（区）环境的稳定性，确保检查结果的可靠性，对洁净室（区）的环境定期监测并采取合理的措施保证洁净环境符合要求。
5.1.3.无菌检查全过程必须严格遵守无菌操作,防止微生物污染.5.1.4.洁净区的温度、湿度等参数必须符合相应洁净级别的要求.5.1.5.无菌检查操作还需要对检查环境进行监控，5.2.培养基、稀释液、缓冲液5.2.1.硫乙醇酸盐流体培养基,市售培养基干粉.除另有规定，接种后应置30～35℃培养.5.2.2.胰酪大豆胨液体培养基，市售培养基干粉。
接种后应置20~35℃培养. 5.2.3.中和或灭活用培养基，按上述硫乙醇酸盐流体培养基或胰酪大豆胨液体培养基的处方及制法，在培养基灭菌或使用前加入适宜的中和剂、灭活剂或表面活性剂，其用量同方法适用性试验.5.2.4.胰酪大豆胨琼脂培养基，市售培养基干粉。
5.2.5.沙氏葡萄糖液体培养基，市售培养基干粉。
5.2.6.沙式葡萄糖琼脂培养基，市售培养基干粉。
5.2.7.PH7.0氯化钠蛋白胨缓冲液，市售培养基干粉。
5.2.8.0.9％无菌氯化钠溶液.5.2.9.培养基使用性检查无菌检査用的硫乙醇酸盐流体培养基和胰酪大豆胨液体培养基等应符培养基的无菌性检査及灵敏度检査的要求。
2015年版《中国药典》无菌检查法解读杨晓莉;李辉;绳金房;钱维清;胡昌勤【摘要】目的解读2015年版《中国药典》无菌检查法的主要增修订情况.方法对比2015年版《中国药典》无菌检查法与2010年版《中国药典》无菌检查法的主要差异.结果 2015年版《中国药典》无菌检查法在检查内容、检查方法、培养体系及质量控制理念等方面都作了较大修订.结论 2015年版《中国药典》将无菌检查法完善成为更加科学并与国际接轨的检查方法.【期刊名称】《中国药业》【年(卷),期】2015(024)024【总页数】5页(P7-11)【关键词】无菌检查法;2015年版《中国药典》;无菌药品;培养体系;质量控制【作者】杨晓莉;李辉;绳金房;钱维清;胡昌勤【作者单位】陕西省食品药品检验所,陕西西安 710065;陕西省食品药品检验所,陕西西安 710065;陕西省食品药品检验所,陕西西安 710065;上海市食品药品检验所,上海 201203;中国食品药品检定研究院,北京 100050【正文语种】中文【中图分类】R954;R921.2无菌检查法是指用于检查药典要求无菌的药品、生物制品、医疗器具、原料、辅料及其他品种是否无菌的方法［1］，是药品微生物检查体系的重要组成部分，药品微生物是关系药品安全性的关键指标之一。
无菌药品的微生物污染是影响药品生产质量和引发临床不良事件的主要因素，近年来发生的“欣弗事件及刺五加事件”等严重药害事件都是无菌药品的微生物污染导致［2］。
目前，美国、欧盟、日本等国家或组织无菌检查法已协调一致［3］。
2010年版《中国药典》及之前版本收录的无菌检查法与国际通用的标准在检查理念、培养体系、方法要求等诸多方面有显著差异。
在国家药品安全规划与标准提高的目标下，2015年版《中国药典》借鉴国外药典先进技术经验，以新的控制理念为指导，结合我国国情对无菌检查法的检测范围及环境要求、培养体系、方法适用性、检查方法、偏差调查与过程控制等方面都做了较大修订，进一步完善了无菌检查法，修订后的无菌检查法正逐步与国际通用标准一致。
1.目的：制定无菌检验标准操作规程，确保检验操作正确。
2.范围：本标准适用于本公司成品无菌检验操作。
3.职责：生产部负责提供待检验产品，质量部负责检验，出具检验报告。
4.内容：4.1.标准依据：《中国药典》2015年版通则（1101）无菌检查法。
4.2.简述：无菌检查方法系用于检查无菌医疗器械是否无菌的一种方法。
若供试品符合无菌检查法的规定，仅表明了供试品在该检验条件下未发现微生物污染。
4.3.环境要求：该项检查应在无菌条件下进行。
其全过程必须严格遵守无菌操作。
防止微生物污染，但所采取的措施不得影响供试品中微生物的检出。
操作前环境洁净度应经验证。
日常检验需对试验环境进行监控。
4.4.方法验证：进行该项检查前应进行方法适用性试验。
4.5.人员要求：无菌检查人员必须具备微生物专业知识，并经过无菌技术培训。
4.6.检验数量及检验量：4.6.1.接种每种培养基所需的最少检验数量 (表1)供试品批产量N(个）接种每种培养基的最少检验数量医疗器具≤100100<N≤500>500 10%或4件（取较多者）10件2%或20件（取较少者）4.6.2.检验量（表3）供试品供试品装量每支供试品接入每种培养基的最少量医疗器具外科用敷料棉花及纱布缝合线、一次性医用材料带导管的一次性医疗器具其他医疗器具取100mg或1cm×3cm整个材料二分之一内表面整个器具（切碎或拆散开）4.7.仪器用具：垂直层流超净工作台、生化培养箱、电热恒温水浴箱、显微镜、手提灭菌器、离心机、双碟、试管、三角瓶、刻度离心管、注射器（针头）、剪刀、镊子、注射器盒、75％酒精棉球、紫外光灯365nm、真空泵、一次性使用集菌培养器。
4.8.消毒剂配制：75％乙醇溶液（配制酒精棉球用）。
0.2％新洁尔灭溶液（配制消毒棉球用）。
2％来苏尔溶液（配制消毒棉球用）。
4.9.试剂及培养基的配制：4.9.1.0.1％蛋白胨水溶液：取蛋白胨1.0g，加水1000ml,微温使溶解，滤清，调节PH值至7.1±0.2，分装，灭菌。
