山茱萸多糖对肺癌A549细胞凋亡的影响及机制
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山茱萸多糖能诱导 A 4 5 9细胞凋亡 ,
关键词 : 山茱萸多糖 ; 肺肿瘤 , 肺癌 ; 59细胞 ; A4 凋亡 ;uv i 白 Sri n蛋 v
中图 分 类 号 : 74 2 R 3 . 文 献 标 志 码 : A 文 章 编 号 :0 226 2 1 )30 4 -2 10 -6 X(0 2 0 - 60 0
察 细胞 的形态 变化 。
年 5月 ~2 1 0 1年 6月 , 们 观察 了 山茱 萸 多 糖 对 我 A4 59细胞 凋亡 的影 响 , 旨在为新 型抗 肿瘤 药 物 的开 发 提供理 论依 据 。
1 材 料与 方法
11 材 料 山茱 萸 多糖 ( 北 农 业 大 学 生 命 科 学 . 河
中药 山 茱 萸 为 山 茱 萸 科 植 物 山茱 萸 ( rcu Futs C mi干燥成 熟 的果实 , 医认 为其 有 补益 肝 肾 、 o ) 中 涩 精 固脱之 功效 j 山茱 萸多糖 是 山茱萸 中所 含 的 。
重要 化学 成 分 , 有 一 定 的 抗 肿瘤 活性 -] 0 9 具 6。2 0
院 提 供 , 用 苯 酚一硫 酸 法 测 定 多 糖 含 量 为 采 6 . 5 。试 验前 制 成 5 0 m / L的 溶 液 , 压 灭 8 9% 0 gm 高
菌 4℃保存 ) 。肺 癌 A 4 59细胞 ( 北大 学生 命科 学 河 院提供 ) 。胰 蛋 白酶 、 P I6 0培 养 基 ( IC R M 14 GB O公
山东 医药 2 1 0 2年第 5 2卷第 3期
山茱 萸 多糖 对肺 癌 A 4 59细胞 凋 亡 的 影 响及 机制
王 恩军 靳 , 神 刘 , 斌 周 艳芬 关 , , 宏。 ( 1河北 大学基础 医学院 , 北保定 0 10 ; 定 市急救 中心 ; 河 70 02保 3保定 市 第一 中心 医院)
L新鲜 培养液 及 2 L M T( L/ L 液 , 续 培 0 I 5I ) 继 - g
养 4h 然 后弃 上 清 , , 每孔 加 D S 5 z 震 荡 1 M O 10I . L, 0 mn在 酶联 免疫 检测 仪 上测 定 各 孔 40n i, 9 m处 的吸 光度值 ( A值 ) 同时 设 调 零 孔 ( 养 液 、 T 、 M— , 培 M fD s , 照孔 ( o)对 细胞 、 培养 液 、 T 、 MS , 组 设 4 M F D O) 每 个 复孔 , 算 山茱 萸 多 糖对 A 4 计 5 9细胞 增 殖 的抑 制 率 和 I ( C。抑制 A 4 59细胞生 长 5 %时 的浓度 ) 0 。 13 山茱 萸 多 糖 作 用 后 A 4 . 59细 胞 形 态 学 变 化 取对 数生 长期 A 4 59细 胞接 种 于 4 8孔 培 养板 内 , 培 养 2 , 别加 入 5 gm 4h分 0m / L的 山茱萸 多糖 , 同时设 相应 对照 组 , 培养 2 、87 于倒 置 显微 镜 下观 44 、2h后
摘要 : 目的
Hale Waihona Puke 探讨 山茱萸多糖对人肺 癌 A 4 59细胞凋亡作 用 的影 响及机制 。方法 收集对数 生长期 A 4 5 9细
胞, 加入终质量浓度分别为 2 、0 10mgm 5 5 、0 / L的山茱萸 多糖 2 , 0 分别 培养 2 、8 7 , T 4 4 、2h M F法测定细胞增殖 抑
司 ) 二 甲基 亚 砜 ( MS 、 甲基偶 氮 唑 盐 ( T) ; D O) 四 M1 r 均购 自 Sg a公 司 ; 抗 S rii( A T R Z公 i m 一 uv n S N A C U v
14 Srin蛋 白表达检 测 . uvv i
采用 免疫组 化 s 。 P法
抑制 , 细胞增殖抑制率呈明显的量效 、 时效关系 ; 倒置显微镜下观察到细胞凋亡的典 型改变 , 免疫 组化 s P法染色 显 示 Srv uv i i n表达降低 ,uvv S rin蛋 白的 I S随浓度增加呈明显下 降趋势 。结论 i H
其机制可能与下调 Srii uvv n表达有关 。
9 6孔 培养板 中 , 孔 10 , 每 8 培养 2 。加 入 终质 4h
量浓度分别为 2 、0 10m / L的山茱 萸多糖 2 55 、 gm 0 0
细胞 爬片 常规 消毒后 置于 6孔 培养 板 内。待 细胞密 度 达到 2X1 m , 种 于 6孔 培 养 板 中 , 孔 2 0/ L 接 每 mL 培养 2 , 4h后吸 弃培 养基 , 分别 加 入终 质 量 浓度 为 2 、0 10m / 55 、0 gmL的山茱 萸 多糖 , 养 4 ,B 培 8h P S 冲洗 ,% 多 聚 甲醛 固定 , 说 明 书进行 操 作 。结 果 4 按 判 定 :uv i 白主要 定 位 于胞 质 , Sri n蛋 v 阳性 产 物染 色 呈棕 黄色 颗 粒 , 照文 献 用 免 疫 组化 评 分 (H ) 参 I S 表示 , 用 双 盲 法 随机 选 择 5个 高 倍 镜 视 野 (0 采 40
制率和 山茱萸多糖的半抑制浓度 (C。 。倒置显微镜下观察 5 S m I,) 0m / L山茱萸多糖作用后 细胞形态变化 。免疫 组
化s P法检测 Sri n 白表达 , uv i 蛋 v 用免疫组化评分 (H ) I S 表示 。结 果 山茱 萸多糖作用 后 A 4 5 9细胞生 长受到 明显
司)兔二抗 、 ; 鼠二 抗 及 D B显 色 剂 (nioe A Ivrgn公 t
司) 。
12 山茱萸 多 糖 干预及 A 4 . 59细胞 增 殖抑 制率 、 半
抑制浓度 (C。 测定 I )
采用 M r法。收集对数生 T
长期 的 A 4 细胞 , 59 调整细胞密度( m ) 2 1 / L 分于 X0