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乙型肝炎病毒整合研究进展

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・　６３２　・　

・综　述・　山西医药杂志２０１３年６月第４２卷第６期上半月　Ｓｈａｎｘｉ　Ｍｅｄ　Ｊ，Ｊｕｎｅ　２０１３，Ｖｏ１．４２，Ｎｏ．６　ｔｈｅ　Ｆｉｒｓｔ　

乙型肝炎病毒整合研究进展　

武汉大学第一临床学院（４３００７１）　阮　鹏　龚作炯　

深圳市第三人民医院　周伯平　黄　健　

湖北医药学院附属人民医院　徐少勇　

乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）ＤＮＡ整合在乙型肝炎患者中广　

泛发生。慢性乙型肝炎（ＣＨＢ）患者ＨＢＶ　ＤＮＡ整合率达　８ｏ　，在急性肝炎、ＣＨＢ、低血清抗ＨＢＶ核心抗体（抗　

ＨＢｃ）滴度的丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）相关ＣＨＢ患者中，ＨＢＶ　

ＤＮＡ整合率分别为１６　、１００　、２５　，提示急性、慢性肝炎　

中均存在ＨＢＶ　ＤＮＡ整合　１］。本文对ＨＢＶ　ＤＮＡ整合研　

究进展进行综述。　１整合机制　

ＨＢＶ　ＤＮＡ复制过程中存在独特的前基因组ＲＮＡ　

（ｐｇＲＮＡ）反转录阶段，造成了其基因可以整合人人体基因　

组。与反转录病毒感染不同，ＨＢＶ整合不是病毒复制的必　

须条件，而认为是ＨＢＶ感染过程中的随机事件。ＨＢＶ病　

毒成熟体（Ｄａｎｅ颗粒）通过受体黏附于宿主肝脏细胞表面　

并进入肝细胞内，部分病毒基因成分进入肝细胞核内部，　

ＨＢＶ　ＤＮＡ以疏松的环状结构（ｒｃＤＮＡ）转变成共价闭合环　

状ＤＮＡ（ｃｃｃＤＮＡ），并有ＨＢＶ　ＤＮＡ部分片段整合入宿主　

细胞核。　参与ＨＢＶ整合的为双链线型ＤＮＡ（ｄ１ＤＮＡ）而非ｒｃＤ—　

ＮＡｌ２］。ＨＢＶ感染患者血流中约１Ｏ　～２Ｏ　病毒颗粒为　

ｄ１ＤＮＡ，它们的形成包括：①原位引发线型ＤＮＡ（ｉｎ　ｓｉｔｕ—　

ｐｒｉｍｅｄ　ＤＮＡ）；②非法复制线型ＤＮＡ（ｉｌｌｅｇｉｔｉｍａｔｅ　ｌｉｎｅａｒ　

ＤＮＡ）；③紧密结合末端线型ＤＮＡ（ｃｏｈｅｓｉｖｅ－ｅｎｄ　ＤＮＡ）。　

ＨＢＶ整合分为简单性和复杂性２类，前者为单一ＨＢＶ在　

宿主基因组中线性排列，伴有部分序列缺失，后者常是重排　

结果，为多个同向或反向ＨＢＶ整合，或ＨＢＶ结构发生错　

排。ＨＢＶ基因整合方式分为Ｉ，Ⅱ，Ⅲ，Ⅳ。Ｉ起始于ＤＲ１　向负链３　端延伸，Ⅱ起始于ＤＲ１向负链５　端延伸，Ⅲ起始　

于ＤＲ２向负链３　端延伸，Ⅳ起始于ＤＲ２向负链５　端延伸。　

Ｉ，Ⅱ种方式比Ⅲ，Ⅳ种方式更为常见，大约是后者的３倍，　ｐｒｅ—Ｓ也是病毒重组的常见序列。　

Ｗａｎｇ和ＲｏｇｌｅｒＥ　通过对经内源性多聚酶修补的土拨　

鼠肝炎病毒（ＷＨＶ）ＤＮＡ与拓扑异构酶Ｉ（Ｔｏｐｏ１）反应，认　

为ｒｃＤＮＡ也可以被Ｔｏｐｏｉ切割产生线型ＤＮＡ参人整合。　

Ｔｏｐｏｌ切割ｒｃＤＮＡ使之具有黏性末端，在ｗＨＶ正链３　端　

打开一缺口而致病毒ＤＮＡ线型化。Ｔｏｐｏｌ与ｗＨＶ正链　３　端共价连接作为供体，另一端带有５＇－ＯＨ部分可作为接　

受异源（即细胞）ＤＮＡ的受体，从而可介导病毒与细胞　

ＤＮＡ整合。Ｔｏｐｏｌ对ｒｃＤＮＡ的切割会导致ｒｃＤＮＡ形成　

通信作者：周伯平，Ｅｍａｉｌ：ｚｈｏｕｂｐ＠ｈｏｔｍａｉｌ．ｃｏｍ　对细胞内核酸酶敏感的单链末端突出序列，这有助于解释　

在病毒整合中常见核酸序列的缺失。这类整合模式主要见　

于癌前期和小肝癌中，高度恶化的大肝癌中主要表现为病　

毒序列的重排，病毒包膜堵塞使病毒分泌减少和核内ｒｃＤ—　

ＮＡ、ｃｃｃＤＮＡ积聚可导致整合增加。原发性肝细胞癌　

（ＨＣＣ）中观察到拓扑异构酶Ⅱ高表达，其与ＨＢＶ整合的　

关系有待阐明。　

宿主基因发生整合的条件包括稳定性差、细胞ＤＮＡ复　

制频率增加、合并其他病毒感染、慢性肝脏损伤等　ｊ。ＨＢＶ　

持续感染会对机体造成炎症反应导致细胞发生氧化应激损　

伤，一部分基因损伤会转变成为ＤＮＡ双链断裂（ＤｓＢｓ），　

ＤｓＢｓ的产生及修复可增加ＨＢＶ基因组的整合频率。哺乳　

动物细胞ＤｓＢｓ有２条独立又互补的修复途径：①无错误的　

同源重组（ＨＲ），它需要在受损的ＤＮＡ和未受损的ＤＮＡ　

之间存在一个同源序列，可有效地去除ＤＮＡ损伤，恢复　

ＤＮＡ原有状态；②非同源末端连接（ＮＨＥＪ），它不需要连接　

端存在广泛的同源性，通过对受损的ＤＮＡ末端加工，提供　

一个与被连接ＤＮＡ同源的黏结点，将断裂片段连接起来，　

也可能把从不同染色体来的非相邻的ＤＮＡ片段连接起来，　

这为病毒ＤＮＡ的整合提供了平台。　

ＮＨＥＪ主要是通过ＤＮＡ依赖蛋白激酶和ＸＲＣＣ４／　

ＤＮＡ连接酶Ⅳ等成分完成的，ＤＮＡ—ＰＫ为整个过程的关键　

酶，包含１个大的具有丝氨酸／苏氨酸激酶活性的催化亚单　

位（ＤＮＡ—ＰＫｃｓ）和１个由ＤＮＡ结合蛋白Ｋｕ７０／Ｋｕ８０二聚　

体组成的调节亚单位，Ｋｕ蛋白可在ＮＨＥＪ中作为ＤＮＡ—ＰＫ　

的调节亚基起着重要的作用。哺乳动物体内ＨＲ修复途径　

仍未完全阐明，已知的参与ＨＲ的因子包括Ｒａｄ５１、Ｒａｄ５２、　

Ｒａｄ５４、ＢＲＣＡ１和ＢＲＣＡ２。ＤＳＢｓ发生后Ｒａｄ５２和Ｋｕ基因　

竞争结合ＤＮＡ双链断端，从而引导不同的修复途径，因此　

Ｒａｄ５２和Ｋｕ蛋白也被称做是ＨＲ和ＮＨＥＪ的门控基因。　

细胞可能更喜欢用较少差错的ＨＲ途径修复ＤｓＢｓ，但ＨＲ　

需要存在同源性序列，它仅存在于细胞周期的ｓ期及Ｇｚ后　

期的姐妹染色单体中。当损伤发生在细胞周期的其他阶段　

时，细胞以ＮＨＥＪ修复为主、修复与病毒转录复制同时发生　

时，整合就容易发生。通过改变细胞中Ｒａｄ５２和Ｋｕ蛋白　

的比例从而使细胞倾向于采用ＨＲ修复方式，有可能是预　

防ＨＢＶ整合的有效策略之一［５］。　

２整合位点　

ＨＢＶ各基因片段整合率由高到低依次为Ｘ、Ｓ、ｐｒｅ—Ｓ、　

Ｃ、Ｐ，

Ｘ基因是ＨＢＶ基因组中最常发生整合的片段，至今　山西医药杂志２０１３年６月第４２卷第６期上半月　Ｓｈａｎｘｉ　Ｍｅｄ　Ｊ，Ｊｕｎｅ　２０１３，Ｖｏ１．４２，Ｎｏ．６　ｔｈｅ　Ｆｉｒｓｔ　

没有完整ＨＢＶ　ＤＮＡ整合的报道。目前认为宿主基因　

ＨＢＶ整合位点是随机的，一项研究结果显示除１３、ｘ和Ｙ　

染色体外均可见ＨＢＶ　ＤＮＡ整合现象。另一项研究显示　

ｘ、Ｙ染色体也可涉及ＨＢＶ　ＤＮＡ整合。还有研究发现随　

机整合或许是一种假象，除整合位点的病毒侧翼序列常具　

独特性外，整合点的宿主侧翼序列可见短的同源性序列，如　ＡＴＧＡ、ＡＴＧＴＡ、ＡＴＧＡＧ等，邻近数十碱基对之内也见同　

源性序列，如ＡＡＡＧＡ、ＡＡＡＧＴ、ＡＡＡＴＴ等，提示宿主　

ＤＮＡ的核苷酸序列与ＨＢＶ整合有关，大量相对特异的短　序列决定了ＨＢＶ整合的广泛性＿６］。　

目前研究发现ＨＢＶ的整合存在相对热点区段，认为整　

合位点可出现在一些编码与生长发育、细胞信号表达有关　

的基因内或其附近，如管理细胞永生［人端粒酶逆转录酶　

（ｈＴＥＲＴ）］、繁殖［细胞周期蛋白（Ｃｙｃｌｉｎ）Ａ、丝裂原激活的　

蛋白激酶１（ＭＡＰＫ１）］、生长发育［肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）受　体相关蛋白１］等部位［７３。尽管有些基因和目标基因相距较　

远，但考虑到基因表达可相隔数十万个碱基对，因此不能因　

为排除一些整合对数百ｋｂ之外目的基因的调控，如血小板　

衍生生长因子（ＰＤＧＦ）一Ｂ、ＡＰＣＬ、ＭＧＭＴ基因，它们调控　

ｐ５３基因抑癌效果。　

传统聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测方法受引物设计的限制　并只能检测重复整合部位＿２］，因此发现整合位点较少。　

Ｊｉａｎｇ等　通过用深覆盖测序对ＨＣＣ患者ＨＢＶ　ＤＮＡ整合　

进行检测，认为宿主基因整合位点数量随测序深度而增加。　

肿瘤标本和邻近非肿瘤标本中均存在整合，但方式不完全　

一样，因为肿瘤组织中发现携带主要整合位点（ＭＩＳ）肝细　

胞的克隆扩增。ＨＢＶ整合部位平均分布在ＤＲ１和ＤＲ２附　

近，整合后融合基因转录则倾向于ＤＲ１，认为ＤＲ１固有的　

反式作用机制及ＤＲ１和宿主基因融合部位的短距离为整　

合后转录的必要条件。ＨＢＶ环型病毒结构中多聚酶结构　

位于ＤＲ１下游，线型结构中多聚酶和ＤＲ１分开、多聚酶在　

５　下端，ＤＲ１位于３　末端，这种现象解释了为何整合后　

ＨＢＶ多聚酶活性下调。相信随着深覆盖测序法的广泛应　

用，更多的整合位点和机制会被发现。　３整合与ＨＢＶ　ＤＮＡ抗原表达　

ＨＢＶ转录蛋白中来自ｃｃｃＤＮＡ的仅为来自整合ＤＮＡ　

的１Ｏ　～２Ｏ　Ｅｇ？。ｃｃｅＤＮＡ转录率低的原因考虑：①ＨＢＶ　

ｃｅｃＤＮＡ在细胞内和组蛋白及非组蛋白形成紧凑的微染色　体样结构，ＨＢＶ　ｃｃｃＤＮＡ的转录需组蛋白Ｈ３和Ｈ４的乙　

酰化Ｉ１　；②凋亡蛋白（ＡＰ）一１、ＡＰ一２、核因子（ＮＦ）一ＫＢ、Ｃ／　

ＥＢＰ、三磷酸腺苷（ＡＴＰ）／环磷酸腺苷反应元件结合蛋白　

（ＣＲＥＢ）、ＳＲＦＳＰ１等转录因子参与ｃｃｃＤＮＡ转录调控¨ｇ　；③　

ＨＢｘ通过影响转录因子活性调控ｃｃｃＤＮＡ转录水平，Ｘ蛋　

白表达丢失则ｅｃｃＤＮＡ转录率下降。　

ＨＢＶ　ｅ抗原（ＨＢｅＡｇ）（＋）ＣＨＢ患者血清ＨＢＶ表面　

抗原（ＨＢｓＡｇ）水平与肝细胞ＨＢＶ　ｃｃｃＤＮＡ拷贝数（ｃｏｐｉｅｓ／　

ｃｅｌ１）、肝脏ＨＢＶ　ＤＮＡ量正相关，ＨＢｅＡｇ（一）ＣＨＢ患者血　清ＨＢｓＡｇ水平与肝细胞ＨＢＶ　ｃｃｃＤＮＡ拷贝数、肝脏ＨＢＶ　・　６３３　・　

ＤＮＡ量不相关，而与肝组织ＨＢｓＡｇ（＋）肝细胞／ｒａｍ。的数　

量、免疫染色强度、分布格局相关【１　。可以用整合来解释　

这种情况。整合是ＨＢＶ感染中早期事件，ｓ基因是最常参　

与整合及整合后转录的片段之一；ＨＢｅＡｇ（一）ＣＨＢ患者病　

程较ＨＢｅＡｇ（＋）长，更有可能发生整合。以上假说未得到　

证实，因为尚无法临床上检验ＨＢｓＡｇ来自ｃｃｃＤＮＡ转录还　是整合ＤＮＡ转录＿】　。ＨＢＶ　ＤＮＡ整合导致的肝内ＨＢｅＡｇ　

和ＨＢｓＡｇ表达存在差异。整合的ＨＢＶ　ＤＮＡ由于表达　

ＨＢｃＡｇ段基因序列被高度甲基化而无法合成ＨＢｃＡｇ，肝内　

ＨＢｃＡｇ的合成主要由游离ＨＢＶ　ＤＮＡ表达。肝内ＨＢｓＡｇ　

则既可被游离的亦被整合的ＨＢＶ　ＤＮＡ表达。　

４整合与前Ｓｌ／前Ｓ２、Ｓ区变异　

ＨＢＶ　ＤＮＡ整合导致前ｓ区变异很常见，并在感染肝　

细胞克隆颗粒中出现。前Ｓ１区域变异产生１型毛玻璃样　

肝细胞（ＧＧＨ），前ｓ２区域变异产生２型ＧＧＨ细胞。１型　

ＧＧＨ细胞前ｓ１变异导致转录因子结合位点缺乏（ＡＡ６３～　

８６），影响中、小型表面蛋白合成障碍。２型ＧＧＨ细胞前Ｓ２　

起始密码子（ＡＴ　ＡＴＡ）变异导致中型表面蛋白（ＭＨＢｓ）　无法合成　”］。　

中、小型表面蛋白合成障碍导致大型表面蛋白增多，在　

肝细胞内质网聚集，向外分泌减少，逃避了宿主的免疫攻　

击，引发内质网压力，激活未折叠蛋白反应（ＵＰＲ），上调　

ｃｙｃｌｉｎｅ　Ｄ１。ＵＰＲ最重要的致癌作用是引发氧化应激，激活　

内质网应激下游信号通路，引起ＨＢＶ感染的肝细胞异常增　

殖和细胞凋亡受阻，大量氧化产物产生引起宿主ＤＮＡ损　

伤、不稳、变异等，引发肝脏发育不良，严重肝脏损害，肝脏　肿瘤结节再生，最终导致肝癌发生［１　。　

ＨＢＶ　ＤＮＡ整合可表达完整或截断的ｓ蛋白。肝癌细　胞系或肝癌组织中克隆出的截断型前Ｓ２／Ｓ基因表达产物　

羧基末端的截断中蛋白（ＭＨＢｓｔ）具有类似ｃ—ｍｙｃ或ｃ—ｌｏｓ　

的反式激活功能，而全长的ＭＨＢｓ无此功能　］。ＭＨＢｓｔ　

缺失了位于ｃ末端的膜定位信号，使ＭＨＢｓｔ未能进入分泌　

途径而在内质网（ＥＲ）中滞留，其前ｓ２区指向胞质区与胞　

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乙型肝炎病毒感染与原发性肝癌研究进展

乙型肝炎病毒感染与原发性肝癌研究进展

・４７８２’　现代中西医结合杂志Ｍｏｄｅｒｎ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ　Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　ａｎｄ　Ｗｅｓｔｅｒｎ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ　２０１０　Ｄｅｃ．１９（３６）　［１７］肖叶玉，吴仁华．针灸机理的ｆＭＲ１研究［Ｊ］放射学实践，２００４，　１９（３）：２２２—２２４　［１８］刘爱国，吴秀玲，李永秋，等脑梗死患者针刺足三里穴的脑功　能性磁共振成像观察［Ｊ］．河北中医，２００９，３１（１）：５１～５２　［１９］吴志远，缪飞，项琼瑶，等针刺足三里对磁共振脑功能成像影　响的研究［Ｊ］．中围中医药科技，２００７，１４（５）：３０５—３０７　［２０］周诚，王嘉洲，陈敏，等．针刺穴位与大脑皮层之间关系的脑功　能ＭＲＩ表现［Ｊ］．中华放射学杂志，２００５，２３（３）：２８—３１　［２１］刘月芝，杨甲三，张国瑞，等针刺治疗中风肢体运动功能障碍　的Ｉ临床研究［Ｊ］．中国针灸，１９９９，１９（２）：６９—７１　［２２］乇苇，朱芳，漆剑频，等人脑对针刺与对指反应的实时动态功　能ＭＲｌ的对比研究［Ｊ］．中华放射学杂志，２００２，２４（３）：１９—２２　［２３］胡军武，王苇，漆剑频，等正常人体针灸效应功能性磁共振成　像的研究［Ｊ］中华物理医学与康复杂志，２００５，２７（３）：１６０—　１６２　［２４］王苇，漆剑频，夏业玲，等．人脑运动皮质对针刺足三里和阳陵　泉反应的功能性磁共振成像研究［Ｊ］．中华物理医学与康复杂　志，２００４，２６（８）：４７２—４７５　［２５］曾燕，梁勋厂．从脑功能成像看针刺作用的中枢机制［Ｊ］．中国　针灸，２００４，１２（２）：７１—７４　［２６］龚洪翰，王永正，肖香佐，等．ｆＭＲＩ探讨针蒯足三里穴和下巨虚　穴的大脑功能区分布［¨影像诊断与介入放射学，２００３，１２　（３）：１３３—１３６　［收稿１５１期］２０１０—０５—１５　乙型肝炎病毒感染与原发性肝癌研究进展　刘利波，杨静茹　（解放军第２６６医院，河北承德０６７０００）　［关键词］　乙型肝炎病毒；原发性肝癌　［中图分类号］　Ｒ７３５．７　［文献标识码］　Ａ　［文章编号］　１００８—８８４９（２０１０）３６—４７２８—０３　原发性肝癌（ＰＨＣ）是我国最常见的恶性肿瘤之一，发病　人数占全世界的４２．５％。乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）感染与原发　性肝癌关系密切，原发性肝癌患者咀清中ＨＢＶ标志物阳性牢　高达９０％，全世界目前大约有三亿五千万人感染ＨＢＶ，尽管　ＨＢＶ引起ＰＨＣ的发病机制尚未完全阐明，但已有越来越多的　研究报道证实ＨＢＶ　Ｘ基因的整合、癌基因抑痛基因及多种生　长因子在ＰＨＣ发病机制巾起至关重要的作用。本文就ＨＢＶ　感染与ＰＨＣ发生的研究进展作一综述。　１　ＨＢＶ感染与ＰＨＣ　大量流行病学调查证实，ＨＢｓＡｇ阳性者发生ＰＨＣ的机会　远高于ＨＢｓＡｇ阴性者，在某些地区的ＰＨＣ患者中，ＨＢｓＡｇ的　阳性率比对照组高１００倍；５　ａ长期调查发现，男性ＨＢｓＡｇ携　带者发生ＰＨＣ的危险性较对照组高ｌ　０００倍；对２５个国家和　地区的调查资料表明，ＰＨＣ患者的ＨＢｓＡｇ阳性率，无论是高　发区（如越南缅甸），还是低发区（如英国等地）都显著高于正　常人群。据统计，我国ＰＨＣ患者中９０％以上血清或肝组织中　ＨＢＶ标志物阳性。陆培新等　在肝癌高发区，对ＨＢｓＡｇ携带　的７４４人和相应的ＨＢｓＡｇ阴性的８９５人进行了８年３个月的　前瞻性随访观察，结果表明，ＨＢｓＡｇ阳性组年平均肝癌发生率　为ｌ７７　１２９／１０万，高于ＨＢｓＡｇ阴性组的６９　ｌ５３／１０万，相对危　险度为１６　１７３，表明ＨＢＶ与肝癌发生密切相关。因此ＨＢＶ　的感染与ＰＨＣ的发生有非常密切的关系。　２　ＨＢＶ　Ｘ基因　ＨＢＶ是嗜肝ＤＮＡ病毒科中正类嗜肝ＤＮＡ病毒属的一　员，ＨＢＶ基因组是一环形且部分双股ＤＮＡ，长股（负链）长度　约为３　２００碱基，含有４个开放读码框（ＯＲＦ），谓之ｓ、Ｃ、Ｐ和　ｘ　。董菁等　于２００４年在中国流行株ＨＢＶ基因序列中又　新发现了２个基因，因此负链核苷酸序列共包含６个编码基因，　即包膜（Ｓ）、核心（Ｃ）、多聚酶（Ｐ）、Ｘ基因、前一Ｓ基因、前一ｘ基　因。最小的ＯＲＦ即为ｘ基因编码的ＨＢＸ，一个含１５４个氨基　酸的多肽，分子量为１７　ｋＤ。将ＨＢＶ基因组中ｘ基因去除　后，可导致感染病毒基因沉默，感染患者抗原标志物检测如　ＨＢｓＡｇ、ＨＢｃＡｇ和ＨＢｅＡｇ阴性。　３　ＨＢＶ　Ｘ基因与ＰＨＣ　３．１　ＨＢＶ　ＤＮＡ　Ｘ基因的整合ＨＢＶ　ＤＮＡ在细胞中以游离　和整合两种形式存在，两者可同时存在，在大部分ＰＨＣ和癌　旁组织中可见ＨＢＶ　ＤＮＡ的整合，整合常发生于ＨＢＶ　ＤＮＡ链　末端的两个直接重复序列（ＤＲ１和ＤＲ２），而ｘ基因紧邻ＤＲ　序列，因此整合也常发生于ｘ基因及其附近，研究证实，ｘ基　因是十分稳定的主要整合基因，其整合率显著高于Ｓ、Ｐｒｅ—Ｓ　和ｃ等基因　，ｘ基因的整合与ＨＢｘ的表达和ＰＨＣ的发生　有着密切的关系　。　３．２　Ｘ基因的整合与原癌基因及抑癌基因　３．２．１原癌基因在表达ＨＢＸ的ＰＨＣ和癌旁组织中，可见　Ｃ—ｍｙｃ、Ｎ—ｒａｓ等多个癌基因表达增加的现象。目前已知的　致肝癌基因有Ｃ—ｍｙｃ、Ｎ—ｒａｓ　ｍＲＮＡ过量表达或基因重排和　放大等，超过５０％肝癌中的Ｎ—ｒａｓ呈过高表达，Ｎ—ｒａｓ有两　个活化突变点，一个是第ｌ２号密码的第２个核苷酸由原癌基　因的ＧＧＴ变成ＣＧＴ，另一个为改变第６ｌ号密码的编码蛋白　质ＰＰ２１的结构，使之无法结合ＧＰＴ或ＧＤＰ来调节细胞的生　长与分化。　３．２．２抑癌基因　肝癌的发生与多种抑癌基因的突变有关，

影响慢性乙型肝炎病毒感染者临床结局的病毒学因素研究进展

影响慢性乙型肝炎病毒感染者临床结局的病毒学因素研究进展

・２７０・　实用肝脏病杂志２０１２年６月第ｌ５卷第３期Ｊ　Ｃｌｉｎ　Ｈｅｐａｔｏｌ，Ｊｕｎ．２０１２．Ｖｏ１．１５　Ｎｏ．３　

影响慢性乙型肝炎病毒　

病毒学因素研究进展术　

徐春利　综述郝友华杨东亮　审校　感染者临床结局的　・综述・　

【摘要】慢性乙型肝炎患者ｆ临床结局受多种因素的影响，主要包括宿主因素和病毒学因素两大方面，其中病毒学因素包括ＨＢＶ　ＤＮＡ载量，ＨＢＶ基凶型、ＨＢＶ基因变异及ＨＢＶ蛋白表达等。本文就影响慢性乙型肝炎病毒感染者临床结局的病毒学因素研究进展进行　＿『介绍。　【关键词】慢性乙型肝炎；ｌ临床结局；病毒学　ｄｏｉ：１０．３９６９￣．ｉｓｓｎ．１６７２—５０６９．２０１２．０３．０３４　

乙型肝炎病毒（Ｈｅｐａｔｉｔｉｔｓ　Ｂ　ｖｉｒｕｓ，ＨＢＶ）感染呈世界性　

流行，不同地区ＨＢＶ感染的流行强度差异很大。我国现有的　

ＨＢＶ感染者约９３００万人，其中慢性乙型肝炎患者约２０００　

万例ｌｌｌ。慢性乙型病毒性肝炎病程长、病情易反复；其临床结　

局主要表现为肝硬化、肝细胞癌（ｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒ　ｃａｒｃｉｎｏｍａ，　

ＨＣＣ）。乙型肝炎患者临床结局进展是多阶段、多种因素综合　

作用的结果，包括宿主因素和病毒学因素两大方面，宿主因　

素主要有：病毒感染宿主的初始年龄、性别、种族、共存感染、　

阳性家族史和免疫状态等因素；病毒学因素主要包括ＨＢＶ　

ＤＮＡ载量水平，ＨＢＶ基因型、ＨＢＶ基因变异及ＨＢＶ表达蛋　

白等。近年来，病毒学因素影响慢性乙型肝炎患者临床结局　

的研究取得许多进展，本文拟就此作一综述。　

一、ＨＢＶ　ＤＮＡ水平对慢性乙型肝炎患者临床结局的影响　

ＨＢＶ　ＤＮＡ是独立于ＨＢｅＡｇ和ＡＬＴ以外能够独立预测　

肝硬化发生的危险因素，肝硬化的累积发生率与持续高病　

毒载量呈正相关ｌｌＩ。Ｉｌｏｅｊｅ等［２１对３５８２名乙型肝炎患者前瞻ｌ生　

队列研究表明，在校正ＨＢｅＡｇ、转氨酶的水平等后，ＨＢＶ　

ＤＮＡ是肝硬化进展的最强烈的预示因子。当ＨＢＶ　ＤＮＡ水平　

乙型肝炎肝硬化抗病毒治疗研究进展

乙型肝炎肝硬化抗病毒治疗研究进展

２３４　复旦学报（医学版）　２０１３年３月，４０（２）　

在亚洲国家，慢性乙型肝炎是肝硬化的主要病因，发　

生肝硬化后患者５年生存率约为５５　～８４　ｌ１］。　

肝硬化患者的死亡率可能与患者的病毒载量相关，　

一项针对２　７６３位乙肝表面抗原（ｈｅｐａｔｉｔｉｓ　Ｂ　ｖｉｒｕｓ　ｓｕｒｆａｃｅ　ａｎｔｉｇｅｎ，ＨＢｓＡｇ）阳性患者的前瞻性研究ｌ［２　

显示，慢性肝病和肝癌的死亡率随患者病毒载量升　

高而升高。故而抗病毒治疗对于慢性乙肝患者的预　

后有重要意义。　

干扰素（ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ，ＩＦＮ）和核苷类似物　

［ｎｕｃｌｅｏｓ（ｔ）ｉｄｅ　ａｎａｌｏｇｕｅｓ，ＮＵＣｓ］都是临床常用的　

抗病毒药物。ＩＦＮ通过与细胞表面受体作用，诱导　

出能阻断信使核糖核酸（ｍｅｓｓｅｎｇｅｒ　ｒｉｂｏｎｕｃｌｅｉｃ　

ａｃｉｄ，ｍＲＮＡ）翻译的蛋白从而抑制病毒复制，耐药　

率低但不良反应较大；ＮＵＣｓ能终止ＤＮＡ链的延长　

和合成，抑制病毒的脱氧核糖核酸多聚酶　

（ｄｅｏｘｙｒｉｂｏｎｕｃｌｅｉｃ　ａｃｉｄ　ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ，ＤＮＡ　ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ）　

和逆转录酶的活性，从而抑制病毒复制。其不良反　

应较ＩＦＮ少，使用方便，但易发生耐药。近年来，针　

对这两种药物治疗乙肝肝硬化的研究新进展屡见报　

道，本文对此做一综述。　

干扰素（ＩＦＮ）　ＩＦＮ是一种广谱抗病毒剂，它　

主要通过细胞表面受体作用使细胞产生抗病毒蛋　

白，从而抑制乙肝病毒的复制；同时还可增强自然杀　

伤细胞（ｎａｔｕｒａｌ　ｋｉｌｌｅｒ　ｃｅｌｌ，ＮＫ细胞）、巨噬细胞和Ｔ　

淋巴细胞的活力，从而起到免疫调节作用。患者停　

药后，原来的乙肝病毒ＤＮＡ（ｈｅｐａｔｉｔｉｓ　Ｂ　ｖｉｒｕｓ　

ＤＮＡ，ＨＢＶ　ＤＮＡ）阴性率仍可继续保持，而ＨＢｓＡｇ　

清除率甚至可继续增高＿３］。但ＩＦＮ不良反应较大　

且需皮下注射，使用不方便。目前用于慢性乙肝及　

肝硬化的ＩＦＮ主要有ＩＦＮａ一２ａ、２ｂ和１ｂ以及聚乙　

乙型肝炎病毒核心DNA疫苗研究进展

乙型肝炎病毒核心DNA疫苗研究进展

传染病信息２００２年第１５卷第２期　・　５７　・　

乙型肝炎病毒核心ＤＮＡ疫苗研究进展　

刘学恩庄辉　

北京大学医学部微生物学系　北京　１０００８３　

第一代乙型肝炎疫苗是从乙型肝炎表面抗原　

（ＨＢｓＡｇ）无症状携带者血清中分离ＨＢｓＡｇ颗粒，经　

灭活后制成的乙型肝炎血源疫苗；第二代乙型肝炎　

疫苗即为ＨＢｓＡｇ基因重组疫苗，该疫苗可诱导体液　

免疫应答产生中和抗体，但不能诱导细胞免疫应答，　

主要用于预防，而不是用于治疗。目前，国内外正在　

研究和开发第三代乙型肝炎疫苗，即乙型肝炎病毒　

（船ｖ）ＤＮＡ疫苗（也称核酸疫苗），目的是既可用　

于预防，又可用于慢性乙型肝炎的治疗。　

ＨＢＶ　ＤＮＡ疫苗即核酸疫苗，是指将含有编码　

ＨＢＶ抗原蛋白的ＤＮＡ序列及必要的表达调控元件　

的重组质粒直接导人机体组织，通过宿主细胞的转　

译系统表达目的抗原，诱导机体发生免疫应答的一　

种新型疫苗…。ＨＢＶ　ＤＮＡ疫苗可选用编码ＨＢｓＡｇ　

或ＨＢｃＡｇ和ＨＢｅＡｇ的基因序列构建重组质粒，编　

码ＨＢｃＡｇ和ＨＢｅＡｇ的基因构建的重组质粒称为　

ＨＢＶ核心ＤＮＡ疫苗。ＨＢｃＡｇ基因编码１８３～１８５　

个氨基酸的核衣壳；ＨＢｅＡｇ基因起始密码在ＨＢｃＡｇ　

基因上游２９个氨基酸残基位置，ＨＢｅＡｇ分泌到细　

胞外的成熟蛋白比胞内前体在Ｎ端多９个氨基酸　

信号序列，在ｃ端少３３～３５个氨基酸＿２　Ｊ。　

患急性乙型肝炎时，在病人血循环中可检测到　

ＨＢｃＡｇ和ＨＢｅＡｇ特异性细胞毒Ｔ淋巴细胞（ＣＴＬ）　

应答，它是ＭＨＣ　Ｉ类分子限制性的多克隆反应，可　

针对多种多肽表位，如ＨＢｓＡｇ、ＨＢｃＡｇ和聚合酶等。　

但在慢性乙型肝炎时，一般检测不到ＨＢｃＡｇ和　

ＨＢｅＡｇ特异性ＣＴＬ应答和Ｔｈ细胞活性，除非是肝　

炎加重或血清学标志由ＨＢｅＡｇ（＋）转为抗一ＨＢｅ　

（＋）。这说明ＣＴＬ应答对机体清除ＨＢＶ具有重要　

作用＿２　Ｊ。ＨＢＶ核心ＤＮＡ疫苗类似于ＨＢＶ自然感　

染过程，既能诱导机体体液免疫，又能诱导特异性