荧光显微镜简单操作流程

耳用显微镜操作流程

操作常规

1、接好电源，开总开关，解锁，待自检约40秒后方可动显微镜把手。

2、开小开关，再把灯的亮度调大，关显微镜时，先把光线调到最小，再关小开关，然后关总开关。关的亮度不能调到黄色警示区。一般先用卤素灯（HALOGEN）,卤素灯一般调到最亮区，再用氙灯（XENON）, 氙灯（XENON）调到一半亮度即可。

3、BALANCE调到SYSTEM.REDAY----全部可以动。可以调整个平衡，一般只能调到SYSTEM READY 处。调到C处----以下能动，调到C把手能调平衡（C部分平衡）。调到A+B---只能动A+B，按A可以调A处平衡，按B可调B处平衡

4、做左耳和右耳时，先看是左耳，还是右耳，提前把显微镜的副镜调好。做右耳时，副镜在主镜的左侧（以患侧为准），做左耳时，副镜在主镜的右侧（以患侧为准）。

5、显微镜都放好，套好后，锁上。

1 开启电源：显微镜的电源开关，在显微镜后侧。

2 按下照明开关，打开透射显微观察的照明灯。并将亮度控制旋钮调

到预设位置。

3 将ND8、ND32 和NCB11 滤光块切入光路。

4 按下光路切换杆，将双目镜完成切入光路

5 转动激发方式切换转盘，将其调节到无滤光块的位置上。

6 将聚光镜升到最高位置。

7 将视场光阑和孔径光阑充分打开

8 将10 倍物镜移入光路。

9 放置标本后调节载物台，将标本移入视野中

10 对标本对焦。

11 调节屈光度和瞳间距。

12 对聚光镜进行对焦。

13 切换到所需的物镜并观察标本。

14 观察完毕后请关闭电源。

2.4 落射荧光显微观察

进行显微观察前必须：

• 检查照明灯的累计照明时间和落射荧光附件的状态。如果照明灯己

超过其使用寿命，请更换照明灯。

• 使用无荧光型的玻片。

• 使用非荧光型浸油。

• 为防止标本发生褪色，请在不进行显微观察时关闭光闸。

1将明场光源关闭。

注意：A 荧光显微术用于观察荧光染色和荧光标记的样本；

B 使用前明确样本荧光激发光波长和发射光波长，了解需要使用的荧光滤光片；

C 荧光显微镜光学系统部件在组成以及原理上与前三种显微镜差别很大，在使用时应了解

荧光显微镜光程和明场显微镜光程；

D 汞灯灯室可产生高温高热，使用完请勿立即盖上防尘罩，而要在关闭电源30 分钟后再盖上

防尘罩，防止烧坏显微镜部件和发生火灾

E 为延长汞灯使用寿命，应按规范操作：开启汞灯变压器电源预热三分钟后再启动激发按

钮，激发后就可以使用，每次使用至少开

机30分钟，两次连续使用的时间间隔至少30分钟以上； 2将当前所需激发方式的滤光块移入光路。

3放置标本，并调节载物台使标本进入视野。

4 切换到所需的物镜并观察标本。

5 返回明场显微观察。转动激发方式切换转盘，将其调节到无滤光块

的位置上。

拍照软件：

NIS图像捕捉软件介绍

打开NIS软件包，主菜单中有File Edit Camera Preprocess View Help

荧光显微镜(Fluorescence microscope)及其操作

荧光显微镜是免疫荧光细胞化学的基本工具。它是由光源、滤板系统和光学系统等主要部件组成。是利用一定波长的光激发标本发射荧光，通过物镜和目镜系统放大以观察标本的荧光图像。

目录

• 原理

• 荧光显微镜标本制作要求

• 使用荧光显微镜的注意事项

• 荧光图像的记录方法

原理

某些物质经一定波长的光（如紫外光）照射后，物质中的分子被激活，吸收能量后跃迁至激发态；当其从激发态返回到基态时，所吸收的能量除部分转化为热量或用于光化学反应外，其余较大部分则以光能形式辐射出来，由于能量没能全以光的形式辐射出来，故所辐射出的光的波长比激发光的要长，这种波长长于激发光的可见光部就是荧光(fluorescence)。所谓荧光就是某些物质在一定波长光（如紫外光）的照射下、在极短时间内所发出的比照射光波长更长的可见光。由此可见，被照射物质产生荧光必须具备以下两个条件：①物质分子（或所特异性结合的荧光染料）必须具有可吸收能量的生色团；②该物质还必须具有一定的量子产率和适宜的环境（如溶剂、pH、温度等）。

荧光显微术是利用荧光显微镜结可发荧光的物质进行观测的一种实验技术。某些物质在一定短波长的光(如紫外光)的照射下吸收光能进入激发态，从激发态回到基态时, 就能在极短的时间内放射出比照射光波长更长的光(如见光)，这种光就称为荧光。有些生物体内的物质受激发光照射后可直接产生荧光, 称为自发荧光(或直接荧光)，如叶绿素的火红色荧光和木质素的黄色荧光等。有的生物材料本身不能产生荧光，但它吸收荧光染料后同样却能发出荧光，这种荧光称为次生荧光(或间接荧光)，如叶绿体吸附吖啶橙后便可发出桔红色荧光。

荧光显微镜具特殊光源（多为紫外光光源），提供足够强度和波长的激发光，诱发荧光物质发出荧光。在视场中所所观察到的图像，主要是样品的荧光映像。

（一）光源

原子力显微镜操作简要说明

一、设备开机

1、打开原子力显微镜主机电源（在光学平台下方）。

2、开启电脑、运行软件（软件10，如有问题可换9重新运行）。

3、在软件界面点击 SPM init 进行设备初始化，如显示SPM OK可继续操作，如不显示SPM OK重启软件。

4、点open door开操作门，点灯泡按钮照亮。

二、样品准备

1、将表面洁净样品使用专用双面胶粘贴至设备配备的圆形载物片上（最好两个台子一起使用，以便旋转样品）。

2、通过检测组件上的按钮或者软件点open door开启样品室舱门，点灯泡按钮照亮，点击软件界面上的AFM-STM退针钮使显微镜探头缩回。

3、使用专用镊子将样品连同载物片放入磁性样品台上，小心调整样品区域之中间。小心不要碰触探头、激光源等。

4、点击软件界面的AFM-STM使探头移回。关闭舱门。

三、操作程序

1、运行软件的camera功能，点击绿色的play键。运行approach，点击蓝色step

move，将样品降低到安全距离。

2、运行软件的aiming功能，点击tools-motors-video calibration-右下角specify laser step 1-Alt+左键-确定-手动Alt+左键点击红十字中心，使激光与十字匹配。

3、运行AFM钮，使针头伸出。点击Shift+左键点击针悬臂梁的中间或偏上三分之一处，点击move laser使激光移动到点击位置，然后用Laser X和Y将Laser调到最大，点击Aiming，使DFL、LF为0。

4、运行软件的Resonance功能，选择semicontact模式，在probes里选择对应针尖，点击Auto，调节探针悬臂的共振频率。如产生共振，调节Gain和lockgain的大小（保证其乘积大小不变），确定setpoint为典型值Mag的一半，Gain0.5-1之间。

5、运行landing，观察way值变化。