造血干细胞分选主要标志

造血干细胞表面标志物造血干细胞(Hematopoietic stem cells, HSC)是一类成体干细胞，具有干细胞的特性：自我更新和分化潜能。

造血干细胞是一种骨髓来源的多能干细胞，它是血液系统中的“种子”细胞。

造血干细胞(HSCs)在造血过程中形成血系中的所有细胞，包括各种成熟细胞如白细胞、红细胞、血小板等。

在受到适当刺激时还分化为其他非造血组织(如脂肪细胞、心肌细胞、内皮细胞和胰腺细胞)[1]。

造血干细胞具有调节体内平衡、免疫功能、抗微生物、抗炎症等生物学功能。

它在血液病、遗传性血液病和自身免疫性疾病的治疗方面有重要作用。

1. 造血干细胞类型2. 造血干细胞的来源3. 造血干细胞的生物学特性4. HSC和免疫系统5. 人体造血系统层次6. 造血干细胞的细胞表面标志7. HSC的临床应用1. 造血干细胞类型已经定义了两种类型的造血干细胞：能够终生保持自我更新和多谱系分化潜能的长期再生细胞(LTRC)；来源于LTRC的短期再生细胞(STRC)，虽然它们保持了多能性，但它们表现出更有限的自我更新潜能。

它们重建髓系和/或淋巴系间隔的时间很短，大约6周。

2. 造血干细胞的来源造血干细胞存在于成年人的骨髓中，特别是在骨盆、股骨和胸骨中。

它们也存在于脐带血和少量的外周血中。

2.1 骨髓造血干细胞(HSCs)是一种骨髓来源的多能干细胞。

从骨髓中获取造血干细胞通过外科手术，从两个髂骨后嵴分次采集。

骨髓中每10万个细胞中约有1个是长期造血干细胞(LT-HSC)。

2.2 外周血大部分造血干细胞来源于骨髓，少量的干细胞和祖细胞在血液中循环。

人类造血干细胞的临床移植，可以从外周血中收集供体细胞。

造血干细胞的采集是在粒细胞集落刺激因子(G-CSF)等造血生长因子的作用下，将骨髓中的HSC动员到外周血后，通过分离的方式采集。

2.3 脐带血(UCB)脐带血是造血干细胞和造血祖细胞的丰富来源，它所含不同类型的造血祖细胞的数量大约是成人血液中观察到的数量的10倍。

临床血液学检验基础知识1.属于血细胞生理学范畴的是：细胞分化2.属于遗传血液学范畴的是：信息传递3.胚胎时三个造血阶段是：相互交替，此消彼长4.只能短期重建造血的是：早期造血祖细胞5.进行不对称有丝分裂的是：造血干细胞6.在血细胞的增殖中，与多数系统增殖方式不同的是：巨核细胞7.出生后在正常情况侠，产生红细胞的场所是：骨髓8.B淋巴祖细胞的发育部位是：骨髓9.全身骨髓的髓腔内均为红骨髓的阶段是:＜4岁10.在胚胎期，骨髓成为造血高度发育的阶段是在人胚发育的：第8个月11.属于多倍体细胞的是：巨核细胞12.可出现两种类型颗粒的细胞是：中幼粒细胞13.核染色质凝聚成条索状或块状，其中有明显间隙，核仁消失，胞质内血红蛋白呈嗜多色性，符合的是：中幼红细胞14.核染色质浓密成块，常呈车轮状或龟背状，无核仁，胞质丰富，有泡沫感，是：浆细胞15.正常骨髓中，粒细胞系统中比例最高的是：中性杆状核粒细胞16.粒细胞系统细胞体积最大的阶段是：早幼粒细胞17.胞质欧诺个开始出现嗜碱性颗粒的阶段是：中幼粒细胞18.正常情况下，既可出现在骨髓中，也可出现在外周血中的粒细胞是：杆状核粒细胞19.嗜酸性粒细胞体积最大的阶段是：中幼粒细胞20.在染色中加入L-酒石酸，观察抑制情况的化学染色：酸性磷酸酶染色21.过氧化物酶染色后显示颗粒粗大、成团块，几乎布满胞质，其阳性级别是：+++22.去吧过碘酸-雪夫反应阳性结果+和++的红色颗粒数量是：10个23.铁染色时，骨髓小粒中的铁属于：细胞外铁24.环形铁粒幼红细胞是指幼红细胞胞质内的蓝色颗粒在：6颗以上，围绕核周1/2以上25.铁粒红细胞指：成熟红细胞26.采用偶氮耦联法原理的化学染色是：碱性磷酸酶染色27.符合碱性磷酸酶火星生理性改变的是：分娩时活性增高28.属于急性淋巴细胞白细胞的化学染色特点是：过氧化物酶染色阳性的原始细胞＜3%29.白血病细胞内无Auer小体的急性髓细胞性白血病类型是M030.与M0型急性髓细胞性白血病在形态学上类似的是ALL-L231.胞质中含密集的嗜苯胺蓝颗粒，并有短而粗的Auer小体，数条或数十条呈束状交叉排列，的白血病是：M332.M4型白血病的同质性白血病细胞增生型的特点是，白血病细胞在形态学上：同时具有粒系及单核系特征33.血象中篮细胞增多见于：慢性淋巴细胞白血病34.B细胞型慢性淋巴细胞型白血病主要表达的B细胞特异性抗原有：CD535.浆细胞白血病时，外周血白细胞分类中的浆细胞应＞20%36.霍启金病的骨髓组织活检可将R-S细胞阳性率提高到9%-22%37.属于浆细胞病的是：骨髓瘤38.属于骨髓增生型疾病的是：骨髓纤维化39.粒细胞缺乏症的骨髓象主要表现为粒系细胞明显减低和缺乏：成熟阶段的中性粒细胞40.类白血病患者的骨髓象显示为：增生活跃41.维生素K缺乏时，水平或活性减低的项目是：蛋白C42.亚临床型血友病A时的FⅧ：C应为：26%-45%43.纤溶酶原活性增高见于：血栓前状态44.α2纤溶酶抑制物减低见于:DIC45.肩膀原发性纤溶症和继发性纤溶症的指标是：D-二聚体46.能够被蛋白C灭活的凝血因子是：Fva47.能特异性与t-PA以1:1比例结合，使其失活的物质是：PAI-148.血友病患者筛选试验中发生延长的凝血时间是：APTT49.区分遗传性和继发性铁粒幼型贫血的是：发病年龄50.正常情况下，人体内铁主要存在的形式是：铁蛋白51.关于微量元素铁：人体内铁主要经胆汁、尿液排泄52.成人外周血涂片出现有核红细胞最常见于：溶血性贫血53.细胞直方图出现双峰，底部变宽多见于：铁粒幼细胞贫血54.骨髓以中晚幼红增生为主，细胞内、外铁明显减少，最常见于：缺铁性贫血55.通过进行骨髓检查能做出准确判断的是：急性再生障碍性贫血56.铁吸收率的正确范围是：10%-35%57.导致维生素B12缺乏的原因是：全胃切除58.细胞外铁呈阴性，铁粒幼细胞占13%，可能是：缺铁性贫血59.红细胞镰变实验所用试剂是Na2S2O260.氰化高铁血红蛋白吸收峰（nm）是在：54061血清铁浓度减低见于：缺铁性贫血62.测总铁结合力需先测血清铁63.进行糖原染色时幼红细胞呈阳性反应的是：缺铁性贫血原始细胞＞30%，过氧化物酶染色阴性或阳性率＜3%，无Auer小体，免疫细胞化学MPO阳性，CD13、CD33、CD14、CD15、CD11b中至少有一种阳性。

骨髓瘤化疗后采集干细胞的指标标准
骨髓瘤是一种恶性肿瘤，化疗是治疗骨髓瘤的常见方法之一。

在化疗后采集干细胞是为了进行自体干细胞移植，以帮助恢复骨髓功能。

在进行干细胞采集时，通常会根据一些指标和标准来评估患者的适宜程度。

以下是一些常见的指标和标准：
1. 血液学指标，包括血红蛋白水平、白细胞计数、血小板计数等。

这些指标可以反映患者的造血功能和血液状况，对于干细胞采集的适宜性有重要意义。

2. 肿瘤学指标，包括骨髓瘤的病情稳定程度、肿瘤负担等。

化疗后的肿瘤负担对于干细胞采集的适宜性有一定影响，通常需要确保肿瘤得到一定程度的控制。

3. 肝肾功能指标，包括肝功能、肾功能等。

这些功能的正常与否对于干细胞采集的安全性和成功性都有重要影响。

4. 干细胞数量指标，包括外周血干细胞数量、质量等。

这些指标可以直接反映干细胞采集的可行性和预期的收获量。

5. 心肺功能指标，包括心脏功能、肺功能等。

这些指标对于干细胞采集过程中的耐受性和安全性至关重要。

总的来说，干细胞采集的指标标准是多方面的，综合考虑患者的血液学、肿瘤学、肝肾功能、干细胞数量以及心肺功能等多个方面的指标，以确保干细胞采集的安全性和有效性。

医生会根据患者的具体情况进行评估，确定是否适合进行干细胞采集。

造血细胞分离、集落培养及表型分析所谓造血干细胞（hematopoietic stem cells，HSC，）是指具有自我更新和多向分化能力的一类细胞。

它的基本特性是具有自我更新能力，即经过一个细胞周期活动之后，可以产生两个与分裂前性质相同的造血干细胞,同时又具有多向分化能力，即在一定的环境条件下，造血干细胞具有向各系血细胞分化的能力。

图1 造血系统和造血干细胞分化图Fig。

1 hematopoietic system and hematopoietic stem cell differentiation.造血干细胞主要存在于骨髓、动员的外周血、脐血中，与骨髓和动员的外周血相比，脐血来源丰富、受病毒污染的几率小、富含造血干细胞且所含的造血干细胞具有更高的增殖潜能，同时脐血中的淋巴细胞幼稚，具有较低的免疫排斥活性，是优良的造血干细胞来源。

造血干/祖细胞鉴别的传统方法还是应用集落分析方法，它可检测粒-巨嗜细胞集落形成单位（colony - forming unit-granulocyte/ macrophage，CFU-GM）、红系爆式集落形成单位（burst-forming unit-erythroid，BFU-E）、巨核细胞集落形成单位（colony-forming unit-megakaryocyte，CFU-MK）、红系-粒系-巨嗜系-单核系集落形成单位（multipotent colony-forming units，CFU-GEMM 或mixed colony-forming unit，CFU-Mix），等等，它是在半固体培养基上培养14天，然后在显微镜下计数集落。

造血干细胞的表面标志随着个体发育的不同时期不同，CD34+、CD38-、HLA-DR-、Thy-1+、c-kit+、LFA-1-、CD45RA-、CD71-、lin-已经普遍被认为是造血干细胞的标志。

此外，1997年发现一个新的造血干细胞标志是AC133，但具CD34抗原是目前公认的造血干细胞和祖细胞的共同标志。

临检易错题-临床血液学检验临床血液学检验第二章造血与血细胞分化发育1、造血干细胞的主要分子标志是CD342、红细胞破坏后，主要被单核-巨噬细胞系统吞噬3、原始细胞胞体大、核浆比大第三章骨髓细胞学检查的临床意义1、核质发育不平衡见于白血病、巨幼细胞贫血和缺铁性贫血2、小红细胞＜6μm、大红细胞＞10μm、巨红细胞＞15μm第四章血细胞化学染色的临床应用1、抗酒石酸酸性磷酸酶染色：戈谢细胞＋、尼曼-匹克细胞—；多毛细胞白血病＋、慢性淋巴细胞白血病—；T淋巴细胞＋、B淋巴细胞—；2、非特异性酯酶染色：急性单核细胞白血病＋，可被氟化钠抑制急性粒细胞白血病＋，不被氟化钠抑制3、碱性磷酸酶染色：正常：30~130①细菌感染时NAP积分增高，病毒感染不变；②慢性粒细胞白血病，NAP积分明显减低常为0类白血病反应时，NAP积分值明显增高；③急性粒细胞白血病时NAP减低，急性淋巴细胞白血病NAP增高；④再障时NAP增高，PNH时NAP减低。

4、缺铁性贫血时，骨髓细胞外铁明显减低，甚至消失；铁粒幼细胞的百分率减低。

骨髓外铁是观察骨髓小粒中的铁。

5、PAS染色，红血病或红白血病时幼红细胞可呈阳性反应。

6、特异性酯酶染色：萘酚AS-D氯乙酸酯酶，NSE。

粒细胞系统染色阳性，其余都为阴性。

第六章染色体检查1、慢性粒细胞白血病：t（9；22）2、急性早幼粒白血病：t（15；17）第七章贫血及其细胞学检验1、PNH：筛选试验—蔗糖溶血试验确诊实验—酸化血清溶血试验（Ham test），pH6.4~6.52、G6PD：高铁血红蛋白还原试验、变性珠蛋白小体生成试验、荧光斑点试验和G6PD活性检测3、红细胞丙酮酸激酶缺陷症：筛检试验：PK荧光斑点法确认试验：PK活性检测4、HbA2增多见于β珠蛋白合成障碍性贫血5、急性造血功能停滞，亦称再生障碍危象。

表现为血中红细胞及网织红细胞减少或全血细胞减少。

多数骨髓增生活跃，粒红比增高，在骨髓中可见巨大原始红细胞是其突出特点。

造血干细胞HSC1简介造血干细胞（HSC）是罕见的能自我更新的祖细胞，可产生所有血细胞谱系。

此外，HSC能够在移植后的主要受辐照接受者中长期产生所有血细胞类型，并且能够自我更新，因此可以将细胞移植到第二宿主中，从而引起长期的多谱系再造种群。

HSC静态、自我更新和分化之间的平衡在很大程度上取决于HSC跟环境的相互作用。

在发育中的胚胎中，HSC驻留在尚未形成小生态的胎儿肝脏中，可延长细胞寿命。

从E 17.5开始，骨髓被HSC所定居，在整个成年期BM仍然是主要的造血生境。

成年后，最原始的HSC被认为位于BM中最缺氧的微环境中，即低氧干细胞生态位，从而维持了原始表型和细胞周期的静止，从而避免了HSC衰老。

可以基于表面标志物表达，通过流式细胞术分离小鼠HSC。

从BM中分离小鼠HSC的第一步通常是去除表达特异于终末分化血细胞的“谱系”（Lin）抗原的成熟细胞，Lin包括F4/80+/Mac1+单核和巨噬细胞，Gr1+粒细胞，CD11c+DC细胞，CD4+/CD8+/CD3+ T细胞，CD5+ CD19+ B220+ B 细胞，NK1.1+ NK细胞和Ter119+红细胞。

这些抗原在HSC上不存在。

然后，HSC作为谱系阴性（Lin–）细胞进一步富集，表达细胞表面标志物的组合。

常用的标记包括Thy1.1，c-Kit和Sca1。

因此，多能造血祖细胞已被纯化为Lin-Thy1.1lo c-Kit+ Sca-1+细胞，占有核BM细胞的<0.1％。

尽管该种群包含小鼠中的所有多能祖细胞，但它仍然是异质的，除了长期重建的HSC外，还包含瞬时重建的多能祖细胞。

长期自我更新的HSC与短暂重构的多能祖细胞之间在表面标志物表达上存在差异，两种祖细胞群能够区分。

Lin-c-Kit+ Sca-1+Thy1.1loCD150+CD48-群体(SLAM细胞)主要包含长期自我更新的HSC，Lin-c-Kit+Sca-1+Thy1.1loCD150+CD48+群体主要包含瞬时自我更新的多能祖细胞，Lin-c-Kit+Sca-1+Thy1.1loCD150-CD48+群体主要包含非自我更新的多能祖细胞，可据此进行流式分选或移植分析。

造血细胞分离、集落培养及表型分析动性好，同时也避免了细胞因受力而损伤的情况。

流式细胞仪通过激光束照射细胞，检测细胞表面标记物的荧光强度，进而分析细胞表型，包括细胞表面标志、大小、形态等。

2、集落培养集落培养法是一种常用的检测造血干细胞的方法。

将待测细胞在半固体培养基中培养，待细胞分裂形成集落后，根据集落的形态和数量来判断细胞的分化能力。

常用的集落包括粒-巨嗜细胞集落形成单位（CFU-GM）、红系爆式集落形成单位（BFU-E）、巨核细胞集落形成单位（CFU-MK）等。

集落培养法可以检测细胞的增殖能力和分化潜能，是评估细胞功能的重要方法。

二、实验步骤1、细胞样品制备将待测细胞制成单细胞悬液，使得细胞可以均匀地分布在流式细胞仪的流动室中，方便后续的细胞表型分析。

2、流式细胞仪分析将制备好的细胞悬液加入样品管中，加入特异性荧光染料后，通过流式细胞仪进行细胞表型分析。

根据细胞表面标志物的荧光强度，可以判断细胞的类型和状态。

3、集落培养将待测细胞在半固体培养基中培养，待细胞分裂形成集落后，根据集落的形态和数量来判断细胞的分化能力。

常用的集落包括粒-巨嗜细胞集落形成单位（CFU-GM）、红系爆式集落形成单位（BFU-E）、巨核细胞集落形成单位（CFU-MK）等。

三、实验结果分析通过流式细胞仪和集落培养的结果，可以分析细胞的表型和功能。

例如，CD34+、CD38-、HLA-DR-、Thy-1+、c-kit+、LFA-1-、CD45RA-、CD71-、lin-等标志物被广泛认为是造血干细胞的标志。

同时，集落培养的结果也可以评估细胞的增殖能力和分化潜能。

这些结果对于研究造血干细胞的生物学特性和临床应用具有重要意义。

本实验采用流式细胞仪技术对脐血中的造血干细胞进行分离和检测。

流式细胞仪的测量区利用样品流和鞘流的气压差的层流原理，使细胞依次排列成单行，每个细胞以均等的时间依次通过测量区。

被荧光染料染色的细胞受到强烈的激光照射后发出荧光，同时产生散射光。

造血干/祖细胞增殖与分化谱系多能干细胞（HPSC）G0——G0期HPSCHPSC G1 淋巴干细胞高增殖潜能细胞（Blast CFCs）前前B前T 多向性祖细胞（CFU—GEMM）———————————————————————前B 粒-巨噬细胞爆式集落BFU-E BFU-MK（CFU—GM）未成熟BCFU-E CFU-MK CFU-G CFU-M 成熟B成熟T原始红细胞原始巨核细胞原始粒细胞原始单核细胞原始浆细胞早幼红细胞幼稚巨核细胞早幼粒细胞幼稚单核细胞幼稚浆细胞中幼红细胞成熟巨核细胞单核细胞浆细胞中性中幼嗜酸性中嗜碱性中晚幼红细胞粒细胞幼粒细胞幼粒细胞成熟红细胞中性晚幼嗜酸性晚嗜碱性晚粒细胞幼粒细胞幼粒细胞中性成熟嗜酸性成嗜碱性成粒细胞熟粒细胞熟粒细胞缺铁性贫血巨幼红细胞性贫血再生障碍性贫血珠蛋白生成障碍性贫血异常血红蛋白病遗传性球形红细胞增多症遗传性椭圆形红细胞增多症遗传性口形红细胞增多症葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症丙酮酸激酶缺乏症阵发性睡眠性血红蛋白尿症自身免疫性溶血性贫血冷凝集素综合征高铁血红蛋白症硫化血红蛋白症真性红细胞增多症白细胞减少症中性粒细胞减少症和粒细胞缺乏症传染性单核细胞增多症急性微分化性白血病（M0）急性粒细胞白血病未分化性（M1）急性粒细胞白血病部分分化性（M2a）M2b（M2b）急性颗粒增多的早幼粒细胞白血病（M3a）M3b 急性粒-单核细胞白血病（M4a M4b M4c M4EO）急性单核细胞白血病（M5a）M5b红白血病（M6）急性巨核细胞白血病(M7)急性淋巴细胞白血病(ALL)T-细胞型：（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型）B-细胞型：前前B 、前B 、Common 型、B-ALL急性混合细胞白血病(HAL) 浆细胞白血病嗜酸粒细胞白血病 嗜碱粒细胞白血病多毛细胞白血病(HCL) 慢性淋巴细胞白血病 (CLL)慢性粒细胞白血病(CML)肥大细胞白血病大颗粒淋巴细胞白血病幼淋细胞白血病骨髓增生异常综合征（MDS：RA RAS RAEB RAEBT）。