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犬瘟热病毒分离株N、H、F蛋白基因的变异分析王旭荣;王小辉;张世栋;李世宏;潘虎;严作廷【摘要】通过RT-PCR方法扩增到犬瘟热病毒(canine distemper virus,CDV)分离株GS0812-4的N、H、F蛋白基因,然后克隆入pGEM-T Easy载体并进行序列分析和抗原表位预测分析.结果表明,GS0812-4分离株的N、H、F蛋白基因与其他分离株相应序列的核苷酸同源性分别为93.2％～97.8％、90.3％～97.3％、93.2％～97.8％,其推定的氨基酸同源性分别为96.6％～98.7％、91.3％～97.9％和96.6％～98.7％;GS0812-4分离株N、H、F蛋白基因与疫苗株相应序列的核苷酸同源性分别为93.1％～93.8％、89.4％～90.5％、93.1％～93.8％,其推定的氨基酸同源性分别为96.4％～97.3％、89.3％～91.3％、96.4％～97.3％.由基因系统发育树可知,GS0812-4与疫苗株处于不同的分支,其中与MKY-KM08的亲缘关系最近,但GS0812-4在N、H、F3个基因系统发育树上与其他同一毒株的亲缘关系远近不同.H、F蛋白的抗原表位预测结果表明,GS0812-4与MKY-KM08和疫苗株的抗原表位均有差异.说明GS0812-4是野毒株,与MKY-KM08属于同一基因型,来源于同一毒株,但两毒株间的H蛋白和F蛋白的抗原表位仍有差异.%The nucleoprotein (N), haemgagglutinin protein (H)and fusion protein (F) genes of canine distemper virus (CDV) isolate GS0812-4were obtained by RT-PCR and sequenced after being cloned directly into the pGEM-T Easy. The sequences of N,H and F genes of GS0812-4 were compared with sequences and antigen epitope of other CDV strains in Gen-Bank by BLAST and DNAStar software. The results showed that the N,H and F of GS0812-4 shared 93. 2% to 97. 8% ,90. 3% to 97. 3%,93. 2% to 97.8% of nucleotide homology, and 96. 6% to 98. 7%,91. 3% to 97.9% and 96.6% to 98.7% ofamino acid identity with that of referenced strains, respectively. However, The N, H and F genes of the GS0812-4 shared only 93.1% to 93. 8%,89. 4% to 90. 5% and 93.1% to 93. 8% of nucleotide homology, and 96.4% to 97. 3% ,89. 3% to 91.3% and 96. 4% to 97. 3% of amino acid homology with that of vaccine strains, respectively. Phylogenetic tree showed thatGS0812-4 was different from the vaccine strain of the branch, it had a recent genetic relationship and MKY-KM08. But GS0812-4 compared with other strains of different genetic distance relationships. H, F protein epitope prediction results showed that GS0812-4 epitope was different from and MKY-KM08 and vaccine strains. Results showed that GS0812-4 was the wild strain, and the GS0812-4 strain was MKY-KM08 belonged to the same genotype, derived from the same strain, but there were still differences between epitopes.【期刊名称】《中国畜牧兽医》【年(卷),期】2011(038)008【总页数】7页(P71-77)【关键词】犬瘟热病毒;H蛋白;H蛋白;F蛋白;变异分析【作者】王旭荣;王小辉;张世栋;李世宏;潘虎;严作廷【作者单位】中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所中国农业科学院临床兽医学研究中心,甘肃兰州 730050;中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所中国农业科学院临床兽医学研究中心,甘肃兰州 730050;中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所中国农业科学院临床兽医学研究中心,甘肃兰州 730050;中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所中国农业科学院临床兽医学研究中心,甘肃兰州 730050;中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所中国农业科学院临床兽医学研究中心,甘肃兰州 730050;中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所中国农业科学院临床兽医学研究中心,甘肃兰州 730050【正文语种】中文【中图分类】Q78犬瘟热（canine distemper，CD）是由犬瘟热病毒（canine distemper virus，CDV）感染引起的急性高度接触性传染病，在非免疫动物中发病率和致死率很高。
表达犬瘟热病毒融合蛋白基因重组腺病毒的构建与鉴定鞠会艳;高玉伟;杨松涛;夏咸柱【期刊名称】《东北农业大学学报》【年(卷),期】2010(041)009【摘要】利用pVAX1载体的表达元件CMV启动子和poly(A)多聚腺苷酸信号构建了含犬瘟热病毒融合蛋白基因(F)的重组犬腺病毒.首先,利用酶切、连接等实验方法构建了含CDV启动子F蛋白基因表达盒的转移质粒pVAXΔE3LPF.再以含CAV-2 SY株全基因组的pPoly2-CAV-2为载体,构建重组质粒pCAV-2-pVAXLPF,利用脂质体介导方法转染MDCK细胞,转染3次后,细胞出现了典型的犬腺病毒感染样病变.电镜负染和切片观察、酶切、PCR扩增及测序鉴定的结果表明,成功构建了含犬瘟热病毒融合蛋白基因的重组犬腺病毒,表达的融合蛋白分子质量为72 ku.在MDCK细胞上连续传30代试验表明重组病毒CAV-2-pVAXLPF具有良好的遗传稳定性.【总页数】8页(P89-96)【作者】鞠会艳;高玉伟;杨松涛;夏咸柱【作者单位】吉林大学农学部,长春,130062;军事医学科学院军事兽医研究所,长春,130062;军事医学科学院军事兽医研究所,长春,130062;军事医学科学院军事兽医研究所,长春,130062;吉林大学农学部,长春,130062;军事医学科学院军事兽医研究所,长春,130062【正文语种】中文【中图分类】S852.655【相关文献】1.犬瘟热病毒核蛋白基因重组腺病毒的构建、鉴定与表达 [J], 鞠会艳;夏咸柱;高玉伟;杨松涛;邹啸环;黄耕;李彦舫2.HIV-1 Tat基因重组原核表达载体的构建及融合蛋白的表达纯化与功能鉴定 [J], 邱会平;程晓东;卢春3.犬瘟热病毒核蛋白基因重组腺病毒的构建、鉴定与表达 [J], 鞠会艳;夏咸柱;高玉伟;杨松涛;邹啸环;黄耕;李彦舫4.表达大熊猫源犬瘟热病毒H蛋白复制缺陷型重组腺病毒的构建及鉴定 [J], 陈廷炜;孟宪踊;王铁成;高玉伟;冯娜;夏咸柱5.表达大熊猫源犬瘟热病毒H蛋白复制缺陷型重组腺病毒的构建及鉴定 [J], 陈廷炜;孟宪踊;王铁成;高玉伟;冯娜;夏咸柱因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
犬瘟热病毒F蛋白分子生物学研究进展
许红丽;易立;王建科;杨莘;程世鹏
【期刊名称】《特产研究》
【年(卷),期】2011(033)002
【摘要】犬瘟热病毒融合蛋白是囊膜糖蛋白,是产生中和抗体的主要保护性抗原,结构相对保守.融合蛋白介导病毒囊膜和细胞膜融合,决定病毒在宿主体内扩散的能力,在病毒的致病性及免疫原性上具有重要作用.因此,对犬瘟热融合蛋白基因及其蛋白的结构和功能进行研究具有重要的意义.本文从蛋白结构、蛋白功能、核酸序列比对等多方面对融合蛋白进行了阐述.
【总页数】5页(P52-56)
【作者】许红丽;易立;王建科;杨莘;程世鹏
【作者单位】中国农业科学院特产研究所,吉林省特种经济动物分子生物学重点实验室,吉林吉林132109;中国农业科学院特产研究所,吉林省特种经济动物分子生物学重点实验室,吉林吉林132109;中国农业科学院特产研究所,吉林省特种经济动物分子生物学重点实验室,吉林吉林132109;中国农业科学院特产研究所,吉林省特种经济动物分子生物学重点实验室,吉林吉林132109;中国农业科学院特产研究所,吉林省特种经济动物分子生物学重点实验室,吉林吉林132109
【正文语种】中文
【中图分类】Q939.4
【相关文献】
1.犬瘟热病毒核衣壳蛋白分子生物学研究进展 [J], 罗彬;易立;王建科;程世鹏
2.犬瘟热病毒分子生物学特征研究进展 [J], 乔军
3.犬瘟热病毒分子生物学研究进展 [J], 高娃;杨敬;陈振文
4.犬瘟热病毒分子生物学研究进展 [J], 王琛;袁宝;任文陟
5.犬瘟热病毒分子生物学研究进展 [J], 杨敬;李永清
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犬瘟热病毒H、F和N基因的克隆及原核表达作者：包福祥，阿米娜等来源：《兽医导刊》 2018年第4期犬瘟热病毒(Canine distemper virus, CDV) 为负链RNA 病毒，属于副黏病毒科麻疹病毒属，可引起犬科、鼬科和浣熊科动物的急性、高度接触性、致死性疾病，该病的主要传染源为患病动物和隐性感染的带毒动物。
目前，犬瘟热常年发生，呈散发、地方流行，传染性强、发病率和死亡率高，是养犬业、经济动物养殖和野生动物危害最大的疾病之一。
CDV 由15 616个核苷酸组成，编码基因按3’～5’端排序依次为：3’端前导序列、核衣壳蛋白基因（N）、磷蛋白基因（P）、基质蛋白基因（M）、融合蛋白基因（F）、血凝素蛋白基因（H）、聚合酶蛋白基因（L）和5’端引导序列。
研究表明，CDV 的N、F 和H 三种蛋白在病毒感染和宿主免疫方面起主要作用。
因此，H、F 和N 蛋白的克隆和表达将对CDV 的诊断和治疗具有非常重要的意义。
一、材料和方法1. 材料（1）主要试剂。
英特威犬四联疫苗（宠必威）由内蒙古农业大学教学兽医院刘俊平教授提供；Trizol 试剂为Invitrogen 产品；反转录试剂盒购自Promega 公司；T4 连接酶为NEB 公司产品；Ex-Taq DNA 聚合酶、凝胶回收试剂盒、质粒小提试剂盒、DL2000、DL5000Maker、pMD19-T（Simple）Vector、EcoRI、XhoI、BamHI 限制性内切酶均购自Takara 公司；大肠杆菌Trans-T1 感受态、Transetta (DE3) 感受态购自北京全式金公司；Ni-NTA Sefinose(TM) Resin 购自生工生物工程( 上海) 股份有限公司；SDS-PAGE 凝胶试剂盒购自碧云天公司。
（2）PCR 引物。
根据GenBank 中发表的CDVOnderstepoort 毒株基因序列，用Primer premier 5 软件设计了三对特异性引物H1/H2、N1/N2、F1/F2，引物序列如表1 所示，并在PCR 产物上、下游分别引入酶切位点，引物由生工生物工程( 上海) 股份有限公司合成。
犬瘟热病毒水貂株H与F蛋白基因原核表达重组质粒的构建及表达苏凤艳;温铁峰;宗颖;王全凯【期刊名称】《华南农业大学学报》【年(卷),期】2012(033)003【摘要】将克隆质粒pMD-18T-H和pMD-18T-F分别进行双酶切,获得纯化的H 基因和F基因,在T4 DNA连接酶的作用下,亚克隆到原核表达载体pET28a(+)上,获得原核重组质粒pET28a-H和pET28a-F.将原核重组质粒转化大肠埃希菌Escherichia coli Rosetta2( DE3)中进行表达,SDS-PAGE结果显示H基因和F基因分别表达相对分子质量约为31 400和38 200的融合蛋白,Western-blot检测结果显示,表达蛋白均可与CDV标准阳性血清呈阳性反应,表明原核表达的CDV H 蛋白和F蛋白在反应原性上具有与天然H蛋白和F蛋白同样的特性,可作为CDV 诊断用抗原,为CDV的免疫预防研究奠定基础.【总页数】4页(P417-420)【作者】苏凤艳;温铁峰;宗颖;王全凯【作者单位】吉林农业大学中药材学院,吉林长春130118;吉林农业大学中药材学院,吉林长春130118;吉林农业大学中药材学院,吉林长春130118;吉林农业大学中药材学院,吉林长春130118【正文语种】中文【中图分类】S852.65【相关文献】1.犬瘟热病毒水貂分离株F基因真核表达载体的构建与表达 [J], 苏凤艳;宗春苗;王卓聪;丁庆东;王全凯2.犬瘟热病毒GZ2株的分离鉴定及 H 基因原核表达质粒构建 [J], 曾智勇;周莉;汤德元;刘志杰;梁海英3.犬瘟热病毒GZ-Z株H基因原核表达载体的构建 [J], 薛磊4.犬瘟热病毒水貂分离株F1基因的克隆表达 [J], 张蕾;柴秀丽;张大鹏;张海玲;赵建军;高晗;白雪;徐磊;闫喜军5.犬瘟热病毒水貂分离株F基因的克隆及原核表达 [J], 袁小远;单虎;王志亮;李俊因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
犬瘟热病毒F蛋白基因片段的克隆与表达及其表达产物抗原性的初步鉴定许莎琼;傅志强;华修国;朱建国;刘金明;吴祖立【期刊名称】《上海交通大学学报（农业科学版）》【年(卷),期】2006(024)001【摘要】本研究采用RT-PCR法扩增出犬瘟热病毒标准疫苗株的融合蛋白基因(F 基因)片段约1499 bp,克隆到pMD18-T载体,酶切鉴定后用一对特异性的引物扩增约732 bp的F蛋白基因片段.并把该基因定向克隆到原核表达载体pET-28a(+)中,转化到宿主菌BL21(DE3)后进行了表达并纯化了该表达产物,Western印迹显示表达产物有良好的抗原性.【总页数】5页(P70-74)【作者】许莎琼;傅志强;华修国;朱建国;刘金明;吴祖立【作者单位】上海交通大学,农业与生物学院,上海,201101;中国农科院,上海家畜寄生虫病研究所,上海,200232;上海交通大学,农业与生物学院,上海,201101;上海交通大学,农业与生物学院,上海,201101;中国农科院,上海家畜寄生虫病研究所,上海,200232;上海交通大学,农业与生物学院,上海,201101【正文语种】中文【中图分类】S858.292【相关文献】1.犬瘟热病毒水貂株H与F蛋白基因原核表达重组质粒的构建及表达 [J], 苏凤艳;温铁峰;宗颖;王全凯2.TTMV ORF1基因的原核表达及表达产物抗原性初步鉴定 [J], 阿荣;朱彩霞;杨志彪;李培锋;华修国3.犬瘟热病毒N蛋白基因的克隆、原核表达及其表达产物抗原性鉴定 [J], 申卫红;马素贞;陈胜男;刘腾飞;陶玉成;简子健4.犬瘟热病毒血凝蛋白在昆虫细胞中的表达与抗原性分析 [J], 全传松;姜骞;于作;李博韬;李连峰;曲连东5.犬瘟热病毒疫苗株H蛋白基因片段的克隆与表达及表达产物抗原性的初步鉴定[J], 王好;钱爱东;刘晔;扈荣良因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
表达犬瘟热H基因重组伪狂犬病毒的构建及生物学特性研究李业伟;孙程龙;韩乃君;王颖;扈荣良【期刊名称】《农业科学与技术（英文版）》【年(卷),期】2011(012)006【摘要】[目的]构建表达犬瘟热Onderstepoort株H蛋白的重组伪狂犬病毒,并研究其生物学特性。
[方法]通过RT-PCR方法获得Onderstepoort株H基因,插入pcDNA3.1（＋）建立好完整的真核细胞表达盒并将此表达盒亚克隆到转移载体p8AA上。
在此基础上再将报告基因LacZ的表达盒插入转移载体,命名为p8AAZH。
将p8AAZH与伪狂犬病毒（PRV）Bartha-K61株基因组共转染至BHK-21细胞中进行基因重组包装出毒,待细胞病变后收集病毒液。
通过蓝色蚀斑筛选、PCR、电镜观察以及Weste%[Objective] The aim was to construct a recombinant pseudorabies virus expressing canine distemper virus H gene and investigate its biological characters.[Method] H gene of canine distemper virus（CDV）strain Onderstepoort was produced by RT-PCR,inserted into pcDNA3.1（＋）vector to construct a expression cassette,which was then subcloned into transfer vector p8AA,prior to the insertion of LacZ expression cassette.The resulting new transfer vector was named as p8AAZH.Subsequently,p8AAZH was co-transfected with the genome of pseudorabies virus（PRV）Bartha-K61 into BHK-21 cells to enable gene recombination and virus package,and the virus solution was collected as cytopathic effect occurring.A series of procedures including blue plaque purification,PCR identification,observation under electronmicroscope and Western blot were carried out to screen the recombinant pseudorabies virus and identify the protein expression of targetgene.Meanwhile,growth curve of the recombinant virus was determined in BHK-21 cells.[Result] The H gene had been inserted into the genome of Bartha-K61 strain,and RPRV-H was the same as Bartha-K61 in the one-step growth curve and cytopathic effect in BHK-21 cells.[Conclusion] The recombinant pseudorabies virus was constructed,and the insertion of H gene did not influence proliferation of recombinant virus,which laid a foundation for development of recombinant canine distemper virus vaccine.【总页数】4页(P897-900)【作者】李业伟;孙程龙;韩乃君;王颖;扈荣良【作者单位】吉林大学畜牧兽医学院,吉林长春130062;吉林大学畜牧兽医学院,吉林长春130062;吉林大学畜牧兽医学院,吉林长春130062;军事医学科学院军事兽医研究所,吉林长春130122;军事医学科学院军事兽医研究所,吉林长春130122【正文语种】中文【中图分类】S因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
