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HPLC法测定并比较喜树果、马比木中10-羟基喜树碱含量苏爱雪;周翔;罗娅君;边清泉【摘要】目的：建立喜树果、马比木中10-羟基喜树碱的高效液相色谱法分析方法,并对两者10-羟基喜树碱含量进行比较分析。
方法：采用岛津LC-20A高效液相色谱系统对样品进行定量分析,色谱柱为ODS；甲醇：水(5.5：4.5)为流动相；检测波长为254nm；柱温35益；流速0.9mL·min-1。
结果：该条件下目标组分与其他组分有效分离( R>1.5),喜树碱进样量在0.01~0.09μg线性范围关系良好,相关系数 r=0.9996,平均回收率：100.4%,RSD：0.23%。
结论：该方法专属性强、分离效果好、分析速度快、灵敏度高、操作简便易行、结果准确可靠。
分析结果可为喜树果和马比木的深度开发提供参考依据。
【期刊名称】《产业与科技论坛》【年(卷),期】2014(000)005【总页数】2页(P78-79)【关键词】HPLC;喜树果;马比木;10-羟基喜树碱【作者】苏爱雪;周翔;罗娅君;边清泉【作者单位】绵阳师范学院化学与化学工程学院;绵阳师范学院化学与化学工程学院;绵阳师范学院化学与化学工程学院;绵阳师范学院化学与化学工程学院【正文语种】中文喜树果是中国珙桐科植物(Camptotheca acuminate Decne)的果实，喜树又称旱莲、水桐树、千张树，主要生长于云南、广西等地;马比木为茶茱萸科植物海桐假柴龙树(Nothapodytes Pittosporoides Oliv.sleum)的根皮，又称为公黄珠子、追风伞，分布于贵州、湖北、四川、湖南等地。
2种植物的共同特点是均含有活性成分喜树碱及其衍生物10－羟基喜树碱(10－hydroxycamptothecin，简称HCPT)，喜树碱及10－羟基喜树碱临床用于治疗膀胱癌、胃癌、直肠癌等消化系统恶性肿瘤，10－羟基喜树碱作为S期的特异性抗癌物质，其毒性较喜树碱低，用于直肠癌、原发性肝癌、胃癌、慢性粒细胞白血病、膀胱癌的治疗更为安全有效。
10-羟基喜树碱杂质10-羟基喜树碱 (11-hydroxy mitragynine) 是来自喜树 (Mitragyna speciosa) 的天然生物碱，具有潜在的药理学活性。
然而，在提取和制备过程中，可能会存在一些杂质。
本文将讨论10-羟基喜树碱杂质的来源、影响及相关解决方法。
一、来源10-羟基喜树碱作为一种天然生物碱，主要存在于喜树的叶片中。
提取10-羟基喜树碱通常需要采用化学方法，如溶剂萃取、温和蒸馏或超声波提取。
然而，这些提取方法在一定程度上可能引入一些杂质。
二、影响10-羟基喜树碱杂质的存在可能会对其药理学活性和安全性产生一定的影响。
常见的杂质包括其他喜树生物碱的衍生物、杂质来源的溶剂、氧化产物等。
这些杂质可能会干扰10-羟基喜树碱的药效评估和临床疗效。
三、分析方法针对10-羟基喜树碱杂质的分析方法也得到了不断的发展和优化。
常见的方法包括高效液相色谱-质谱联用 (HPLC-MS)、气相色谱-质谱联用 (GC-MS) 和核磁共振 (NMR) 等。
四、减少杂质的方法为了减少10-羟基喜树碱中的杂质，可以采用以下几种方法：1. 优化提取过程：在提取10-羟基喜树碱时，可以选择合适的溶剂和提取条件，以减少杂质的引入。
2. 清洁分离技术：采用纯化分离技术，如液相色谱 (LC)、固相萃取 (SPE) 等，可以有效地去除杂质。
3. 质量控制：建立标准化的质量控制程序，确保10-羟基喜树碱的纯度和安全性。
4. 选择合适的提取源：在选择提取源时，可以优先考虑那些杂质较少的植物，以减少提取过程中的杂质。
五、结论10-羟基喜树碱作为一种具有药理学活性的天然生物碱，其杂质问题需要引起我们的关注。
通过优化提取过程、采用清洁分离技术、建立质量控制程序及选择合适的提取源等方法，可以减少10-羟基喜树碱中的杂质，提高其药理学活性和安全性。
进一步的研究需要将目光放在提高10-羟基喜树碱纯度的方法上，以开发更多潜在的临床应用和药物开发的机会。
第37卷第1期林业科技Vol.37No.1 2012年1月FORESTRY SCIENCE＆TECHNOLOGY Jan．2012文章编号：1001－9499（2012）01－0021－03高效液相色谱－电喷雾质谱联用分析喜树果鞣花酸类成分*郭群袁桥玉（武汉职业技术学院生物工程学院，湖北武汉430074）摘要：建立喜树果的液相色谱质谱联用分析方法，并分析了喜树果中的鞣花酸类化合物。
大孔吸附树脂分离、HPLC–ESI–（MS）n数据分析结果：初步分析到5个化合物，即3，4－O，O－亚甲基－3'，4'－O－二甲基鞣花酸、3'－O－甲基鞣花酸－4'－O－葡萄糖苷、鞣花酸－4'－O－鼠李糖苷、3，4'－O－二甲基鞣花酸、3，3' 4，4'－O－四甲基－5'－甲氧基鞣花酸。
用HPLC–ESI–（MS）n方法分析喜树果鞣花酸类成分，方便、快捷、实用。
关键词：喜树果；HPLC–（MS）n；鞣花酸中图分类号：TH833，TH834文献标识码：A喜树果为珙桐科植物喜树（Camptotheca acuminata）的果实，其抗癌活性成分喜树碱和10－羟基喜树碱已经得到开发应用。
喜树果中的鞣花酸类成分—3'－O－甲基－3，4－O，O－亚甲基鞣花酸－4'－O－β－D－吡喃葡萄糖苷，具有较强抑制DNA拓扑异构酶I的作用，是潜在的抗癌药物资源［1－2］。
喜树果中的鞣花酸类成分含量较低［3］，且暂时未见有对照品提供。
本研究针对喜树果中的鞣花酸类成分，建立了大孔吸附树脂分离技术和HPLC–ESI－（MS）n分析技术，并定性分析到5个鞣花酸类化合物，其中2个为鞣花酸糖苷。
1试验部分1.1样品的制备喜树果采自中国湖北省恩施自治州。
50%乙醇回流提取，浓缩液上苯乙烯型非极性大孔吸附树脂柱，用30%、50%乙醇梯度洗脱；50%乙醇洗脱液再上聚苯乙烯型大孔吸附树脂柱，先用30%乙醇洗去水溶性杂质，再用50%乙醇脱洗；收集50%乙醇洗脱液的第5个至第6个BV（BV 为床体积）段的洗脱液，回收溶剂得提取物。
植物学通报 2005, 22 (5): 584￣589①陕西省教育厅产业化培育项目(03JC39)和西北大学科研基金项目(02NW10)资助。
②通讯作者。
Author for correspondence. E-mail: lwenzhe@ 收稿日期: 2004-12-19 接受日期: 2005-02-28 责任编辑: 于昕不同种源喜树幼枝中喜树碱的含量①王玲丽 刘文哲②(西北大学生命科学学院 西安 710069)摘要 通过HPLC 测定了喜树(Camptotheca acuminata )不同器官及不同种源幼枝中喜树碱的含量。
结果表明, 喜树碱含量在叶、种子和幼枝(幼叶和幼茎)中较高, 木质部中较少, 髓中最低。
不同种源的幼枝中, 来自成都种源喜树的喜树碱含量最高。
通过比较, 两年生喜树各器官中喜树碱含量普遍比一年生高, 幼枝中顶枝的喜树碱含量比侧枝高。
关键词 喜树, 喜树碱, 幼枝, 种源Contents of Camptothecin in Camptotheca acuminatafrom Different ProvenancesWANG Ling-Li LIU Wen-Zhe ②(College of Life Science, Northwest University, Xi’an 710069 )Abstract Camptothecin (CPT) content in organs of Camptotheca acuminata and young shoots from different areas of China was determined by HPLC. CPT content in leaves, seeds and young shoots was higher than that in xylem, lowest in piths and highest in young shoots from Sichuan province. CPT content in young biennial shoots was higher than that in annual shoots and that in caulody was higher than that in subbranches.Key words Camptotheca acuminata , Camptothecin, Young shoot , Provenance喜树(Camptotheca acuminata ), 为珙桐科(Nyssaceae)喜树属多年生亚热带落叶阔叶乔木, 是我国特有树种, 主要分布在长江流域及西南各省(中国科学院中国植物志编辑委员会,1983)。
加入一定量对照品,按供试品测定方法测定,并计算回收率,测得墨沙酮的加样回收率为9819%,RSD为211%(n=6)。
4 供试品的测定考查了供试品溶液的制备方法。
以甲醇为溶剂,分别采用浸泡20h,回流提取4h和超声振荡提取1h等3种方法制备供试液。
结果表明,浸泡20h浸出量明显低于其他两种方法,而回流提取液中杂质较多。
对超声提取时间也进行了考查。
对照品溶液:精密称取墨沙酮对照品适量,加甲醇定量稀释制成每毫升中约含0115mg的溶液,作为对照品溶液。
供试品溶液:精密称取生等药材细粉(过60目筛)约015g,置具塞锥形瓶中,精密加入甲醇50ml后,称重,浸泡2h后,超声振荡提取1h,放冷,补足重量,过滤,取续滤液备用。
准确量取对照品溶液2,4,6,8,10μl和供试品溶液适量进样,按外标法计算含量。
测得生等药材中墨沙酮的含量为1102%,RSD为0152%(n=3)。
5 参考文献1 中国科学院西北高原生物研究所.藏药志.西宁:青海人 民出版社,1991:4052 藏药标准.西宁:青海人民出版社,1979:331996—03—26收稿反相高效液相色谱法测定喜树果实中喜树碱的含量张丽艳 杨玉琴(贵州省中医研究所 贵阳550002) 摘要 采用YWG2C18柱,甲醇2水(6∶4)流动相,254nm检测,测定了喜树果实中喜树碱的含量,平均回收率为98167%,RSD为1171%(n=5),并对不同月份采收的喜树果实进行了测定。
关键词 高效液相色谱法 喜树碱 喜树果系珙桐科植物喜树的果实。
喜树碱为其主要活性成分,临床用于治疗消化系统恶性肿瘤[1]。
目前广西、上海药品标准采用紫外分光光度法测定喜树碱含量。
本文用反相HPLC测定喜树碱,其结果对于药材质量评价及指导工业生产具有参考作用。
1 实验部分111 仪器与试药日本岛津LC25A高效液相色谱仪,C2 R2AX数据处理机,SPD22AM紫外检测器。
喜树碱对照品(中国科学院昆明植物研究所提供)为分析纯。
HPLC法测定复方喜树碱贴膏中喜树碱的含量刘伟林【摘要】本文利用反相高效液相色谱仪(RP- HPLC)建立了测定复方喜树碱贴膏中喜树碱含量方法.Inertsil ODS -3 C18色谱柱(250mm ×4.6mm,5μm),流动相:甲醇-10％四氢呋喃(48∶ 52),紫外检测波长254nm,理论板数(以喜树碱计)3000.实验结果:喜树碱在0.03987～0.319μg范围内线性关系良好,r=1.0000,回收率97.8％.【期刊名称】《中国民族民间医药》【年(卷),期】2012(021)002【总页数】2页(P32-33)【关键词】复方喜树碱贴膏;喜树碱;高效液相色谱法【作者】刘伟林【作者单位】广西壮族自治区食品药品检验所,广西南宁530021【正文语种】中文【中图分类】R284.1喜树碱 (Camptothecine)为具抗肿瘤活性，为植物喜树的果实中提取的生物碱，其注射液作为抗恶性肿瘤药已在临床上应用。
复方喜树碱贴膏为喜树碱、山苍子油、冰片等的复方橡胶制剂，为角质促成剂，减少局部皮肤角质增生，主要用于斑块状，寻常型银屑病。
其主要有效成分为喜树碱，具有抗肿瘤活性，故对其进行含量测定是产品质量控制的关键。
该制剂原含量测定方法为紫外导数光谱法，是测定共轭体系的吸收光谱，而复方喜树碱贴膏除含喜树碱外，还共存有10-羟基喜树碱 (10-hgdroxg Camptothecine)、10-甲氧基喜树碱 (10-methoxy Camptothecine)等同系物，因此其测定受到干扰。
现采用HPLC法，将喜树碱与其他干扰成分分离，结果满意。
我们采用高效液相色谱法，对喜树碱进行含量测定方法研究，经方法学考察，其准确性、精密度、重现性均较好，可用于产品的质量控制。
1 仪器与试药仪器①Waters高效液相色谱仪 (1、600E泵，2487紫外检测器，717自动进样器;2、515泵×2，996二极管阵列检测器，717自动进样器)，Millennium32色谱工作站，Inertsil ODS-3 C18色谱柱，4.6×250mm，5μm; ② SartoriusBP211D电子天平。
一、喜树碱类羟喜树碱HydroxycamptothecinC20H16N2O5。
●本品为黄色柱状结晶，不溶于水，微溶于有机溶剂，具有酚羟基，可溶于碱性水溶液，显黄色荧光。
●结构特点：A+B环构成喹啉环；C环为吡咯环；D环为吡啶环；E环为α-羟基内酯环。
本品碱性较弱，不能与酸成稳定盐。
天然喜树碱为右旋，唯一手性中心C20为S型。
●药理毒理●羟基喜树碱作用于S期，为细胞周期特异性药物。
对S期的作用较G1期和G2期明显。
对G0期细胞无作用。
在较高浓度时对核分裂有抑制作用。
阻止细胞进入分裂期。
●机制：抑制Topo I，阻断单链或双链DNA在切口部位重新结合，从而导致DNA断裂和细胞死亡。
●应用：肠癌、肝癌和白血病的治疗二、长春碱类硫酸长春碱Vinblastine Sulfate紫杉醇药理作用：长春新碱为夹竹桃科植物长春花中提取的有效成分。
为干扰蛋白质合成的抗癌药物，主要对淋巴瘤、绒毛膜上皮癌及睾丸肿瘤有效、对肺癌、乳腺癌、卵巢癌及单核细胞白血病也有效。
抗肿瘤作用靶点是微管，主要抑制微管蛋白的聚合而影响纺锤体微管的形成。
使有丝分裂停止于中期，从而阻止癌细胞分裂繁殖。
周期特异性长春新碱Vincristine●对神经系统毒性较突出，对光过敏，应避光保存，静脉滴注时应避免日光直射长春瑞滨(vinorelbine●为周期特异性药物，对肺癌、尤其是非小细胞肺癌的疗效好，还用于乳腺癌、卵巢癌、食管癌的治疗神经毒性较低三、紫杉醇类紫杉醇paclitaxel药理作用：通过诱导和促使微管蛋白聚合成微管，同时抑制所形成微管的解聚，变性的微管可阻碍细胞正常有丝分裂，从而抑制细胞分裂和增殖，导致细胞死亡●对卵巢癌、乳腺癌和大肠癌疗效突出●为水针剂，需避光贮存2-8摄氏度。
喜树种子的天然扩散
刘济明;雷基祥
【期刊名称】《贵州农学院学报》
【年(卷),期】1997(016)002
【摘要】喜树种子的扩散，以风力和重力为扩散媒介，降雨及鼠类引起微弱的二次扩散。
扩散从９旬开始一直处续到次年８月末，但其有效扩散时间为１０月至次年３月。
不同年龄阶段及同一年龄阶段的不同部位，扩散的起始时间有差异。
种子的扩散距离及有效扩散距离与植株高度及冠幅大小的乘积成正相关，其扩散曲线向下凸出，递减率很大。
随扩散距离的增加，的数量及妇芽率迅速降低。
【总页数】7页(P13-19)
【作者】刘济明;雷基祥
【作者单位】贵州农学院林学系;贵州农学院林学系
【正文语种】中文
【中图分类】S792.990.5
【相关文献】
1.天然喜树碱和10-羟基喜树碱柱层析分离工艺研究 [J], 郭忠军;麻长娟
2.呼伦贝尔沙地天然樟子松种子扩散机制研究 [J], 王妍;卢琦;程立岩;熊好琴
3.喜树种子中喜树碱和10-羟基喜树碱高效液相色谱法分析 [J], 王洋;阎秀峰;张玉红;于涛;马梅芳;魏焕勇
4.南方红豆杉水浸提液对喜树种子发芽和幼苗生长的化感作用 [J], 李春英;关佳晶;
李玉正;苏伟然;田瑶;王婷婷;李申;赵春建
5.喜树种子萌发和幼苗发育过程中喜树碱含量的变化 [J], 张玉红;王洋;阎秀峰因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
![喜树碱、10-羟基喜树碱的生产工艺方法[发明专利]](https://img.taocdn.com/s1/m/d3be413a33d4b14e8424681b.png)
专利名称：喜树碱、10－羟基喜树碱的生产工艺方法专利类型：发明专利
发明人：阎秀峰,王洋,张玉红,于涛
申请号：CN01138943.5
申请日：20011225
公开号：CN1428343A
公开日：
20030709
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：一种喜树碱、10－羟基喜树碱的生产工艺方法，它是以2～40天的喜树幼苗或喜树果实为原料，经粉碎→乙醇渗漉萃取→萃取液浓缩至浓水溶液→大孔吸附树脂柱层析→不同溶剂解吸液浓缩分别得喜树碱和10－羟基喜树碱粗品→分别重结晶后得喜树碱和10－羟基喜树碱产品的工艺路线。
本发明生产喜树碱及10－羟基喜树碱，生产成本低，生产过程中的环境污染程度低，对生产人员的毒害小，产品收率高，纯度高。
申请人：东北林业大学,阎秀峰,王洋
地址：150040 黑龙江省哈尔滨市和兴路26号332信箱
国籍：CN
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羟基喜树碱10，20位双取代衍生物的合成及活性评价郭娜;江都;温少鹏;滕玉鸥【摘要】According to the structure-activity relationship(SAR)of camptothecin and the concept of prodrug,a novel seires of 10,20-disubstituted camptothecin derivatives with a carbamate linker was designed and synthesized. Biological evaluation in vitro revealed that the cytotoxicity of these analogs was significantly reduced compared with camptothecin,which indi-cated that these compounds could be further investigated as lead prodrugs.%根据喜树碱类药物的构效关系和前药设计理念，设计和合成了一系列新的10，20位双氨基甲酸酯取代的羟基喜树碱衍生物，且均为新化合物。
体外细胞活性测试结果表明：这些化合物的细胞毒作用比喜树碱明显降低，可作为前药先导物进行更深入研究。
【期刊名称】《天津科技大学学报》【年(卷),期】2014(000)006【总页数】4页(P7-10)【关键词】喜树碱;抗肿瘤;合成【作者】郭娜;江都;温少鹏;滕玉鸥【作者单位】工业发酵微生物教育部重点实验室，天津科技大学生物工程学院，天津 300457;工业发酵微生物教育部重点实验室，天津科技大学生物工程学院，天津 300457;工业发酵微生物教育部重点实验室，天津科技大学生物工程学院，天津 300457;工业发酵微生物教育部重点实验室，天津科技大学生物工程学院，天津 300457【正文语种】中文【中图分类】R914.5喜树碱和羟基喜树碱是从喜树中分得的微量生物碱类化合物[1]，对多种肿瘤具有明显的抑制作用，其作用靶点是拓扑异构酶I(TopoI)．喜树碱和羟基喜树碱具有较强毒副作用，容易出现不良反应，同时溶解性差，因此国内外研究者一直致力于寻找高效低毒的喜树碱衍生物，希望可以使药物选择性地分布于肿瘤部位，从而减少对正常细胞的毒性，或者因安全性提高使得用药量以及用药次数增加[2–3]．达到上述目的的方法之一是以前药的形式将药物制作成相对非毒性的制剂，待药物到达肿瘤部位时再被激活生成活性形式．喜树碱常见的另一问题是其20位羟基内酯的不稳定性，在中性至碱性条件下容易水解开环成为非活性的羧酸盐．已有构效关系表明，内酯环与20位裸露的羟基是该类化合物抗肿瘤活性所必需的结构特征，将20位羟基衍生化后会导致活性下降，但同时内酯环的稳定性增加[4]，这是因为20位羟基可以与内酯的羰基基团形成分子内氢键，加速内酯的水解，而20位衍生化后破坏了此氢键作用，从而使内酯结构稳定．因此，20位进行适当的衍生化是制备喜树碱前药最普遍的方法[5–7]．最常见的衍生化是将20位羟基成酯[8–9]，但酯基在生理pH条件下容易水解，同时体内的多种水解酶也可水解酯基，选择性差，因此不是制备前药的理想基团．2004年，Pessah等[10]报道了一系列喜树碱20位氨基碳酸酯连接桥连接的衍生物，该连接桥可被青霉素G酰化酶或催化抗体38C2选择性去除，释放出原药．因此，该连接桥在前药研究中具有较好的应用前景，本文研究也正是采用了氨基甲酸酯这一连接桥．由于羟基喜树碱比喜树碱毒性稍小，抗瘤谱更广，因此本文选择羟基喜树碱为原药，在其10位、20位同时以氨基甲酸酯为连接桥连接不同的亲水含氮基团，目的是通过对羟基喜树碱双取代的修饰在形成前药的同时获得比20位单取代衍生物更好的水溶性.1.1 试剂与仪器羟基喜树碱，化学纯，上海龙翔医药科技有限公司；对硝基氯甲酸苯酯等试剂，化学纯，国药化学试剂有限公司．6120型高效液相–质谱联用仪(LC-MS)，安捷伦科技有限公司；AV–400型核磁共振仪，布鲁克光谱仪器公司．1.2 合成方法羟基喜树碱的10位、20位均有羟基官能团，但反应活性不同，10位羟基的反应活性高于20位，控制反应条件和试剂当量可以选择性地在10位发生反应，在增加试剂当量或反应条件剧烈的情况下可以得到10，20位双取代的产物．据此，设计了一条简便易行的合成路线合成目标化合物，见图1．1.2.1 中间体的合成取5,g(13.72,mmol)10–羟基喜树碱溶于500,mL无水二氯甲烷(DCM)中，于冰浴下加入16.77,g (137.2,mmol)4–二甲氨基吡啶(DMAP)，再加入16.6,g(82.34,mmol)对硝基氯甲酸苯酯，冰浴下搅拌15,min，在室温下反应10,h．TLC检测反应完全后，用300,mL饱和氯化钠水溶液洗涤3次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，加入乙醚使产物析出，过滤，干燥，得8.1,g 10，20–二(4–硝基碳酸苯酯)–喜树碱，即化合物1．1.2.2 目标产物的合成取0.5,g(0.72,mmol)10，20–二(4–硝基碳酸苯酯)–喜树碱(化合物1)溶于3,mL无水二甲基甲酰胺(DMF)，冰浴下加入0.22,mL(2.88,mmol)正丙胺，搅拌．TLC监测反应完全后，向反应混合物中加入15,mL饱和氯化钠水溶液，用25,mL二氯甲烷萃取3次，合并有机相，有机相用饱和氯化钠水溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，V(二氯甲烷)∶V(甲醇)＝175∶1，200目硅胶柱层析纯化，得0.19,g固体化合物2．化合物3—化合物6的合成方法与化合物2相同，只是含氮试剂分别为正丁胺、二乙胺、四氢吡咯和吗啉．1.3 活性测试采用MTT法检测目标化合物(化合物2—化合物6)和中间体(化合物1)对HepG2(人肝癌细胞)、K562(人白血病细胞)和HT-29(结肠癌细胞)3种肿瘤细胞的生长抑制活性．2.1 化合物的表征数据2.1.1 化合物1ESI-MS(m/z)：693.4[M–H]-.1H NMR(d6-DMSO，400,MHz)，δ：0.955～0.991(m，3,H)，2.249～2.329 (m，2,H)，5.338(s，2,H)，5.569(d，J＝6.0,Hz，2,H)，7.293(s，1,H)，7.529(d，J＝9.2,Hz，2,H)，7.769(d，J＝9.2,Hz，2,H)，7.971～8.001(m，1,H)，8.215(d，J＝2.4,Hz，1,H)，8.278～8.321(m，3,H)，8.395(d，J＝9.2,Hz，2,H)，8.754(s，1,H).2.1.2 化合物2ESI-MS(m/z)：533.6[M–H]-.1,H NMR(d6-DMSO，400,MHz)，δ：0.711～0.810(m，3,H)，0.845～0.935 (m，6,H)，1.332～1.386(m，2,H)，1.497～1.551(m，2,H)，2.058～2.128(m，2,H)，2.828～2.891(m，2,H)，3.056～3.105(m，2,H)，5.305(s，2,H)，5.436(d，J＝3.2,Hz，2,H)，7.024(s，1,H)，7.629～7.657(m，1,H)，7.764～7.792(m，1,H)，7.891(d，J＝2.4,Hz，1,H)，7.979～8.007(m，1,H)，8.175(d，J＝9.2,Hz，1,H)，8.662(s，1,H).2.1.3 化合物3ESI-MS(m/z)：561.3[M–H]-.1,H NMR(d6-DMSO，400,MHz)，δ：0.711～0.815(m，3,H)，0.891～0.937 (m，6,H)，1.2～1.251(m，2,H)，1.294～1.383(m，4,H)，1.460～1.515(m，2,H)，2.052～2.123(m，2,H)，2.890～2.905(m，2,H)，3.091～3.140(m，2,H)，5.307(d，J＝3.2,Hz，2,H)，5.435(d，J＝2.4,Hz，2,H)，7.021(s，1,H)，7.626～7.654(m，1,H)，7.739～7.767 (m，1,H)，7.885(d，J＝2.4,Hz，1,H)，7.948～7.976 (m，1,H)，8.164(d，J＝9.2,Hz，1,H)，8.66(s，1,H). 2.1.4 化合物4ESI-MS(m/z)：561.4[M–H]-.1,H NMR(CDCl3，400,MHz)，δ：0.973～1.010(m，3,H)，1.063～1.098 (m，3,H)，1.237～1.271(m，4,H)，1.306～1.374(m，6,H)，2.104～2.157(m，1,H)，2.241～2.312(m，1,H)，3.209～3.262(m，2,H)，3.399～3.577(m，6,H)，5.270(d，J＝6.0,Hz，2,H)，5.398(m，1,H)，5.676(d，J＝13.6,Hz，1,H)，7.357(s，1,H)，7.655～7.738(m，1,H)，8.274(d，J＝9.2,Hz，1,H)，8.350(s，1,H).2.1.5 化合物5ESI-MS(m/z)：557.5[M–H]-.1,H NMR(CDCl3， 400,MHz)，δ：0.958～0.995(m，3,H)，1.846～1.896(m，2,H)，1.946～2.045(m，6,H)，2.104～2.158(m，1,H)，2.269～2.323(m，1,H)，3.23～3.275(m，1,H)，3.353～3.397(m，1,H)，3.522～3.555(m，2,H)，3.617～3.663(m，4,H)，5.206～5.318(m，2,H)，5.407(d，J＝13.2,Hz，1,H)，5.67(d，J＝17.2,Hz，1,H)，7.343(s，1,H)，7.649(m，1,H)，7.758(d，J＝2.0,Hz，1,H)，8.248(d，J＝9.2,Hz，1,H)，8.343(s，1,H).2.1.6 化合物6ESI-MS(m/z)：589.4[M–H]-.1,H NMR(CDCl3，400,MHz)，δ：0.969～1.006(m，3,H)，2.108～2.319(m，2,H)，3.345～3.452(m，2,H)，3.485(s，4,H)，3.644(s，4,H)，3.765～3.813(m，6,H)，5.286(t，J＝5.6,Hz，2,H)，5.406(d，J＝13.2,Hz，1,H)，5.683(d，J＝17.2,Hz，1,H)，7.303(s，1,H)，7.657(m，1,H)，7.734(d，J＝2.4,Hz，1,H)，8.263(d，J＝8.8,Hz，1,H)，8.356(s，1,H).2.2 活性测试结果采用MTT法测定中间体(化合物1)和目标产物(化合物2—化合物6)的体外抑制肿瘤细胞生长活性，结果见表1．由表1可见：化合物1—化合物6的活性均显著低于喜树碱，这与20位的羟基为活性必需的结论是相符的，同时也说明这些化合物符合前药的基本要求；中间体的抑制活性高于其他化合物，可能是由于中间体的稳定性差，在测试体系中有部分已变回羟基喜树碱；化合物4—化合物6的体外活性的降低较为明显，因此初步判断它们更适合继续进行药理和药代动力学研究，例如动物急毒实验、动物肿瘤抑制效果评价等．2.3 目标产物的脂水分配系数在实验过程中，观察到目标产物在水和有机溶剂中的溶解性相对喜树碱和羟基喜树碱均有所改善.使用Chemdraw Ultra 8.0软件对化合物2—化合物6的脂水分配系数(CLogP)进行了预测，结果见表2．可以看出：化合物2—化合物5的脂溶性明显增强，而化合物6的性质与喜树碱和羟基喜树碱相当．所有目标产物的CLogP均小于5，符合Lipinski五规则，可以预期该类化合物可能具有更好的理化性质．本文在喜树碱类药物已有构效关系的基础上，选择上市药物伊立替康中的氨基甲酸酯连接桥设计和合成了一系列10，20位双取代的喜树碱类衍生物，该类化合物的脂溶性有所改善，同时体外活性测试结果表明这些衍生物细胞毒作用明显降低，可作为前药先导物进一步研究．［1］ Wall M E，Wani M C，Cook C E，et al. Plant Antitumor Agents I. Theisolation and structure of camptothecin，a novel alkaloidal leukemia and tumor inhibitor from camptotheca acuminata[J]. Journal of the American Chemistry Society，1966，88：3888–3890.［2］ Wrasidlo W，Schroder，U，Bernt K，et al. Synthesis，hydrolytic activation and cytotoxicity of etoposide prodrugs[J]. Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters，2002，12(4)：557–560.［3］ Schroeder U，Bernt K M，Lange B，et al. Hydrolytically activated etoposide prodrugs inhibit MDR-1 function and eradicate established MR-1 multidrug-resistant T-cell leukemia[J]. Blood，2003，102(1)：246–253. ［4］ Zhao H，Lee C，Sai P，et al. 20-O-acylcamptothecin derivatives：Evidence for lactone stabilization[J]. Journal of Organic Chemistry，2000，65(15)：4601–4606.［5］ Leu Y L，Roffler S R，Chern J W. Design and synthesis of water-soluble glucuronide derivatives of camptothecin for cancer prodrug monotherapy and antibody-directed enzyme prodrug therapy(ADEPT)[J]. 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喜树规范化种植（GAP）及10-羟基喜树碱制备方法研究的
开题报告
1. 研究背景和意义
喜树是一种药用植物，主要有中药材和食用价值。
其中，喜树碱是喜树的主要有效成分之一，具有降血压、镇痛、消炎等药理作用，是一种重要的中药材。
但是，目前喜树的种植和喜树碱的提取存在一些问题，比如种植不规范、品质不稳定、提取工艺存在缺陷等。
因此，开展喜树规范化种植和10-羟基喜树碱制备方法的研究，对于改善喜树资源的利用和中药材的品质提升具有重要意义。
2. 研究内容和方法
（1）喜树规范化种植：采用GAP（Good Agricultural Practice）规范，从选地、培育管理、施肥、病虫害防治等方面进行规范化种植，比较不同处理方式对喜树生长和品质的影响。
（2）10-羟基喜树碱制备方法研究：采用超声波提取法、微波辅助提取法、蒸馏提取法、酸浸提取法等不同提取方法，比较各种提取方法对10-羟基喜树碱提取效率和品质的影响，并对提取工艺进行优化。
3. 研究预期成果
通过喜树规范化种植和10-羟基喜树碱提取方法研究，预计可以获得以下成果：
（1）建立喜树GAP规范化种植技术，并筛选出最佳的培育管理方式，提高喜树的产量和品质稳定性；
（2）比较不同提取方法对10-羟基喜树碱的提取效率和品质的影响，找出最佳提取工艺，提高10-羟基喜树碱的产量和品质。
4. 研究意义和应用价值
本研究可以推动喜树规范化种植技术的推广和应用，提高喜树产业的发展水平，推动中药材产业的健康发展。
同时，该研究可以为10-羟基喜树碱的提取和利用提供技术支撑，为药品、保健品等产品的生产提供可靠的原材料。
喜树果(千丈树,水栗子,天梓树)【来源】: 为珙桐科植物喜树Camptotheca acuminata Decne.的果实。
【植物形态】: 落叶大乔木。
叶互生，卵状长方形或卵状椭圆形，长7-18cm，宽5-1Ocm，先端渐尖，基部圆或广楔形，全缘，边缘有纤毛，羽脉10-11对；叶柄红色，有疏毛。
花单性同株，成球形头状花序；花萼5齿裂；花瓣5，绿色；雄花雄蕊10；雌花子房下位，1室，柱头3裂，花盘明显。
果序球状。
花期8月，果期10―11月。
生于海拔1OOOm以下较潮湿处；有种植。
主产浙江、江苏、江西、湖北、湖南。
【采制】: 秋季果实成熟尚未脱落时采收，晒干。
【性状】: 果实披针形，长2―2.5cm，宽5―7mm，先端尖，有柱头残基；基部变狭，可见着生在花盘上的椭圆形凹点痕，两边有翅。
表面棕色至棕黑色，微有光泽，有纵皱纹，有时可见数条角棱和黑色斑点。
质韧，不易折断，断面纤维性，内有种子1粒，干缩成细条状。
味苦。
【化学成分】: 含喜树碱(camptothecine)、喜树次碱(venoterpine)、10―羟基喜树碱(10-hydroxycamptothecine)、10―甲氧基喜树碱(10―methoxycamptothecine)、白桦脂酸(betulic acid)、长春甙内酰胺(vincoside-lactam)等。
【性味】: 性寒，味苦、涩；有毒。
【功能主治】: 抗癌，散结，破血化瘀。
用于多种肿瘤，如胃癌、肠癌、绒毛膜上皮癌、淋巴肉瘤等。
用量3―9g。
英文名: Common Camptotheca Fruit学名: Fructus Camptothecae Acuminatae。
喜树碱和10-羟基喜树碱提取方法的比较与优化作者：沈少华刘姬艳胡江琴等来源：《湖北农业科学》2011年第21期摘要：以乙醇为溶剂，比较了浸提法、超声波法、微波法和匀浆提取法从喜树（ＣａｍｐｔｏｔｈｅｃａａｃｕｍｉｎａｔａＤｅｃａｉｓｎｅ）幼叶中提取喜树碱和１０－羟基喜树碱的效果，并通过正交试验设计对提取温度、提取时间以及匀浆时间对提取效率的影响进行了分析。
利用反向－高效液相荧光法检测喜树碱和１０－羟基喜树碱的浓度。
结果显示提取１０－羟基喜树碱的最优条件为匀浆１２ｍｉｎ、６０℃浸提３０ｍｉｎ、超声处理３０ｍｉｎ；提取喜树碱的最优方案为匀浆１２ｍｉｎ、６０℃浸提３０ｍｉｎ、超声处理１５ｍｉｎ。
多种提取工艺混合使用能显著提高喜树碱和１０－羟基喜树碱的产率。
关键词：喜树碱；１０－羟基喜树碱；喜树（Ｃａｍｐｔｏｔｈｅｃａａｃｕｍｉｎａｔａ）；提取方法中图分类号：Ｒ２８４．２文献标识码：Ａ文章编号：0439－８114（２０11）21－4459-04ＣｏｍｐａｒｉｓｏｎａｎｄＯｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎｏｆＥｘｔｒａｃｔｉｏｎＭｅｔｈｏｄｓｆｏｒＣａｍｐｔｏｔｈｅｃｉｎａｎｄ１０－HｙｄｒｏｘｙｃａｍｐｔｏｔｈｅｃｉｎｆｒｏｍＣａｍｐｔｏｔｈｅｃａａｃｕｍｉｎａｔａＳＨＥＮＳｈａｏ－ｈｕａ，ＬＩＵＪｉ－ｙａｎ，ＨＵＪｉａｎｇ－ｑｉｎ，ＣＨＥＮＢｏ，ＷＡＮＧＬｉ－ｌｉｎ（ＳｃｈｏｏｌｏｆＬｉｆｅａｎｄＥｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔＳｃｉｅｎｃｅｓ，ＨａｎｇｚｈｏｕＮｏｒｍａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｈａｎｇｚｈｏｕ３１００３６，Ｃｈｉｎａ）Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｕｓｉｎｇｅｔｈａｎｏｌａｓｓｏｌｖｅｎｔ，４ｍｅｔｈｏｄｓｉｎｃｌｕｄｉｎｇｓｔｉｒｒｉｎｇｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ，ｈｏｍｏｇｅｎａｔｅｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ，ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃｅｘｔｒａｃｔｉｏｎａｎｄｍｉｃｒｏｗａｖｅ－ａｓｓｉｓｔｅｄｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｗere ａｄｏｐｔｅｄｔｏｅｘｔｒａｃｔｃａｍｐｔｏｔｈｅｃｉｎ（ＣＰＴ）ａｎｄ１０－ｈｙｄｒｏｘｙｃａｍｐｔｏｔｈｅｃｉｎ（ＨＣＰＴ）ｆｒｏｍＣａｍｐｔｏｔｈｅｃａａｃｕｍｉｎａｔａ．Ｔｈｅｅｆｆｅｃｔｓｏｆｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ，ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｔｉｍｅａｎｄｈｏｍｏｇｅｎａｔｅｔｉｍｅｏｎｔｈｅｙｉｅｌｄｏｆＣＰＴａｎｄＨＣＰＴｗｅｒｅｓｔｕｄｉｅｄｂｙｏｒｔｈｏｇｏｎａｌｄｅｓｉｇｎ．Ａｎｄｔｈｅｅｘｔｒａｃｔｓｗｅｒｅａｎａｌｙｚｅｄｂｙ reverse-high performance liquid fluorescence method．ＴｈｅｏｐｔｉｍｕｍｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓｆｏｒｅｘｔｒａｃｔｉｎｇＨＣＰＴｗｅｒｅｈｏｍｏｇｅｎａｔｉｏｎｆｏｒ１２ｍｉｎ，６０℃ｗａｔｅｒｂａｔｈｆｏｒ３０ｍｉｎａｎｄｕｌｔｒａｓｏｎｉｃｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｆｏｒ３０ｍｉｎ；ｗｈｉｌｅｆｏｒｅｘｔｒａｃｔｉｎｇＣＰＴｗｅｒｅｈｏｍｏｇｅｎａｔｉｏｎｆｏｒ１２ｍｉｎ，６０℃ｗａｔｅｒｂａｔｈｆｏｒ３０ｍｉｎａｎｄｕｌｔｒａｓｏｎｉｃｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｆｏｒ１５ｍｉｎ. Ｔｈｅｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｏｆｄｉｆｆｅｒｅｎｔｍｅｔｈｏｄｓｃｏｕｌｄｏｂｖｉｏｕｓｌｙｉｍｐｒｏｖｅｔｈｅｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｃａｍｐｔｏｔｈｅｃｉｎ；１０－ｈｙｄｒｏｘｙｃａｍｐｔｏｔｈｅｃｉｎ；Ｃａｍｐｔｏｔｈｅｃａａｃｕｍｉｎａｔａ；ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄｓ喜树（ＣａｍｐｔｏｔｈｅｃａａｃｕｍｉｎａｔａＤｅｃａｉｓｎｅ）为山茱萸目（Ｃｏｒｎａｌｅｓ）珙桐科（Ｎｙｓｓａｃｅａｅ）旱莲属植物，是中国特有的多年生高大落叶乔木。
第25卷第3期2005年9月林 产 化 学 与 工 业Che m istry and I ndustry of Forest Pr oductsVol.25No.3Sep t.2005D ETER M I NAT I O N O F CA M PT O THEC I N AN D102H YDR O X YCA M PT O THEC I N I NCAM PT O TH ECA ACUM I NAT A D.SEE DS B Y HP LC3WANG Y WANG Yang1,Y AN Xiu2feng13,ZHANG Yu2hong2,Y U Tao1,MA M ei2fang1,W E I Huan2yong1(1.College of L ife Sciences,N ortheast Forestry U niversity,Harbin150040,China;2.Key L aboratory of Plant Forestry Ecology,N ortheast Forestry U niversity,Harbin150040,China)Abstract:A si m p le,rap id and sensitive method for the deter m inati on of contents of ca mp t othecin(CPT)and102hydr oxycamp t othecin(HCPT)in Cam ptotheca acum inata Decne.seeds by HP LC was established.The HP LC separati on was perfor med on a KY A H I Q sil C18colu mn(250mm×4.6mm,5μm)at fl ow rate1mL/m in,the s olvent gradient p r ogra m was as f oll ow:acet onitrile2water increased linearly fr om10%t o40% in the first15m in,then decreased linearly t o10%in3m in;at ti m e21m in,st opped the p r ogra m.The alkal oids were detected by a phot odi ode array detect or and quantitatively analyzed at254n m for CPT and266n m f or HCPT.CPT and HCPT were ultras onically extracted by60%alcohol at60℃for50m in.CPT and HCPT contents in different parts of C.acum inata D.seeds were deter m ined by the above analyzing method.The results showed that CPT and HCPT levels were different in the four parts of C.acum inata D.seeds.CPT content was the highest in endos per m,l ower in e mbryonic axis and cotyledon,and the l owest in seed coat,whereas HCPT content was the highest in endos per m,l ower in seed coat,and the l owest in e mbryonic axis and cotyledon.Key words:ca mp t othecin;102hydr oxycamp t othecin;Cam ptotheca acum inata Decne.seeds;ultras onic extracti onCLC nu m ber:T Q283;S792.31 D ocu m en t code:A Arti cle I D:0253-2417(2005)03-0063-04喜树种子中喜树碱和10-羟基喜树碱高效液相色谱法分析王洋1,阎秀峰1,张玉红2,于涛1,马梅芳1,魏焕勇1(1.东北林业大学生命科学学院,黑龙江哈尔滨150040;2.东北林业大学森林植物生态学教育部重点实验室,黑龙江哈尔滨150040)摘 要:建立了一种简便、快速、准确的测定喜树(Cam ptotheca acum inata Decne.)种子中喜树碱和10-羟基喜树碱含量的高效液相色谱分析方法;色谱条件为:采用日本KY A H I Q sil C18柱(250mm×4.6mm,5μm),流速为1mL/m in,梯度洗脱程序为:在前15m in流动相乙腈-水的体积比由10%线性增加至40%,在随后的3m in乙腈-水的体积比线性降至10%并保持恒定3m in,在21m in时停止该程序。
检测器为二极管阵列检测器,喜树碱定量分析波长254n m,10-羟基喜树碱定量分析波长266n m,进样量10μL。
样品制备以60%的乙醇作溶剂,在60℃下超声波提取喜树种子50m in。
利用以上方法分别测定了喜树种子胚乳、胚轴、子叶和种皮中的喜树碱和10-羟基喜树碱含量,喜树碱的含量是胚乳>胚轴,子叶>种皮,10-羟基喜树碱的含量是胚乳>种皮>胚轴>子叶。
关键词:喜树碱;10-羟基喜树碱;喜树种子;超声波提取Cam ptotheca acum inata Decne.(Nyssaceae)is a native tree of South China.Ca mp t othecin(CPT),an3Rece i ved da te:2004-07-08 Founda ti on ite m:国家自然科学基金资助项目(30070086) B i ography:王洋(1971-),女,黑龙江哈尔滨人,副教授,博士,研究方向为植物次生代谢、植物化学3Correspondence Author:阎秀峰,教授,博士生导师,主要研究领域为植物次生代谢、植物生理生态学。
林 产 化 学 与 工 业第25卷64indole alkal oid,was is olated fr o m the woody parts by W all,et al in1966[1].Because of its high anti2tu mor activity in the Leuka e m ia1210mouse leuke m ia assay,CPT attracted i m mediate attenti on as a potential che motherapeutic agent against cancer[2].The devel opment of CPT as an anti2tu mor drug was deterred due t o a variety of unaccep table side effects on hu man[3]until CPT′s unique mechanis m of acti on as an inhibit or of t opois omerase I was discovered by L iu,et al.in1985[4].102Hydr oxyca mp t othecin(HCPT),a natural derivative of CPT in C.acum ina ta D.,has been sho wn efficacy against lung,breast and uterine cervical cancers[5]thr ough the sa me mechanis m of inhibiti on of t opois omerase I.Among many CPT and HCPT anal ogues,which have been investigated over more than30years,irinotecan[6]and t opotecan[7]have been app r oved by United State Food and D rug Ad m inistrati on(F DA)f or app licati on against col on2rectum cancer and ovarian cancer.The deter m inati on methods of CPT[8-10]and HCPT[11]by HP LC have been reported separately,but the si m ultaneous deter m inati on of CPT and HCPT hasn′t been discussed s o far,and the op ti m al conditi ons f or the si m ultaneous extracti on of CPT and HCPT in C.acum ina ta D.t o p repare analytic sa mp le has not been referred.W hen ultras ound passes thr ough a p lant cell at sufficiently high intensities,cavities are f or med because of the alternating p ressure changes in the cell.These cavities gr ow in size and then collap se vi olently.U ltras onic extracti on is a kind of methods that can achieve analytical sa mp les in one2ti m e2extracti on thr ough keep ing p lant materials in extractant.It is a rap id,si m p le and accurate method t o p repare analytical sa mp les.I n this paper, the op ti m al extracti on f or the p reparati on of analysis sa mp les by HP LC was syste matically discussed.1 Materials and methods1.1 Pl an t ma ter i a ls and equ i p m en ts1.1.1 Plant materials C.acum ina ta D.seeds were bought fr om J intang,Sichuan Pr ovince in January 2004.Seven2day seedlings were ger m inated fr om seeds t o study the p reparati on of the analytical sa mp le.To deter m ine the levels of CPT and HCPT in seeds,seeds were separated int o f our different parts,i.e. endos per m,e mbryonic axis,cotyledon,and seed coat.A ll sa mp les were dried at80℃for24h,and gr ound t o60mesh.1.1.2 Equi pments and reagents W aters HP LC syste m with1525binary HP LC pu mp,2996phot odi ode array detect or and717p lus aut osa mp ler;B i ofuge22R high s peed centrifugal machine;B104electr onic balance;B2321ultras onic oscillat or;Multite mpⅢcycle water2bath.Acet onitrile is chr omat ographically pure; W ater is ultrapure water;others are all analytically pure.The CPT(purity99%)and HCPT(purity96%) standard sa mp les were kind gifts fr om The Stehlin Foundati on f or Cancer Research(Houst on,TX,US A).1.2 St andard soluti on and st andard curveD iss olved6mg CPT and6mg HCPT by acet onitrile in a100mL2measuring flask as mother s oluti on. Shifted1,2,3and4mL of mother s oluti on int o4different5mL2measuring flasks,res pectively,then added acet onitrile t o the scale and shook up,res pectively.Under the selective HP LC conditi ons,standard sa mp les were analyzed in tri p licate.The standard curves were perf or med bet w een concentrati on(mg/mL)of CPT/X1 HCPT/X2and peak area/Y.Y1=54715X1-16186,R1=0.9991Y2=37622X2-8895.8,R2=0.99901.3 Prepara ti on of ana lyti ca l s am plesT o study the op ti m al conditi ons f or the si m ultaneous extracti on of CPT and HCPT fr om C.acum inata D. seeds,experi m ents were p ref or med by3fact ors and11levels of unif or m design(Table1).The3fact ors were第3期王洋,等:喜树种子中喜树碱和10-羟基喜树碱高效液相色谱法分析65 concentrati on of alcohol,extracti on te mperature and extracti on ti m e .Accurately measured 1g seedling powder int o 25mL measuring flask,according t o the designed experi 2mental conditi ons,added 20mL of different concentrati on of aq .alcohol and ultras onically extracted at the corres ponding te mperature f or definite ti m e .Then cooled t o r oom te mperature,added aq .alcohol t o the scale,and shook up.One mL of supernatant was centrifuged at 12500g f or 10m in,and deter m ined by HP LC .2 Results and disscussi on2.1 HP LC cond iti on sColu mn:KY A H I Q sil C18colu mn (4.6mm ×250mm ,5μm;Japan );fl ow rate:1mL /m in;sa mp le injecti on:10μL;the s olvent gradient p r ogra m was as f oll ow:acet onitrile 2water of 10%increased linearly t o 40%in the first 15m in;then decreased linearly t o 10%in 3m in;at ti m e 21m in,st opped the p r ogra m (ready f or next injecti on ).Qualitative analysis:CPT and HCPT were detected by 2996phot odi ode array detect or at retenti on ti m e 18.8m in and 15.5m in,res pectively,and the peak purity was compared with the standard sa mp le thr ough the UV s pectru m.Quantitative analysis:wavelength 254nm f or CPT,266n m f or HCPT .2.2 O pti m a l cond iti on s for the s am ple prepara ti onTable 1 Exper i m en t cond iti on s and results of un i for m desi gnNo .extracti onte mp./℃X 1extracti onti m e /m inX 2alcohol concn ./%X 3yield 1)/(mg ・g -1)(dry weight )CPT Y 1HCPTY 211045600.9460.12021520300.3420.0413*******.4600.0744*******.4830.0455********.3620.03463530200.2630.028********.3950.0458455100.1090.01495015700.6490.0891*******.0750.013116035500.7420.095 1)Y 1=-0.4079021-0.0103298X 1+0.0157990X 2+0.0277084X 3+0.0003949X 21-0.0002646X 1X 2-0.0001646X 1X 3-0.0000835X 22-0.0001677X 23R =0.9909;Y 2=-0.0398635-0.0019719X 1+0.0029073X 2+0.0026236X 3+0.0000585X 21-0.0000619X 1X 2+0.0000037X 22-0.0000105X 2X 3-0.0000184X 23R =0.9998Table 2 O pti m a l exper i m en t a l cond iti on s of a lka lo i dssa mp les te mp./℃ti m e /m in alcohol concn ./%CPT 551065.4HCPT 605055.6op ti m al conditi on605060Experi m entresultsofunif or mdesign were dis p layed in Table 1.U sing extracti on te mperature (X 1),extracti on ti m e (X 2),and alcohol concentrati on (volu me rati o,sa me as in the f oll owing )(X 3)as independent variables,CPT (Y 1),and HCPT (Y 2)as dependent variables,the results were analyzed by stepwiseregressi onanalysis methodusing unifor m design s oft w are .Based on the regressi on equati ons,the op ti m al conditi ons f or the extracti on of CPT and HCPT were calculated res pectively within the scopes of selected ex peri m ental conditi ons (Table 2).Comp rehensively analyzed the condi 2ti ons,the op ti m al conditi ons for the si m ultaneous extracti on of CPT and HCPT were t o extract C.acum inatamaterials by 60%alcohol at 60℃for50m in undersupers onicextracti onmethod .Among the three affectingfact ors,the most significant fact or wasalcohol concentrati on,then extracti on te mperature,and the least was the extracti on ti m e .2.3 Prec isi on exper i m en tI njected a CPT and HCPT standard sa mp le for 5ti m es,res pectively,relative standard deviati on (RS D )of CPT was 3.32%,and that of HCPT was 4.04%.66 林 产 化 学 与 工 业第25卷2.4 Coeff i c i en t of recoveryMeasured 0.5g ×6sa mp le powder int o 25mL 2measuring flasks,res pectively,then 0.5mg of CPT standard sa mp le and 0.1mg of HCPT standard sa mp le were added t o each flask .Extracted and deter m ined according t o the above extracti on and analyzing conditi ons .The average recovery and RS D of CPT and HCPT were 95.23%,3.78%;and 93.56%,5.10%,res pectively .2.5 CPT and HCPT con ten ts i n d i fferen t parts of C.acum ina ta D.seedsTable 3 CPT and HCPT con ten ts i n d i fferen t parts ofC.acum ina taD.seedsmg/gparts CPT content (dry weight )HCPT content (dry weight )endos per m 2.5550.082e mbryonic axis 0.7410.021cotyledon 0.7450.010seed coat0.3600.048CPT and HCPT contents in different parts of C.acum inata D.seeds were deter m ined by the above analyzing method .Theresultsshowed that CPT and HCPT levels were different in the f our parts of C.acum ina ta D.seeds .CPT content wasthehighestinendos per m ,l ower in e mbryonic axis and cotyledon,and the l owest in seed coat,whereas HCPT content was the highest in endos per m ,l ower in seed coat,and the l owest in e mbryonic axis and cotyledon (Table 3).3 Conclusi on3.1 A rap id and si m p le HP LC analyzing method for the deter m inati on of contents of CPT and HCPT in C.acum inata D.seeds was established .3.2 U sing unif or m experi m ental design,the si m ultaneous extracti on of CPT and HCPT was studied,and the op ti m al conditi ons were t o extract C.acum inata D.materials by 60%alcohol (volume rati o )at 60℃f or 50m in under supers onic extracti on .3.3 CPT and HCPT levels were different in the f our parts of C.acum ina ta D.seeds .CPT content was the highest in endos per m ,l o wer in embryonic axis and cotyledon,and the l owest in seed coat,whereas HCPT content was the highest in endos per m ,l ower in seed coat,and the l owest in e mbryonic axis and cotyledon .References:[1]WALL M E,WAN IM C,COOK C E,et al .Plant antitumor agents .Ⅰ.The is olati on and structure of camp t othecin,a novel alkal oidalleukem ia and tumor inhibit or fr om Cam ptotheca 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