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![一种用于表达恶臭假单胞杆菌肌酐酶的酵母工程菌及其应用[发明专利]](https://uimg.taocdn.com/03369af56037ee06eff9aef8941ea76e58fa4a3c.webp)
(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201710872926.3(22)申请日 2017.12.26(71)申请人 华南理工大学地址 510000 广东省广州市天河区五山路381号(72)发明人 林影 梁书利 侯赣生 (74)专利代理机构 广州三环专利商标代理有限公司 44202代理人 王会龙(51)Int.Cl.C12N 1/19(2006.01)C12N 15/81(2006.01)C12N 9/86(2006.01)C12R 1/84(2006.01)(54)发明名称一种用于表达恶臭假单胞杆菌肌酐酶的酵母工程菌及其应用(57)摘要一种用于表达恶臭假单胞杆菌肌酐酶的酵母工程菌，所述酵母工程菌是通过将含有如下外源DNA的表达载体转化到毕赤酵母而获得：所述外源DNA为恶臭假单胞杆菌肌酐酶的DNA编码序列，所述恶臭假单胞杆菌肌酐酶的氨基酸序列如Seq No.2所示。
本发明还提供了该酵母工程菌的构建方法以及采用本发明的酵母工程菌发酵获得的重组恶臭假单胞杆菌肌酐酶在肌酐检测中的应用。
本发明的酵母工程菌培养快速简单，诱导条件容易控制，生产成本低，具有工业化生产的潜力；同时由其发酵制备的重组恶臭假单胞杆菌肌酐酶具有良好的肌酐酶活性，并表现出优良的温度稳定性、耐热能力和pH稳定性。
权利要求书1页 说明书4页序列表2页 附图2页CN 107663505 A 2018.02.06C N 107663505A1.一种用于表达恶臭假单胞杆菌肌酐酶的酵母工程菌，其特征在于，所述酵母工程菌是通过将含有如下外源DNA的表达载体转化到毕赤酵母而获得：所述外源DNA为恶臭假单胞杆菌肌酐酶的DNA编码序列，所述恶臭假单胞杆菌肌酐酶的氨基酸序列如Seq No.2所示。
2.如权利要求1所述的用于表达恶臭假单胞杆菌肌酐酶的酵母工程菌，其特征在于：所述外源DNA序列如Seq No.1所示。
恶臭假单胞菌和其混菌以甘油为底物合成PHA发酵条件的优化由于生物柴油的大力发展,造成副产物甘油的大量过剩。
同时PHA的生产成本较高大大限制了它的应用。
利用甘油生产PHA具有重要意义。
本论文以甘油为底物通过添加前体辛酸钠合成PHA,通过对恶臭假单胞菌和其混菌的培养基和培养条件进行优化,得到合成PHA的最佳条件。
为了选择优良的PHA生产菌株,在不同营养水平下比较了Pseudomonas putida NBRC 14164和Pseudomonas putida KT2440两种恶臭假单胞菌合成PHA 产量的高低,发现Pseudomonas putida KT2440的PHA产量显著高于Pseudomonas putida NBRC 14164,同时营养二培养基是最适培养基。
因而选择Pseudomonas putida KT2440作为发酵产PHA的菌株。
另外比较了多种实验室常见模式菌在甘油中的生长情况,发现Escherichia coli BL21、Escherichia coli MG1655和Saccharomyces cerevisiae W303在甘油中长势较好,选择这些菌株与恶臭假单胞菌进行混菌发酵。
以营养二培养基为基础,对Pseudomonas putida KT2440恶臭假单胞菌进行培养条件的优化,通过单因素和响应面优化得到最佳生长条件为:辛酸钠为12.23g/L,载液量为44.39 mL/250 mL,转速为220 rpm,硫酸铵浓度为1 g/L,甘油为40 g/L。
用此条件进行摇瓶发酵实验,得到PHA的平均产量为4.56 g/L,显著高于同类以甘油和辛酸钠为唯一碳源的产量。
将恶臭假单胞菌Pseudomonas putida KT2440培养在5L发酵罐中发酵优化,通过对转速和通气量的调节使PHA产量最高达到了8.47 g/L。
而阶段限氧和补料操作都抑制了Pseudomonas putida KT2440的生长和PHA的合成。
5.方茴说："那时候我们不说爱，爱是多么遥远、多么沉重的字眼啊。
我们只说喜欢，就算喜欢也是偷偷摸摸的。
"6.方茴说："我觉得之所以说相见不如怀念，是因为相见只能让人在现实面前无奈地哀悼伤痛，而怀念却可以把已经注定的谎言变成童话。
"7.在村头有一截巨大的雷击木，直径十几米，此时主干上唯一的柳条已经在朝霞中掩去了莹光，变得普普通通了。
“挑战杯”全国大学生课外学术科技作品竞赛简介参加“挑战杯”科技竞赛的作品一般分为三大类：自然科学类学术论文、社会科学类社会调查报告和学术论文、科技发明制作，凡在举办竞赛终审决赛的当年７月１日起前正式注册的全日制非成人教育的各类高等院校的在校中国籍本专科生和硕士研究生、博士研究生（均不含在职研究生）都可申报参赛。
每个学校选送参加竞赛的作品总数不得超过６件（每人只限报一件作品）、作品中研究生的作品不得超过３件，其中博士研究生作品不得超过１件。
各类作品先经过省级选拔或发起院校直接报送至组委会，再由全国评审委员会对其进行预审，并最终评选出８０％左右的参赛作品进入终审，终审的结果是，参赛的三类作品各有特等奖、一等奖、二等奖、三等奖、且分别约占该类作品总数的３％、８％、２４％和６５％。
竞赛的宗旨：崇尚科学、追求真知、勤奋学习、锐意创新、迎接挑战。
竞赛的目的：引导和激励高校学生实事求是、刻苦钻研、勇于创新、多出成果、提高素质，并在此基础上促进高校学生课外学术科技活动的蓬勃开展，发现和培养一批在学术科技上有作为、有潜力的优秀人才。
竞赛的方式：高等学校在校学生申报自然科学类学术论文、哲学社会科学类社会调查报告和学术论文、科技发明制作三类作品参赛；聘请专家评定出具有较高学术理论水平、实际应用价值和创新意义的优秀作品，给予奖励；组织学术交流和科技成果的展览、转让活动。
第五届“挑战杯”一等奖获奖名单清华大学浦志勇《十字路口看乡企》--中国农村乡镇企业转制问题调查报告清华大学白继红蛋白质去折叠与折叠机制的研究清华大学陈益钢基于界面设计的多层膜技术获得新型合金1."噢，居然有土龙肉，给我一块！"2.老人们都笑了，自巨石上起身。
![一种催化烟酸制备6-羟基烟酸的方法及其所用菌株[发明专利]](https://uimg.taocdn.com/e29cc70c19e8b8f67d1cb907.webp)
专利名称：一种催化烟酸制备6－羟基烟酸的方法及其所用菌株
专利类型：发明专利
发明人：罗晖,尹祖建,常雁红,肖宝清
申请号：CN200710177394.8
申请日：20071116
公开号：CN101200746A
公开日：
20080618
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明提供了一种催化烟酸制备6－羟基烟酸的方法，包括用假单胞菌(Pseudomonas)sp.BK－1CGMCCNo.2191悬浮液催化溶液中的烟酸转化为6－羟基烟酸。
所述假单胞菌悬浮液为用磷酸缓冲液或水悬浮该假单胞菌sp.BK－1。
所述溶液中的烟酸的浓度保持在0.5％以上。
催化反应过程中pH值为6.0～8.0。
催化反应完成后调节pH值小于2.0，收集固体6－羟基烟酸。
本发明还提供一种催化烟酸制备6－羟基烟酸的假单胞菌sp.BK－1CGMCC No.2191。
还提供了该菌株的筛选方法。
本发明的催化过程能耗低，无污染，副产物少，产物易于分离；筛选所得到的菌株催化活性高，对催化环境适应性强。
申请人：北京科技大学
地址：100083 北京市海淀区学院路30号
国籍：CN
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恶臭假单胞菌合成生物学-概述说明以及解释1.引言1.1 概述概述:恶臭假单胞菌是一种重要的细菌，可以产生挥发性有机硫化合物，导致恶臭问题。
合成生物学作为一项新兴的交叉学科，可以应用于恶臭假单胞菌的研究和应用中。
本文将探讨恶臭假单胞菌的特点以及合成生物学在其研究中的应用，展望合成生物学在恶臭假单胞菌研究中的未来发展方向。
通过深入研究恶臭假单胞菌合成生物学，可以为解决恶臭问题提供新的思路和方法。
1.2 文章结构:本文主要包括引言、正文和结论三部分。
在引言部分，将介绍恶臭假单胞菌及合成生物学的概念，说明本文的目的与目标。
在正文部分，将详细介绍恶臭假单胞菌的特点及其在合成生物学中的应用情况，探讨合成生物学在恶臭假单胞菌研究中的重要性，并对未来发展方向进行展望。
最后，在结论部分，将对全文进行总结，展望恶臭假单胞菌合成生物学研究的成果，提出相关的意义和建议。
通过这样的结构安排，将全面而系统地探讨恶臭假单胞菌合成生物学的相关内容，为读者提供一个清晰的阅读框架。
1.3 目的:本文旨在探讨恶臭假单胞菌在合成生物学领域的研究进展，深入了解其在生物合成领域的潜在应用和意义。
通过分析恶臭假单胞菌的生物合成机制和合成生物学的技术手段，探讨其在环境治理、医学和工业生产等方面的应用前景。
同时，也为未来研究提供实践方向和发展建议，促进恶臭假单胞菌合成生物学领域的进一步探索和应用。
1.3 目的部分的内容2.正文2.1 恶臭假单胞菌简介恶臭假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）是一种常见的革兰氏阴性细菌，它广泛存在于自然界中，可以在不同的环境中生存并繁殖。
恶臭假单胞菌是一种革兰氏阴性细菌，通常生长在潮湿的环境中，如土壤、水体和人体皮肤和黏膜等处。
恶臭假单胞菌具有强大的致病性，是造成人类和其他动物感染的主要病原体之一。
它可以引起各种感染，包括呼吸道感染、泌尿道感染、伤口感染等。
此外，恶臭假单胞菌还可以对免疫缺陷患者造成严重的感染，甚至导致生命危险。
中国生物工程杂志C h i n a B i o t e c h n o l o g y，2021，41(5): 105-113D O I：10. 13523/j.c b.2101019衣康酸发酵研究进展高寅岭张凤娇赵贵众张宏森王风芹^宋安东(河南农业大学生命科学学院农业部农业微生物酶工程重点实验室郑州450002)摘要衣康酸作为一种平台化合物，可被各行业广泛用于多种高附加值产品的生产，其更是具有替代传统石油基原料的潜力，在工业生产中有着重要地位与应用前景。
目前，衣康酸主要由土曲霉深层好氧发酵生产，碳源、氮源、磷酸盐、金属离子、溶解氧、pH、温度等条件对其产量影响显著。
在衣康酸生产中，原料成本高是阻碍其市场进一步扩大与发展的重要因素。
木质纤维素原料来源广泛、价格低廉，是理想的低成本碳源底物。
研究利用木质纤维素水解液作为替代碳源生产衣康酸有望降低生产成本，对推动其发展应用具有重要意义。
关键词衣康酸土曲霉发酵生产木质纤维素中图分类号Q819衣康酸（itaconic ac i d，I A),又称亚甲基琥珀酸或亚 甲基丁二酸，是一种重要的不饱和二羧酸，被广泛应用 于乳胶、塑料、树脂等高价值化学品的生产+21。
衣康 酸具有抗菌、抗炎、抗肿瘤、抗病毒等特性，在医学、畜牧养殖业具有良好的应用前景[~。
此外，衣康酸还是 生产潜在生物燃料3-甲基四氢呋喃的中间体[7],具有 替代石油基甲基丙烯酸和丙烯酸的巨大潜力[8]。
目前，土曲霉利用葡萄糖发酵生产衣康酸产量已达到160 g/L[9]。
然而，衣康酸的价格偏高限制了其市场及应用 的进一步发展[1°]。
原料成本高是导致衣康酸价格偏高 的关键因素之一，其中碳源成本更是占总成本的25% 以上[1’3]。
木质纤维素原料来源广泛且多被视为农林 业废弃物，其碳源组成主要为己糖和戊糖，可作为衣康 酸发酵生产所需的碳源。
本文对衣康酸发酵菌种、衣 康酸发酵影响因素及木质纤维素原料发酵生产衣康酸 的最新进展进行了综述，以期为衣康酸发酵研究提供 参考。
(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利(10)授权公告号 (45)授权公告日 (21)申请号 201910273403.6(22)申请日 2019.04.05(65)同一申请的已公布的文献号申请公布号 CN 110144305 A (43)申请公布日 2019.08.20(83)生物保藏信息CCTCC M 2019048 2019.01.15(73)专利权人 华中农业大学地址 430070 湖北省武汉市洪山区狮子山街1号(72)发明人 刘军伟 李国怀 何昊 叶俊丽 朱炜 (74)专利代理机构 武汉泰山北斗专利代理事务所(特殊普通合伙) 42250代理人 程千慧(51)Int.Cl.C12N 1/20(2006.01)A01N 63/27(2020.01)C09K 17/14(2006.01)A01P 21/00(2006.01)C12R 1/40(2006.01)审查员 周茂新(54)发明名称一种恶臭假单胞菌及其菌剂和应用(57)摘要本发明涉及一种恶臭假单胞菌，为恶臭假单胞菌WH -B3(Pseudomonas putida WH -B3)，保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏编号为CCTCC M 2019048。
本发明提供了一种含有上述恶臭假单胞菌的微生物菌及微生物菌剂的制备方法，并提供了上述微生物菌剂在降解苯甲酸和缓解桃连作障碍中的应用方法。
本发明的恶臭假单胞菌Pseudomonas putida WH -B3对苯甲酸具有极强的降解能力，在24小时内对土壤中500mg kg -1苯甲酸的降解效率能够达到99％以上，且降解产物无毒，具有良好的开发应用前景。
权利要求书1页 说明书6页序列表1页 附图2页CN 110144305 B 2020.03.17C N 110144305B权 利 要 求 书1/1页CN 110144305 B1.一种恶臭假单胞菌，其特征在于，为恶臭假单胞菌WH-B3(Pseudomonasputida WH-B3)，保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC),保藏编号为CCTCC M2019048。
恶臭假单胞菌f1长链烷醇氧化酶基因敲除菌株的构建下载提示：该文档是本店铺精心编制而成的，希望大家下载后，能够帮助大家解决实际问题。
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假单胞菌和酿酒酵母利用木糖共培养生产PHA的初步研究聚羟基烷酸酯(PHA)是一种环境友好型高分子生物塑料,由于其具有良好的生物可降解性和生物相容性,PHA被广泛的应用于医药包装、塑料制造以及高分子材料等领域。
本文利用从天津市纪庄子污水处理厂中筛选出一株PHA生产菌:假单胞菌TU02,然后对其进行了可利用的碳源测试,最终选择葡萄糖作为底物进行PHA发酵生产。
同时,利用基因工程菌酵母菌和假单胞菌在木糖培养基中共培养,以实现木糖到PHA转化。
经过一系列实验,本文主要得到的研究结果如下:考察了假单胞菌TU02对常用碳源的利用情况,发现其能够在葡萄糖、蔗糖、乳酸钠、酵母提取物作为单底物时良好生长,在木糖以及乙酸钠中几乎没有生长现象,在柠檬酸中则是完全没有生长。
其中,假单胞菌TU02在葡萄糖培养基中生长最好。
利用葡萄糖作为底物,让假单胞菌TU02在摇瓶中发酵生产PHA,并对培养条件进行了初步优化。
经过不同培养条件的对比,发现当培养基中,缺乏磷源时,假单胞菌几乎不能生长,而供给磷源而缺乏铵盐和镁离子时,假单胞菌生长也受到了严重的抑制。
培养过程中,假单胞菌TU02在48h后有明显的衰亡现象,其接种48h后的菌液的OD600低于48h,菌体量有减少的现象,同时其PHA积累量也有所减少,最终得到的最佳发酵条件为:葡萄糖浓度20g/L,pH=8,培养时间48h左右,PHA达到细胞干重的38%。
尽管在此条件下假单胞菌的PHA百分比含量为所有条件中的最高值,但在pH 值为7时,假单胞菌TU02的菌体量最大,达到4.7g/L,假单胞菌TU02的PHA产量在所有条件下达到最大值1.62g/L。
将能利用木糖的重组酿酒酵母和能积累PHA的假单胞菌TU02在木糖培养基中混合培养,两者能够很好的共生并且积累一定量的PHA。
在酵母菌和假单胞菌接种比为1:2,假单胞菌12h后接种的条件下,最终PHA 积累达到了细胞干重的14%,最大产量达到0.37g/L。
