Hieff TransTM脂质体核酸转染试剂(亲手整理)

转染和转化转染的定义是“将具生物功能的核酸转移或运送到细胞内并使核酸在细胞内维持其生物功能”。

其中，核酸包括DNA（质粒和线性双链DNA），反义寡核苷酸及RNAi（RNA interference）。

基因转染技术已广泛应用于基因组功能研究（基因表达调控，基因功能，信号转导和药物筛选研究）和基因治疗研究。

基因转染需要一定的转染试剂将带有目的基因的载体运送到细胞内。

早期的磷酸钙转染法转染效率很低，且对很多细胞株无效，因此不能满足很多科研工作的需要。

目前，最常用的转染试剂是阳离子脂质体和阳离子聚合物，它们在克服细胞屏障方面跟病毒有很相象的特征，容易透过细胞膜。

其中，阳离子脂质体在体外基因转染中有很高的效率，然而在体内，它迅速被血清清除，在肺组织内累积，诱发强烈的抗炎反应，这将导致高水平的毒性，因此，在很大程度上限制了其应用。

由于阳离子脂质体的局限性，阳离子聚合物转染试剂日益受到重视。

转化特指将质粒DNA或以其为载体构建的重组DNA导入细菌体内，使之获得新的遗传特性的一种方法。

它是微生物遗传、分子遗传、基因工程等研究领域的基本实验技术之一。

受体细胞经过一些特殊方法（如：电击法，CaCl2等化学试剂法）处理后，使细胞膜的通透性发生变化，成为能容许外源DNA分子通过的感受态细胞。

进入细胞的DNA分子通过复制、表达实现遗传信息的转移，使受体细胞出现新的遗传性状。

由外来DNA引起生物体遗传性状改变的过程称为转化(transformation)。

噬菌体常常可感染细菌并将其DNA注入细菌体内，也可引起细菌遗传性状的改变。

通过感染方式将外来DNA 引入宿主细胞，并导致宿主细胞遗传性状改变的过程称为转染(transfection)。

转染是转化的一种特殊形式。

基因工程:有目的的通过分子克隆技术，人为的操作改造基因，改变生物遗传性状的系列过程。

载体:能在连接酶的作用下和外源DNA片段连接并运送DNA分子进入受体细胞的DNA分子。

脂质体转染原理及操作步骤脂质体转染是一种常用的基因传递技术，用于将外源的核酸（例如DNA、RNA）转入细胞内。

脂质体是由人工合成的类似于细胞膜的双层脂质膜组成，具有较好的生物相容性和可降解性，因此可以用来包裹并传递外源核酸进入目标细胞内。

本文将详细介绍脂质体转染的原理和操作步骤。

脂质体由两个疏水性脂质尾部和一个亲水性脂质头部组成，形成类似生物细胞膜的双层结构。

这种双层结构使得脂质体可以包裹水溶性的外源核酸，并形成脂质体-核酸复合物。

当复合物与细胞膜接触时，由于脂质体的类似性，这些复合物可以与细胞膜融合，并释放外源核酸进入细胞。

然而，简单地将脂质体-核酸复合物添加到细胞培养基中并不能有效地将外源核酸转入细胞内。

为了提高转染效率，常常需要使用电穿孔或钙磷共沉淀等方法，以增加细胞膜的通透性。

操作步骤：1.准备工作：-完整的脂质体转染试剂盒。

-DNA或RNA溶液。

-靶细胞。

-无菌操作条件下的实验室。

2.重组脂质体的合成：-按照试剂盒说明将脂质体复合物合成。

-使用无菌的工具和试剂。

3.核酸引物的制备：-将外源DNA或RNA与引物混合，使其形成核酸复合物。

4.细胞处理：-将培养皿中的细胞进行冲洗，去除培养基。

-将适量的细胞培养基添加到培养皿中，以保证细胞的正常生长。

5.导入核酸：-将所制备的核酸复合物滴加到细胞培养基中。

-将细胞培养皿置于无菌环境中，以便细胞吸收和利用核酸。

6.细胞培养：-按照细胞类型和所使用的培养基，将细胞置于恰当的培养条件下，并进行培养。

-根据需求添加所需要的生长因子和抗生素。

7.观察和分析：-在一定的培养时间后，观察细胞是否发生了显著的变化。

- 使用适当的实验方法（如PCR、Western blot等）检测外源基因的表达。

-观察并记录实验结果。

以上是脂质体转染的原理和操作步骤。

脂质体转染是目前常用的基因传递技术之一，可以用于研究基因功能、疾病治疗等领域。

随着技术的不断发展，转染效率和特异性将逐渐提高，为研究和治疗带来更多的机会和挑战。

Hieff Trans TM脂质体核酸转染试剂说明书产品描述Hieff Trans TM脂质体核酸转染试剂是一种多用途的脂质体转染试剂，适用于DNA、RNA 和寡核苷酸的转染，对大多数真核细胞具有很高的转染效率。

其独特的配方使其可直接加入培养基中，血清的存在不会影响转染效率，这样可以减少去除血清对细胞的损伤。

转染后不需要除去核酸-Hieff Trans TM复合物或更换新鲜培养基，也可在4～6小时后除去。

Hieff Trans TM以无菌的液体形式提供。

通常情况下对于 24 孔板转染，每次用1.5μl左右，则1ml Hieff Trans TM约可做660次转染；对于6孔板，每次用6μl左右，则1ml Hieff Trans TM约可做160 次转染；运输与保存方法冰袋（wet ice）运输。

产品4ºC保存，一年有效。

不可冷冻！注意事项1）Hieff Trans TM脂质体核酸转染试剂要求细胞铺板密度较高，以90%-95%为佳，这有助于减少阳离子脂质体细胞毒性造成的影响；如果你研究的基因要求比较长的表达时间，比如细胞周期相关基因，或者细胞表面蛋白，最好选择细胞铺板密度要求较低的转染试剂，不适合用脂质体核酸转染试剂。

2）Hieff Trans TM脂质体核酸转染试剂可用于有血清培养基的转染，并且转染前后不需要换培养基。

但是，制备转染复合物时要求用无血清培养基稀释DNA和转染试剂，因为血清会影响复合物的形成。

另外，要检测所用的无血清培养基与脂质体核酸转染试剂的相容性，已知CD293, SFMII, VP-SFM 就不相容。

3）转染的时候培养基中不能添加抗生素。

4）使用高纯度的DNA或RNA有助于获得较高的转染效率，质粒中的内毒素是转染的大敌。

5）阳离子脂质体应该在4度保存，要注意避免多次反复长时间开盖，因为可能会导致脂质体氧化而影响转染效率。

6）初次使用应优化DNA浓度和阳离子脂质体试剂量以得到最大的转染效率。

转染是将核酸导入真核细胞中的过程。

相关实验方案和技术包括转染试剂（脂质体转染、阳离子聚合物转染等）、以及化学法（DEAE-葡聚糖法、磷酸钙法等）或物理方法（如电穿孔、基因枪粒子轰击法、显微注射等）。

其中，转染试剂已然成为实验室细胞转染主流方法。

转染试剂是新一代的阳离子聚合物基因转染试剂，已被广泛应用于体外细胞转染和动物体内转染、众多原代细胞和转化细胞株转染、瞬时转染和稳定转染、贴壁细胞和悬浮细胞转染等。

具有高效转染、细胞毒性很低，不被血清清除、操作简便易行，高重复性等特点。

特点
● 转染效率高
对原代培养细胞HUV-EC有较高的转染效率，而大多数阳离子脂质体对此细胞的转染效率很低。

● 细胞毒性低
在正确的转染方法及条件下，常用的细胞存活率高于90%。

● 试剂不被血清清除，转染操作简单
新型转染试剂不被血清清除，转染时可直接将转染试剂/DNA复合物直接加到细胞培养基中，无需更换培养基质和清洗细胞，整个操作过程可在半小时内完成。

图1.与传统转染实验程序比较
● 适应于体外细胞转染和动物体内转染、众多原代细胞和转化细胞株转染、瞬时转染和稳定转染、贴壁细胞和悬浮细胞转染等。

●新型转染试剂成功转染的部分细胞株：。

英格恩entranster转染试剂说明书一、产品概述英格恩 Entanster 转染试剂是一种用于转染外源 DNA/RNA 到细胞内的试剂。

它是经过优化的化学试剂组合，可以将外源 DNA/RNA 高效地传递到各种细胞中，并促进其定向表达。

本试剂适用于体外转染实验和基因工程研究，具有高转染效率、低细胞毒性、简单易用等优点。

二、试剂成分英格恩 Entanster 转染试剂主要成分包括转染缓冲液和转染增强剂。

转染缓冲液中包含有机溶剂、非离子表面活性剂等，用于稳定 DNA/RNA与转染剂的结合。

转染增强剂含有具有阴离子表面活性剂、脂质、蛋白质等物质，可以提高细胞膜通透性和转染效率。

三、使用说明1.储存和稀释：试剂应储存于-20℃的冰箱中，保持干燥和避光。

使用前需要将试剂溶解在适当体积的转染缓冲液中，最佳稀释比例为1：9、溶液需充分混匀，离心并去除任何沉淀物。

2.样品准备：在转染前，将目标DNA/RNA溶解在适当的缓冲液中，浓度通常在0.1-1μg/μL最佳。

确保样品充分溶解并无明显沉淀。

3.转染操作：对于已经培养至适当倍数的细胞，将细胞用预先暖和的转染缓冲液洗涤一次，并去除缓冲液。

将转染缓冲液和溶解好的目标DNA/RNA混合，稍微搅拌均匀。

与此同时，将适量的转染增强剂加入到混合物中，充分混合。

然后将混合物直接滴加到细胞上，并轻轻摇晃培养板以确保混合物均匀分布。

4.培养和检测：将含有转染混合物的培养板放回恒温培养箱中，保持恒定的温度和CO2浓度。

培养时间和温度根据需要进行调整，通常在24-48小时后可以进行下一步实验或观察。

四、注意事项1.试剂需保存在干燥、阴凉、避光的环境中，避免结冰或暴露在高温环境中。

2.操作中需佩戴手套并遵循生物安全实验操作规范。

3.使用前需充分摇匀试剂瓶，确保所有试剂成分充分混合均匀。

4.转染缓冲液中的有机溶剂可能对一些细胞有毒性，因此在选择试剂时应参考相关文献或尝试不同的浓度和时间，以确定最佳条件。

转染试剂的作用原理一、转染试剂的基本概念转染试剂是一种用于将外源基因或其他生物分子转移到目标细胞中的化学物质。

转染试剂可以通过物理或化学方法改变细胞的通透性，使外源物质能够进入细胞内，并达到转染的目的。

转染试剂在基因治疗、基因表达研究和细胞工程等领域广泛应用。

二、转染试剂的分类转染试剂按照机理和性质的不同可分为多种类型，常见的转染试剂包括：1.脂质体（Liposome）：脂质体是由磷脂双分子层构成的微小囊泡，可与细胞膜融合，将目标物质转移到细胞中。

2.内源蛋白介导的转染：通过利用特定的蛋白质，如病毒衣壳蛋白或细胞内运输蛋白，将目标物质转移到目标细胞中。

3.阳离子聚合物：阳离子聚合物具有正电荷，能够与负电荷的DNA或RNA结合形成复合物，进而转染入细胞。

4.高分子基质：高分子材料如凝胶、纤维或微球等可用于载体，将目标物质与细胞接触，实现转染。

5.电穿孔：利用电场或离子流导致细胞膜破裂，使目标物质通过细胞膜进入细胞质。

三、脂质体转染试剂的作用原理脂质体是一种常用的转染试剂，其作用原理主要包括以下几个步骤：1.与DNA结合：脂质体通过与目标DNA相互作用，形成脂质体-DNA复合物。

脂质体由于其亲油性能与DNA中的疏水部分相互作用，同时脂质体表面带有正电荷，可以与DNA的负电荷相吸引。

2.细胞摄取：脂质体-DNA复合物与细胞膜结合后，脂质体会在细胞膜上形成微囊泡。

随后，微囊泡与细胞膜融合，释放出脂质体-DNA复合物进入细胞质。

3.脱脂质体：脂质体在细胞质中逐渐失去其亲油性，释放出DNA。

由于脂质体-DNA复合物在细胞膜上的微囊泡中形成的电位差，使得DNA被吸引到细胞核附近。

4.核入：DNA由细胞质进入细胞核，最终与染色体结合或进入细胞核内的胞浆，实现转基因。

四、脂质体转染试剂的优缺点脂质体转染试剂具有一些优点和缺点，需要根据实际应用情况选择使用：优点：1.安全性：脂质体转染试剂大多采用合成非病毒载体，通常比病毒载体更安全，不会引起病毒感染及遗传毒性。

TransLipid®HL Transfection Reagent目录号：FT111保存：2-8℃保存一年(避免冷冻)。

产品说明TransLipid® HL Transfection Reagent是一种新型的阳离子脂质体转染试剂，适用于将核酸(DNA和RNA)转染入真核细胞，在保证高转染效率的同时具有极低的细胞毒性。

本产品适用细胞类型广，转染时血清和抗生素的存在不影响转染效率，并且转染后无需更换培养基。

适用范围：贴壁细胞和悬浮细胞(哺乳动物细胞系)的转染。

特点·转染效率高·细胞毒性极低(细胞存活率>90%)·操作简便，转染后无需更换培养基质粒DNA的转染:以24孔板为例，步骤如下细胞接种：每孔接种0.5-2×105个细胞，使转染时细胞达到70-90%汇合度细胞培养12-24小时质粒稀释：将0.8 μg质粒稀释于50 μl Opti-MEM培养基TransLipid® HL稀释：将2 μl TransLipid® HL稀释于50 μlOpti-MEM培养基室温静置5分钟将质粒和TransLipid® HL轻柔混合室温静置20分钟将质粒-TransLipid® HL混合物加入细胞，于37℃ CO2培养箱培养转染4-6小时后更换培养基(可选)，继续培养18-72小时本产品仅供研究，不用于临床诊断。

siRNA 的转染以24孔板为例，转染时细胞汇合度为30-50%，转染所需的siRNA 和TransLipid ® HL 的量分别为20 pmol 和1 μl ，步骤同DNA 转染。

质粒DNA 和siRNA 转染的优化为达到高转染效率和低细胞毒性的最佳结合，可以对DNA 或siRNA 和 TransLipid ® HL 的比例及转染初始细胞密度进行优化，DNA 转染可以在1: 2-1: 5的范围内优化比例，siRNA 转染可以试用10-50 pmol siRNA 和0.5-1.5 μl TransLipid ® HL 的用量。

Entranster-RNA转染试剂，⾼效转染EntransterTM-R4000（⽤于将RNA转染⼊动物细胞）使⽤⼿册⼀产品介绍本品推荐⽤于将siRNA、microRNA(miRNA)、mimic、inhibitor等⼩⽚断RNA转染⼊动物细胞（包括各种细胞系、原代细胞、悬浮细胞、昆⾍细胞等）。

本品在多种细胞系的验证中均表现了很好的RNA转染效率，并有很低的细胞毒性，⽽较低的细胞毒性对RNAi实验尤其重要。

⼆重要提⽰1.由于本品细胞毒性很低，所以采⽤本品进⾏转染的细胞数量相对较少，这有助于提⾼转染效率。

2.采⽤本品进⾏转染，RNA⽤质量(ug)进⾏计量，对21nt双链的siRNA来说，1OD=3.0nmol=40ug。

3.siRNA等较短RNA请参照表1中siRNA⽤量，mRNA、shRNA等较长RNA请参照表1中mRNA⽤量。

4.如转染后需要⽤Trizol提取RNA，建议转染后6⼩时换液。

三实验过程（以24孔板siRNA转染为例）1.提前1天细胞种植贴壁细胞：提前⼀天将细胞种植在24孔板中，以转染时细胞汇合度（Confluence）在30％左右为宜，转染前全培养基总量为0.45ml。

悬浮细胞：采⽤对数⽣长期的细胞，数量为常规培养细胞数的1/3进⾏转染实验。

如某细胞常规培养的细胞数是6×105，那么就⽤2×105的细胞进⾏转染。

2.转染过程⑴取0.67ug(50pmol)的siRNA，加⼊⼀定量⽆⾎清稀释液，充分混匀，制成RNA稀释液，终体积为25µl。

注意：⽆⾎清稀释液建议采⽤OPTI-MEM、⽆⾎清DMEM或1640。

⑵取1ul的EntransterTM-R4000，然后加⼊24ul⽆⾎清稀释液体，充分混匀，制成EntransterTM-R4000稀释液，终体积为25µl。

室温静置5分钟。

⑶将EntransterTM-R4000稀释液和RNA稀释液充分混合（可⽤振荡器振荡或⽤加样器吹吸10次以上）混合，室温静置15分钟。

EndoFectin TM -Max 转染试剂高效转染核酸到哺乳动物细胞产品编号：EF003 / EF004 / EF003T 包装规格：1 mL / 3 mL / 100 μL储存条件：4℃~8℃密闭保存，可保持稳定至少12个月，常温运输。

产品概述EndoFectin TM -Max 转染试剂是以脂质体转染为原理的转染试剂，它能与核酸形成复合物，并使该复合物进入哺乳动物细胞。

EndoFectin TM -Max 转染试剂广泛适用于常见细胞系，如HEK-293、HEK293T 、CHO-K1、Hep G2、Hela 、MCF-7、NIH/3T3和A549等。

即使在有血清存在的情况下，该试剂仍能高效将核酸导入细胞。

GeneCopoeia 公司提供的EndoFectin TM -Max 转染试剂具有如下优点： y 转染效率更优良 y 细胞毒性低y 适用于多种细胞系的转染操作，操作简便y 与含血清的培养基相兼容，转染前不需去除细胞培养液或血清，转染后不需清洗细胞质量控制每批次EndoFectin TM -Max 转染试剂均经过转染测试。

将eGFP 表达质粒（GeneCopoeia Cat.No. EX-EGFP-M02）用EndoFectin TM -Max 转染试剂转入亚融合状态的HEK-293细胞，转染24小时后，超过95%的细胞表达eGFP 。

注意事项使用高质量的质粒：请务必使用高质量的转染级无内毒素质粒。

可通过260 nm 光吸收测定DNA 浓度，并以260 nm / 280 nm 比值确定DNA 纯度（比值应在1.8~2.0的范围内）。

如有可能，请通过琼脂糖凝胶电泳检测质粒的完整性。

保证细胞状态：请使用适当保存和经常传代的健康细胞，并确保培养基无细菌、真菌或支原体污染。

如果细胞是近期复苏的液氮冻存细胞，请在转染前至少传代两次。

实验材料y EndoFectin TM -Max 转染试剂、含目的基因的DNA 质粒y 无蛋白细胞培养液（如Opti-MEM I TM ，来自Life Technologies . 货号：31985-088） y 培养至70~80%汇合度的目的细胞条件摸索在进行正式转染前，推荐以EndoFectin TM -Max 转染试剂摸索目的细胞的最佳转染条件。

生产脂质体转染试剂工艺流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。

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L_(IPOFECT)AMINE^(TM)试剂：一种新的高效多聚阳离子
脂质体转染试剂
李克深
【期刊名称】《国外医学：遗传学分册》
【年(卷),期】1995(18)4
【摘要】阳离子脂质简化了核酸序列转入真核细胞的过程,最初用于转染的脂质包括L_(IPOFECTIN)及L_(IPOFECT) ACE^(TM)、DOTAP,它们都是单价阳离子。

L_(IPOFECT) AMINE,一种新的脂质体配方包含一种带有精胺头部的多聚阳离子脂质,可以在大多数类型的细胞中提高转染效率,比单价阳离子脂质体试剂的活性高出30倍。

本报道通过转染和人原代成纤维细胞将L_(IPOFECT) AMINE与其它几种可购买到的单阳离子脂质试剂进行了比较。

同时对转染条件的确定和优化进行了阐述。

【总页数】3页(P210-212)
【关键词】转染试剂;阳离子脂质;多聚阳离子脂质
【作者】李克深
【作者单位】哈尔滨医科大学遗传学教研室
【正文语种】中文
【中图分类】Q785
【相关文献】
1.三种脂质体法转染试剂转染原代大鼠气道平滑肌细胞效果的比较 [J], 徐玉东;王宇;魏颖;尹磊淼;杨永清
2.三种阳离子转染试剂对小鼠血管瘤内皮细胞转染效率及细胞毒性的影响 [J], 周晓彤;沈振亚;于曙东;余云生;叶文学;黄浩岳;焦鹏;滕小梅
3.SA脂质体—高效介导DNA转染的新试剂 [J], 杨静平;孔玉英
4.一种可降解的阳离子聚合物基因转染试剂 [J], 季守平;杜福胜;王颖丽;章扬培
5.LIPOFECT AMINETM试剂：一种新的高效多聚阳离子脂质体转… [J], 李克深;傅松滨
因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

Hieff TransTM 脂质体核酸转染试剂产品描述Hieff Trans TM 脂质体核酸转染试剂是一种多用途的脂质体转染试剂，适用于DNA 、RNA 和寡核苷酸的转染，对大多数真核细胞具有很高的转染效率。

其独特的配方使其可直接加入培养基中，血清的存在不会影响转染效率，这样可以减少去除血清对细胞的损伤。

转染后不需要除去核酸-Hieff Trans TM 复合物或更换新鲜培养基，也可在4～6小时后除去。

Hieff Trans TM 以无菌的液体形式提供。

通常情况下对于 24 孔板转染，每次用1.5μl 左右，则1ml Hieff Trans TM 约可做660次转染；对于6孔板，每次用6μl 左右，则1ml Hieff Trans TM 约可做160 次转染； 运输与保存方法冰袋（wet ice ）运输。

产品4ºC 保存，一年有效。

不可冷冻！ 注意事项1）Hieff Trans TM 脂质体核酸转染试剂要求细胞铺板密度较高，以90%-95%为佳，这有助于减少阳离子脂质体细胞毒性造成的影响；如果你研究的基因要求比较长的表达时间，比如细胞周期相关基因，或者细胞表面蛋白，最好选择细胞铺板密度要求较低的转染试剂，不适合用脂质体核酸转染试剂。

2）Hieff Trans TM 脂质体核酸转染试剂可用于有血清培养基的转染，并且转染前后不需要换培养基。

但是，制备转染复合物时要求用无血清培养基稀释DNA 和转染试剂，因为血清会影响复合物的形成。

另外，要检测所用的无血清培养基与脂质体核酸转染试剂的相容性，已知CD293, SFMII, VP-SFM 就不相容。

3）转染的时候培养基中不能添加抗生素。

4）使用高纯度的DNA 或RNA 有助于获得较高的转染效率，质粒中的内毒素是转染的大敌。

5）阳离子脂质体应该在4度保存，要注意避免多次反复长时间开盖，因为可能会导致脂质体氧化而影响转染效率。

6）初次使用应优化DNA 浓度和阳离子脂质体试剂量以得到最大的转染效率。

Lipofect 脂质体转染试剂简介：外源基因导入真核细胞的方法有很多种，如磷酸钙转染法、DEAE-葡聚糖转染法、脂质体法、电穿孔法、显微注射法等。

Leagene Lipofect 脂质体转染试剂(Lipofect Transfection Reagent)是一种新型的阳离子脂质体转染试剂，适用于把质粒、siRNA 或其它形式的核酸包括DNA 、RNA 、寡核苷酸以及核酸蛋白复合物或带负电荷的蛋白转染到真核细胞中。

Leagene Lipofect 脂质体转染试剂对于常见的哺乳动物细胞具有较高的转染效率，较好的重复性，且操作简以及单细胞毒性较小，可用于贴壁细胞和悬浮细胞。

Lipofect 脂质体转染试剂使用方法与Lipofectamine ® 2000 Reagent 极为相似。

该转染试剂转染细胞时， 基本不受细胞培养液中的血清和抗生素的影响，即可以在血清和抗生素存在的情况下进行细胞转染。

但为了取得最佳的转染效果，推荐转染时使用不含抗生素的含血清的细胞培养液。

组成：自备材料：1、 胰蛋白酶消化液2、 完全培养液和不完全培养液3、 PBS操作步骤(仅供参考)：(一)DNA 转染：1、 (以12孔板为例)在转染前18～24h 用胰蛋白酶消化培养细胞，取适量对数期细胞转移至12孔板中，并将细胞培养板置于CO 2 培养箱培养，待细胞密度达到即可进行转染。

后续操作步骤均按12孔板计算，如果转染器皿不同，请按比例自行调节用量。

2、 在加入待转染的DNA 之前2～4h ，加入不含抗生素的完全培养液，置于CO 2培养箱培养。

也可使用含有血清并含有抗生素的新鲜培养液，但抗生素使某些细胞转染后出现一定的细胞毒性。

3、 配制转染工作液：取两个无菌离心管，分别加入不含抗生素和血清的培养液，取其中一编号 名称CZ0002 CZ0002 CZ0002 StorageLipofect 脂质体转染试剂 0.5ml 1ml 5×1 ml 4℃使用说明书 1份离心管加入DNA，轻轻混匀；取另一离心管加入Lipofect脂质体转染试剂，轻轻混匀。

一、实验目的本实验旨在通过脂质体转染技术将目的基因导入细胞内，研究脂质体转染方法对基因表达的影响，为后续基因功能研究提供技术支持。

二、实验材料1. 细胞：人胚肾细胞HEK2932. 载体：pGL3-Basic（含有报告基因）3. 脂质体：Lipofectamine 30004. 细胞培养试剂：DMEM培养基、胎牛血清、青霉素-链霉素溶液5. 实验仪器：超净工作台、CO2培养箱、酶标仪、显微镜、PCR仪等三、实验方法1. 细胞培养：将HEK293细胞接种于6孔板，待细胞汇合至80%时进行实验。

2. 脂质体-DNA复合物制备：将pGL3-Basic质粒DNA和Lipofectamine 3000试剂按照说明书比例混合，室温孵育20分钟。

3. 细胞转染：将脂质体-DNA复合物加入细胞培养孔中，轻轻混匀，37℃、5%CO2培养箱中孵育6小时。

4. 洗涤：弃去转染液，用PBS缓冲液洗涤细胞两次。

5. 优化培养条件：将细胞分为实验组和对照组，实验组加入脂质体-DNA复合物，对照组加入等量无DNA的脂质体。

6. 重组蛋白表达检测：收集细胞，提取总蛋白，进行Western blot检测目的蛋白表达水平。

7. 报告基因表达检测：收集细胞，提取总RNA，进行实时荧光定量PCR检测报告基因表达水平。

四、实验结果1. Western blot结果：实验组细胞中目的蛋白表达水平明显高于对照组（P<0.05），表明脂质体转染成功。

2. 实时荧光定量PCR结果：实验组细胞中报告基因表达水平明显高于对照组（P<0.05），表明脂质体转染对基因表达有显著促进作用。

五、实验讨论1. 脂质体转染技术在基因研究中的应用：脂质体转染技术具有操作简便、转染效率高、安全性好等优点，是基因研究中最常用的转染方法之一。

2. 本实验中，脂质体转染成功地将目的基因导入细胞内，并显著提高了报告基因的表达水平。

这表明脂质体转染技术在本实验中具有良好的效果。

脂质体转染操作步骤
（一）准备材料
1.质粒：一般是由受体细胞胞浆抽提的质粒，其中含有DNA操纵因子、胞质蛋白等；
2.抗体：主要由混合物或单一蛋白质组成，用于鉴定质粒抗原性以及
抑制免疫反应；
3.细胞培养液：一般为包含细胞培养基和生长因子的混合物；
4.转染试剂：也称转染缓冲液，主要由多种物质，如阿拉伯胞浆清酯、卡夫培糖、酚红、多数体核酸等组成，用于载体细胞的传感和质粒的迁移。

（二）脂质体转染操作
1.取出细胞培养液，将受体细胞倒入培养管中，用浓度为0.25%（体
积比）的牛血清添加至8-10%，以细胞膜生长抗性抑制剂（如抗生素或吲
哚美辛）等抑制细胞膜的分裂，加以培养；
2.将培养液中的受体细胞的数量控制在2×105/ml以上，用酚酞红法
检测，检测结果达到要求后，把受体细胞从培养管中放入6 ml的离心管中，进行6000 g的离心；
3.将离心液放入新的容器中，把细胞抽出，再加入细胞稀释缓冲液
（以PBS或缓冲液为主，加入百维素或多数体核酸）至1×106/ml，离心5000 g；
4.将离心液抽出，用转染试剂缓冲液把细胞洗涤，再分别加入DNase I, 抗体和质粒，放入摇床中。

LipoFiter TM 转染试剂操作说明保存条件：4℃保存，一年有效（避免反复冻融）。

LipoFiter TM 简介LipoFiter TM 脂质体转染试剂( LipoFiter TM Liposomal Transfection Reagent )是一种适合于把质粒或其它形式的核酸,以及核酸蛋白复合物转染到培养的真核细胞中的高效阳离子脂质体转染试剂。

LipoFiter TM 优点1、转染效率高，重复性好，操作简单。

2、无明显细胞毒性，用LipoFiter TM 转染细胞后，对于大多数细胞72 小时内不更换培养液无明显细胞毒性。

3、LipoFiter TM 对于贴壁细胞和悬浮细胞都适用，并且可以用于稳定表达细胞株的筛选。

LipoFiter TM 使用说明1.细胞培养：以293T 细胞为例，转染前一天(20-24 小时) ~0.4×106 细胞(具体的细胞数量据细胞大小和细胞生长速度而定)铺到六孔板内，使第二天细胞汇合度（confluent）能达到约50%~70%。

注1：汉恒生物LipoFiter TM 对细胞毒性极小，因此无需通过增大细胞汇合度来抵抗转染试剂毒性，我们实验证明，50%~70% confluent 时细胞的转染效率可以达到最优。

注2：其它培养板或培养皿参考六孔板进行操作，其他培养介质如培养板，培养皿的详细细胞接1种数目请按照比例自行换算。

2.在进行下述转染步骤前，把六孔板每孔内换成新鲜细胞培养液。

培养液的体积约为2 ml。

注：其他培养介质培养液体积参见《各种培养介质下LipoFiter TM 转染DNA 详表》，抗生素、Glutamine 等对LipoFiter TM 转染并无影响。

如果LipoFiter 对目的细胞毒性较大，建议去除转染体系内的抗生素。

3.把LipoFiter TM 脂质体转染试剂轻轻混匀。

4.对于待转染的六孔板中一个孔的细胞，取一只洁净无菌离心管，加入4 μg 质粒DNA（其他培养介质DNA 用量参见附表）到250 μl DMEM 溶液，用枪轻轻吹打混匀。

脂质体转染实验步骤脂质体（LR）试剂是阳离子脂质体DOTMA和DOPE的混合物（1：1）。

它适用于把DNA转染入悬浮或贴壁培养细胞中，是目前条件下最方面的转染方法之一。

转染率高，优于磷酸钙法，比它高5-100倍，能把DNA和RNA转染到各种细胞。

用LR进行转染时，首先需要优化转染条件，应找出该批LR对转染某一特定细胞适合的用量、作用时间等，对每批LR都要做。

先要固定一个DNA的量和DNA/LR混合物与细胞相互作用的时间，DNA可从1-5ug和孵育时间6h，开始，按这两个参数绘出相应LR需用量的曲线，再选用LR和DNA两者最佳的剂量，确定出转染时间。

因LR对细胞有一定的毒性，转染时间以不超过24h为宜。

细胞种类：COS-7、BHK、NIH-3T3、Hela和Jurkat等任何一种细胞均可作为受体细胞。

1、操作步骤（方法一）：（1）：取6孔培养板，向每孔中加入2ml含（1-2） x 10^5个细胞的培养基，37℃、18% CO2培养基40%-60%汇合时。

（2）转染液制备：在聚苯乙烯管中制备以下两液（为转染1个空细胞所用的量）。

A液：用不含血清培养基稀释DNA使浓度为1-10ug，终量100ul。

B液：用不含血清培养基稀释LR，使终浓度为2-50ug，终量100ul。

轻轻混合A液、B液，室温中置10-15min，稍后会出现微浊现象，但并不妨碍转染。

（3）转染准备：用2ml不含血清培养基漂洗2次，再加入1ml不含血清培养基。

（4）转染：把A/B复合物缓缓加入培养基中，摇匀，置37℃温箱中6-24h，吸除无血清转染液，换入正常培养基继续培养。

（5）其余处理：如观察、筛选、检测等与其他转染法相同。

（6）注意：转染时切勿加血清，血清对转染效率有很大影响。

2、快速脂质体转染法操作步骤（方法二）：●∙∙∙∙∙∙∙ 将细胞以5 x 10^5个/孔接种于6孔板中培养24h，使其达到50%-60%板底面积。

●∙∙∙∙∙∙∙ 在试管中配制DNA-脂质体复合物。

第25卷第8期2013年8月化学进展PROGRESS IN CHEMISTRYVol．25No．8Aug．，2013收稿：2012年12月，收修改稿：2013年2月（特约）*Corresponding authore-mail ：xqyu@scu．edu．cn大环多胺脂质体介导的核酸转染刘宝全1，2刘强1张骥1范圣第2余孝其1*（1．四川大学化学学院绿色化学与技术教育部重点实验室成都610064；2．大连民族学院生物化学工程教育部重点实验室大连116600）摘要以大环多胺为亲水部分构建的脂质体可以有效用于核酸转染。

大环多胺中带正电荷的氮原子可通过静电吸引和氢键等方式与核酸（DNA /RNA ）结合。

当前用于构建脂质体并进行核酸转染的大环多胺主要涉及到1，4，7-三氮杂环壬烷（tacn ）、1，4，7，10-四氮杂环十二烷（cyclen ）、1，4，8，11-四氮杂环十四烷（cyclam ）等类型，其中基于cyclen 的脂质体研究较多。

亲水的大环多胺头部、疏水基团尾部及连接基团的结构对脂质体的转染效率有很大影响。

一些大环多胺的金属配合物除了可以作为基因转染载体，在标记、示踪等方面也有特殊作用。

本文综述了基于大环多胺的两亲性分子在核酸载体方面的应用，对其构效关系进行了讨论，并对相关领域的发展做了展望。

关键词大环多胺脂质体核酸转染中图分类号：O621.3；Q527文献标识码：A文章编号：1005-281X （2013）08-1237-09Transfection of Nucleic Acids Mediated by MacrocyclicPolyamine-Based LiposomesLiu Baoquan 1，2Liu Qiang 1Zhang Ji 1Fan Shengdi 2Yu Xiaoqi 1*（1．Key Laboratory of Green Chemistry and Technology ，Ministry of Education ，College of Chemistry ，Sichuan University ，Chengdu 610064，China ；2．Key Laboratory of Biochemical Engineering ，Ministry of Education ，Dalian Nationalities University ，Dalian 116600，China ）AbstractCationic lipid-based nanodevices were considered to be appropriate alternatives for virus-basedparticles in the delivery of nucleic acids ，such as DNA and siRNA．Macrocyclic polyamine-based cationic lipids have great potential as gene delivery vectors．The cationic amino groups on the macrocyclic backbone can interact with nucleic acid （DNA /RNA ）via electrostatic interaction and hydrogen bonds．Three types of macrocyclic polyamines including 1，4，7-triazacyclononane （tacn ），1，4，7，10-tetraazacyclododecane （cyclen ）and 1，4，8，11-tetraazacyclotetradecane （cyclam ）were mainly used to construct these lipidic vectors．It was found that the transfection efficiency might be largely influenced by the structures of both the hydrophobic moiety and linking group ，which bridge the hydrophilic polyamine and hydrophobic tails．Some metal complexes of macrocyclic polyamines could not only achieve efficient gene delivery ，but also have the potential as visibility and radiation therapy reagents．This paper reviews the application of macrocyclic polyamine-based liposomes on nucleic acids delivery．Their structure-activity relationships were discussed ，and the progress in relative field was expected．Key wordsmacrocyclic polyamines ；liposomes ；nucleic acids delivery·1238·化学进展第25卷Contents1Introduction2Characteristics of macrocyclic polyamines and their interaction with nucleic acids2.1Characteristics of macrocyclic polyamines2.2The interaction of macrocyclic polyamines andnucleic acids3Tacn-based cationic lipids for DNA delivery3.1Long chain modified tacn lipids3.2Tacn lipid containing copper（Ⅱ）ion4Cyclen-based cationic lipids for DNA delivery4.1Long chain modified cyclen lipids4.2Sterides modified cyclen lipids5Cyclen-based lipids for RNA delivery6Cyclen-based lipids for labelling and tracing application7Other lipidic macrocyclic polyamines as potential gene vectors8Possible mechanism of macrocyclic polyamines for protection of nucleic acids9Conclusions and outlook1引言脂质体（liposome）是一类由磷脂分子（或人工合成的类脂分子）通过分子间自组装形成的中空的、由双层脂质分子包裹的囊泡结构［1—4］。