桑叶提取工艺

工艺技术　媾　

桑叶多糖提取工艺优化研究　

李德灵　

（无限极（中国）有限公司广东江门５２９１５６）　

摘要：本文通过对桑叶多糖的提取方法对比，得出超声波辅助浸提法收率最高，多糖含量可以达到５．３２％。同时对超声波　

法辅助浸提工艺的３个因素３个水平的正交实验考ｇ４ｇ－知超声波辅助浸提法法对桑叶多糖含量影响最大的因素为提取次数。在这　

３个因素中其影响程度的排序是提取次数＞提取时间＞固液比。而最佳提取条件的组合是固液比１：１５，提取次数２次，提取时间为　

１．５－２．Ｏｈ。在最佳条件下，桑叶多糖提取收率可以达到２１．５６％。　

关键词：桑叶多糖提取超声波工艺　

中图分类号：ＴＱ２８　文献标识码：Ａ　文章编号：１　６７２—５３３６（２０１４）０２—００２２—０３　

桑叶椒桑科植物桑在叶子，有名家桑、荆桑、黄　

桑叶等，全国各地基本都有生产。药用一般认为桑叶　

性味苦、甘、寒、有散风祛热功效，我国桑叶资源丰　

富，若能加以有效利用从桑叶中提取天然药用有效　

成分如桑叶多糖等制备药品或保健品，有着很重大　的意义。　

热水　ｌ　—１　——｛Ｉ　毒　ｌ；　ｌ　一粉碎一　提一　瓣　

ｌ　翅　打波　滴液收粜　图１桑叶多糖提取工艺流程图　１材料与方法　

１．１材料与仪器　

干桑叶：无极限（中国）有限公司提供。ＦＡ２００４Ｎ型　

分析天平，上海精密科学仪器有限公司；超声波清洗　器（Ｋ１—２５０ＤＥ（功率２５０Ｗ），昆山市超声仪器有限公　

司；ＤＺＫＷ—Ｄ一２电热恒温水浴锅，北京市永光明医疗　

仪器厂；ＸＷ一８０Ａ微型旋涡混合仪，上海泸西分析仪器　

厂；ＸＦＢ一２００／４００，＇］＇，型粉碎机，湖南中诚制药机械厂　１．２实验方法　

（１）本文设计桑叶多糖的制备工艺流程见图１：　

（２）桑叶多糖测定。　精密量取ｌｍＬ提取液，加入乙醇１２ｍＬ，摇匀，室温　

放置１２ｈ，取出，离心，倾去上清液，沉淀用２ｍＬ９５％乙　

表１热水浴浸提法桑叶多糖提取实验数据表　

实验次数　超声波辅助　无超声波辅助　

山西农业科学２０１４．４２（２）：１７４—１７７　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆＳｈａｎｘｉ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ　

ｄｏｉ：１０．３９６９６．ｉｓｓｎ．１００２－２４８１．２０１４．０２．１９　

超声波辅助提取桑叶蛋白加工工艺　

王　芳，乔　璐，张庆庆，高瑜珑　

（浙江师范大学化学与生命科学学院，浙江金华３２１００４）　

摘要：采用超声波提取桑叶叶蛋白，通过单因素和正交试验，得出该方法提取桑叶蛋白的最佳优化工艺：以　Ｏ．４％的ＮａＣ１溶液为提取溶剂，料液比为１：３０，超声波４００　Ｗ超声处理２０　ｍｉｎ，４０℃水浴浸提６０　ｍｉｎ；此工艺下，　桑叶叶蛋白得率为９．９３％，粗蛋白含量为５６．８％。与常规的水提法相比，超声波辅助提取法大大提高了桑叶蛋白的　得率。　关键词：桑叶；叶蛋白；超声波；正交试验　中图分类号：ＴＱ０２８；￥８８８　文献标识码：Ａ　文章编号：１００２—２４８１（２０１４）０２—０１７４—０４　

Ｓｔｕｄｙ　ｏｎ　Ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ　Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｍｕｌｂｅｒｒｙ　Ｌｅａｆ　Ｐｒｏｔｅｉｎ　

ＷＡＮＧ　Ｆａｎｇ，ＱＩＡＯ　Ｌｕ，ＺＨＡＮＧ　Ｑｉｎｇ—ｑｉｎｇ，ＧＡＯ　Ｙｕ—ｌｏｎｇ　（Ｃｏｌｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ＆Ｌｉｆｅ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｚｈｅｊｉａｎｇ　Ｎｏｒｍａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｊｉｎｈｕａ　３２　１００４，Ｃｈｉｎａ）　

Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｉｎ　ｔｈｉｓ　ｐａｐｅｒ，ｔｈｅ　ｕｈｒａｓｏｎｉｃ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｍｕｌｂｅｒｒｙ　ｌｅａｆ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｗａｓ　ｓｔｕｄｉｅｄ．Ｔｈｅ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｐｒｏｃｅｓｓ　ｗａｓ　ｏｐｔｉｍｉｚｅｄ　ｂｙ　ｓｉｎ—　ｇｌｅ　ｆａｃｔｏｒ　ｔｅｓｔ　ａｎｄ　ｏ￣ｈｏｇｏｎａｌ　ｔｅｓｔ．ａｎｄ　ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ｂｅｓｔ　ｅｘｔｒａｃｔｉｎｇ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ　ｗａｓ：ｔｈｅ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｏｆ　ＮａＣ１　ｉｓ　０．４％．ｔｈｅ　ｒａｔｉｏ　ｏｆ　ｍａｔｅｒｉａｌ　ａｎｄ　ｗａｔｅｒ　１：３０，ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｔｉｍｅ　ｏｆ　ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ　２０　ｍｉｎ，ｐｏｗｅｒ　ｏｆ　ｕｈｒａｓｏｎｉｃ　４００　Ｗ　ａｎｄ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｔｉｍｅ　６０　ｍｉｎ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ　４０℃．Ｕｎｄｅｒ　ｔｈｉｓ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ　ｔｈｅ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｒａｔｅ　ｗｏｕｌｄ　ｂｅ　９．９３％．ａｎｄ　ｔｈｅ　ｃｒｕｄｅ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｅｘｔｒａｃｔ　５６．８％．Ｃｏｍｐａｒｅｄ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｃｏｎｖｅｎｔｉｏｎａｌ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｍｅｔｈｏｄｓ，ｕｌｔｒａｓｏｕｎｄ－ａｓｓｉｓｔｅｄ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｉｍｐｒｏｖｅｄ　ｙｉｅｌｄ　ｏｆ　ｍｕｌｂｅｒｒｙ　ｌｅａｆ　ｐｒｏｔｅｉｎ．　Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：ｍｕｌｂｅｒｒｙ　ｌｅａｆ；ｌｅａｆ　ｐｒｏｔｅｉｎ；ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ　ｗａｖｅ；ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ　ｔｅｓｔ　

食品工艺　食品研究与开发　２ｏｏ６．Ｖｏ｜．２７．Ｎｏ．２　

桑叶叶蛋白提取工艺的研究　

王桃云，王金虎　

（苏州科技学院生物系，江苏苏州２１５００９）　７９＝　

摘要：对桑树叶蛋白提取条件的优化进行了研究。结果表明，桑树叶蛋白提取的优化工艺条件为：室温下，以水为浸提　荆，打浆时间３　ｒａｉｎ，浸提时间４　ｒａｉｎ，料液比１：５（叶片重比浸提剂体积，即ｇ：ｍ１），漫挺剂ｐＨ值８．０，絮凝温度７５℃，调　节提取液ｐＨ为５．０、８．０和１３．０得到沉淀物，在６０￣Ｃ－ｒ－￣。该工艺提取桑树鲜叶叶蛋白得率为：５．１７％。　

关键词：桑叶；叶蛋白；提取．Ｔ－艺　

ＴＨＥ　０Ｐ１１ＭＩＺＡＴＩＯＮ　ＦＯＲ　ＥＸＴＲＡＣＴＩＯＮ　ＴＥＣＨＮＩＱＵＥ　ＯＦ　ＬＥＡＦ　ＰＲＯＴＥＩＮ　ＣＯＮＣＥＮＴＲＡＴＥ（ＬＰＣ）　

ＦＲＯＭ　ＭＯＲＵＳＡＬ　Ｌ．　

ＷＡＮＧ　Ｔａｏ－ｙｕｎ，ＷＡＮＧ　Ｊｉｎ—ｈｕ　

（Ｄｅｐｔ．Ｂｉｏｌｏｇｙ　ｏｆ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　Ｓｃｉｅｎｃｅ＆Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　ｏｆ　Ｓｕｚｈｏｕ，Ｊｉａｎｇｓｕ　２１５００９，Ｃｈｉｎａ）　

Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅ　ｏｐｔｉｍｕｍ　ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ　ａｎｄ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ　ｏｆ　ｅｘｔｒａｃｔｉｎｇ　Ｌｅａｆ　Ｐｒｏｔｅｉｎ　Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅ（ＬＰＣ）ｆｒｏｍ　ｆｒｅｓｈ　

１ｅａｖｅｓ　ｏｆ　Ｍｏｒｕｓ　ａｌｂａ　Ｌ．ｗｅｒｅ　ｓｔｕｄｉｅｄ　ｉｎ　ｔｈｉｓ　ｐａｐｅｒ．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｓｈｏｗ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ｎｏｒｍａｌ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ，ｔｈｅ　ｒａｔｉｏ　

１：５　ｆｏｒ　ｆｒｅｓｈ　ｌｅａｆ　ｔｏ　ｗａｔｅｒ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｐＨ８．０，３　ｍｉｎｕｔｅｓ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｂｅａｔｉｎｇ　ｔｉｍｅｓ，ａｎｄ　ｌａｙｉｎｇ　ｆｏｒ　４　ｍｉｎｕｔｅｓ，ｗｅｒｅ　

ｔｈｅ　ｍｏｓｔ　ｏｐｔｉｍｕｍ　ｅｘｔｒａｃｔｉｎｇ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ，ｂｕｔ　ｔｈｅ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ　ｏｆ　ｍｏｓｔ　ｏｐｔｉｍｕｍ　ｄｅｐｏｓｉｔ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ　ｉｓ　７５℃，　

９４　广东化工　Ⅵ，、Ｖｗ．ｇｄｃｈｅｍ．ｃｏｍ　２０１４年第１９期　第４ｌ卷总第２８５期　桑叶生物碱提取工艺研究进展　王婴１，２，３，王岩２，吴新荣　（１．广州军区广州总医院药学部，广东Ｆ－＇Ｊ、｝Ｉ　５１００１０：２．广东药学院，广东广州５１０００６：３．广州中医药大学，广东广州５１０４０５）　［摘要】桑叶富含生物碱类化合物，是其有效的降糖部位之一　文章奁阅了近年来关于桑叶生物碱提取工艺研究的文献，并进行分析和归纳，　为桑叶资源的综合利用提供科学依据　［关键词］桑叶；生物碱；提取　［中图分类号］ＴＱ　【文献标识码】Ａ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　Ｐｒｏｇｒｅｓｓ　ｏｎ　Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　ｏｆ　Ａｌｋａｌｏｉｄｓ　ｉｎ　Ｍｕｌｂｅｒｒｙ　Ｌｅａｖｅｓ　Ｗａｎｇ　Ｙｉｎｇ　～，Ｗａｎｇ　Ｙａｎ２，Ｗｕ　Ｘｉｎｒｏｎ￣　（１．Ｇｅｎｅｒａｌ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ　ｏｆＧｕａｎｇｚｈｏｕ　Ｍｉｌｉｔａｒｙ　Ｃｏｍｍａｎｄ　ｏｆＰＬＡ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ　５１００１０；　２．Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ　ＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ　５１０００６；３．ＧｕａｎｇｚｈｏｕＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ　５１０４０５，Ｃｈｉｎａ）　Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ａｌｋａｌｏｉｄｓ　ａｒｅ　ａｂｕｎｄａｎｔ　ｉｎ　ｍｕｌｂｅｒｒｙ　ｌｅａｖｅｓ　ａｎｄ　ｔｈｅｙ　ａｒｅ　ｏｎｅ　ｏｆ　ｈｙｐｏｇｌｙｃｅｍｉｃ　ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ　ｐａｒｔｓ．Ｄｏｃｕｍｅｎｔｓ　ｃｏｎｃｅｒｎｉｎｇ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　ｏｆ　ａｌｋａｌｏｉｄｓ　ｉｎ　ｍｕｌｂｅｒｒｙ　ｌｅａｖｅｓ　ｗｅｒｅ　ａｎａｌｙｚｅｄ　ａｎｄ　ｉｎｄｕｃｅｄ　ｉｎ　ｔｈｅ　ａｒｔｉｃｌｅ　Ｉｔ　ｍａｙ　ｐｒｏｖｉｄｅ　ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ　ｂａｓｉｓ　ｆｏｒ　ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ　ｕｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｍｕｌｂｅｒｒｙ　ｌｅａｖｅｓ．　Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｍｕｌｂｅｒｒｙ　ｌｅａｖｅｓ：ａｌｋａｌｏｉｄｓ；ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　桑叶为桑科植物桑Ｍｏｒｕｓ　ａｌｂａ　Ｌ．的＝Ｆ煤叶，具有疏散风热、　清肺润燥、清肝明目等功效…。生物碱是桑叶有效的降糖活性部　位之一，由于桑叶生物碱多具有与糖相类似的多羟基结构，且其　二位被还原，故亦可被视为氮糖类成分ｌ２Ｊ。其中ｌ　脱氧野尻霉素　（ＤＮＪ）是桑叶生物碱中研究最多、降糖活性最强的有效成分。药理　研究表明，桑叶生物碱能促进肝糖合成，增强糖尿病动物糖的贮　藏能力ｐ　。ＤＮＪ除了通过对０【．葡萄糖苷酶活性的抑制来控制血糖　水平外，还对ｄ．葡萄糖淀粉酶活性起到竞争性抑制作用【５】。本文　拟对近年来桑叶生物碱提取工艺的研究进展作一概述。　１传统提取法　１．１热水浸提　该法主要用于极性较大的多羟基生物碱的提取　研究表明，　该类成分具有显著的降血糖作用【６　Ｊ。邓伟杰等【７ｊ利用正交试验设计　研究了桑叶总生物碱的最佳提取工艺。以煎煮时间和加水量为考　察因素，以总生物碱含量为评价指标，采用正交试验优选最佳水　煎煮提取　艺条件。优选的最佳提取工艺为：用ｌ２倍量水煎煮１　ｈ。优选的工艺稳定、可行，桑叶总生物碱含量高。　杨文字等　采用水提醇沉法，将桑叶加水煎煮，浓缩，放冷　后加乙醇　含醇量达７Ｏ％，静置过夜，滤取上清液，回收乙醇。　再经７３２阳离子交换树脂富集，再经正丁醇萃取、氧化铝柱层析、　活性炭脱色等步骤得到总生物碱。　１．２酸水浸提　该法用于提取难溶于水的弱碱性生物碱，通过使生物碱成盐　增加溶解度，从而提高提取率。蒋小飞ｐ　等采用正交试验，考察　了提取液酸度、料液比、提取时间及提取次数对桑叶生物碱提取　Ｌ艺的影响，通过高效液相衍生处理法对指标成分ＤＮＪ的含量进　行榆测。结果表明，提取液酸度和提取次数有显著差异，得到最　佳的提取工艺为：提取液酸度Ｏ＿３％，料液比１：７，提取时间１００　ｍｉｎ，提取３次。　１．３乙醇浸提　该法提取生物碱的极性范围较广，包括水溶性和脂溶性生物　碱，但缺点是提出的杂质较多，生物碱纯化较困难。刘杰等Ｉ】　在　单因素试验基础上，采用正交试验进行了桑叶生物碱醇提工艺参　数的优化。结果最佳提取工艺为：乙醇浓度６０％（ｐＨ　２）、料液比　ｌ：１０（Ｖ／ｍ）、提取时间２　ｈ、提取温度８Ｏ℃、提取２次。　２提取新技术　２．１超卢提取　刘一衡等…】采用超声法提取新疆桑叶中的总生物碱。通过单　因素和正交试验，研究了提取时间、提取温度、料液比、超声功　率和乙醇浓度对生物碱提取效果的影响。优化工艺条件为：提取　时间１０ｍｉｎ，提取温度６Ｏ℃，料液比ｌ：２０，超声功率８００Ｗ，　乙醇浓度６Ｏ％。在此条件下，总生物碱含量为４．６４　ｍｇ・ｇ～。该法　具有简单、省时、高效的优点。　［收稿目期】２０１４・０８—０８　［基金项目］广东省科技重点项目（２００８Ａ０３０２０１０３１）　［作者简介】王婴，在读博士，从事药物新剂型与质量控制研究。　为通讯作者。　２．２微波萃取　胡瑞君等【】　】研究了利用微波萃取技术提取桑叶中ＤＮＪ的方　法。以无菌过滤水为溶剂，以微波为辅助条件提取桑叶中的ＤＮＪ，　考察了微波功率、微波处理时间、固液比和提取次数等因素对ＤＮＪ　得率的影响。确定了最佳提取工艺条件为：微波功率４０６　Ｗ，微　波处理时间１．５ｍｉｎ，固液比１：４０，提取２次。　２－３树脂吸附　黄勇等【ＩｌｊＪ研究了００１＂７和００１　１４．５两种阳离子交换树脂对桑　叶生物碱的吸附与洗脱性能。结果表明，００１　７阳离子交换树脂　对桑叶生物碱的吸附与洗脱性能优于００１　１４．５阳离子交换树脂，　该树脂能有效地从桑叶提取物中分离纯化生物碱。　刘树兴等Ｉ】　ｌ研究了４种大孔吸附树脂纯化桑叶中ＤＮＪ的ｌＴ　艺。桑叶用酸性乙醇提取，经浓缩、离心处理后，加适量１０％三　氯乙酸除去蛋白质，离心取上清液，以１．０　ＢＶ／ｈ的流速加入树脂　柱。结果表明，ＸＤＡ．６树脂更适宜桑叶ＤＮＪ的分离纯化，最佳二Ｉ　艺条件为：ｐＨ　１０、药液浓度０．３５２　ｍｇ・ｍＬ。。、流速２．０　ＢＶ／ｈ条件　下吸附。　２．４真空气流细胞破壁技术（ＶＡＰＢ）　孙长波等＿Ｉ　研究了ＶＡＰＢ对桑叶中生物碱提取率的影响。采　用ＨＰＬＣ法，以１．脱氧野尻霉素为对照品，测定破壁与未破壁桑　叶中的生物碱含量。结果破壁较未破壁桑叶样品中的生物碱含鼍　的测定值高出７４％。表明采用ＶＡＰＢ对桑叶进行提取前处理，可　提高其有效成分的溶出率，更好地发挥其生物活性。　３总结与展望　随着对糖尿病发病机制研究的不断深入，越来越多的抗糖尿　病药物被发现并用于临床。西药降血糖作用强、起效快，但往往　缺乏整体的协调性，且具有明显的毒副作用，不利于糖尿病患者　的长期治疗ｆ１　。诸多研究表明，中药治疗糖尿病具有多途径、多　靶点、多环节的特点，相对于西药具有疗效持久、毒副作用低的　独特优势。　随着现代提取纯化技术的飞速发展，桑叶中的降血糖生物碱　活性成分陆续被发现，其作用机制不断被阐明。我们有理由相信，　随着对桑叶生物碱有效部位和有效成分研究的不断深入，新的抗　糖尿病实体药物的诞生已不再遥远。　参考文献　【Ｉ】国家药典委员会．中国药典２０１０年版一部［ｓ】．北京：化学工业出版社．　【２］何羡霞，苏楠，吴新荣．桑叶降糖有效部位及其降糖活性研究进展［Ｊ］．中　国实验方剂学杂志，２０１４，２Ｏ（７）：２４５—２４８．　（下转第９Ｏ页）